肝细胞生长因子对培养的视网膜色素上皮 细胞移行及增生的作用

目的研究肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor, HGF)对视网膜色素上皮 (retinal pigment epitheliaum, RPE) 细胞的促增生和促移行作用。方法在无血清培养液培养的人RPE细胞中分别加入1、2、10、50、100 μg/L不同浓度的HGF,四唑盐比色法(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)测定促细胞增生情况; 采用RPE细胞损伤愈合模型,在无血清培养液中分别加入1、2、10、50、100 μg/L 不同浓度的HGF,培养20 h后计数进入刮痕区的细胞,观察HGF对RPE细胞移行的作用。结果HGF浓度处于10 ～100 μg/L时对RPE细胞具有促增生作用(P<0.05或P<0.01), 增生率为18.2 %～34.8 %,其中浓度为50 μg/L作 用3 d达到最大促增生效果(P<0.01）,增生率为32.8 %;HGF可明显促进RPE细胞移行,促移行能力分别为113.0 %(10 μg/L), 91.7 %(50 μg/L) 和50.3 %(100 μg/ L )。浓度自2 μg/L开始出现促细胞移行作用(P<0.05),促移行能力为9.3 %。结论HGF可促进RPE细胞增生和移行,是RPE细胞的有丝分裂原和强力的促移行因子。(中华眼底病杂志,2001,17:307-310)     

肝细胞生长因子对培养的人晶状体上皮细胞增生及移行作用的研究

目的研究肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对体外培养的人晶状体上皮细胞(hu-man lens epithelial cells,HLECs)增生及移行的作用。方法在无血清培养液培养的HLECs中分别加入不同浓度的HGF(2.5、5、10、20、40、50、100μg/L),MTT法测定促细胞增生的情况;流式细胞仪分析细胞周期;HLECs损伤愈合模型,观察不同浓度HGF(10、20、50μg/L)处理24h后HLECs的移行情况。结果HGF浓度处于10、20、40、50μg/L时对HLECs具有促增生作用(P<0.05或P<0.01),增生率分别为10.5%、30.2%、28.3%和11.1%;当浓度为20μg/L作用24h能达到最大促增生效果(P<0.01),增生率为29.6%;HGF通过促进细胞G0向G1的转化来促进细胞的增生;HGF可明显促进HLECs的移行,其移行能力分别为22.1%(10μg/L)、57.7%(20μg/L)和208.6%(50μg/L)。结论HGF可促进HLECs的增生和移行,是HLECs的有丝分裂原和强有力的促移行因子。     

葡萄籽原花青素提取物对牛晶状体上皮细胞增殖及细胞周期的影响

目的 观察葡萄籽原花青素提取物(grape seedproanthocyanidin extract,GSPE)对牛晶状体上皮细胞(bovinelens epithelial cells,BLECs)的增殖及细胞周期的影响,为后发性白内障的药物治疗提供新的研究方向.方法 首先进行BLECs的原代及传代培养,取第2-第3代的BLECs,分别采用MTT法、流式细胞术及免疫组化SP染色法进行实验,研究不同浓度及作用时间的GSPE对体外培养的BLECs的增殖及细胞周期的影响.结果 GSPE能明显抑制BLECs的增殖,并呈现剂量和时间依赖性.在作用24 h后,随着GSPE浓度的增高(20 μg/ml,60 μg/ml,100 μg/ml),A值逐渐变小(0.343±0.079,0.252±0.029,0.137±0.011),抑制作用逐渐增强(P＜0.01).100 μg/ml GSPE作用BLECs 24 h、48 h、72 h后,A值分别为0.137±0.011、0.096±0.025、0.055±0.008,差异有非常显著的统计学意义(P<0.01).流式细胞术结果显示:经过GSPE处理,BLECs的G0/G1期细胞数量增加,S期、G2/M期明显减少.100 μg/ml GSPE作用24 h后,G0/G1期细胞为83.67%±5.63%,阴性对照组为59.13%±5.71%,差异有统计学意义(P＜0.05).免疫组化结果:GSPE剂量组中p21蛋白的表达增加,阳性细胞率从28.75%±1.25%增加到86.73%±5.11%,与阴性对照组7.73%±1.75%相比,差异有非常显著的统计学意义(P＜0.01).结论 GSPE通过上调p21蛋白的表达诱导细胞周期停滞于G0/G1期,能有效地抑制牛晶状体上皮细胞增殖,可能成为后发性白内障的药物治疗研究的新方向.     

