SARS相关抗肺自身抗体产生机制的初步研究

目的:检测严重急性呼吸综合征(SARS)患者血清中抗SARS病毒抗体与肺组织的反应性.方法:采用酶联免疫吸附法检测SARS患者恢复期血清中抗SARS病毒抗体,并采用肺组织与抗体共同孵育的方法,吸附抗SARS病毒抗体中同肺组织反应的SARS相关抗体.结果:与肺组织共同孵育后,抗SARS病毒抗体被部分中和,中和率为13.6％～32.2％.结论:部分抗SARS病毒抗体可以与肺组织反应,SARS病毒抗原同肺组织抗原有部分同源性.机体对SARS病毒抗原和肺组织的交叉免疫性可能是SARS相关抗肺自身抗体产生的原因.     

严重急性呼吸综合征患者血清中SARS相关抗体的特异性研究

目的：检测严重急性呼吸综合征(SARS)患者血清中SARS相关抗体的抗原特异性。方法：采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中IgG抗体，并采用抗原抗体的预孵育，吸附血清中抗原特异性抗体，检测其抗原特异性。结果：SARS患者血清与SARS患者肺组织以及非SARS患者肺组织均有相似的反应性。阳性血清与非SARS患者肺组织孵育后，其中抗SARS患者肺组织抗体被吸收，吸收率为100％。结论：本组SARS患者血清中存在抗肺组织抗体，其对SARS致病机制的意义值得进一步研究。     

自身抗体的检测与临床应用

自身抗体的检测与临床应用北京中日友好医院娄永新１自身免疫病与自身抗体自身免疫病是自身免疫系统对自己的某些器官组织、细胞或细胞间物质产生了免疫应答反应，因而体液中产生自身抗体。自身抗体和自身免疫活性Ｔ淋巴细胞又对自身抗原的器官组织、细胞再起对应的抗原抗...     

自身免疫的病因学(译文)

自身免疫性疾病患者血清中常含有抗不同组织的自身抗体。然而,要确定与不同组织起反应的这种抗体的反应类型所表现的是各种特异性不同的自身抗体,还是与不同组织的相同抗原决定簇起反应的特异性相同的抗体是困难的。通过增殖大理的自身免疫     

抗内耳组织的特异性抗体与淋巴细胞免疫示踪研究

目的：了解针对内耳组织的特异性抗体和淋巴细胞到达内耳的途径、部位及其对内耳组织和生理功能的影响。方法：采用荧光标记抗体和同位素标记淋巴细胞，观察被动免疫动物内耳不同部位组织中荧光反应和同位素含是的变化，同时测定听觉功能。结果：特异性抗体（ＩｇＧ）首先到达血管纹部位，内耳听觉功能障碍发生在内耳组织中抗体含量较多时。特异性抗体（ＩｇＧ）首先到达血管纹部位，内耳听觉功能障碍发生在内耳组织中抗体含量较多时     

人胎盘型谷胱甘肽S-转移酶抗体的制备及其在肺癌研究中的应用

报告了人胎盘型谷胱甘肽S-转移酶(GST-π)抗体的制备和应用。免疫沉淀和免疫组化显示,该抗体与日本Sato教授赠送的GST-π抗体具有相同的特异性和反应性。用免疫金银法检测了40例肺癌组织和配对肺组织对GST-π抗体反应的情况,肺组织呈弱阳性反应,19例鳞癌均为阳性,腺癌和小细胞癌的阳性率分别为89%(16/18)和33%(1/3),与所赠送抗体检测结果相比,差别无统计学意义(P>0.05)。免疫吸印法(Western blot)表明肺癌组织中GST-π水平明显高于正常肺组织。GST-π是非小细胞肺癌的一种标志酶,兔抗GST-π抗体能够较精确、敏感地用于检测组织中的酶蛋白。     

一个新的生长激素受体相关蛋白的发现及临床意义

目的鉴定实验中发现的一个新蛋白与生长激素受体（growth hormone receptor,GHR）蛋白的相关性。方法用两种不同的GHR抗体,通过蛋白质印迹法（Western blot）检测16对结直肠癌患者的肿瘤组织和癌旁组织以及8个结直肠癌细胞系中GHR的表达;在结直肠癌细胞系中过表达pcDNA3.1-HA-GHR质粒,并应用HA-tag血凝素标记（hemagglutinin-tag,HA-tag）抗体检测HA融合蛋白。结果用两种不同的GHR抗体在结直肠癌患者组织中及结直肠癌细胞系中均能检测到一大小约45kD的蛋白,抗HA-tag抗体检测外源性GHR的表达也能检测到一与HA融合的大小约45kD的蛋白。并且发现这个45kD大小的蛋白在癌组织的表达明显低于癌旁组织（P〈0.05）,在8种结直肠癌细胞系均检测到这一蛋白,其大小为45kD,并通过HA-tag抗体检测到此蛋白与GHR蛋白有关。结论此蛋白与GHR有关,并且可能参与了结直肠癌的发生与发展。     

