M3受体对体外H2O2诱导大鼠心肌细胞凋亡的保护作用

目的探讨M₃受体激动对H₂O₂诱导的大鼠培养心肌细胞凋亡的作用，进一步阐明其机制。方法末端标记法 (TUNEL)进行细胞凋亡检测；免疫组化方法检测Bcl-2和Fas的表达；共聚焦显微镜观察［Ca²⁺］_i荧光强度变化。结果M₃受体激动剂胆碱(10 mmol·L^-1)可减少H₂O₂诱导的心肌细胞凋亡的数量，并可增加心肌Bcl-2的表达，减少Fas表达，抑制H₂O₂诱导的［Ca²⁺］_i荧光强度的升高。但预先应用4DAMP (10 nmol·L^-1)阻断M₃受体可逆转胆碱作用。结论激动M₃受体对H₂O₂诱导的心肌细胞凋亡有保护作用，其机制可能与Bcl-2和Fas表达以及下调［Ca²⁺］_i有关。     

抗心律失常药物作用的新靶点M3R/IKM3

目的研究心脏M₃受体/M₃受体介导的钾通道与心律失常的关系，寻找抗心律失常药物的新靶点。方法 分别以结扎大鼠左冠状动脉前降支所致急性心律失常模型和膜片钳技术为基础，观察M₃受体的干预作用及作用机制。结果M₃受体阻断剂4DAMP(4-diphenylacetoxy-n-methylpiperidine-methiodide)加重结扎大鼠冠状动脉前降支所致心律失常，而M₃受体激动剂胆碱能明显对抗其作用。其他亚型受体阻断剂，M₁受体阻断剂(prienzepine)、M₂受体阻断剂(methotramine)和M₄受体阻断剂(tropicamide)对结扎大鼠左冠状动脉前降支所致急性心律失常无影响。在膜片钳实验中发现，胆碱可激活一种延迟整流钾电流(IK_M3)，此电流可被M₃受体阻断剂4DAMP明显抑制。而M₁，M₂和M₄受体阻断剂对胆碱介导的电流无作用。结论胆碱通过激动心肌M₃受体诱发一外向钾电流(IK_M3)，并在维持心脏离子通道平衡中起重要作用。M₃受体/IK_M3可能是抗心律失常新靶点。     

M3受体在脑心综合征心律失常中的作用

观察M₃受体(M₃R)在脑心综合征(CCS)模型大鼠心室肌中的作用及其表达，以探讨其与CCS心律失常的关系。线栓法建立CCS模型，监测心电图，激光共聚焦扫描显微镜记录激动M₃R后心肌细胞内钙的变化，Western blotting检测心室肌中M₃R表达水平的改变。同对照组相比，模型组心电图QRS、QT间期显著延长(P<0.01)；Western blotting结果显示模型组心室肌中M₃R的表达水平较对照组显著降低(P<0.05)；胆碱激动M₃R可以抑制KCl除极诱导的模型组心肌细胞内钙的升高幅度(P<0.01)，其特异阻断剂4-DAMP可以阻断这一作用。M₃R表达降低可能是CCS心律失常的重要原因之一。激动M₃R可以降低心肌细胞内钙，M₃R可能是治疗CCS心律失常新的靶点。     

心脏M3受体作为抗心律失常药物新靶点研究的进展

心脏在交感神经和副交感神经的精细控制下完成正常的生理功能，心脏迷走神经通过刺激M型乙酰胆碱受体（muscarinic acetylcholine receptor．mAchR）调节心脏收缩力、兴奋性和传导。目前，通过分子生物学技术已经克隆出哺乳动物M受体的5个亚型，即m1，m2，m3，m4和m5。由于尚无m5受体相对特异性阻滞剂和激动剂，通过药理学的方法，将M受体分为M1，M2，M3及M4等4个亚型。     

白藜芦醇能够修复离体缺血再灌注损伤大鼠心脏M3受体与间隙连接蛋白43间结构及功能性整合

为了探讨白藜芦醇是否能通过影响M₃受体和间隙连接蛋白43(Cx43)间结构及功能性整合发挥其抗心肌缺血再灌注损伤作用，应用免疫共沉淀、免疫印迹及免疫荧光技术研究白藜芦醇对M₃受体与Cx43间结构及功能性整合的影响。结合大鼠离体II导联心电图及心肌超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的检测观察白藜芦醇是否能恢复心肌缺血再灌注损伤。白藜芦醇能修复心肌缺血再灌注损伤所致的M₃受体与Cx43间结构及功能性整合的破坏及纠正Cx43表达异常。同时QRS波时限﹑SOD及MDA的改变也得到相应恢复。白藜芦醇能修复M₃受体与Cx43间结构及功能性整合而发挥抗缺血再灌注损伤作用。     

