EB病毒LMP1在鼻咽癌细胞系中通过TRAF2活化NF-κB

目的:为了探讨EB病毒(EBV)中LMP1的致瘤机制,对鼻咽癌LMP1激活重要的核转录因子NF-κB的机制进行了研究.方法:①以LMP1阴性的鼻咽癌细胞系HNE2及表达载体(pSG5)的鼻咽癌细胞系HNE2-pSG5为对照,采用免疫共沉淀-Western-blotting方法在稳定表达LMP1的鼻咽癌细胞系HNE2-LMP1中证实LMP1与TRAF2是否直接结合形成免疫共沉淀复合物;②在HNE2-LMP1细胞系导入TRAF2表达质粒或不同剂量TRAF2显性负性突变体(TRAF2Δ6～86)表达质粒,以NF-κB报道基因方法确定LMP1是否通过TRAF2活化NF-κB;③将LMP1(1～231)(CTAR2缺失区)或LMP1Δ187～351(CTAR1缺失区)及不同剂量TRAF2Δ6～86瞬时导入HNE2中以证实LMP1CTAR1或CTAR2是否介导了这种效应;④以转染或未转染TRAF2Δ6～86的HNE2-LMP1细胞系为材料,应用免疫共沉淀-Western-blotting方法,确定TRAF2Δ6～86是否竞争性抑制TRAF2与LMP1结合.结果:①在HNE2-LMP1中LMP1与TRAF2形成复合物沉淀,而HNE2-pSG5和HNE2为阴性.②在HNE2-LMP1细胞系导入TRAF2表达质粒,NF-κB活性增高20倍,而导入不同剂量TRAF2Δ6～86表达质粒时,随着剂量增大,NF-κB活性递减.③TRAF2强烈抑制LMP1(1～231)活化NF-κB,而仅部分抑制LMP1Δ187～351活化NF-κB.④TRAF2Δ6～86竞争性抑制TRAF2与LMP1结合.结论:在鼻咽癌中LMP1通过TRAF2而激活NF-κB,其中LMP1的CTAR1区主要介导了这种效应.这为我们进一步从信号传导通路来探讨LMP1的致癌机制提供了新的线索.     

Gambogic Acid通过影响NF-κB信号通路诱导A549细胞凋亡

目的:研究Gambogic Acid（GA）对人非小细胞肺癌A549细胞系中NF-κB信号通路的影响及其对细胞凋亡的促进作用。方法:Western blot法和共聚焦显微镜成像技术检测GA对NF-κB的信号通路的影响,MTT及流式细胞（FCM）术检测GA对A549细胞的促凋亡作用。结果:Western blot发现GA能显著抵抗TNF-α诱导导致的IκB磷酸化水平上升及IκB的降解;共聚焦显微镜成像进一步发现GA有效阻止了NF-κB入核;MTT结果显示GA能显著抑制A549细胞的增殖,当药物浓度为5.0μmol/L时抑制率可达到（93.5±6.5）％（P<0.05),IC50值为1.2±0.4 μmol/L;凋亡检测结果显示A549细胞在0.0、0.5、1.0、2.0、3.0及5.0 μmol/L药物处理下细胞凋亡率分别是（6.0±0.7）%、（15.5±2.3）%、（35.0±3.6）%、（43.5±2.7）%、（43.0±3.8）%及（53.7±2.6）%（P<0.05);结论:实验表明,GA能有效地抑制A549细胞增殖和诱导其凋亡,其机制可能是通过影响NF-κB信号通路而发生作用。     

