奎纳克林对人肾癌细胞系786-0的抑制作用研究

目的：研究奎纳克林（quanacrine,OC）对786-0细胞的抑制作用,为临床应用奎纳克林治疗肾癌提供理论依据。方法：采用细胞培养、光学显微镜及MTT法研究奎纳克林对786-0细胞的抑制作用。结果：MTT实验显示QC处理24h胚肾细胞HEK293IC50为24.836μmol/L,肾癌细胞系786-0IC50为10.421μmol/L;QC处理48h胚肾细胞HEK293IC50为21.044μmol/L,肾癌细胞系786-0IC50为6.822μmol/L;QC处理72h胚肾细胞HEK293IC50为15.643μmol/L,肾癌细胞系786-0IC50为3.859μmol/L。结论：QC对肾癌细胞系786-0有明显的增殖抑制作用,作用随时间延长和浓度提高而增强,且其抑制作用具有选择性。     

蛋白激酶Cα介导人神经胶质瘤细胞株多药耐药机制的研究

目的 探讨蛋白激酶Ca(protein kinase Cα,PKCα)在人神经胶质瘤细胞株SHG-44发生多药耐药过程中的作用和机制.方法 应用阿霉素浓度递增和间歇诱导法建立SHG-44/ADM耐药株,采用PKCα激活剂PMA和抑制剂Staurosporine分别干预SHG-44/WT和SHG-44/ADM细胞株,免疫印迹法检测PKCα和MDR-1的表达量,激酶分析PKCα活性,荧光分光光度计检测细胞内阿霉素浓度.结果 PKCα激活剂PMA增强细胞PKCα活性,同时增加MDR-1表达和活性;PKCα抑制剂Staurosporine抑制细胞PKCα活性,减少MDR-1表达和活性.结论 PKCα通过MDR-1参与神经胶质瘤细胞的多药耐药.     

蛋白激酶C活性、亚细胞分布与KBV200细胞多药耐药性的相关研究

目的探讨蛋白激酶C(PKC)活性、亚细胞分布与KBV200细胞株多药耐药(MDR)的关系。方法MTT法检测KB和KBV200细胞对细胞毒药物的耐药性,32P掺入法检测两株细胞的PKC活性。结果长春新碱(VCR)、阿霉素(ADR)对KBV200细胞的半数抑制浓度(IC50)值分别是KB细胞的65.03和19.8倍;KBV200细胞的膜组分、胞质组分的PKC活性均高于KB细胞(P<0.01),KBV200细胞PKC总活性是KB细胞的2.12倍;佛波酯可升高KBV200细胞总或膜组分PKC活性,VCR、ADR的IC50值升高(P<0.01);十字孢碱可降低KBV200细胞两种组分PKC活性,VCR、ADR的IC50值降低(P<0.01),对VCR、ADR的逆转倍数分别是5.46和1.96倍。结论PKC与KBV200细胞株的MDR表型关系密切,PKC可能介导了KBV200细胞的MDR。     

靶向MDR1基因siRNA逆转HepG2/ADM细胞耐药性的研究

目的 采用RNA干扰技术逆转人类肝癌细胞系/阿霉素(human hepatocellular liver carcinoma cell line/adriamycin,HepG2/ADM)细胞中多耐药基因,探讨该基因能否有效地抑制多耐药基因(multidrug resistance gene,MDR1)及其编码的糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达,并检测对HepG2/ADM耐药表型的逆转效果.方法 采用药物大剂量冲击法建立HepG2/ADM耐药模型,构建靶向MDR1的小干扰RNA表达载体,并转染到HepG2/ADM细胞中,应用半定量逆转录-聚合酶链反应检测基因转染前后MDR1 mRNA表达水平的变化,Western-blot检测各组细胞P-gp蛋白表达的变化,用噻唑蓝法检测各组细胞对阿霉素、顺铂、长春新碱和氟尿嘧啶等药物的敏感性.结果 HepG2/ADM细胞系不仅对阿霉素耐药,而且对其他化疗药也有抗性,呈现多药耐药特性;重组质粒鉴定结果表明针对MDR1的小干扰RNA表达载体成功构建;与对照组比较,转入细胞后MDR1 mRNA水平明显下降,P-gp蛋白表达明显降低;转入细胞后HepG2/ADM细胞对化疗药物的敏感性明显提高,部分逆转其耐药性.结论 靶向MDR1的小干扰RNA可显著抑制HepG2/ADM细胞中MDR1基因和P-gp蛋白的表达,逆转P-gp介导的HepG2/ADM细胞的耐药性.     