整合素αvβ3受体拮抗剂药效团模型的研究

为构建可靠的整合素α_vβ₃受体选择性拮抗剂的药效团模型并根据模型设计小分子活性化合物,选择对α_vβ₃受体具有较高抑制活性（IC₅₀ < 110 nmol·L^-1）的4个类型（分别以酰胺、哌嗪、哌啶、γ-戊内酰胺为中间连接基）的30个化合物为训练集,利用Catalyst软件构建整合素α_vβ₃受体选择性拮抗剂药效团模型,并在数据库中寻找具有活性的母体结构,对母体结构进行修饰和改造及类药性分析得到先导化合物。得到的药效团模型相关系数好、预测能力高,可较准确的预测相关化合物的活性。优化模型含1个芳环中心（RA）、1个可阴离子化部位（NI）和2个疏水作用基（HP）,其相关系数与权重值分别为：RMS = 0.73, Correl = 0.90, Weight = 1.17, Config = 14.00。所设计的目标化合物预测活性强且结构简单,易于合成,噻唑类为未见报道的一类母体结构化合物。
     

迷迭香酸诱导肝癌HepG2细胞凋亡的作用机制研究

摘 要 目的：研究迷迭香酸诱导HepG₂细胞凋亡的作用机制。方法: MTT法检测不同浓度的迷迭香酸作用于HepG₂细胞48 h后,对细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测不同浓度迷迭香酸分别作用于HepG₂细胞24 h及48 h后的细胞凋亡;Western Blotting法检测迷迭香酸作用HepG₂细胞48 h对P53和c-Myc蛋白表达的影响。结果: 12.50,25.00,50.00,100.00 μg·ml^-1浓度的迷迭香酸作用48 h后对HepG₂的生长有抑制作用,半抑制浓度（IC₅₀）为43.48 μg·ml^-1。对比不同浓度迷迭香酸作用HepG₂细胞24 h及48 h,当作用48 h时对HepG₂细胞的早期凋亡产生作用。不同浓度迷迭香酸作用于 HepG₂48 h后,c-Myc的表达随迷迭香酸浓度的增加而降低,P53的表达随迷迭香酸浓度的增加而增高。结论:迷迭香酸对HepG₂细胞增殖的抑制作用呈剂量依赖性,可通过对抑癌基因P53的激活及对原癌基因c-Myc蛋白的切割,促进 HepG₂细胞发生凋亡。     

人参皂甙Rb1和Rg1对小鼠中枢神经递质受体和脑内蛋白质合成的影响

应用放射配基结合法测定了人参皂甙Rb₁和Rg₁对α₁,α₂,β肾上腺素能受体、M胆碱能受体、5-羟色胺、多巴胺及GABA等七种受体的作用。结果均不能证明它们对这七种受体有亲和力。但给动物ip药物连续5天,Rb₁和Rg₁均能使中枢M胆碱受体密度显著增高。Rb₁及Rg₁还能显著增加脑内蛋白质的含量。上述实验结果对解释人参的中枢作用提供了重要证据。     

反相高效液相色谱分析赤霉素GA3含量

以μBondapak C₁₈柱建立了赤霉素GA₃的HPLC分析方法。反相HPLC梯度条件可使GA₃与包括双键异构体GA₁在内的其它同系物通过离子配对机制获得分离。此法操作简便,不需衍生化;分析快速,色谱全程仅15 min;检测灵敏,0.5μg即可准确定量;线性(r=0.999,n=5)、重复性(RSD<2%,n=4)均佳;结果准确。优越性全面超出各传统分析方法,可望成为赤霉素质量分析的标准方法。     

薯蓣皂苷元衍生物与M3受体的分子对接研究

目的研究薯蓣皂苷元衍生物与M3受体相互作用可能的构效关系,为薯蓣皂苷元舒张平滑肌的结构改造提供更多的理论基础。方法运用AutoDock4.0研究薯蓣皂苷元衍生物与M3受体的分子对接,并分析了对接结果与薯蓣皂苷元衍生物对离体豚鼠气管平滑肌舒张活性的结果,对接模型中的M3受体分子模型为以牛视紫红质的晶体结构为模板同源建模搭建的人M3受体的三维结构模型。结果薯蓣皂苷元衍生物与M3受体的对接结果与离体豚鼠气管平滑肌舒张的活性结果有一定联系。结论薯蓣皂苷元衍生物Ⅰ～Ⅴ的舒张活性有在一定范围内随碳链增长而提高的趋势;芳香酯类(Ⅵ～Ⅸ)的舒张活性可能与苯环取代基的供电性有关;带苯环的支链酯类(Ⅹ～Ⅺ)的位阻可能对舒张活性影响较大。因此,薯蓣皂苷元衍生物与M3受体的对接对其进一步的修饰有一定的指导作用。     