CARD10 通过活化NF-κB信号进而促进肝癌细胞凋亡抵抗

目的：研究半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶招募域家族分子10（caspase recruitment domain family member 10,CARD10）在肝癌组织中的表达,及其对肝癌进展尤其是凋亡抵抗的作用和机制。方法：采集2008 年至2010 年海军军医大学东方肝胆外科医院收治的129 例肝癌患者手术切除的肝癌及其癌旁组织标本,采用实时定量PCR法检测癌旁和肝癌组织中CARD10 的表达,以Spearman 等级相关统计学分析CARD10 表达与肝癌分期的相关性。在CARD10 质粒转染过表达以及RNA干扰敲减表达后,采用流式细胞术Annexin-V/PI 标记法检测肝癌细胞株的凋亡,采用Western blotting 检测肝癌细胞株中NF-κB信号的活化。结果：CARD10 在肝癌组织中的表达较癌旁组织显著增高（P<0.01）,且肝癌组织中CARD10 的表达增高与肝癌分期进展呈正相关（P<0.01）。CARD10 过表达可以抑制肝癌细胞株SMMC-7721 和BEL-7402 的凋亡,而敲减CARD10 能够促进肝癌细胞株凋亡。CARD10 过表达能够增强肝癌细胞株中促生存的NF-κB信号的活化,而CARD10 敲减能够抑制NF-κB信号活化。结论：CARD10在肝癌组织中表达显著增高并与肝癌进展呈正相关,CARD10 能够通过活化NF-κB信号进而促进肝癌细胞凋亡抵抗。     

抑制NF-κB的表达对射线诱导HeLa细胞株凋亡的影响

背景与目的：TNF、某些化疗药物以及电离辐射可以活化NF-κB,从而抑制细胞凋亡。NF-κB的活化可以通过特异性抑制剂吡咯二硫氨基甲酸脂（pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC）得到抑制。本实验的目的在于探讨抑制NF-κB的表达在宫颈癌HeLa细胞对射线诱导的细胞凋亡中的影响。方法：将HeLa细胞分为实验组加入PDTC（100μmol/L）及对照组不加PDTC。两组均给予直线加速器照射,剂量分别为0、2、4、6Gy,均作用2 h。用Western blot法来观察细胞核内NF-κB含量的变化,用TUNEL法来检测细胞的凋亡,用MTT法测细胞增殖。结果：辐射可以使HeLa细胞内NF-κB的表达增多,PDTC可以抑制由射线介导的NF-κB的增加。抑制了由射线介导的NF-κB的增加,不仅使得HeLa细胞的增殖受到明显的抑制（P〈0.05）也使凋亡指数大大增加（P〈0.001）。结论：在宫颈癌HeLa细胞中抑制NF-κB的表达可以增加由射线介导的细胞凋亡,增加了细胞对射线的反应。     

汉防己碱对MCF-7细胞凋亡及Akt/NF-κB信号传导通路的影响

目的:探讨汉防己碱诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡的信号机制.方法:以MTT法测定不同浓度的汉防己碱(1、5和10 μmol/L)对MCF-7肿瘤细胞增殖抑制;流式细胞仪检测细胞凋亡;免疫印迹法分析AKT活化;细胞免疫化学染色检测NF-κB表达.结果:不同浓度汉防己碱对培养的乳腺癌细胞MCF-7生长有显著的抑制作用,有效的诱导凋亡,且呈剂量依赖性,各组MCF-7细胞生长抑制率分别为(34.04±2.06)%、(54.07±1.08)%和(70.29±1.05)%,与对照相比较差异均有统计学意义,P<0.01;各组细胞凋亡率分别为(15.21±2.13)%、(23.07±1.08)%和(30.35±1.06)%,与对照相比差异均有统计学意义,P<0.05.汉防己碱对细胞内总AKT激酶蛋白的表达没有影响,但抑制磷酸化AKT蛋白的表达;同时对细胞内NF-κB的表达有抑制作用.结论:汉防己碱诱导乳腺癌细胞凋亡的机制与Akt/NF-κB信号途径有关.     

NF-κB的活性对TRAIL诱导肿瘤凋亡的影响研究进展

0 引言`` 1986年,Sen等~([1])首先从B淋巴细胞核中检测到一种蛋白因子,它能与免疫球蛋白κ轻链基因增强子_κB序列(5'-CGATITCC-3)特异结合,并促进κ链基因表达,将之命名为核转录因子κB(nuclearfactor-kappa B,NF-κB).此后研究表明,NF-κB是一种普遍存在的转录因子,能与调控免疫应答、炎性反应、细胞生长分化凋亡等所需的许多细胞因子、黏附分子等基因的启动子或增强子的κB位点特异性结合,启动和调节这些基因的转录,在机体的免疫应答、炎性反应、细胞生长分化和凋亡等方面起重要作用.     