角膜穿孔伤患者血清中四种眼组织抗体的测定

目的通过测定眼角膜穿孔伤和外眼病患者血清抗葡萄膜抗体(AUAb)、抗晶状体抗体(ALAb)、抗视网膜抗体(ARAb)和抗角膜抗体(AKAb),了解角膜穿孔伤后患者血清中眼组织的自身免疫状况。方法取新鲜的牛眼组织制备相应组织抗原和抗体,用其抗原致敏羊血球后,改良的间接血凝法检测患者血清中的相应眼组织抗体。结果角膜穿孔伤患者血清中AUAb、ALAb和AKAb阳性率显著高于正常人(P<0.05或P<0.01),而外眼病组却无差异(P>0.05)。结论通过对角膜穿孔伤患者血清中眼组织自身抗体的检测,可及时了解机体的免疫反应情况,对临床的诊断和防治有一定指导意义。     

抗体基因芯片应用于检测鼻咽癌组织切片蛋白质表达谱的研究

目的研究应用抗体基因芯片检测鼻咽癌组织特异性蛋白质表达谱的新技术方案。方法利用噬菌体抗体库筛选出抗鼻咽癌的特异性抗体库,以扩增抗体基因V—D-J片段作为标识分子用于制备抗体基因芯片;通过特异性抗体库与鼻咽癌肿瘤组织结合后,使标记引物扩增的V—D—J序列与抗体基因芯片进行杂交后显示癌组织的蛋白质表达谱,从而选择性通过免疫组织化学显示其中关键性蛋白质原位表达状况。结果肿瘤组织结合的抗体滴度可达到10^6～10^8数量级,标记的DNA分子效价约为10^-6～10^-8,以该文一次检测20个抗体为例,基因芯片检出有10～14个阳性蛋白质表达谱;免疫组织化学可显示阳性抗体在细胞中的结合部位。结论以抗体基因芯片为核心的技术方案,能在组织切片上同时检测含多个蛋白质表达谱,可以广泛应用于基础研究和临床诊疗过程。     

免疫组化技术实验课教学改革与实践

免疫组织化学又称免疫细胞化学。它是组织化学的分支,是用标记的特异性抗体(或抗原)对组织内抗原(或抗体)的分布进行组织和细胞原位检测技术[1]。目前在基础与临床科研中被广泛应用。近年     

小鼠实验性干燥综合征模型的建立

目的: 利用小鼠唾液腺蛋白免疫诱导构建实验性干燥综合征(experimental Sjgren syndrome,ESS)模型。方法: 制备唾液腺蛋白,将其免疫C57BL/6小鼠,诱导ESS模型,检测小鼠唾液流速,采用ELISA试剂盒检测血清中自身抗体水平,HE染色观察唾液腺组织中淋巴细胞的浸润情况。结果： 与对照组相比,ESS小鼠唾液流速显著降低(P<0.05);血清中抗唾液腺蛋白抗体,抗毒蕈碱乙酰胆碱3受体抗体(抗M3R抗体),抗核抗体等自身抗体水平明显增高(P<0.05);唾液腺组织和颈部淋巴结明显肿大;HE染色显示ESS小鼠唾液腺组织中大量淋巴细胞浸润且伴有腺管的破坏。结论： 通过小鼠唾液腺蛋白免疫C57BL/6小鼠,可成功构建ESS模型。     

