一例罕见B(A)血型的基因鉴定

目的对1例血清学血型鉴定困难的患者进行基因鉴定,分析引起血型鉴定困难的原因及突变基因。方法采用微柱凝胶法和试管法进行血清学血型鉴定、抗球蛋白试验和抗体筛查,采用聚合酶链反应(PCR)扩增结合测序及PCR产物克隆的方法,分析该患者ABO基因第6、7外显子区及其侧翼序列,寻找变异位点。结果患者血清学血型鉴定正反结果不一致,其红细胞与单克隆抗A抗体反应呈弱阳性(++),与单克隆抗B及抗H抗体反应均为强阳性(++++);其血清与A1型红细胞呈现弱凝集,但不凝集B和O型红细胞;患者直接及间接抗球蛋白试验均为阴性、血清抗体筛查为阴性。经测序发现,患者ABO基因存在多个变异,其第6外显子区存在261del和c.297AG二处杂合变异,第7外显子区存在c.526CG、c.640AG、c.646TA、c.657CT、c.681GA、c.703GA、c.771CT、c.796CT、c.803GC、c.829GA、c.930GA共11处杂合变异,以A101等位基因为标准序列进行比较,对照Blood Group Antigen Gene Mutation Database进行ABO等位基因突变分析,判断患者血型为B(A)04/O06血型。结论患者的B变异的基因型及弱AB的表型是引起血型鉴定正反不一致的主要原因,DNA基因分型有助于解决疑难样本的血型鉴定。     

B(A)血型等位基因分型研究

目的了解血清学定型为B(A)血型标本的分子基础。方法采用PCR-SSP方法检测以血清学方法定型为B(A)血型的4名献血者和8例送检患者标本的ABO基因型;对于有O等位基因的杂合子标本,使用特异性引物分别扩增O和B等位基因的7号外显子编码序列,并做测序分析。结果 12例采用血清学方法定为B(A)血型标本的ABO基因型分别为B/B型1例(8.33%),B/O1型4例(33.33%),B/O2型7例(58.33%);序列分析显示:B(A)02等位基因为5例(41.67%),B(A)04等位基因为7例(58.33%)。结论 B(A)04和B(A)02等位基因可能是我国北方汉族人群B(A)血型中主要的遗传类型。     

罕见B(A)血型的分子遗传学研究

目的以核苷酸序列分析鉴定出血型血清学分型困难标本的ABO血型基因型。方法对常规血清学方法难以做ABO血型准确定型的3例被捡血样,采用PCR方法扩增其ABO等位基因的第6、7外显子,PCR产物采用直接测序和克隆测序的方法,以确定其基因型。结果 3例被检血样的血型血清学结果相似:红细胞与抗-A弱凝集,与抗-B强凝集,不与抗-A1凝集,其血清中存在抗-A,初步定型为AWB;经直接测序和克隆测序发现:3例被检血样都含有O等位基因,且它们的B等位基因在第7外显子都存在700CG突变,证实其为B(A)02等位基因。结论核苷酸序列分析证实这3例血清学表现为AWB亚型个体均为B(A)表现型,基因型均为罕见的B(A)02/O型。     

罕见B(A)血型的鉴定

目的观察2例罕见B(A)血型的血清学特征并研究其分子机制。方法用血型血清学鉴定2例献血者标本ABO血型,用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)基因分型和直接测序确定其基因型。结果 2例献血者血型血清学检测结果均表现为B(A)亚型的特点。标本1基因分型为BO2,测序结果为第7外显子B基因发生640AG突变,符合B(A)04/O02的基因型特点;标本2基因分型为BO1,测序结果为第7外显子B基因发生700CG突变,符合B(A)02/O01的基因型特点。结论2例标本均为B(A)表现型,基因型分别为B(A)04/O02和B(A)02/O01。     

中国汉族人群检出新的B(A)641T>C等位基因

目的明确稀有ABO表现型的遗传学基础。方法对ABO血清学常规定型正反不一致的样本,采用PCR-RFLP方法作初步基因分型,对8例血清学表现为AwB,而基因分型具有O基因的个体,进行ABO基因第6和7外显子PCR产物的TA克隆及核苷酸序列测定。结果8例样本除1对为母女关系外,其余无任何亲缘关系,血清学表现相似,红细胞上含有接近正常的B抗原和少量A抗原,H抗原含量较正常B细胞显著增高,血清中存在抗-A,初定为AwB,基因分型均为BO。克隆测序表明除具有正常O1或者O1V基因外,他们的B基因第7外显子在正常B等位基因的基础上,均发生单碱基突变,4例发生nt700C>G点突变,导致Pro234Ala,2例无关个体为nt640A>G点突变,导致Met214Val,1对母女均表现nt641T>C点突变,导致Met214Thr。证实所有8例样本真正血型应为B(A)表现型,其基因型均为B(A)/O型。结论在中国汉族人群中检出3种B(A)血型,除了已在我国台湾首先被发现的B(A)700C>G和笔者以前报道的B(A)640A>G之外,新发现1种B(A)641T>C等位基因。     

