口服鸡Ⅱ型胶原治疗大鼠实验性类风湿性关节炎的研究

本文研究口服鸡Ⅱ型胶原（CCⅡ）治疗大鼠类风湿性关节炎的作用。以CCⅡ和完全弗氏佐剂免疫Wistar大鼠,建立大鼠的类风湿性关节炎（RA）模型,用CCⅡ进行口服,观察实验组和对照组动物关节炎的发病程度。并以ELISA法对发病大鼠血清中的抗CCⅡ抗体的水平进行检测。结果表明,口服CCⅡ可以减轻大鼠关节炎的发病程度。其中口服6μg、60μgCCⅡ的实验组大鼠关节炎指数均对照组明显减低,且差异有显著性意义（P＜0．01;P＜0．05）。而口服600μgCCⅡ的实验组大鼠关节炎指数虽较对照组大鼠降低,胆二者相比,无显著性差异（P＞0．05）。ELISA检测结果显示,口服低剂量（6μg和60μg）可溶性CCⅡ对大鼠体抗CCⅡ抗体的产生有一定的抑制作用。口服CCⅡ对关节炎大鼠的发病程度有较明显的抑制作用。为应用口服耐受治疗RA等自身免疫性疾病提供了实验基础。     

口服Ⅱ型胶原蛋白诱导免疫耐受治疗佐剂关节炎的研究

目的： 观察口服Ⅱ型胶原蛋白（ｔｙｐｅＩＩｃｏｌｌａｇｅｎ, ＣＩＩ） 对大鼠佐剂关节炎（ａｄｊｕｖａｎｔａｒｔｈｒｉｔｉｓ, ＡＡ） 的治疗作用。方法： 采用酶消化法, 提取牛软骨ＣＩＩ, 经口插管灌注将ＣＩＩ给予佐剂关节炎ＳＤ大鼠。结果： 口服ＣＩＩ可推迟ＡＡ的发病, 降低发病率, 明显减轻病变关节的炎症反应和使病程缩短。结论： 口服ＣＩＩ可诱导抗原特异性免疫耐受并对淋巴细胞的增殖反应有抑制作用, 而且此种免疫耐受作用可以剂量依赖的方式通过淋巴细胞转移。     

类风湿性关节炎患者血清Ⅱ型胶原抗体的检测及意义

目的 探讨类风湿性关节炎（RA）患者血清抗Ⅱ型胶原（CⅡ)抗体阳性的意义。方法 分别以人Ⅱ型胶原蛋白（HCⅡ）及牛Ⅱ型胶原蛋白CⅡ（BCⅡ）作为包被抗原进行间接ELISA法，检测30例RA患者，对照组（30例非RA的风湿病患者和34例健康人）血清抗CⅡ抗体。结果 以HCⅡ及BCⅡ作为包被抗原检测RA患者血清抗CⅡ抗体的阳性率分别约为30．0％和33．3％；对照组血清中抗体阳性率均约为1．6％；二者差异极其显著（P＜0．01）。抗CⅡ抗体阳性的RA患者RF的阳性率高于抗CⅡ抗体阴性的RA患者。与HCⅡ和BCⅡ均发生阳性反应的血清8例，均为早期RA患者。结论 抗CⅡ抗体可作为判断RA患者病的辅助手段之一，牛CⅡ可替代人CⅡ进行有关RA发病机制中B细胞免疫的实验研究。     

哮喘患者免疫治疗对细胞因子的影响

比较变应性哮喘用粉尘螨浸出液抗原免疫治疗６～１２月与未用免疫治疗患者外周血淋巴细胞ＩＬ－４分细胞阳性率和ＩＦＮγ活性的变化，结果显示：免疫治疗患者ＩＬ－４分泌细胞阳性率显著低于未免疫治疗患者，而ＩＦＮγ活性则相反，同时免疫治疗患者也较未免疫治疗患者的Ｔｓ细胞活性显著增高，血清ＩｇＥ水平两者均高于正常对照组，表明ＩＬ－４ＩＦＮγ参与哮喘发病的免疫机理。     