碱性成纤维细胞生长因子诱导牛晶状体上皮细胞增殖细胞核抗原的表达及对晶状体上皮细胞增殖作用的研究

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF)诱导牛晶状体上皮细胞（bovine lens epithelial cell,BLEC)增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达及对BLEC增殖的作用。方法 取体外培养的第2代BLEC,加入不同浓度的bFGF(0.01-100.00μg/L）共同培养24－96h后,用^3H-TdR掺入法测定BLEC DNA合成率,用流式细胞仪检测细胞周期和PCNA的表达。结果 不同浓度的bFGF有促进BLEC增殖作用,并呈剂量时间依赖性,当浓度为10.00μg/L的bFGF作用BLEC24－48h后,晶状体上皮细胞的^3H-TdR掺入值分别为11772．5和10988．2,较对照组的6550．5增加约一倍,两组比较差异有显著意义（P＜0．05）。bFGF作用BLEC可使PCNA表达率上升（77．40％）,并使BLEC周期发生变化,S期细胞和G2／M期细胞比例分别提高至23．41％和20．76％,与对照组比较,差异有显著意义（P＜0．05）。结论 bFGF通过上调BLEC的PCNA表达,改变细胞周期,致使BLEC进入增殖状态。     

维拉帕米对体外人晶状体上皮细胞增殖和黏附的抑制作用

目的:研究钙离子拮抗剂维拉帕米(verapamil,Ver)对体外培养的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)增殖、凋亡和黏附的影响。方法:组织块法培养人晶状体上皮细胞,用Ver处理第二代人晶状体上皮细胞。MTT法观察不同浓度的Ver对HLEC增殖和黏附的影响,AO/EB双染法观察细胞形态,Annexin V-FITC/PI双染法观察细胞凋亡情况,流式细胞术(FCM)检测Ver对HLEC周期的影响。结果:组织块贴壁4~6d可见HLEC从组织块边缘长出,15~20d接近融合。随着Ver药物浓度的增加,HELC增殖率减少,以72h最为明显。FCM检测细胞周期变化时发现,G1期细胞在10,40g/L Ver(78.1±0.2,83.2±0.6)较正常组(72.0±0.9)增加(P<0.05);S期的细胞在10,40g/L Ver(10.2±0.1,8.5±0.3)较正常组(16.9±0.3)明显减少(P<0.05)。形态学观察发现,HELC在40g/LVer作用48h后发生了一系列形态改变,包括细胞核固缩、染色质边集等凋亡改变。10,20,40,80g/L的Ver可以诱导HLEC发生凋亡,且随着浓度的升高凋亡率显著升高。用药24h后HELC的贴壁量为对照组的73.2%。结论:Ver能改变细胞周期而抑制HLEC增殖、诱导细胞凋亡,并且抑制HLEC的黏附。     