抑制NF-κB通路增强蟾蜍灵诱导的HL-60细胞凋亡

目的:观察蟾蜍灵对HL-60细胞活力和凋亡的影响,对NF-κB通路的作用,探讨NF-κB通路在蟾蜍灵诱导HL-60细胞凋亡过程中的作用.方法:锥虫蓝染色检测细胞活力;流式细胞仪技术检测细胞凋亡和周期分布;采用Western Blot技术检测IKK的磷酸化.结果:蟾蜍灵以时间和剂量依赖性方式诱导HL-60细胞凋亡.24,48和72h抑制细胞活力的IC50浓度分别为26.3,7.8和2.0nmol/L.对照组HL-60细胞有pIKK表达,蟾蜍灵可诱导IKK的快速活化.NF-κB通路的特异性抑制剂Bay 11-7082增强蟾蜍灵的凋亡诱导作用.结论:蟾蜍灵可诱导HL-60细胞凋亡,促进IKK活化与NF-κB通路调节相关,而且与NF-κB通路抑制剂有协同作用.     

乳腺癌组织中MTDH、IκB、NF-κB P65的表达及其临床意义

目的 观察乳腺癌组织中MTDH、IκB、NF-κB P65的表达及与其临床病理指标的相关性.方法 分别采用实时荧光定量PCR及免疫组织化学法,对70例乳腺癌组织和癌旁组织行MTDH、IκB、NF-κB P65的mRNA及蛋白检测,同时分析三者与临床病理指标的相关性.结果 乳腺癌组织中MTDH、NF-κB P65 mRNA及蛋白表达水平均高于癌旁组织(P＜0.05),乳腺癌组织中IκB mRNA及蛋白表达水平低于癌旁组织(P ＜0.05);MTDH、IκB、NF-κB P65的表达与乳腺癌的临床分期、淋巴结转移有关(P＜0.05).结论 乳腺癌中MTDH、IκB、NF-κB P65的表达可能参与了乳腺癌的发生发展.     

食管鳞癌细胞中NF-κB与IκBα的mRNA、蛋白表达

目的：核转录因子NF—kappaB（NF—κB）是一种重要的转录因子，参与调控多种与炎症、抗凋亡、肿瘤形成和转化有关的基因表达。本研究通过检测食管鳞癌细胞中NF—κB与IκBαmRNA、蛋白的表达及NF—κB的DNA结合活性．分析NF—κB在食管鳞癌细胞中的激活状态及其在食管鳞癌细胞的生存及转化中的作用。方法：采用Western blotting法检测两株食管鳞癌细胞胞质中NF—κB亚单位p50和p65、阻遏物IKBα及其磷酸化IKBα的蛋白表达．检测细胞核中p50和p65的蛋白表达并采用EMSA法检测其与DNA的结合活性。使用RT-PCR法检测p50、p65、IκBαmRNA的表达：结果：NF—κB的亚单位p50、p65、IκBα及磷酸化IκBα在食管鳞癌细胞质中均表达．p50、p65蛋白在细胞核中也表达并具有较高的DNA结合活性.RT-PCR结果表明．p50、p65、IκBα的mRNA在细胞中也存在过表达。结论：本研究发现NF—κ在两株食管鳞癌细胞系中被激活，基因的过表达及IκBα的磷酸化在维持NF—κB的活化中起着重要的作用．     

NF-κB信号通路抑制剂与溶瘤麻疹病毒疫苗株协同抗肺癌的作用及机制

背景与目的肺癌已成为我国发病率和死亡率居首位的恶性肿瘤.能自我复制、选择性杀伤肿瘤的溶瘤病毒,是治疗恶性肿瘤的有效策略,而其中溶瘤麻疹病毒疫苗株因其良好的溶瘤效果,且对正常细胞无损伤或微损伤,已进入几项临床试验.本研究旨在探讨核转录因子κB(nuclear factor kappa B, NF-κB)信号通路抑制剂与溶...     