MDR1反义寡核苷酸逆转胃癌耐药的研究

目的探讨MDR1反义寡脱氧核苷酸(Antisense oligodooxynucleotide,ASODN)片段逆转人胃腺癌耐药细胞SGC7901/ADM耐药的可行性。方法经MDR1 ASODN转染SGC7901/ADM细胞后,采用MTT法检测瘤细胞对阿霉素抗癌药的敏感性;采用流式细胞术检测细胞周期的改变、细胞内Rh123的潴留状况;采用免疫细胞化学检测MDR1蛋白质表达水平的变化。结果SGC7901/ADM细胞经MDR1 ASODN转染48小时后,对阿霉素化疗药物的敏感性增强,细胞对阿霉素的半数抑制浓度(IC50)由转染前的16.82μg/ml降至2.66μg/ml;与未经转染的SGC7901/ADM相比,ASODN/LF转染后出现明显的细胞周期阻滞,大量细胞被阻滞于S期;瘤细胞内RH123的潴留量显著高于转染前;瘤细胞内P-gp、MRP的表达显著下降。结论转染MDR1 ASODN可部分逆转人胃腺癌耐药细胞SGC7901/ADM耐药。     

白屈菜红碱逆转人乳腺癌多药耐药的机制

目的 研究蛋白激酶Cα(PKCα)抑制剂白屈菜红碱(CH)逆转人乳腺癌细胞多药耐药的机制.方法 应用RT-PCR和Western blot方法,检测CH和佛波醇酯(PMA)作用于乳腺癌耐药细胞系MCF-7Taxol后,细胞中多药耐药相关基因ABCG2、ABCC1、MDR1和P糖蛋白表达的变化.采用MTT方法,分析给予低...     

HL-60/ADM细胞系耐药性检测

目的　检测 HL- 6 0 / ADM细胞化疗药物敏感性及 MRP表达。方法　以 HL- 6 0 / ADM细胞为实验对象 ,对化疗敏感的 HL - 6 0细胞为对照 ,MTT法检测药物敏感性 ,免疫细胞化学法检测 MRP蛋白的表达 ,PT- PCR法检测MRP m RNA表达。结果　两种细胞生长周期基本一致 ;HL - 6 0 / ADM细胞对 ADM、MTZ、VCR、H四种化疗药物 IC50 显著高于 HL- 6 0细胞 (P<0 .0 1) ,RF均在 2 0倍以上 ;HL- 6 0 / ADM表达 MRP m RNA,细胞膜表面 MRP阳性。结论　 HL-6 0 / ADM细胞系适合体外 MDR研究。     

腺病毒介导p53基因逆转乳腺癌耐药的实验研究

目的探讨腺病毒介导p53基因（Ad-p53）对人乳腺癌阿霉素（ADM）耐药细胞株MCF-7／ADM的耐药性及多药耐药基因1（MDR1）的影响。方法以Ad-p53转染MCF-7／ADM细胞株,流式细胞术检测p53蛋白变化;锥虫蓝活细胞拒染法观察细胞生长情况;MTT法观察MCF-7／ADM细胞对阿霉素耐药性的变化,实时荧光RT—PCR法检测MDR1 mRNA变化。结果流式细胞术观察到MCF-7／ADM细胞经MOI50的Ad-p53作用48h后,p53蛋白表达率由10．24％升高到36．20％;细胞抑制率为7．4％（P=0．003）;逆转MCF-7／ADM对ADM的耐药倍数11．6倍（P=0．001）;实时荧光RT-PCR检测结果显示MDR1 mRNA相对表达量由1．25±0．01下降至0．91±0．01（P=0．011）。结论腺病毒介导p53基因能抑制MCF-7／ADM细胞MDR1基因的表达,并能部分逆转MCF-7／ADM的耐药性,增加阿霉素化疗敏感性。     