类风湿性关节炎患者血清抗Ⅱ型胶原抗体的检测及意义

目的探讨类风湿性关节炎(RA)患者血清抗Ⅱ型胶原(CⅡ)抗体阳性的意义. 方法分别以人Ⅱ型胶原蛋白(HCⅡ)及牛Ⅱ型胶原蛋白CⅡ(BCⅡ)作为包被抗原进行间接 ELISA法,检测30例RA患者,对照组(30例非RA的风湿病患者和34例健康人)血清抗CⅡ抗体. 结果以HCⅡ及BCⅡ作为包被抗原检测RA患者血清抗CⅡ抗体的阳性率分别约为30.0%和33.3%;对照组血清中抗体阳性率均约为1.6%;二者差异极其显著(P＜0.01).抗CⅡ抗体阳性的RA患者RF的阳性率高于抗CⅡ抗体阴性的RA患者.与HCⅡ和BCⅡ均发生阳性反应的血清8例,均为早期RA患者. 结论抗CⅡ抗体可作为判断RA患者病情的辅助手段之一,牛CⅡ可替代人CⅡ进行有关RA发病机制中B细胞免疫的实验研究.     

口服Ⅱ型胶原蛋白对血清抗体和派氏集结细胞因子表达的影响

目的:探讨口服Ⅱ型胶原蛋白(cⅡ)对派[伊尔]氏集结(PP结)的形态学、细胞因子表达水平和血清特异性IgG、IgA、IgM含量的影响.方法:连续10 d给小鼠口服不同剂量的CⅡ,第11天和第21天用佐剂或CⅡ进行免疫,分别于第11天、第21天和第31天采集血液和PP结.PP结经HE染色后,镜下观察其增生的情况.用荧光实时定量RT-PCR法,检测PP结中IL-17、TNF-α、IFN-γ和TGF-β1 mRNA 的水平.采用ELISA法检测血清抗CⅡIgG、IgA、IgM的水平.结果:口服CⅡ10 d后,PP结增生活跃,高剂量组可见清晰的帽状结构;血清中出现IgA,未见IgG和IgM水平增加;IL-17、TNF-α、IFN-γ mRNA的表达受到抑制.以CⅡ初次免疫后,实验组IgA、IgM、IL-17的水平均低于对照组(P＜0.05或P＜0.01),TGF-β1的水平显著增加(P＜0.05).以C Ⅱ加强免疫后,高剂量组IgA的水平显著增加(P＜0.05),实验组IgM的水平仍受到抑制(P＜0.05或P＜0.01),TGF-β1的水平高于对照组(P＜0.05).以佐剂免疫时PP结中细胞因子的表达与CⅡ免疫时相似,未见血清抗CⅡ IgG、IgA、IgM 水平的变化.结论:口服CⅡ能使血清中产生特异性IgA,抑制PP结IL-17、TNF-α、IFN-γ的基因表达,对CⅡ免疫后IgA、IgM的产生和IL-17 mRNA的表达具有一定的抑制作用.以上结果表明,血清特异性抗体的水平和细胞因子表达的变化在口服CⅡ诱导免疫耐受对类风湿性关节炎的治疗作用方面发挥着重要的作用.     

外源血小板生成素基因体内导入对循环免疫因子水平的影响

研究外源ＴＰＯ基因由质粒载体导入后,小鼠体内一些细胞因子的变化规律。方法：用脂质体将表达人ＴＰＯ的真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３／ｈＴＰＯ包裹后,注射到Ｂａｌｂ／ｃ鼠的后肢肌肉内,用ＥＬＩＳＡ法检测小鼠血 多种细胞因子的水平。     

碘化钠对人甲状腺细胞IL—6，IFN—γ和TNF—α基因表达的影响

本研究以10^-4M碘化钠（NaI)刺激单层培养的人Graves病（GD）甲状腺滤泡上皮细胞（TEC）,采用定性及半定量PCR技术检测刺激前后白介素-6（IL-6）、γ-干扰素（IFN-γ）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）在细胞中的表达水平。结果表明：（1）3例GD组织均含有IL-6及IFN-γmRNA,2例检测到TNF-α基因表达;（2）基础状态下,3例TEC均表达IL-6基础,2例表达TNF-α,而所有样本均无IFN-γmRNA;（3）NaI不能诱导TEC产生IFN-γmRNA,对IL-6mRNA的表达亦无明显影响;（4）1例TNF-α阴性的TEC样本,经NaI刺激后,可表达mRNA,2例原含有TNF-α的TEC经刺激后,其mRNA的表达水平显著增加。提示碘可通过诱导或增强TEC表达TNF-α,导致自身免疫性甲状腺疾病的发生与发展。     