芝麻酚通过AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路调控食管鳞状细胞癌Eca109细胞的自噬和凋亡

目的：探讨芝麻酚（SEM）通过腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）/沉默信息调节因子1(SIRT1)/核因子κB(NF-κB)通路影响食管鳞状细胞癌（ESCC）Eca109细胞自噬和凋亡的机制。方法:用不同浓度的SEM(0、1.562 5、3.125、6.25、12.5、25、50、100、200、400μmol/L)分别处理Eca109细胞、人食管上皮细胞HEEpiC 48 h,CCK-8法检测细胞增殖率，筛选适宜的SEM浓度用于后续实验。将Eca109细胞分为对照组（CK组，0μmol/L）、低剂量SEM组（SEM-L组，25μmol/L）、中剂量SEM组（SEM-M组，50μmol/L）、高剂量SEM组（SEM-H组，100μmol/L）、高剂量SEM+Compound C(AMPK抑制剂)组（SEM-H+Compound C组，100μmol/L+10μmol/L），所有各组Eca109细胞在对应的药物浓度下处理48 h后，CCK-8法检测Eca109细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡，透射电镜观察Eca109细胞内自噬小体，WB法检测Eca109细胞中微管相关蛋白1轻链3(LC3)-...     

小檗碱诱导白血病Molt-4细胞株凋亡及对NF-κB/p65、Caspase-3表达的影响

 【摘要】　目的　研究小檗碱对急性T淋巴细胞白血病细胞株Molt-4增殖的抑制作用及其机制探讨。方法　将0、10、100 μg／ml小檗碱作用于Molt-4细胞后,经细胞形态学观察、流式细胞术、DNA凝胶电泳检测细胞凋亡情况,用免疫印迹法检测NF-κB及Caspase-3的表达。结果　小檗碱作用于Molt-4细胞后,光镜下可见形成凋亡小体,流式细胞术可见存在G2／M期增加和S期减少,DNA凝胶电泳出现典型的DNA梯形条带。Western blot法检测发现部分Caspase-3酶原被激活,而细胞核中p65表达降低。结论　小檗碱可导致白血病细胞Molt-4细胞凋亡,而NF-κB、Caspase-3可能参与了Molt-4细胞凋亡的调控。     

NF-κB信号传导途径对TNF-α诱导的SMMC-7721细胞凋亡的影响

背景与目的:已证明核因子κ B( nuclear factor- κ B,NF- κ B) 在免疫细胞激活、抗病毒、多种应激反应和细胞凋亡的调控等许多方面起着重要作用.本实验研究 NF- κ B信号传导途径对 TNF- α诱导的肝癌细胞株 SMMC- 7721细胞凋亡的影响.方法:采用 ELISA和免疫组化检测 TNF- α对 NF- κ B信号传导通路的激活作用,继而用 TPCK( n- tosyl- Phe- chloromethylketone) 阻断 NF- κ B的活化,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:① TNF- α能激活 NF- κ B信号传导通路 ; ② TPCK能抑制 TNF- α诱导的 NF- κ B活化 ; ③ TPCK抑制 NF- κ B活化后,能加强 TNF- α诱导的细胞凋亡.结论:SMMC- 7721细胞中 NF- κ B信号传导途径参与了细胞的抗凋亡过程,在 SMMC- 7721细胞对 TNF- α的细胞毒性作用耐受中起重要作用.抑制 NF- κ B信号传导途径可能在肿瘤治疗中有潜在的应用价值 .     