抑癌基因TIP30对肾癌细胞系786-0的生长抑制作用

目的：筛选含有外源性TIP30的人肾透明细胞腺癌细胞系786-0,探讨TIP30基因对786-0的生长抑制作用,寻找肾癌基因治疗的潜在靶点。方法：采用RT-PCR技术扩增TIP30基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-TIP30,转染786-0细胞,利用RT-PCR及Western blotting检测稳定转染pcDNA3.1-TIP30载体、转染pcDNA3.1(+)空载体及未处理的786-0细胞中TIP30的表达,另通过MTT法检测转染后细胞增殖能力的变化,流式细胞仪测定细胞周期分布的变化。 结果：与未处理的和转染pcDNA3.1(+)的786-0细胞比较,转染pcDNA3.1-TIP30的786-0细胞中TIP30基因的mRNA和蛋白表达水平均明显增加(P<0.05);未处理与转染pcDNA3.1(+)的786-0细胞中TIP30的表达水平比较差异无显著性(P>0.05)。转染pcDNA3.1-TIP30的786-0细胞生长抑制率明显高于未处理的和转染pcDNA3.1(+)的786-0细胞(P<0.01)。流式仪检测细胞周期,与未处理的和转染pcDNA3.1(+)的786-0细胞比较,转染pcDNA3.1-TIP30的786-0细胞G₀-G₁期细胞比例显著增加,S和G₂-M期细胞比例降低(P<0.01)。结论: 786-0细胞能够稳定表达外源基因TIP30;提高肾癌细胞中TIP30蛋白的表达,可抑制肿瘤细胞的生长;TIP30是肾癌基因治疗的潜在靶点。     

ROS/p38MAPK通路对结直肠癌SW480细胞侵袭能力的影响

目的 探究ROS/p38MAPK通路对PKC诱导人结直肠癌SW480细胞MMP-9表达及细胞侵袭的作用机制.方法 利用蛋白激酶C(PKC)激动剂12-O-十四烷基酚-13-乙酸酯(TPA)处理人结直肠癌SW480细胞,并且进行PKC抑制剂/ROS抑制剂/p38抑制剂干扰.通过Western blot法检测MMP-9、p...     

蛋白激酶C活性、表达及亚细胞分布与KBV200细胞多药耐药相关性的研究

目的研究多药耐药肿瘤细胞PKC活性、PKC亚型的表达和亚细胞分布与KBV200细胞多药耐药的关系。方法MTT法检测敏感株KB和耐药株KBV200细胞的耐药性；印掺入法测定PKC的活性；Western blot法检测KBV200及其亲本KB细胞株PKC亚型的表达和亚细胞分布。结果长春新碱（VCK）和阿霉素（ADK）对KBV200细胞的IC50值分别高于KB细胞（P〈0．01）；耐药指数（RI）分别为65．03和19．8。KBV200细胞的膜组分、浆组分的PKC活性均较KB细胞高,KBV200细胞的总PKC活性是KB细胞的2．12倍。Western blot结果发现KBV200和KB细胞膜组分及浆组分均有PKCq的表达，且KBV200细胞的表达较KB明显增强。PMA可升高KBV200细胞的PKC总活性和膜组分PKC活性，降低浆组分PKC活性、表达（P〈0．01）；PMA可升高VCR、ADK对KBV200细胞的IC50值（P〈0．01）。SP可降低PKC活性；SP预孵育使PKCα膜组分和浆组分的表达均降低，可降低VCR、ADK对KBV200细胞的IC50值（P〈0．01）。结论KBV200细胞的PKC活性、表达、亚细胞分布与KB细胞有明显差别，这种差别可能与KBV200耐药性的变化密切相关，在PKC亚型中，PKCα的表达明显高于其他亚型，且高于亲本株，提示KBV200细胞中PKCα与多药耐药相关。     