雷帕霉素抑制猴视网膜微血管内皮细胞增生的实验研究

背景 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路在细胞周期调控机制中扮演着重要角色,其抑制剂雷帕霉素（RAPA）可通过调控细胞周期抑制细胞增生. 目的 观察RAPA对体外培养的猴视网膜微血管内皮细胞RF/6A细胞系增生的影响. 方法 体外培养RF/6A细胞系,分别在培养液中加入PBS、10 μg/L RAPA和5μg/L RAPA.采用Western blot法检测cyclin D1蛋白在各组RF/6A细胞中的表达;采用流式细胞仪检测不同质量浓度RAPA作用后G0/G1期RF/6A细胞的比例;行血管内皮细胞体外成管实验观察不同质量浓度RAPA对RF/6A细胞成管的抑制作用. 结果 Western blot检测表明,PBS组、10μg/LRAPA组和5μg/L RAPA组RF/6A细胞中cyclin D1蛋白的相对表达量分别为0.92±0.04、0.58±0.02和0.73±0.02,3个组间的差异有统计学意义（F=246.320,P=0.000）,其中10 μg/L RAPA组和5μg/L RAPA组cyclin D1蛋白在RF/6A细胞中的相对表达量均明显低于PBS组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.细胞周期检测发现,PBS组、10 μg/L RAPA组和5μg/L RAPA组G0/G1期细胞比例分别为（42.13±0.57）％、（65.15±0.64）％和（54.09±0.78）％,3个组间差异有统计学意义（F=887.815,P=0.000）,其中10 μg/L RAPA组和5 μg/L RAPA组RF/6A细胞G0/G1期比例明显高于PBS组,差异有统计学意义（P＜0.05）.体外成管实验显示,PBS组、10 μg/L RAPA组及5μg/L RAPA组每个视野下血管内皮细胞成管数分别为（9.67±1.53）、（4.33±0.58）和（6.33±0.58）个/视野,3个组间比较差异有统计学意义（F=21.778,P=0.002）,10 μg/LRAPA组内皮细胞管数最少,其次为5μg/L RAPA组,均明显少于PBS组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 RAPA可通过下调cyclin D1蛋白的表达抑制RF/6A细胞的增生,较高质量浓度的RAPA作用更强.     

基质金属蛋白酶抑制剂对培养的人晶状体上皮细胞移行抑制作用的研究

目的 通过体外人晶状体囊袋模型的建立,探讨基质金属蛋白酶抑制剂GM6001对白内障患者术后晶状体上皮细胞移行的抑制作用及其对细胞活性的影响,以寻找一种安全有效地防治晶状体后囊膜混浊的药物.方法 本文为实验研究.16例供体人眼行模拟白内障手术,建立人晶状体囊袋培养模型,确认赤道部晶状体上皮细胞开始移行后,将晶状体囊袋置于不同浓度(1 μmol/L、10 μmol/L和100 μmol/L)的GM6001及其阴性对照液(100 μmol/L)中培养(每组4个囊袋).相差显微镜下分别测量培养10、20及30 d时各组晶状体上皮细胞在后囊膜移行的距离;酶联免疫吸附实验测定囊袋培养液中MMP-2和MMP-9的浓度.四甲基偶氮唑盐法(MTT)测定不同实验浓度GM6001对细胞活性的影响.多组间及组间计数资料的比较,采用随机区组设计的方差分析.结果 培养的人晶状体囊袋中赤道部晶状体上皮细胞第4天开始移行.GM6001明显抑制了晶状体上皮细胞在后囊膜的移行,呈剂量依赖性(F=53.79,P<0.01):实验第20天,10μmol/L GM6001组晶状体上皮细胞移行距离较对照组减少70%(P<0.01),100μmoL/L组减少98%(P<0.01);GM6001降低了MMP-2、MMP-9表达水平,浓度越高,抑制作用越明显(F=86.59,72.96;P<0.01):实验第20天,10 μmol/L GM6001组MMP-2和MMP-9表达水平较对照组均降低70%(P<0.01),100 μmol/LGM6001组MMP-2水平降低了90%(P<0.01),MMP-9水平降低了87%(P<0.01);MTT法显示,晶状体上皮细胞在GM6001中仍保持增殖活性,各处理浓度组光密度(A)值与对照组比较差异无统计学意义(F=0.62,P>0.05).结论 MMP抑制剂有效地抑制了体外囊袋培养的人晶状体上皮细胞在后囊膜的移行,且对细胞活性无明显影响.因此,MMP抑制剂可能对预防后囊混浊有一定作用.     