三氧化二砷诱导K562细胞凋亡过程中IκB-α,NF-κB蛋白表达的研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导慢性粒细胞性白血病K562细胞凋亡过程中IκB-α以及NF-κB的表达变化.方法应用不同剂量As2O3诱导K562细胞凋亡,以Western-Blot免疫印迹电泳检测NF-κB,IκB-α的表达,流式细胞术检测K562细胞凋亡及分析IκB-α的阳性表达率变化.结果 As2O3可诱导K562细胞凋亡,随着As2O3浓度从1 μmol/L到4 μmol/L的增高细胞凋亡率由16.0%增加到60.6%,胞浆中IκB-α阳性表达率则由88.1%减少到49.2%,胞核中p65量逐渐增加.结论 As2O3可诱导K562细胞凋亡,在此过程中伴有NF-κB的激活,在一定剂量范围内激活的程度随着砷剂浓度的增加而增强.砷剂激活NF-κB通过其抑制蛋白IκB-α的降解.     

丝裂霉素C对肝癌细胞中NF-κB基因表达和分布的影响

目的:探讨丝裂霉素C(MMC)对肝癌细胞中NF-κB分布和基因表达的影响.方法:应用细胞免疫组织化学检测不同浓度的MMC对SK-HEP-1细胞中NF-κB分布的影响,Western-blot检测50μg/ml MMC作用不同时间的NF-κB蛋白水平,RT-PCR方法比较50μg/ml MMC持续处理细胞不同时间和作用2 h停止用药后不同时间NF-κB基因表达水平的影响.结果:不同剂量的MMC能够不同程度地使细胞核中NF-κB免疫组化染色增强,50μg/ml的MMC导致了NF-κB蛋白蛋白印迹水平升高,并在MMC处理8 h的细胞中升至最高,RT-PCR方法检测NF-κB基因mRNA水平在MMC持续处理的细胞中也上升,在第2小時水平最高,随后下降,但是在MMC处理2 h停止用药后NF-κB基因mRNA水平没有下降反而继续上升,并持续到第12小時.结论:MMC能够促进NF-κB自细胞浆进入细胞核,50μg/ml的MMC导致了NF-κB自身表达升高并在撤除用药后仍旧存在,提示NF-κB同细胞抗MMC活性密切相关.     

甲状腺癌中NF-κB p50、NF-κB p65的表达及其与临床特征的关系

目的 探讨甲状腺癌组织中NF-κB p50、NF-κB p65的表达及其与临床特征的关系.方法 选取73例甲状腺癌患者作为研究对象.采用免疫组化SP法检测所有患者甲状腺癌组织的NF-κB p50、NF-κB p65表达情况,并分析其与临床特征的关系.结果 ①NF-κB p50表达阳性组与NF-κB p50表达阴性组之间性别、年龄、病理类型相比,差异无统计学意义(P>0.05);NF-κB p50表达阳性组肿瘤直径、淋巴结转移显著高于NF-κB p50表达阴性组,差异有统计学意义(P<0.05).②NF-κB p65表达阳性组与NF-κB p65表达阴性组之间性别、年龄、病理类型相比,差异无统计学意义(P>0.05);NF-κB p65表达阳性组肿瘤直径、淋巴结转移显著高于NF-κB p65表达阴性组,差异有统计学意义(P<0.05).③甲状腺癌组织表达NF-κB p50与NF-κB p65呈显著正相关(γs=0.653,P<0.05).结论 甲状腺癌组织表达NF-κB p50、NF-κB p65与肿瘤直径、淋巴结转移密切相关,两者可能在甲状腺癌发生发展、淋巴结转移过程中发挥协同作用.     

结肠腺癌细胞株eIF-4E对NF-κB表达的影响及诱导凋亡机理的探讨

目的研究真核细胞起始因子(Eukaryotic Initiation Factor 4E,eIF-4E)对NF-κB表达及活性水平的影响,并对其阻滞后诱导肿瘤细胞凋亡的途径进行探讨.方法应用脂质体包裹与eIF-4E mRNA翻译起始点互补的反义寡核苷酸(asODN),处理人大肠腺癌细胞LS-174T.使用Western blot和RT-PCR方法分别检测eIF-4E被阻抑后其转录和翻译水平的改变.EMSA用来比较eIF-4E阻滞前后NF-κB活性的改变.采用流式细胞仪检测LS-174T细胞凋亡.结果eIF-4E被阻抑表达后,NF-κB蛋白表达和活性水平也有显著下降.伴随eIF-4E表达和NF-κB活性水平下降,LS-174T细胞的凋亡率显著升高.结论本试验证明NF-κB受eIF-4E的翻译调控,eIF-4E的抗凋亡作用部分可能是通过调节NF-κB活性来实现的.此结论对于结肠癌试验性和肿瘤临床的基因治疗具有一定意义.     