KBV200细胞多药耐药与蛋白激酶C表达上调的关系

目的 研究KBV200多药耐药细胞蛋白激酶C(PKC)的表达,探讨PKC的表达上调与肿瘤多药耐药的关系。方法 KBV200细胞分对照组和佛波酯(PMA)组,PMA组应用200nmol/L的PMA预孵育细胞,而对照组不用。³²P掺入法测定多药耐药KBV200细胞株的PKC活性,通过Westernblotting检测PKC各亚型表达和亚细胞分布。用MTT法检测细胞耐药性。结果 PMA预孵育可提高KBV200细胞的PKC总活性和膜组分PKC活性,降低浆组分PKC活性(P<0.01)。PMA预孵育使膜组分PKCα表达增加,浆组分PKCα表达降低,膜组分PKCβ无明显变化,浆组分PKCβ的表达稍增强。PMA可升高长春新碱、阿霉素对KBV200细胞的IC₅₀值(P<0.01)。结论 PMA使KBV200细胞耐药性增加,可能与PKC表达上调有关。     

蝎毒逆转人乳腺癌细胞株耐药性研究

目的：探讨东亚钳蝎毒（buthus martensii kirsch, BMK）是否能够逆转人乳腺癌细胞的多药耐药性(MDR)。 方法：采用ＭＴＴ法对蝎毒和阿霉素(ADM)合用时肿瘤细胞的半数抑制率(IC₅₀)进行检测。荧光分光光度法检测蝎毒对细胞内ADM浓度的影响。 结果：蝎毒不同组别(100~350 mg•L^-1)能分别提高MCF-7/ADM细胞株对阿霉素的敏感性 (Ｐ<0.05;Ｐ<0.01)。蝎毒不同组别(100~200 mg•L^-1)能使MCF-7/ADM细胞内ADM的浓度升高。 结论：蝎毒能部分逆转人乳腺癌耐药细胞对阿霉素的耐药性。     

miR-143调控DNMT3B表达对肝细胞癌耐阿霉素敏感性的影响

目的:构建耐药细胞株SMMC-7721/ADM,探讨miR-143在调控肝细胞癌耐阿霉素中的作用机制。方法:采用逐步递增阿霉素浓度法构建耐阿霉素细胞株SMMC-7721/ADM,评估其IC₅₀值;采用荧光定量PCR技术检测miR-143、DNA甲基转移酶3B （DNMT3B）、多耐药基因1（MDR1）变化、Bax和Bcl-2 mRNA表达水平;Western blotting检测DNMT3B蛋白表达;通过转染miR-143 mimics上调耐药细胞株SMMC-7721/ADM中miR-143表达水平后,检测耐药细胞IC₅₀、侵袭能力、细胞凋亡、DNMT3B、MDR1变化。应用脂质体-2000瞬时转染miR-143 mimics于耐药细胞株,观察上述指标变化。结果:成功构建耐药细胞株SMMC-7721/ADM,IC₅₀值升高78.97倍（P<0.01）,miR-143表达量降低,DNMT3B、MDR1、Bax、Bcl-2表达量升高（P<0.05~P<0.01）。转染miR-143 mimics后耐药细胞株IC₅₀值降低57%,侵袭能力下降,细胞凋亡增加,DNMT3B表达减少,MDR1 mRNA表达减少（P<0.01）。结论:miR-143可能通过降低DNMT3B表达提高肝细胞癌对阿霉素的敏感性。     