不明原因不孕患者子宫内膜组织黏附分子、CD分子和免疫性抗体的表达

目的:研究不明原因不孕患者子宫内膜组织中黏附分子、CD分子以及免疫性抗体的表达情况.方法:将2013年1月～2014年9月期间在我院就诊的120例不明原因不孕女性患者纳入研究的观察组,将同期在我院体检的120例健康女性纳入研究的对照组,采集子宫内膜组织并检测黏附分子、CD分子以及免疫性抗体的表达情况.结果:(1)黏附分子:观察组患者子宫内膜组织中钙黏蛋白(E-cad-herin)、细胞间黏附分子(ICAM-1)、整合素(Integrin) mRNA和蛋白含量均低于对照组(P＜0.05);(2)CD分子:观察组患者子宫内膜组织中CD68的mRNA和蛋白含量高于对照组(P＜0.05),CD163、CD4+ CD25+ FoxP3的mRNA和蛋白含量低于对照组(P＜0.05);(3)免疫性抗体:观察组患者子宫内膜组织中免疫性抗体抗精子抗体(AsAb)、抗子宫内膜抗体(EmAb)、抗心磷脂抗体(ACAb)、抗绒毛膜促性腺激素抗体(hCGAb)、抗卵巢抗体(AoAb)的含量高于对照组(P＜0.05).结论:宫颈内膜组织中黏附分子表达降低、CD分子表达紊乱、自身抗体表达增多与女性不孕的发生密切相关.     

母胎界面抗磷脂抗体-补体激活机制与自发性早产关系的研究

目的:探讨外周血、胎盘组织中抗磷脂抗体(APA)水平和补体激活机制与自发性早产(SPB)的关系。方法:选取2015年2月-2016年2月本院收治的60例早产分娩产妇作为病例组,另择同期60例正常分娩产妇作为对照组,使用酶联免疫吸附法(ELISA)测定两组产妇外周血、胎盘组织中抗心磷脂抗体(ACA)、狼疮样抗凝物(LA)和抗β2GPⅠ抗体的水平,采用免疫组化方法检测胎盘组织中的补体系统(包括C3、C5、IgG和IgM)水平。结果:病例组胎盘组织中ACA、LA和抗β2GPⅠ抗体水平较外周血更为灵敏,两者比较差异均有统计学意义(P0.05);病例组胎盘组织中C3、C5、IgG和IgM沉积极为显著,而对照组基本无沉积,两组比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论:胎盘组织中的ACA、LA和抗β2GPⅠ抗体指标更能反映SPB病情,补体系统激活与APA诱发SPB过程密切相关。     

人类肿瘤相关蛋白hyrdC的原核表达、抗体制备及其在胃癌中的初步检测

目的:制备原核表达的hyrdC纯化蛋白及相应单克隆抗体,并以该抗体初步检测胃癌中hyrdC蛋白的表达.方法:用RT-PCR方法获取人hyrdC基因序列,插入原核表达载体pET32a构建重组质粒,纯化得到TRX-hyrdC融合蛋白,将其作为抗原免疫BALB/c小鼠,按常规方法制备抗hyrdC单克隆抗体,以ELISA、Western印迹法筛选及鉴定;采用免疫组织化学法(SP法)比较胃癌组织及瘤旁正常组织中hyrdC抗体水平的差异.结果:测序结果显示克隆的hyrdC ORF与GenBank中登录的序列一致.所获TRX-hyrdC融合蛋白相对分子质量与理论计算值相符,获得2株分泌抗hyrdC单克隆抗体的细胞株;Western印迹法显示该抗体能特异性地结合人hyrdC蛋白;SP法测定显示,hyrdC蛋白在胃癌组织中表达明显高于正常胃组织(P＜0.001).结论:成功制备了抗hyrdC单克隆抗体;SP法测定胃癌组织与瘤旁正常组织中hyrdC抗体水平有显著差异.     

正常人和病人血清中某些自身抗体的发生率(用免疫荧光技术研究)

近9年来我们用免疫荧光方法检查了一批正常人和病人的自身抗体(抗核抗体、甲状腺抗体、平滑肌抗体、线粒体抗体、壁细胞抗体和粘液抗体等),约5,000人次。一般公认检查器官特异性组织抗体和一些非器官特异性抗体最常用的方法是间接免疫荧光技术(IFT),用适当的组织作底物。我们的经验也证明IFT普通实验室中使用是足够     

抗体芯片分析炎性细胞因子在复发性 鼻息肉中的表达

目的：应用抗体芯片分析复发性鼻息肉黏膜组织中炎性细胞因子的表达。方法：用生物素标记从鼻息肉组,复发性鼻息肉组及对照组患者鼻黏膜组织中提取的总蛋白,然后与预先点有40个主要炎症相关细胞因子的特异抗体的抗体芯片膜反应,目标蛋白与辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗链霉生物素抗体结合并曝光显示反应信号,最后用激光扫描仪将其转化为图像文件进行分析。结果：与对照组相比,鼻息肉患者组血清中多种炎性细胞因子包括促炎因子、抗炎因子、趋化因子、某些细胞因子受体等的表达水平大幅度提高；而复发性鼻息肉中较鼻息肉高表达的主要是趋化因子,在鼻息肉中高表达的促炎因子在复发性鼻息肉中呈现低表达趋势。结论：鼻息肉与复发性鼻息肉组织中细胞因子的表达存在差异；趋化因子高表达在鼻息肉复发中起重要作用。     