罕见的B(A)表型血清学及基因检测

目的对1例B(A)表现型用血清学及基因检测进行鉴定。方法使用2个厂家的单克隆抗-A、抗-B血型定型试剂;进口单克隆抗-A、抗-B血型定型试剂;Diamed凝胶系统;人源抗-A、抗-B、抗-H血型试剂和试剂红细胞,用常规血清学方法对被检血样进行ABO血型定型。采用吸收放散方法;分子生物学PCR-RFLP方法;ABO基因第6、7外显子的PCR产物正反向测序方法进一步分析。结果被检血样红细胞及血清经2种单克隆抗-A、抗-B和试剂红细胞进行抗原抗体鉴定:正定型结果不一致;正反定型结果不符合。用吸收放散方法,人源抗-A、抗-B、抗-H;进口单克隆抗-A、抗-B血型定型试剂和Diamed凝胶系统检测:有弱A抗原、强H抗原检出;PCR-RFLP基因分型:检出B/O基因;基因克隆测序证实为:B(A)700/O*02。结论证实该例为B(A)700/O*02。     

A novel blood group B subgroup: serological and genetic studies

A discrepancy in the ABO blood groups between a newborn child and her parents was identified. Serological and DNA investigative techniques were performed. A weak variant of B (B(w)) was detected on the erythrocytes of the child, her grandmother and great-uncle. Adsorption-elution studies showed that their erythrocytes adsorb and yield anti-B on elution. The B(w) antigenic strength of the A(1)B(w) cells of her mother and maternal aunt was reduced when compared to that of the A(2)B(w) from another family member. Only one of 15 different anti-B sera agglutinated the A(1)B(w) erythrocytes. Agglutinin anti-B that reacted strongly with normal B erythrocytes and did not agglutinate the B(w) cells, was found in the sera of the A(1)B(w) individuals. The B(w) serum glycosyltransferase could not convert O cells into B cells and no B substance was found in saliva. All family members with the B(w)/AB(w) phenotypes were heterozygous for a B allele and DNA sequencing revealed a novel missense mutation in exon 7 of the B allele (556A > G), resulting in M186V. This substitution changes a highly conserved region of the enzyme, proposed to be a disordered loop near the enzyme cleft, and is expected to diminish the enzyme's activity, leading to this B(w) phenotype.     

Ｂ（ Ａ） ０４ 亚型血清学与分子生物学鉴定及与其他 ＡＢ 亚型的鉴别要点

目的 对 ３ 例血清学定性为 Ａ ｗｅａｋ Ｂ 亚型的血标本进行 ＡＢＯ 基因检测，探讨其分子遗传学特点，并探讨 Ｂ（ Ａ） 亚型与 ＣｉｓＡＢ、Ａ 亚 Ｂ 型的鉴别要点。 方法 用 ＰＣＲ?ＳＳＰ 对常规血清学方法定型困难的 ３ 例标本进行 ＡＢＯ 基因分型，并对其 ＡＢＯ 基 因第 ６、７ 外显子扩增后进行直接测序及单倍型测序，确定其基因型。 结果 ３ 例标本血型血清学结果均为 Ａｗｅａｋ Ｂ 型，存在不 规则抗 Ａ 抗体。 基因分型均为 Ｂ（Ａ）０４ 型，其 Ｂ 等位基因在第 ７ 外显子存在 ｎｔ６４０Ａ＞Ｇ 突变，标本 １ 为 Ｂ（Ａ）０４ ／ Ｏ０２，标本 ２、３ 为 Ｂ（Ａ）０４ ／ Ｏ０１。 结论 当血清学检测结果正反定型不一致时，应采用分子诊断技术进行辅助诊断，并采用配血相合输血策 略，可确保临床输血安全。     

