巢式RT-PCR检测外周血中前列腺特异膜抗原mRNA

目的：应用巢式逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）检测外周血中前列腺特异膜抗原mRNA（PSM－mRNA)并探讨其临床意义。方法：取40例不同分期前列腺癌患者及对照组30例（15例良性前列腺增生患者，15例健康青年男性）周围静脉血各10ml，用巢式RT－PCR检测PSM－mRNA，并培养LNCaP细胞进行阳性对照。结果：共有24例前列腺癌血标本检测出PSM－mRNA(60.0%)，前列腺增生及健康对照组中无1例阳性，19例伴有远处骨转移的前列腺癌患者中16例检测到PSM-mRNA(84.2%)，未发现远处转移的21例中8例阳性（38．1％）。在10ml正常血液中加入10个LNCaP细胞，可检出PSM－mRNA。结论：PSM－mRNA可作为前列腺癌的辅助诊断指标，PSM－mRNA的检出率与前列腺癌分期（ABCD）、转移与否、血清PSA水平有相关性。     

血清PSA检测诊断前列腺癌临床价值探讨

前列腺特异抗原(PSA)是由前列腺上皮分泌的一种酸性蛋白酶，分泌到精液，弥散到血液中，目前血清PSA的检测是临床上筛查和诊断前列腺癌(Pca)最具有价值的肿瘤标志物。     

巢式RT—PCR法检测肝细胞癌外周血AFP mRNA的临床应用

原发性肝细胞癌 (ｐｒｉｍａｒｙｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉ -ｎｏｍａ ,ＰＨＣ)是目前临床上恶性程度最高、进展最快且疗效最差的肿瘤之一。其诊断主要依据临床、影像及血清甲胎蛋白 (α -ｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ ,ＡＦＰ)的检测 ,一旦发现远处转移 ,即属Ⅳ期 ,病人预后极差。因此ＰＨＣ的早期诊断 ,尤其小肝癌的转移倾向的诊断 ,不仅直接关系到病人的预后 ,对临床选择治疗手段 (手术、栓塞、放疗或化疗 )亦有重要价值。循环血中ＰＨＣ细胞的发现 ,可作为ＰＨＣ转移预测的指标之一。但因循环血中ＰＨＣ细胞数量极少 ,很难从形…     

PSA与PSM及其相关指标的研究进展

近年来由于环境因素的变化及人口老年化 ,前列腺癌的发病率有增加的趋势。早期、简单、准确、迅速检测前列腺癌以及对前列腺癌术后的监测 ,日益受到重视。本文就前列腺癌的瘤标前列腺特异性抗原 (ＰＳＡ)及前列腺特异性膜抗原 (ＰＳＭ)作一综述。一、ＰＳＡ的分子类型ＰＳＡ是由人前列腺上皮细胞合成的一种主要蛋白质 ,存在于正常前列腺组织、良性前列腺增生、前列腺息肉、前列腺癌组织和精液当中。ＰＳＡ在男性血液中以不同形式存在 :①大部分ＰＳＡ与蛋白酶抑制剂抗糜蛋白酶形成结合型ＰＳＡ(ＰＳＡ ＡＣＴ) ,小部分为游离型ＰＳＡ(ｆＰＳ…     

巢式RT-PCR检测外周血中前列腺特异膜抗原mRNA

目的:应用巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测外周血中前列腺特异膜抗原mRNA(PSM-mRNA)并探讨其临床意义.方法: 取40例不同分期前列腺癌患者及对照组30例(15例良性前列腺增生患者,15例健康青年男性)周围静脉血各10 ml,用巢式RT-PCR检测PSM-mRNA,并培养LNCaP细胞进行阳性对照.结果:共有24例前列腺癌血标本检测出PSM-mRNA(60.0％),前列腺增生及健康对照组中无1例阳性;19例伴有远处骨转移的前列腺癌患者中16例检测到PSM-mRNA(84.2％),未发现远处转移的21例中8例阳性(38.1％).在10 ml正常血液中加入10个LNCaP细胞,可检出PSM-mRNA.结论:PSM-mRNA 可作为前列腺癌的辅助诊断指标,PSM-mRNA的检出率与前列腺癌分期(ABCD)、转移与否、血清PSA水平有相关性.     