口服鸡II型胶原治疗大鼠实验性类风湿性关节炎的研究

本文研究口服鸡II型胶原 (CCII)治疗大鼠类风湿性关节炎的作用。以CCII和完全弗氏佐剂免疫Wistar大鼠 ,建立大鼠的类风湿性关节炎 (RA )模型。用CCII进行口服 ,观察实验组和对照组动物关节炎的发病程度。并以ELISA法对发病大鼠血清中的抗CCII抗体的水平进行检测。结果表明 ,口服CCII可以减轻大鼠关节炎的发病程度。其中口服 6μg、 60 μgCCII的实验组大鼠关节炎指数均较对照组明显减低 ,且差异有显著性意义 (P <0 0 1;P <0 0 5 )。而口服 60 0 μgCCII的实验组大鼠关节炎指数虽较对照组大鼠降低 ,但二者相比 ,无显著性差异 (P >0 0 5 )。ELISA检测结果显示 :口服低剂量 (6μg和 60μg )可溶性CCII对大鼠体内抗CCII抗体的产生有一定的抑制作用。口服CCII对关节炎大鼠的发病程度有较明显的抑制作用 ,为应用口服耐受治疗RA等自身免疫性疾病提供了实验基础     

重组人Ⅱ型胶原蛋白免疫原性多肽表达的研究

目的 构建编码人Ⅱ型胶原蛋白250-270多肽片段（HuCⅡ250-270)的多聚基因，以获得高效表达，高度可溶和便于纯化的重组多肽基因。方法 选用大肠杆菌（E.coli)偏爱密码子优化HuCⅡ250-270的基因组成，通过化学合成和PCR法，获得HuCⅡ250-270的基因，并利用BanHI和BglⅡ同裂酶进行酶切位点串联获得6聚体，对影响重组HuCⅡ250-270表达的各种因素进行系统研究，以获得优化表达的条件，对表达产物进行分离纯化。结果 酶切分析和DNA测序证实，6聚目的基因的构建正确，融合表达的量明显高于非融合表达，在优化条件下，可达30%，表达产物的可溶性明显提高（在90%以上），其相对分子质量（Mr)与预期的相符，纯化后的纯度达90%以上。结论 实现了HuCⅡ250-270的高效表达，为研究类风湿性关节炎的发病机制和治疗提供了实验依据。为在原核细胞中高效表达的胶原蛋白的功能性小片段，提供了可供参考的借鉴。     

Ⅱ型胶原蛋白和雷公藤多甙对佐剂性关节炎治疗作用的实验研究

目的探讨口服Ⅱ型胶原(typeⅡcollagen,CⅡ)、雷公藤多甙(Tripterygium Wilfordii Polyglycosidium,TWP)对大鼠佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)的治疗作用及在治疗过程中对大鼠外周淋巴器官中白介素10(IL-10)的影响。方法建立动物模型,采用关节炎评分法对关节肿胀程度进行评估,采用免疫组化法检测大鼠外周淋巴器官中IL-10水平的变化。结果口服Ⅱ型胶原及雷公藤多甙可以明显减轻病变关节的炎症反应,降低发病率,推迟AA的发病并且使病程明显缩短,而且大鼠外周淋巴器官中IL-10水平也较模型组显著升高。结论口服CⅡ及TWP可有效减轻佐剂型关节炎大鼠的关节病变,并能使AA大鼠外周淋巴结中IL-10水平升高。     

类风湿性关节炎患者血清IL-1 β和TNF-α水平的观察

为观察细胞因子白细胞介素-1β(IL-1 β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)患者发病过程中的变化,我们应用放射免疫分析法(RIA)对80例RA患者血清中IL-1 β和TNF-α进行检测,现将结果报告如下.     