1例罕见的B(A)亚型的鉴定

B(A)亚型是一种罕见的ABO亚型,其分子机制为B等位基因在正常B基因序列的基础上发生单碱基突变,使其具有编码双功能活性酶的能力。B(A)亚型在血清学检测中除表现B抗原特异性外,还表现少量A抗原特异性,从而干扰血型鉴定及配血工作。B(A)型如误定为AB型,输入AB型红细胞可引起溶血性输血反应。国内已报道7个等位基因,其中B(A)02型发生率为0.78/10万。现将报道1例工作中遇到的B(A)O2型。     

1例罕见B（A）血型鉴定及其临床安全输血策略初探

目的 鉴定罕见B（A）血型并探讨其临床安全输血策略。方法 利用全自动血型分析仪检测ABO血型,发现正反定型不符的一位患者,利用血型血清学和分子生物学方法对该患者及其家系中9位成员进行血型鉴定和ABO血型基因测序,分析该家族血型的遗传特点;并对该血型的患者进行临床输血探讨,确保临床输血安全。结果 患者为B（A）血型,与B101基因序列比对,均为nt640A>G,基因型鉴定为B(A)04/O01,B(A)型血清与同型红细胞以及O型、B型红细胞不凝集,B(A)型红细胞与同型以及AB型血清不凝集。结论 血型血清学方法可以对正反定型不符的B（A）血型做出初步判断,分子生物学技术可以进一步准确判断该血型;临床输血应采取自体输血、同型输注及配合相容性输血。     

Gene analysis of two cases with CisAB/B blood subgroup

Objective

To identify the precise ABO blood type subgroups with genotyping.

基因扫描技术在ABO血型基因型鉴定中的应用

目的 建立基因扫描（GeneScan）技术鉴定ABO血型基因型的方法。方法根据O1基因在261位G缺失而非O1基因无缺失，B基因第803位核苷酸与A基因不同的特点，设计4对引物，分别在上游引物5’端标记荧光基团，PCR-SSP扩增后，用基因扫描技术鉴定ABO血型基因型。结果129例样本用Genescan技术鉴定的ABO血型结果与血清学结果完全符合，A、B、O基因频率分别为0．198、0．159、0．643。其中AA基因型8例（6．2％），AO基因型29例（22．5％），AB基因型6例（4．7％），BB基因型6例（4．7％），BO基因型23例（17．8％），OO基因型57例（44．2％）。结论Genescan技术鉴定ABO血型基因型具有可行性，提供了一种可选择的方法。     

罕见开米拉A_3B_3血型的分子生物学研究

目的一例ABO表型鉴定困难的个体及其家系的分子遗传背景的研究。方法用常规血清血型方法,对其ABO血型分型;PCR-SSP法进行基因分型;同时通过ABO基因直接测序及克隆测序、HLA分型、以及15个常染色体位点短串联重复序列检测对该研究对象进行家系研究。结果患者血清学分型定为A3B3型,其ABO基因分型、序列测定、HLA-B、DR基因分型、和STR-PCR特异性检测的vWA和D8S1179位点均有两个以上的单倍体存在。结论该研究对象认定是一例罕见的开米拉血型,清晰提示此罕见血型的分子基础,有助于深入认识此种分子遗传的方式。     

2例B(A)血型的鉴定

目的 对2例标本B(A)血型进行鉴定.方法 运用血型血清学、PCR-序列特异性引物(sequence specific primer,SSP)基因定型和ABO基因第6及第7外显子直接测序的方法,对2例标本的B(A)血型和B(A)型等位基因进行检测.结果 2例标本血清学定型分别为A2B和AxB,PCR-SSP法初筛均为B/O基因型,DNA序列分析测定标本1基因型为B(A)02/O02型,标本2基因型为B(A) 02/O01型.结论 采用DNA序列分析法才能准确测定华北地区汉族人群中B(A)血型,PCR-SSP法可能引起差错.     

1例Bx亚型的分子机制研究

目的探讨＆亚型的分子机制。方法采用标准方法分析＆亚型的血清学特性,并使用PCR产物直接测序或克隆后测序ABO基因7个外显子和外显子与内含子交界区。结果确认1例Bx表型,DNA分析显示该＆个体的ABO基因为杂合001／g基因：905A〉G导致B糖基转移酶中氨基酸D302G改变。结论在中国汉族人群中检测到Bx02等位基因。     