低水平PSA前列腺癌的诊断

前列腺特异抗原 (PSA)作为检测前列腺癌的有效指标在临床中被广泛应用 ,但对低水平 PSA前列腺癌患者则易漏诊。本文分析了我院 1994年 1月至 2 0 0 0年 4月收治的 73例前列腺癌中 PSA<10 .0 ng/ ml的 10例患者的临床资料 ,并讨论提高低水平 PSA前列腺癌诊断水平的方法。现报告如下。1　资料和方法1.1　一般资料　本组患者 10例 ,年龄 5 4～ 81岁 ,平均 6 5 .7岁 ,病程 1周至 2 4个月 ,平均 6 .3个月。 10例均有膀胱出口梗阻症状、排尿不畅 ,血尿 4例 ,2例服用 5α还原酶抑制剂如非那甾胺 (保列治 ) 1年以上。合并膀胱结石 2例 ,合并单…     

巢式RT—PCR检测肝癌患者外周血微量转移癌细胞

目的建立肝癌患者外周血微转移癌细胞的分子检测方法.方法从肝癌患者外周血中分离有核细胞,用TRzol提取RNA,特异引物扩增AFPmRNA,凝胶电泳观察结果.分析AFPmRNA扩增结果与患者临床指标的关系.结果肝癌患者外周血有核细胞RNA提取成功率为100%,33例肝癌患者AFPmRNA阳性率为69%(23/33),临床肝内门静脉癌栓、肝外转移患者AFP'mRNA扩增阳性率为100%,临床无转移患者AFPmRNA阳性率为56%(15/27),P＜0.05,AFPmRNA阳性患者的肿块最大径平均为10.67,AFP＞400μg/L者占40%(8/20),AFP'mRNA阴性患者肿块最大径平均为7.13cm,AFP＞400μg/L者占10%(1/10).结论巢式RT-PCR是检测肝癌患者外周血微转移癌细胞的稳定方法.     

贲门癌患者外周血CK-20mRNA基因表达的临床意义

目的 探讨贲门癌早期转移的生物标记物CK－20mRNA基因表达及其临床意义。方法 应用巢式逆转录多聚酶链反应（RT－PCR）法检测29例贲门癌患者外周血CK－20mRNA的表达情况。结果 29例贲门癌患者中12例外周血CK－20mRNA表达阳性，按UICC国际TNM标准分期外周血CK－20mRNA的表达率分别为：I期0／5，II期2／10，Ⅲ期8／12，IV期2／2。结论 贲门癌患者外周血CK－20mRNA阳性表达可作为贲门癌血行转移的分子指标之一，与TNM分期有一定关系。     

大肠癌患者外周血CK—20mRNA基因表达的初步研究

目的 探讨大肠癌患者外周血ＣＫ－２０ｍＲＮＡ（细胞角蛋白－２０ｍＲＮＡ）基因表达及其临床意义。方法 用ＲＴ－ＰＣＲ９志录－多聚酶链反应）法检测了３４例大肠癌患者外周血ＣＫ－２０ｍＲＮＡ的表达情况。结果 按Ｄｕｋｅｓ分期外周血ＣＫ－２０ｍＲＮＡ的表达率分别是：Ａ期２０％,Ｂ期３７．５％,Ｃ期５３．３％,Ｄ期８３．３％。结论 大肠癌患者外周血ＣＫ－２０ｍＲＮＡ的基因表达与Ｄｕｋｅｓ分期有一定关系,并且     

前列腺特异抗原(PSA)在晚期前列腺癌诊治中的作用

目的：研究前列腺特异抗原在晚期前列腺癌诊治中的作用。方法：分析11例晚期前列腺癌,包括肿瘤分期,PSA水平,转移部位与诊断方法,抗雄激素治疗反应,缓退瘤撤除反应。结果：PSA随临床分期增高而升高,它可以反映肿瘤对治疗的反应,结论：PSA作为瘤标对晚期前列腺癌有意义,它可指导调整治疗方案,值得临床应用。     

前列腺特异性膜抗原cDNA的克隆及用于临床前列腺癌的检测

目的获得前列腺特异性膜抗原(PSMA)基因,应用巢式反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测前列腺癌(PC)患者外周血中PSMA mRNA.方法从人前列腺癌细胞系LNCaP中提取总RNA,经RT-PCR扩增PSMA基因,克隆入pUC19质粒中,用全自动荧光测序仪测定其序列.根据PSMA cDNA序列设计合成引物,应用巢式RT-PCR方法检测36例PC患者和23例前列腺增生(BPH)患者外周血中PSMAmRNA,结果与巢式RT-PCR方法检测前列腺特异抗原(PSA)mRNA比较.结果获得了PSMA基因(由2 253 bp组成,可编码751个氨基酸),与已发表的PSMA cDNA序列一致.应用巢式RT-PCR方法检测PC患者外周血PSMA mRNA灵敏度和特异度分别为66 7%和100.0%,与巢式RT-PCR方法检测PC患者外周血PSA mRNA(灵敏度和特异度分别为30.6%和87.0%)比较差异显著.结论成功地克隆了PSMA基因并应用于临床PC诊断,巢式RT-PCR方法检测患者外周血中PSMA mRNA在PC诊断中的真实性和可靠性明显优于PSA mRNA.     