硫化氢对急性缺血所致心肌细胞凋亡的影响

目的观察H2S对急性缺血所致大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法健康成年♂SD大鼠(270±20)g,随机分为:假手术组、缺血组、缺血+NaHS低、中、高剂量组。麻醉大鼠,结扎左冠状动脉前降支,NaHS低、中、高剂量组分别于缺血3 h时腹腔注射0.78、1.56和3.12 mg·kg-1的NaHS,缺血组注射等容量的生理盐水,假手术组只穿线不结扎。各组大鼠均于缺血6 h时经颈总动脉取血迅速开胸取心脏,流式细胞术检测心肌组织细胞凋亡率,Western blot法检测caspase-3蛋白的表达,免疫组化法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达,HE染色观察心肌组织学变化。结果大鼠心肌缺血6 h后,心肌细胞凋亡率、caspase-3和Bax表达阳性细胞数百分率明显升高,Bcl-2表达阳性细胞数百分率降低。缺血3 h治疗3 h时,NaHS 3个剂量组大鼠心肌细胞凋亡率、caspase-3和Bax表达阳性细胞数百分率明显低于缺血组,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax比值高于缺血组。组织形态学变化显示,假手术组大鼠心肌细胞排列整齐,着色均匀,缺血组大鼠心脏部分区域心肌纤维横纹不齐或消失,核偏移甚至裂解消失,有炎性因子渗出,NaHS 3个剂量组大鼠心肌细胞损伤程度较缺血组明显减轻。结论硫化氢对大鼠急性缺血心肌具有一定的保护作用,上调Bcl-2的表达,下调Bax表达,抑制细胞凋亡可能是其重要保护作用机制。     

Coxackie B_3病毒诱导心肌细胞凋亡的实验研究

CVB3病毒为病毒性心肌炎的主要致病因素，CVB3病毒可直接损伤心肌，并且借助与宿主MHC／CLASS形成复合物诱导CTL等杀伤性淋巴细胞导致心肌细胞的损伤。近期研究表明，凋亡机制参与心肌炎的病理损伤过程p”’］，慢性。O肌炎、扩张性心肌病心肌组织中持续存在无感染活性的肠道病毒RNA［’叫。其产生机制如何？为此我们应用原位末端标记法（TU－NE法）及电镜技术观测了CVB’病毒对心肌细胞的病理损伤过程。旨在探讨CVB’与心肌细胞凋亡的关系问题。l材料与方法1．l病毒CoxsackieB。病毒，哈尔滨医科大学微生物教研室提供，微量…     

M3 muscarinic acetylcholine receptor is associated with β-catenin in ventricular myocytes during myocardial infarction in the rat

1. The present study was designed to investigate whether the M₃ muscarinic acetylcholine receptors (mAChR) is associated with β‐catenin in the ventricular myocardium during ischaemic myocardial injury and to determine the possible mechanism/s involved. 2. Rat hearts were subjected to coronary artery ligation for 1 and 6 h or 1 month to establish a myocardial ischaemia (MI) model. In the acute MI model, 16 rats were randomized into four groups: (i) control; (ii) ischaemia (rats were subjected to 20 min coronary occlusion); (iii) choline (10 mg/kg, i.v., choline chloride, an M₃ receptor agonist, was administered 15 min before occlusion); and (iv) 4‐diphenylacetoxy‐N‐methylpiperidine methiodide (4‐DAMP; 0.12 mg/kg 4‐DAMP, an M₃ receptor antagonist, was administered 20 min before occlusion, followed 5 min later by 10 mg/kg, i.v., choline chloride). Immunochemistry, western blot analysis and immunoprecipitation were used to determine the expression and localization of β‐catenin and the M₃ mAChR. 3. Myocardial ischaemia caused a time‐dependent increase in the expression of β‐catenin. Moreover, a physical association was found between β‐catenin and the M₃ mAChR in intercalated discs. This association was enhanced by prolonged ischaemia. Administration of choline before ischaemia not only increased β‐catenin expression, but also strengthened the association between β‐catenin and the M₃ mAChR. However, blockade of M₃ mAChR by 4‐DAMP completely inhibited the effect of choline on the expression of β‐catenin. In addition, MI increased phosphorylation of the M₃ mAChR. 4. The results indicate that increased β‐catenin activity is associated with M₃ mAChR during MI. This association is likely to play a role in heart signal transduction during ischaemia between neighbouring ventricular myocardiocum.     

培哚普利对心肌梗塞后心力衰竭大鼠左室舒张功能的影响

观察了培哚普利（Ｐｅｒ）对心肌梗塞（ＭＩ）后心力衰竭（ＨＦ）大鼠左室舒张功能的影响。与对照组相比，Ｐｅｒ处理４ｗｋ大鼠左室舒张末压降低，左室压最大下降速率增高，等容舒张时间常数（Ｔ值）缩短伴心、肺重量明显减轻。心肌组织超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活力增高，丙二醛及Ｃａ２＋含量降低。提示Ｐｅｒ对ＭＩ后左室舒张功能有保护作用，其机制可能与保护ＳＯＤ活性，减少脂质过氧化及Ｃａ２＋超载有关。