姜黄素对乳腺癌MDA-MB-231细胞NOTCH1 和NF-κB表达的影响

 目的 检测姜黄素作用于乳腺癌细胞后NOTCH1和核转录因子-κB（NF-κB）的变化,了解姜黄素抑制乳腺癌细胞增殖的可能机制。 方法 不同剂量（1.25,5.0,20.0μmol/L）姜黄素分别处理乳腺癌MDA-MB-231细胞24,48,72h,MTT法检测细胞增殖 改变。RT-PCR和Western blot检测NOTCH1、NF-κB mRNA和蛋白质表达。 结果 MTT显示,20μmol/L姜黄素处理72h,乳腺癌细胞抑制率为（52.0±0.42）%,与余组比较差异具有统计学意义;PCR结果显示随着剂量和时间的增加,NOTCH1和NF-κB的OD值逐渐下降, Western blot的结果与PCR一致。 结论 姜黄素可下调乳腺癌细胞NOTCH1及NF-κB表达,并呈现剂量和时间依赖性,提示姜黄素具有抑制乳腺癌细胞增殖的作用。     

NF-κB抑制剂对卡铂诱导卵巢癌细胞凋亡的影响

目的探讨NF—κB抑制剂（PDTC）对卡铂诱导卵巢癌细胞SKOV3凋亡的影响。方法采用免疫组织化学方法,观察了卡铂诱导下卵巢癌SKOV3细胞中NF-κB在细胞质和细胞核中的表达变化;采用凝胶迁移率变动试验（EMSA）法,检测卡铂作用下和卡铂与PDTC共同作用下NF—κB的活性;MTT和流式细胞仪分别检测2种情况下SKOV3细胞的生长情况和凋亡率。结果NF—κB在卵巢癌SKOV3细胞质中表达,卡铂诱导12h后卵巢癌SKOV3细胞质中的NF—κB转移至细胞核。EMSA实验结果表明,卡铂诱导后的卵巢癌SKOV3细胞NF—κB的活性增强,PDTC可以抑制此作用。PDTC预处理后可增强卡铂对卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用。卡铂作用24h、48h后卵巢癌SKOV3细胞的凋亡率分别为6．7％、20．1％;卡铂＋PDTC作用24h、48h后卵巢癌SKOV3细胞的凋亡率为14．0％、32．7％,两者比较差异显著（P〈0．05）。结论卡铂能诱导NF—κB的活化,NF—κB的抑制剂可以增强卡铂诱导SKOV3细胞的凋亡,提高化疗疗效。     

c-FLIP和NF-κB p65在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨凋亡相关蛋白c-FLIP和NF-κB p65在人乳腺癌的表达及相关性,分析其与乳腺癌转移复发的关系。方法:应用免疫组织化学法检测80例乳腺癌组织和相应的癌旁组织中c-FLIP和NF-κBp65的表达情况。结果:80例乳腺癌组织中c-FLIP及NF-κB p65表达的阳性率显著高于相应的癌旁组织(P<0.05),c-FLIP的表达与TNM分期、组织学分级、腋窝淋巴结转移、术后复发及C-erbB-2表达密切相关(P<0.05);NF-κB p65的表达组织学分级、肿瘤大小及腋窝淋巴结转移密切相关(P<0.05)。c-FLIP和NF-κB p65的表达有显著正相关性(γ=0.271,P=0.015)。结论:c-FLIP和NF-κB p65的高表达可能在乳腺癌的发生及进展中起着重要作用。