人前列腺特异性抗原mRNA实时荧光PCR定量标准品的构建

目的构建实时荧光定量PCR(FQPCR)的标准品以定量检测人前列腺特异性抗原(PSA)mRNA的表达。方法以Trizol裂解抽提法提取LNCaP细胞的总RNA。以RTPCR法制备PSAcDNA目的片段并进行扩增;以AT载体克隆法制备重组质粒,并转化E.coliDH5α菌提取重组质粒,联合用氨苄青霉素筛选法和α筛选法、EcoRⅠ限制性酶切和序列分析法鉴定特异性重组质粒。用聚乙二醇沉淀法提纯质粒并检测λ260nm吸光度,确定原液的重组质粒的拷贝浓度并以此制备FQPCR梯度标准品。结果PSAcDNA目的片段成功制备并获得稳定的重组质粒,保持了目的片段的特异性和序列的完整性。结论成功构建了实时荧光定量PCR标准品。     

人前列腺特异性抗原mRNA实时荧光POR定量标准品的构建

目的 构建实时荧光定量PCR（FQ-PCR）的标准品以定量检测人前列腺特异性抗原（PSA）mRNA的表达。方法 以Trizol裂解抽提法提取LNcaP细胞的总RNA。以RT-PCR法制备PSAcDNA目的片段并进行扩增；以A-T载体克隆法制备重组质粒，并转化EcoliDH5。菌提取重组质粒，联合用氨苄青霉素筛选法和筛选法、EcoRI限制性酶切和序列分析法鉴定特异性重组质粒。用聚乙二醇沉淀法提纯质粒并检测）．260nm吸光度，确定原液的重组质粒的拷贝浓度并以此制备FQPCR梯度标准品。结果 PSAcDNA目的片段成功制备并获得稳定的重组质粒。保持了目的片段的特异性和序列的完整性。结论 成功构建了实时荧光定量PCR标准品。     

应用PCR和RT-PCR检测猪内源性逆转录病毒及其意义

目的 观察猪内源性逆转录病毒（Porcine endogenous retrovirus,PERV)在中国实验小型猪的感染情况。方法 针对PREV gag区的序列，选用特异性引物，采用PCR方法检测猪肝脏、皮肤前病毒序列；以及RT－PCR方法检测血清中PERV－RNA序列。结果 该法在猪肝脏组织中可检测出PERV前病毒序列；此外，在猪血清标本亦检测出病毒序列，而其它2份HBV、HCV阳性血清及2份其它动物血清（大鼠、兔）检测结果均为阴性，说明该方法特异性较高。结论 中国实验小型猪均携带该病毒，并可以释放到血清中；采用该法具有特异、简便的特点，为进一步研究PERV感染及生物安全性奠定了基础。     

丁型肝炎病毒RNA巢式逆转录PCR检测

为了提高丁型肝炎病毒的实验室诊断水平，建立一个高敏感性和特异性的丁型肝炎病毒的检测方法。根据ＧＥＮＢＡＮＫ中ＨＤＶ的核酸序列设计出巢式引物，采用逆转录巢式ＰＣＲ方法对４０例肝炎患者进行检测。结果：２０例丁型肝炎病毒抗原阳性的ＨＤＶＲＮＡ均为阳性，１０例丁型肝炎病毒抗体阳性中ＨＤＶＲＮＡ阳性６例，１０例单纯ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和抗ＨＢｃ阳性的均未检出ＨＤＶＲＮＡ。结论：巢式逆转录ＰＣＲ可以作为丁型肝炎病毒临床检测的一种方法     