南珠水解液对H2O2诱导的人晶状体上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的　探讨南珠水解液对过氧化氢（H₂O₂）诱导的人晶状体上皮细胞（HLEC）氧化应激损伤的保护作用。方法　培养HLEC细胞株HLEB3,在培养液中加入不同浓度南珠水解液,培养24 h和48 h分别检测细胞增殖水平,并据此选择后续实验中南珠水解液浓度。培养HLE-B3细胞,分成3组:正常对照组;氧化损伤组,加入H₂O₂至终浓度为300 μmol·L^-1;南珠水解液处理组,加入H₂O₂至终浓度为300 μmol·L^-1,加入南珠水解液至终浓度为200 mg·L^-1。3组细胞使用流式细胞术检测细胞凋亡率,利用电镜观察细胞形态差异;利用生化检测试剂盒检测3组细胞中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和超氧化物岐化酶（SOD）活性以及丙二醛（MDA）含量。结果　3组细胞增殖法检测结果显示,南珠水解液处理HLE-B3细胞24 h后,对其活性无抑制作用;50 mg·L^-1、100 mg·L^-1、200 mg·L^-1南珠水解液处理后细胞存活率分别为（128.68±12.35）%、（158.43±11.71）%和（164.16±24.46）%,48 h后能显著提高其增殖水平,与正常对照组［（100.00±9.78）%］比较,差异有统计学意义（P<0.05）。流式细胞仪检测结果显示,正常对照组细胞凋亡率为（4.527±0.321）%;氧化损伤组为（11.460±0.633）%;南珠水解液处理组细胞凋亡率降至（8.877±0.193）%,与氧化损伤组相比差异具有统计学意义（P<0.05）。电镜下观察结果显示,H₂O₂氧化损伤可以诱导HLE-B3细胞形态改变,损伤程度最高;南珠水解液处理后,细胞形态轻微改变。氧化损伤组细胞内GSH-Px、SOD含量均降低,MDA含量升高,与正常对照组相比差异均具有统计学意义（均为P<0.05);南珠水解液处理组GSH-Px、SOD含量均升高,MDA含量下降,与氧化损伤组相比差异均具有统计学意义（均为P<0.05)。结论　南珠水解液能够促进HLEC生长,抑制细胞凋亡,能够提升HLEC中GSH-Px、SOD活性,降低MDA含量,对H₂O₂诱导的HLEC氧化损伤具有保护作用。     

四君子汤含药血清抑制晶状体上皮细胞凋亡的实验研究

目的　观察四君子汤含药血清对人晶状体上皮细胞（human lens epithelial cell，HLEC）凋亡的抑制作用，从而探讨四君子汤防治老年性白内障的机制。方法　30只SD大鼠随机分为2组，分别用四君子汤（1.725 g·kg^-1·d^-1）和生理盐水灌胃，用药7 d后经腹主动脉采血，离心提取四君子汤含药血清和空白血清冻存备用。细胞实验分为4组:阴性对照组、过氧化氢组（300 μmol·L^-1过氧化氢作用4 h）、空白血清组（300 μmol·L^-1过氧化氢作用4 h后加入体积分数20%空白血清作用12 h）和四君子汤含药血清组（300 μmol·L^-1过氧化氢作用4 h后加入体积分数20%四君子汤含药血清作用12 h），流式细胞仪检测HLEC细胞周期；透射电子显微镜观察各组HLEC超微结构的改变。结果　流式细胞仪检测结果示:过氧化氢组G1期细胞比例为（67.127±2.615）%，较阴性对照组明显增加，S期细胞比例为（24.603±2.547）%、 G2期细胞比例为（8.270±1.149）%，均较阴性对照组减少，差异均具有统计学意义（均为P＜0.05）。四君子汤含药血清组G1期细胞比例为（41.517±20.008）%，较过氧化氢组明显减少，S 期细胞比例为（38.423±10.213）%、G2期细胞比例为（20.060±11.004）%，均较过氧化氢组明显增加，差异均具有统计学意义（均为P＜0.05）。透射电子显微镜结果显示:阴性对照组胞膜完整，各细胞器结构正常；过氧化氢组细胞表面微绒毛消失，染色质凝集成块分布于核膜下，核膜欠完整，细胞质内可见溶酶体；空白血清组细胞质内空泡增多，线粒体、内质网等细胞器结构仍可见；四君子汤含药血清组胞膜完整，细胞质内可见少许空泡，线粒体、内质网等细胞器结构清晰。结论　四君子含药血清能有效抑制过氧化氢诱导的HLEC凋亡，这可能是四君子汤防治老年性白内障的机制之一。     