功劳木组分F_6逆转白血病MDR的作用和机制

目的:背景与目的从中药功劳木中提取、分离出来的异喹啉类生物碱组分(Fraction 6,F6),具有抗病毒、抗炎、降血压等生理活性。近年有文献报道异喹啉类生物碱具有一定的逆转肿瘤细胞耐药的作用。本文以白血病多药耐药细胞(K562/ADM)为对象来研究F6逆转肿瘤多药耐药性(Mu ltidrug resistance,MDR)的效果及作用机制,以寻找具有多药耐药逆转活性的新型中药。方法:采用MTT法检测F6及阿霉素(Adriamyc in,ADM)对K562/S和K562/ADM细胞增殖的抑制作用;RT-PCR法检测F6对耐药肿瘤细胞MDR1基因mRNA表达的影响;流式细胞仪分析细胞内罗丹明123(Rhodam ine123,Rh123)浓度,以检测F6对肿瘤细胞膜P糖蛋白(P-glycoprote in,P-gp)泵功能的影响;免疫组化方法检测F6对肿瘤细胞膜P-gp表达水平的影响;流式细胞仪检测F6对肿瘤细胞凋亡的作用。结果:10 mg/L为F6的无毒剂量;ADM对K562/S和K562/ADM细胞的IC50分别为(1.68±0.08)mg/L和(80.25±1.06)mg/L;无毒剂量F6与ADM联合应用后对K562/S和K562/ADM细胞的IC50分别为(1.09±0.07)mg/L和(16.68±0.72)mg/L,此剂量F6使K562/ADM细胞的IC50下降4.81倍;无毒剂量的F6应用前后,K562/ADM细胞MDR1基因表达水平和细胞膜P-gp表达水平无明显差异;Rh123蓄积试验中无毒剂量的F6应用后使K562/ADM细胞内Rh123浓度由F6应用前的29.21%升高到85.35%,Rh123外排试验中无毒剂量的F6应用后使K562/ADM细胞内Rh123浓度由F6应用前的27.19%升高到59.22%;凋亡检测结果显示无毒剂量的F6使K562/ADM细胞凋亡率升高3.82倍。结论:F6能有效逆转白血病细胞的MDR;F6逆转白血病MDR的机制为通过抑制肿瘤细胞膜上P-gp的药泵功能,增加耐药细胞内化疗药物浓度逆转耐药性,而不是抑制MDR1基因和P-gp表达。     

KBV200细胞多药耐药与蛋白激酶C表达上调的关系

目的 研究KBV200多药耐药细胞蛋白激酶C（PKC）的表达，探讨PKC的表达上调与肿瘤多药耐药的关系。方法KBV200细胞分对照组和佛波酯（PMA）组，PMA组应用200nmol/L的PMA预孵育细胞．而对照组不用。^32P掺入法测定多药耐药KBV200细胞株的PKC活性，通过Western blotting检测PKC各亚型表达和亚细胞分布。用MTT法检测细胞耐药性。结果PMA预孵育可提高KBV200细胞的PKC总活性和膜组分PKC活性，降低浆组分PKC活性（P〈0．01）。PMA预孵育使膜组分PKCa表达增加，浆组分PKCa表达降低，膜组分PKCβ无明显变化，浆组分PKCB的表达稍增强。PMA可升高长春新碱、阿霉素对KBV200细胞的IC50值（P〈0．01）。结论PMA使KBV200细胞耐药性增加，可能与PKC表达上调有关。     

蛋白激酶C活性、亚细胞分布与KBV200细胞多药耐药性的相关研究

OBJECTIVE: To investigate the relationship between protein kinase C (PKC) and multidrug resistance (MDR) in cancer cell line KBV200. METHODS: MTT assay was used to evaluate the IC50 of vincristine (VCR) and adriamycin (ADR) in KB cell line and its VCR-resistant derivative KBV200 cells. PKC activities in the 2 cell lines were assayed by measuring the incorporation of (32)P from [gamma-(32)P] ATP into the peptide substrates. RESULTS: The IC50 values of VCR and ADR in KBV200 cells was 64.03 and 18.8 folds greater than those in KB cells. PKC activities of the membrane and cytosol fraction in KBV200 cells were increased compared with that in KB cells, with the total PKC activity 1.12-fold higher. Phorbol-12-myristate-13 -acetate increased PKC activity of the membrane fraction and IC50 values of KBV200 cells, while staurosporine worked to the opposite effects. CONCLUSION: PKC may contribute to MDR mechanism in KBV200 cells.     