口服耐受预防大鼠复发性类风湿性关节炎的研究

目的建立实验性类风湿性关节炎(RA)的动物模型,研究口服可溶性鸡II型胶原(CCII)诱导免疫耐受对大鼠复发性RA的预防作用.方法以CCII和完全弗氏佐剂免疫Wistar大鼠,建立RA大鼠模型.在大鼠致炎前和反复造病后,口服CCII,观察其对RA复发的预防作用.并以ELISA法对大鼠血清中的抗CCII抗体进行检测.结果在Wistar大鼠成功地诱发了RA,发病率为90%.大鼠在致炎前口服CCII可明显延迟RA的发病时间并降低RA的发病率,且大鼠RA的临床症状也明显减轻.而耐受大鼠由CCII引起的迟发性超敏反应(DTH)明显受到抑制.ELISA检测结果显示口服可溶性CCII对大鼠体内抗CCII抗体的产生有一定的抑制作用.结论口服CCII可诱导特异性免疫耐受,从而对大鼠RA的发生有着明显的预防作用.     

类风湿性关节炎患者外周血及滑膜液中Ⅱ型胶原反应性B细胞…

以一个ＣＤ４＾＋Ｔ细胞克隆（ＥＬ－４，克隆ＯＵＢＵ）和ＰＭＡ，ｒＩｌ－２做为多克隆刺激系统，应用酶联斑点（ＥＬＩＳＰＯＴ）技术从单细胞检测了类风湿性关节炎（ＲＡ）非类风湿性关节炎（Ｎｏｎ－ＲＡ）患者外周血及滑膜液中Ⅱ型胶原特异性抗体产生细胞频率，发现ＲＡ患者外周血及滑膜液中Ⅱ型胶原反应性Ｂ细胞频率明显高于Ｎｏｎ－ＲＡ患者，提示单纯软骨结构的破坏并不能解释Ⅱ型软骨胶原在免疫是损伤中的作用，因为Ｎｏｎ     

类风湿性关节炎患者外周血及滑膜液中Ⅱ型胶原反应性B细胞频率分析

以一个ＣＤ４＋Ｔ细胞克隆（ＥＬ－４，克隆ＯＵｒＢＵｒ）和ＰＭＡ、ｒＩＬ－２做为多克隆刺激系统，应用酶联斑点（ＥＬＩＳＰＯＴ）技术从单细胞水平检测了类风湿性关节炎（ＲＡ）、非类风湿性关节炎（Ｎｏｎ－ＲＡ）患者外周血及滑膜液中Ⅱ型胶原特异性抗体产生细胞频率。发现ＲＡ患者外周血及滑膜液中Ⅱ型胶原反应性Ｂ细胞频率明显高于Ｎｏｎ－ＲＡ患者。提示单纯软骨结构的破坏并不能解释Ⅱ型软骨胶原在免疫病理损伤中的作用，因为Ｎｏｎ－ＲＡ患者关节局部也存在着严重的炎症反应。     

口服Ⅱ型胶原诱导分泌TGF—β的特异性Th3细胞

目的 了解饲喂Ⅱ型胶原（ｔｙｐｅ Ⅱ ｃｏｌｌａｇｅｎ，ＣⅡ）的大鼠能否在其肠相关淋巴细胞和脾脏中，诱导产生ＣⅡ特异性Ｔ细胞及其分泌的细胞因子的类型。方法 对口服ＣⅡ致耐大鼠进行特异和非特异性淋巴细胞增殖实验，并采用酶联免疫斑点法（ＥＬＩＳＰＯＴ），对ＣⅡ特异性Ｔ细胞在单细胞水平进行细胞内细胞因子检测。结果 ＣⅡ致耐大鼠的Ｔ细胞增殖能力下降，ＣⅡ特异性Ｔ细胞多数分泌ＴＧＦ－β，极少数分泌ＩＬ－４和     

类风湿性关节炎患者三种可溶性细胞因子受体水平的临床检测

目的：为了分析三种可溶性细胞因子受体（ｓＩＬ－２Ｒ,ｓＩＬ－６Ｒ,ｓＴＮＦＲＩ）对类风湿性关节炎患者的影响。方法：用ＥＬＩＳＡ方法测定了３１例类风湿性关节炎患者血清中三种可溶性细胞因子受体的含量,并与其他指标进行了对比分析。结果：３１例类风湿性关节炎患者的ｓＩＬ－２Ｒ、ｓＩＬ－６Ｒ和ｓＴＮＦＲＩ的水平显著升高（Ｐ〈０．０１）。结论：以上三种可溶性细胞因子受体与类风湿性关节炎具有密切的关系,可作为临