氧化还原信号转导抑制剂对人晶状体上皮细胞增殖的调控作用

目的 观察过氧化氢酶、N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)、二碘基苯(DPI)、AACOCF3四种氧化还原信号转导抑制剂对人晶状体上皮细胞(HLEC)SRA 01/04细胞增殖的作用.方法 为实验研究.取5～10代SRA 01/04细胞逐步降低血清浓度,在无血清培养液中培养2 h,分别用过氧化氢酶、NAC、DPI、AACOCF3预处理细胞30 min后,给予EGF 20μg/L或bFGF 20μs/L,48 h后检测3H-胸腺嘧啶脱氧核苷掺入量,计数活细胞数.在短期实验中,抑制剂只作用于细胞30 min;长期实验中,抑制剂共作用48.5 h.采用单因素方差分析对不同浓度EGF、bFGF对细胞增殖作用的样本均数进行统计.抑制剂对细胞增殖作用的实验设计属于非平衡多因素组合设计,采用拆分组别法进行统计分析.其中对照组与生长因子组间比较采用独立样本t检验,生长因子组与不同抑制剂组间比较采用单因素方差分析,不同抑制剂的不同浓度间比较采用嵌套设计定量资料方差分析.结果 作用30 min(短期实验)和作用48.5 h(长期实验),四种抑制剂都能显著抑制EGF或bFGF引起的细胞增殖.在EGF刺激下的短期实验中,105U/L过氧化氢酶,0.5 mmol/L NAC,0.1 izmoL/L DPI或0.5μmol/LAACOCF3预处理细胞30 min可以使EGF引起的细胞DNA合成分别减少18.0%(t=6.132,P<0.01),24.6%(t=6.188,P<0.01),28.5%(t=6.386,P<0.01)和16.4%(t=3.705,P=0.001).在EGF刺激下的长期实验中,能抑制细胞增殖的最低浓度低于短期实验需要的最低浓度,分别为5×104U/L过氧化氢酶,0.2 mmol/L NAC,0.01 μmol/L DPI和0.1μmol/L AACOCF3.短期实验及长期实验中抑制剂的作用强度均有剂量依赖性.相同浓度下,长期实验的抑制效果强于短期实验.在bFGF刺激下的短期实验及长期实验中得到了相似的结果.结论 氧化还原信号转导对HLEC SRA01/04增殖有重要的调控作用,阻断活性氧的产生或清除细胞内的活性氧能显著抑制LEC增殖.     

bFGF诱导人晶状体上皮细胞增殖过程中细胞外信号调节激酶的作用

目的:检测细胞外信号调节激酶(extracellular regulated kinase,ERK)在碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)诱导的人晶状体上皮细胞增殖过程中的表达与活化;检测ERK1/2特异性阻断剂PD98059对人晶状体上皮细胞增殖的影响。方法:人晶状体上皮细胞系SRA01/04体外培养,采用MTT比色法和[3H]-TdR掺入法检测ERK阻断剂PD98059对人晶状体上皮细胞活力和DNA合成的影响;Westernblot法测定bFGF对培养的人晶状体上皮细胞ERK,c-Jun氨基末端激酶(JNK),P38蛋白表达及PD98059对环氧合酶-2(COX-2)表达的影响。结果:10μg/LbFGF能显著刺激人晶状体上皮细胞增生,1μmol/LPD98059即能显著抑制bFGF启动的HLEC增殖,其效应呈浓度依赖性(P<0.01)。10μg/LbFGF可激活ERK信号通路,诱导COX-2蛋白表达,其效应在30min内达到高峰,6h后逐渐减弱,此作用可被10μmol/LPD98059阻断;10μg/LbFGF对非磷酸化ERK,磷酸化和非磷酸化JNK及P38表达无明显影响。结论:有丝分裂原活性蛋白激酶信号传导通路中ERK磷酸化对bFGF启动的人晶状体上皮细胞增殖具有重要的调节作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对不同年龄白内障患者晶状体上皮细胞增殖的影响