B抗原减弱表型的表型频率与ABO基因分析

目的对血清学表现为B抗原减弱的血液样本进行筛查和ABO基因分析,了解其分布特征和分子遗传学基础。方法筛查并收集B抗原减弱（与抗-B血清试管法凝集强度中等）的样本,采用血型血清学方法进行鉴定分析,采用直接测序的方法对ABO基因的第6、7外显子及第6内含子进行序列分析,对可追踪家庭进行家系分析。结果从241952份样本中检出13例B抗原减弱表型,其中B型9例、AB型4例;所有样本的红细胞与抗-H反应均增强;其中2例可检出不规则抗-B;ABO基因型分别为A102／Bw12（1例）、BIOI／B101（2例）、B10I／002（3例）、A102／B101（3例）、B101／001（4例）。在1例基因型为B101／001个体的家系成员（父亲）中检出相同表型。结论该类表型在B型人群中的频率约为1：7000;除1例样本的B等位基因存在278C〉T突变（Bw12）外,其余样本在第6、7外显子和第6内含子中均未检出突变;ABO基因酶催化活性区域编码序列以外的基因变异,可能是导致B抗原减弱的原因之一。     

ABO血型变异与B糖基转移酶关系研究

目的研究ABO血型B亚型系统Bw亚型与B糖基转移酶的关系。方法运用血型血清学鉴定方法鉴定1个家庭2例ABO血型的Bw亚型,运用聚合酶链式反应的方法扩增糖基转移酶1~7号外显子,送到试剂公司测序。结果直接测序发现2例ABO血型的Bw亚型,其中B糖基转移酶基因第721位C〉T的转变,导致糖基转移酶多肽链Arg241Trp的转变。结论糖基转移酶基因第721位的C〉T的突变引起糖基转移酶活性的消失或者减弱,导致Bw亚型。     

Detection of anti-B antibodies in a patient with A1B blood group: A case report and literature review

ABO antibodies occur naturally and usually exist as alloantibodies. They are the most clinically significant in cases of transfusions. However, there are very few reports on auto-anti-A or B. A 58-year-old man visited our hospital for evaluation of an inguinal mass. Blood typing was performed, while preparing the patient for an excisional biopsy. Forward and reverse typing showed a typical AB and A pattern. Results of the direct antiglobulin and unexpected antibody screening tests were negative. The serum did not react with AB3 cells. The biopsy revealed a diffuse large B-cell lymphoma. After completing four cycles of R-CHOP chemotherapy, the patient achieved complete remission. There were no anti-B antibodies found on repeat ABO typing. This report shares our experience on unexpected anti-B antibody findings in a patient with an A1B blood type. To the best of our knowledge, this is the first report of anti-B antibodies in a patient with an A1B blood type in Korea.     

ABO血型A201等位基因表达A抗原活性的分析

目的研究ABO血型A201等位基因表达A抗原活性。方法运用血型血清学方法对1家2代3人的唾液及血液标本的ABO血型进行检测;运用Identifiler法医基因分析试剂盒作为亲缘关系鉴定;PCR扩增ABO基因后,对所有外显子做DNA测序分析,运用PCR-RFLP法进行同步检测A201等位基因中的序列变异。结果亲缘关系鉴定在Identifiler的15个遗传标记系统中显示,父母可以将所有的等位基因提供给子女,确定具有亲缘关系;然而运用不同来源的3份抗体对ABO血型进行检验时,却出现了正定型否定了母子关系,反定型无法排除母子关系的现象。3个标本ABO基因的测序:父、母、子的基因型分别为O01/O01、A201/B101及A201/O01,符合反定型结果,这就说明A201等位基因在A表型及AB表型中表达的A抗原活性差异显著。运用PCR-RFLP法可将A201等位基因中的2个主要变异点1059-1061del C和467C/T。结论 ABO血型A201基因在AB及A表型中表达A抗原活性,可由于检测抗体不同出现一定的差异;基因测序与PCR-RFLP法进行同步分析能够快速简便的鉴定A201等位基因中的1059-1061del C和467C/T。     

常见ABO抗原和稀有A2抗原同步基因分型的研究

目的建立人类ABO血型系统的同步基因分型法研究ABO血型。方法采用PCR-SSP技术,设计合成13对序列特异性引物,摸索最佳退火温度,通过调整引物浓度、Mg2+浓度等,使ABO系统等位基因在同一条件下进行同步扩增和扩增产物在同一凝胶中进行同步电泳;使用此方法,检测34例已知血清学ABO血型的与20例已知序列的A2亚型标本。结果用基因分型法检测出的ABO常见基因和A2基因,与已知血清学ABO分型结果相符合。结论该ABO基因分型方法适合中国人ABO基因常规鉴定与研究。