抗体芯片分析炎性细胞因子在复发性鼻息肉中的表达

目的：应用抗体芯片分析复发性鼻息肉黏膜组织中炎性细胞因子的表达。方法：用生物素标记从鼻息肉组,复发性鼻息肉组及对照组患者鼻黏膜组织中提取的总蛋白,然后与预先点有40个主要炎症相关细胞因子的特异抗体的抗体芯片膜反应,目标蛋白与辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗链霉生物素抗体结合并曝光显示反应信号,最后用激光扫描仪将其转化为图像文件进行分析。结果：与对照组相比,鼻息肉患者组血清中多种炎性细胞因子包括促炎因子、抗炎因子、趋化因子、某些细胞因子受体等的表达水平大幅度提高;而复发性鼻息肉中较鼻息肉高表达的主要是趋化因子,在鼻息肉中高表达的促炎因子在复发性鼻息肉中呈现低表达趋势。结论：鼻息肉与复发性鼻息肉组织中细胞因子的表达存在差异;趋化因子高表达在鼻息肉复发中起重要作用。     

人Ⅱ型高尔基体膜蛋白73多克隆抗体的制备及免疫学鉴定

目的制备人Ⅱ型高尔基体膜蛋白73(Golgi protein 73,GP73)的多克隆抗体,为进一步研究GP73的功能奠定基础。方法利用重组原核表达载体PET-32a-GP73在大肠杆菌BL21中诱导表达,利用切胶方法回收纯化蛋白,并免疫新西兰兔制备多克隆抗体。制备的抗体经硫酸铵沉淀纯化后,用ELISA法和Western blot对多克隆抗体进行效价和特异性检测,用免疫组织化学法(IHC)检测纯化抗体在不同肝组织中识别GP73的能力。结果 GP73蛋白表达成功,并成功获得纯化的GP73蛋白及兔抗GP73多克隆抗体;ELISA法测定多克隆抗体效价>16 000;Western blot证明多克隆抗体的特异性良好;IHC显示GP73蛋白在正常肝组织中仅表达于胆管上皮细胞,而在肝癌组织中表达于肝癌细胞和胆管上皮细胞。结论成功获得了纯化的GP73蛋白及高效价的多克隆抗体,肝脏组织的IHC验证了其良好的特异性。     

甲状腺自身抗体的检测在甲状腺疾病中的临床价值

甲状腺球蛋白抗体（TGAb）和甲状腺过氧化物酶抗体（TPO—Ab）是主要的甲状腺组织的自身抗体,与甲状腺组织损伤有密切关系。为探讨TGAb、TPO—Ab两种甲状腺自身抗体在甲状腺疾病诊治中的价值,笔者回顾性分析了241例甲状腺疾病患者的TGAb、TPO—Ab两种甲状腺自身抗体的测定结果,现报告如下。     

抗人趋化素样因子1羧基端多肽抗体的制备、鉴定及组织芯片分析

目的制备及鉴定抗人趋化素样因子1(CKLF1)多克隆抗体,为CKLF1表达和功能研究提供基础.方法利用生物信息学方法分析CKLF1蛋白序列,设计、合成CKLF1羧基端多肽,与钥孔戚血蓝素(KLH)偶联,免疫新西兰白兔获得多克隆抗体.经ELISA法测定抗体效价,Western-blot鉴定抗体与原核细胞体外翻译和果蝇S2细胞稳定转染表达的CKLF1反应,组织芯片检测该抗体与内源性表达的CKLFs结合.结果抗CKLF1 C端多肽抗体的效价为10-4,能识别在原核细胞体外翻译系统和真核细胞中表达的CKLF1蛋白,也可与多种组织中天然表达的CKLFs发生特异性反应,在正常支气管软骨、胃粘膜和平滑肌中呈阳性表达,在正常直肠和高分化直肠癌的腺上皮中呈强阳性表达,而在低分化的直肠癌中为阴性.结论抗CKLF1多克隆抗体效价高,亲和力强,可用于CKLF1的检测和研究.