】     

LY294002对bFGF诱导的兔晶状体上皮细胞增生的影响

目的探讨LY294002对碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）诱导的兔晶状体上皮细胞（LECs）增生的影响。方法兔眼LECs经培养后,将10^-8、10^-7、10^-6、10^-5、10^-4mol／LLY294002分别加入LECs培养基中培养48h为LY294002组。另将10^-8、10^-7、10^-6、10^-5、10^-4mol／LLY294002＋bFGF（10mg／L）加入培养基中培养LECs48h。bFGF（10mg／L）诱导LECs增生48h为阳性对照组,空白对照组仅用无血清DMEM。MTT比色法测定吸光度（A）值,分析各组药物对LECs增生的抑制率,流式细胞仪检测各细胞周期的LECs百分率。结果bFGF组与空白对照组相比A值升高,LY294002组随着药物浓度的增加,4值明显降低,差异有统计学意义（P〈0．01）。bFGF＋LY294002组与LY294002组相比,A值下降更明显,差异有统计学意义（P〈0．01）。流式细胞仪分析LY294002对LECs的抑制作用与MTT呈现相同趋势,随着LY294002浓度的增加,处于G0／G1期的LECs逐渐增加（P〈0．01）,而S期和G2／M期逐渐减少。结论LY294002可明显抑制体外培养的bFGF诱导的兔LECs的增生,并呈剂量依赖关系,为临床筛选防治后发性白内障的药物提供依据。     

过氧亚硝酸根联合碱性成纤维细胞生长因子对人晶状体上皮细胞细胞外信号调节激酶（ERK）磷酸化水平的影响

目的　探讨过氧亚硝酸根（ｐｅｒｏｘｙｎｉｔｒｉｔｅ,ＯＮＯＯ－）和重组人碱性成纤维细胞生长因子（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦ）共同作用对人晶状体上皮细胞细胞外信号调节激酶（ＥＲＫ）磷酸化水平的影响。初步探讨ＯＮＯＯ－导致白内障发生的可能机制。方法　将培养的ＨＬＥＣ细胞分为４组,对照组（未经ＯＮＯＯ－和ｂＦＧＦ处理）、ｂＦＧＦ单独处理组、ｂＦＧＦ＋ＯＮＯＯ－处理组［ｂＦＧＦ预处理１ｈ后加入不同浓度ＯＮＯＯ－（５０μｍｏｌ·Ｌ－１、１００μｍｏｌ·Ｌ－１、２００μｍｏｌ·Ｌ－１）处理１ｈ］和ＯＮＯＯ－ ＋ｂＦＧＦ处理组［不同浓度ＯＮＯＯ－（５０μｍｏｌ·Ｌ－１、１００μｍｏｌ·Ｌ－１、２００μｍｏｌ·Ｌ－１）预处理１ｈ后加入ｂＦＧＦ处理１ｈ］。检测各组细胞内ＥＲＫ磷酸化水平的变化。结果　ｂＦＧＦ单独处理组和ｂＦＧＦ ＋ＯＮＯＯ－（５０μｍｏｌ·Ｌ－１、１００μｍｏｌ·Ｌ－１、２００μｍｏｌ·Ｌ－１）处理组中磷酸化ＥＲＫ相对表达值分别为５．１７±０．３５、４．４２±０．１２、３．９１±０．１５和０．４９±０．０８,与对照组（１．００±０．０５）相比差异有统计学意义（Ｆ＝４０２．８３,Ｐ＜０．００１）,结果显示ＯＮＯＯ－可以抑制由ｂＦＧＦ诱导的ＥＲＫ磷酸化水平的增加（Ｆ＝３１０．３４,Ｐ＜０．０５）。ＯＮＯＯ－（５０μｍｏｌ·Ｌ－１、１００μｍｏｌ·Ｌ－１、２００μｍｏｌ·Ｌ－１）＋ｂＦＧＦ处理组中磷酸化ＥＲＫ相对表达值分别为３．３６±０．０４、３．３２±０．０６和２．９２±０．０８,与对照组（１．００±０．０２）相比,所有处理组的ＥＲＫ磷酸化水平均显著增加（Ｆ＝５１８．９４,Ｐ＜０．００１）;５０μｍｏｌ·Ｌ－１和１００μｍｏｌ·Ｌ－１ＯＮＯＯ－处理细胞后经ｂＦＧＦ处理,ＥＲＫ磷酸化水平较ｂＦＧＦ单独处理组（３．０４±０．０５）显著增加（Ｆ＝３５．５３,Ｐ＜０．０５）,而２００μｍｏｌ·Ｌ－１ＯＮＯＯ－处理组与ｂＦＧＦ单独处理组相比差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论　ＯＮＯＯ－诱导的白内障的发生可能与ＥＲＫ磷酸化的紊乱有关。     