环氧合酶-2抑制剂联合苦参碱逆转K562/AO2细胞多药耐药的研究

目的:研究塞来昔布单独及联合应用苦参碱对K562/AO2细胞多药耐药逆转作用的影响,以及探讨他们互相作用的机理.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测阿霉素(ADM)的半数抑制量;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR方法检测多药耐药基因(MDR)和环氧合酶-2(COX-2)mRNA的表达水平;Western blotting方法检测人p-糖蛋白(P-gp)和COX-2蛋白的表达水平.结果:ADM对K562、K562/AO2细胞的IC50值分别为0.398、33.31 μg·ml-1;苦参碱(200 μg·ml-1)、塞来昔布(7.5 μg·ml-1)单独及联合应用处理细胞时,ADM对K562/AO2细胞的IC50值分别为9.44、12.84、2.71 μg·ml-1;苦参碱、塞来昔布单独及联合应用于K562/AO2细胞后凋亡率明显增加,MDR1和COX-2 mRNA以及P-gp、COX-2蛋白的表达明显下调,且两药联合时下调更明显.结论:苦参碱和塞来昔布均有逆转K562/AO2细胞多药耐药的作用,两药联合应用时效果更加明显,P-gp的高表达可能与COX-2的表达上调有关.     

人肝癌多药耐药细胞系BEL-7402/ADM的建立及耐药相关基因表达检测

目的：建立人肝癌多药耐药细胞系,研究其耐药特性及机制。 方法：应用人肝癌细胞株BEL-7402,采用阿霉素（ADM）大剂量间歇诱导法,建立多药耐药细胞系BEL-7402/ADM。相差显微镜观察细胞,用MTT法检测该耐药细胞株对多种化疗药物的多药耐药性,采用流式细胞术检测该耐药细胞表面多药耐药基因(MDR)的表达产物P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)及谷胱甘肽硫转移系统(GSH／GST)的表达情况,应用RT-PCR检测MDR、MRP基因表达水平。 结果：BEL-7402/ADM对多种抗癌药物产生耐药,对ADM的耐药性(半数抑制浓度,IC₅₀)提高了17.31倍。流式细胞仪分析发现（65.5±5.8）%的BEL-7402/ADM细胞表面P-gp 表达阳性,而对照细胞BEL-7402表达仅为（31.3±4.3）%;（32.4±3.5）%的BEL-7402/ADM细胞表面MRP表达阳性,而对照细胞BEL-7402表达仅为（23.4±3.1）%,二者差异有显著性(P<0.01);BEL-7402/ADM和BEL-7402细胞的GSH／GST表达无明显变化（P>0.05）。RT-PCR检测发现BEL-7402/ADM中MDR及MRP mRNA高表达。 结论：BEL-7402/ADM具有明确的多药耐药性,其多药耐药相关基因MDR及MRP mRNA表达升高。     

MDR、MRP与肝癌细胞多重耐药性关系的研究

目的 探讨肝癌细胞多重耐药性形成的分子机制。方法 采用逐步培养法，诱导人肝癌细胞株HepG2产生耐药性，以MTT法测定其耐药性的程度，检测细胞表面MDR、MRP分子表达水平，并确定其与耐药性的关系。结果 耐药细胞表面MDR、MRP的表达明显增高，药物在细胞内的积聚减少；阻断MDR、MRP的功能，可明显逆转细胞的耐药性。结论 MDR、MRP的高表达是肝癌细胞形成多重耐药的性要机制之一。