前列腺癌患者癌组织前列腺干细胞抗原、血清前列腺特异抗原检测

目的:探讨前列腺癌(PCa)组织中前列腺干细胞抗原(PSCA)的表达及与血清前列腺特异抗原(PSA)的关系.方法:采用免疫组织化学方法检测36例PCa组织、20例前列腺高分级上皮样内瘤样病变(HG-PIN)及20例良性前列腺增生(BPH)组织中PSCA的表达,术前ELISA法检测血清PSA水平.结果:BPH组织中无PSCA表达,HG-PIN、PCa组织中PSCA阳性率分别为70.0%(14/20)、80.6%(29/36),高于BPH组织(P＜0.05).高分化、中分化、低分化PCa组织中PSCA的阳性率分别为6/11、14/16、9/9,依次增高(P＜0.05).PSCA阳性率与PCa患者血清PSA水平无相关性(r=0.215,P＞0.05).结论:PSCA有可能是一种新的PCa肿瘤标志物.     

荧光定量RT-PCR在轮状病毒检测中的应用

目的:建立轮状病毒的荧光定量RT-PCR检测方法,用于检测临床腹泻样本。方法:使用Taqman探针技术,建立轮状病毒VP6特异的荧光定量RT-PCR体系。与WHO推荐的轮状病毒检测方法ELISA平行检测,对该体系的检测范围、灵敏度、特异性等参数进行评价。并将该体系用于临床腹泻样本。结果:该荧光定量RT-PCR体系具有高度灵敏度和特异性,线性范围宽,最低可检出1TCID50/ml。对113份临床腹泻样本的平行检测结果显示,该荧光定量RT-PCR体系与ELISA的检出率差异无统计学意义(χ2=0.41,P>0.5),可同样用于临床样本检测。结论:成功建立了轮状病毒荧光定量RT-PCR体系,该体系灵敏、特异、重复性好,可用于临床检测。     

PSMA、PSA在前列腺腺癌组织中的表达及其与腺癌临床分期的相关性分析

目的：研究前列腺腺癌（Pca）组织中前列腺特异性膜抗原（PSMA）、前列腺特异性抗原（PSA）的表达差异,评价两者在Pca预后评估中的价值。方法：选取Pca患者70例,平均年龄（74.3&#177;6.1）岁;前列腺增生（BPH）患者62例,平均年龄（72.1&#177;6.1）岁。采用免疫组化法检测PSMA、PSA表达。结果：Pca患者PSMA、PSA表达阳性率分别为61.4%（43/70）、91.4%（64/70）;BPH患者分别为9.7%（6/62）、90.3%（56/62）。PSMA在Pca与BPH中的表达差异有显著性（P〈0.001）,PSA在Pca与BPH中的表达差异无显著性（P〉0.05）。PSMA、PSA表达对Pca的检出率差异有显著性（P〈0.001）。采用Spearman等级相关分析显示,PSMA和PSA在Pca中的表达无相关性（P=0.606）;Pca临床分期与PSMA表达呈正相关（r=0.66,P〈0.001）,而与PSA表达无相关性（P=0.683）。结论：PSMA和PSA均有较好的前列腺组织特异性,组织PSA在鉴别男性肿瘤来源时较PSMA存在一定的优势;在鉴别前列腺组织病变的良、恶性时,PSMA优于PSA。PSMA表达与Pca的临床分期存在相关性,是Pca预后评价的重要指标之一,而组织PSA表达未显示这一优势。     

前列腺癌组织中前列腺干细胞抗原表达的临床病理相关因素

目的 探讨前列腺干细胞抗原(PSCA)在前列腺癌(PCa)组织中的表达及与肿瘤临床病理因素之间的相关性.方法 采用免疫组化SP法,用PSCA单克隆抗体对前列腺不同病变组织及非前列腺肿瘤组织石蜡包埋切片进行染色,其中PCa组织50例,良性前列腺增生(BPH)组织50例,其它肿瘤组织标本9例.引入阳性灰度值概念判定PSCA染色强度.采用logistic回归分析模型研究PSCA高表达是否和PCa临床病理参数之间存在相关性.结果 100例前列腺病变组织中,仅1例PCa和2例BPH组织PSCA呈阴性表达,PSCA在BPH和PCa组织中平均染色阳性灰度值分别为:18.73灰阶(Gs)和42.16Gs,在PCa组织中呈现明显高表达(P＜0.05),非前列腺肿瘤组织染色均呈阴性.多变量logistic回归分析表明PSCA高表达和PCa分期、分级和有无骨转移之间存在显著相关性(OR值分别为1.8,2.3,3.1;P值分别为0.029,0.013,0.007).结论 PSCA具有良好的前列腺组织器官特异性,并有助于判断PCa临床分期、分级和有无骨转移.