纤维连接蛋白对原发性开角型青光眼小梁网细胞增殖、黏附和迁移的影响

目的通过研究纤维连接蛋白（FN）对体外培养的原发性开角型青光眼（POAG）患者小梁网细胞增殖、黏附、迁移的影响,探讨FN与POAG发病机制的关系。方法取临床确诊的POAG患者小梁网切除术中的深层巩膜组织块,进行小梁网细胞体外原代和传代培养．并对其进行免疫细胞化学和电镜鉴定。取第3代小梁网细胞,实验组分别加入浓度为5、10、20、40、100μg／ml的FN（含无血清DMEM／F12培养液）培养,对照组不加FN。培养24h后,采用CCK-8比色法和Transwell试剂盒检测各组光密度值,分析FN对POAG小梁网细胞增殖、黏附、迁移的影响。采用SPSS17．0统计软件,组间比较采用One-Way ANOVA分析,两两比较采用SNK检验。结果经过免疫细胞化学和电镜鉴定后,确定培养的细胞为POAG小梁网细胞。不同浓度FN对小梁网细胞均有影响。FN对POAG小梁网细胞有促增殖作用,在FN为5～10μg／ml浓度范围,小梁网细胞增殖相对缓慢,10μg／ml以后呈现上调趋势,在40μg／ml时达到增殖高峰,100μg／ml仍促进增殖,但是相对缓慢。各实验组光密度值分别与阴性对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）;各实验组不同浓度组间比较,差异有统计学意义（F=81．778,P〈0．05）。FN浓度为5、10、20、40、100μg／ml时．小梁网细胞的增殖率分别为18．6％、54．7％、67．9％、98．7％和121．5％。同样,FN对POAG小梁网细胞有明显的促黏附、迁移作用。小梁网细胞的黏附、迁移能力随FN浓度的增加而增强,基本呈现曲线上升趋势,与阴性对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论FN能促进POAG患者小梁网细胞增殖、黏附和迁移,其在POAG发病机制中的作用可能为通过影响POAG小梁网细胞的增殖、黏附、迁移功能参与房水流出的调节过程。     

转化生长因子-β、白细胞介素-1和碱性成纤维细胞生长因子对人晶状体上皮细胞的影响

目的:研究体外细胞培养中转化生长因子-β(transforma-tion growth factor beta,TGF-β)、白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对人晶状体上皮细胞(human lens epi-thelial cell,HLEC)的增生作用,对白内障术后晶状体后囊浑浊的预防提供依据。方法:首先进行人晶状体上皮细胞的原代培养,传代培养的晶状体上皮细胞分成各5个实验组,分别加入不同剂量的TGF-β、IL-1,设空白对照组,进行3H-TDR掺入实验,观察TGF-β、IL-1、bFGF对晶状体上皮细胞的作用。结果:TGF-β、IL-1、bFGF对在体外的HLEC增生均有促进作用,并随剂量增加而增强(P<0.05)。结论:TGF-β、IL-1、bFGF在白内障术后的后发性白内障的形成发展过程中起促进作用。