紫杉醇诱导人胃癌MGC803细胞凋亡作用研究

目的:研究胃癌发生过程中原位细胞凋亡活动以及紫杉醇对人胃癌细胞系MGC803诱导细胞凋亡的作用。方法:用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测了胃癌MGC803细胞凋亡,用紫杉醇处理培养胃癌细胞MGC803、显微镜下进行观察并且进行琼脂糖电泳,流式细胞仪检测细胞周期分布和端粒体酶活性检测。结果:癌旁对照组原位凋亡细胞增多,紫杉醇处理胃癌细胞可以诱导细胞产生典型的细胞凋亡变化。DNA发生断裂,琼脂糖电泳产生梯形条带,细胞阻滞于G2/M期,端粒体酶活性下降。结论:在体内肿瘤细胞凋亡降低,细胞分裂可加快,癌旁对照中细胞凋亡增多,体外紫杉醇可以诱导胃癌细胞系MGC803凋亡。     

紫杉醇纳米微粒对人胃癌细胞MGC803增殖和凋亡影响的研究

目的观察不同浓度（紫杉醇）PA纳米微粒在不同时间段对人胃癌MGC803细胞生长和凋亡的影响。方法应用MTF法测定不同浓度的PA纳米微粒、PA和5-FU对MGC803细胞分别在0、6、12、24、48、60、72h的细胞生长抑制率。流式细胞仪分析MGC803细胞周期的改变,细胞免疫组化检测凋亡相关基因Bcl-2蛋白的表达,检测端粒酶活性。结果MTT法显示不同浓度的PA纳米微粒可抑制MGC803细胞增殖（16μg／mL作用72h时的抑制率达69％）,并且与浓度和时间均呈正相关,流式细胞仪细胞周期分析提示PA纳米微粒可将MGC803细胞阻滞于G2M期,16μg／mL作用48h明显,细胞免疫组化法显示凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达下调,端粒酶活性水平下降。结论PA纳米微粒可诱导人胃癌细胞MGC803发生凋亡且具有控释效应,可延长药物对胃癌细胞的有效作用时间,载药纳米微球没有改变PA成分的生物学活性。     

多西紫杉醇诱导前列腺癌PC3细胞凋亡的蛋白质组学研究

目的 比较多西紫杉醇诱导激素非依赖性前列腺癌PC3细胞凋亡前后的差异表达蛋白。方法 采用磺酰罗丹明B(SRB)法检测不同浓度多西紫杉醇对前列腺癌PC3细胞增殖的抑制作用;应用胶内差异凝胶电泳对PC3细胞凋亡前后蛋白质进行双向凝胶电泳图谱分析,分离并筛选鉴定相关差异蛋白。结果 半数抑制浓度IC50为20nmol/L。双向凝胶电泳图谱发现表达差异较为明显的18个蛋白质位点,其中8个蛋白表达上调,10个蛋白表达下调。结论 本研究发现的部分差异蛋白可能参与激素非依赖性前列腺癌对紫杉醇类药物的耐药作用。     

紫杉醇脂质体诱导骨肉瘤细胞MG-63凋亡及其机制的研究

目的 探讨注射用紫杉醇脂质体对骨肉瘤细胞株的细胞毒作用及其作用机制.方法 以0、0.1、1、10、100μg/L浓度梯度的注射用紫杉醇脂质体培养基作用于骨肉瘤细胞株,通过四甲基偶氮唑蓝法(methy thiazolyh tetrazdium,MTT),倒置相差显微镜观察细胞形态,流式细胞分析技术检测细胞凋亡率,蛋白印迹(Western blot)技术分析细胞内增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达情况.结果 不同浓度药物作用于细胞48h后,细胞存活率下降;镜下细胞形态,从梭型趋于圆型,细胞内质聚集,细胞与细胞间距增大,随着药物浓度的逐渐加大,胞浆内颗粒也随之增多,细胞与平皿的附着力减弱,出现不等量的悬浮细胞.流式细胞仪结果显示随着药物浓度的增大,细胞凋亡率随之增高;Western blot显示PCNA的表达逐渐降低.结论 紫杉醇脂质体可以抑制骨肉瘤细胞株MG-63的生长,其机制可能与PCNA有关.     

FHIT基因表达对多西紫杉醇诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨外源性FHIT基因的表达对多西紫杉醇（DOC）诱导人胃癌细胞株(MGC 803)凋亡的影响及其分子机制。方法用脂质体将包含有外源性FHIT基因的重组真核表达质粒转染胃癌细胞MGC 803,获得稳定表达重组质粒pRcCMV FHIT的细胞株（已由山东大学附属省立医院中心实验室成功构建）,Western blot法检测外源性FHIT蛋白的表达;采用MTT法检测不同浓度（1.0、5.0、10.0、20.0、40.0?mg/L）及不同时间（24、48、72?h）下多西紫杉醇对MGC 803细胞的抑制率并选择最佳浓度和作用时间;采用流式细胞术检测FHIT转染和DOC单独及联合作用后的细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法检测干预前后cleaved Caspase3的蛋白表达。结果获得稳定表达FHIT基因的胃癌细胞株;DOC对MGC 803细胞具有抑制作用,且浓度为20?mg/L、时间为48?h时最明显;DOC+pRcCMV FHIT组细胞的凋亡水平（65.54%）较阴性对照组（3.27%）、pRcCMV组（3.55%）、pRcCMV FHIT组（13.94%）、DOC组（44.13%）、DOC+pRcCMV（45.29%）组明显增高,且差异具有统计学意义（P＜0.05）;DOC+ pRcCMV FHIT组细胞的cleaved Caspase3蛋白表达较其它各组明显增强。结论FHIT基因表达与DOC能够协同促进胃癌细胞的凋亡,这可能与二者能够协同上调Caspase 3蛋白表达相关。     

胃癌caspase-3表达及其与细胞凋亡的关系研究

目的 研究caspase-3表达在胃癌发生发展中的作用.方法 采用免疫组化S-P法观察113例胃癌旁上皮细胞、原发灶癌细胞和浸润淋巴细胞以及转移灶癌细胞中caspase-3表达,TUNEL法检测上述组织的细胞凋亡,并分析原发灶癌细胞中caspase-3表达与胃癌临床病理特征的关系,并探讨caspase-3表达与细胞凋亡的关系.结果 caspase-3在50.4%(57/113)的胃癌旁上皮细胞中表达,高于原发灶癌细胞中的阳性率32.7%(37/113)(P<0.05);caspase-3在胃癌原发灶浸润淋巴细胞中的阳性率为70.8%(80/113),高于胃癌旁上皮细胞和原发灶癌细胞中阳性率(P<0.05);58.1%(25/43)的转移灶癌细胞中caspase-3表达阳性,其阳性率高于对应原发灶癌细胞(34.2%,13/38)(P<0.05);原发灶癌细胞中caspase-3表达与胃癌患者的年龄、性别以及胃癌肿瘤大小、浸润深度、转移、TNM分期、生长方式和分化程度无相关性(P>0.05).原发灶癌细胞和浸润淋巴细胞及转移灶癌细胞中细胞凋亡指数明显低于癌旁上皮细胞(P<0.01).结论胃癌原发灶癌细胞中caspase-3表达下调和浸润淋巴细胞中caspase-3表达上调与胃癌发生有关,由caspase-3介导的细胞凋亡与胃癌的发生与发展有关.     

EGCG活化线粒体途径诱导人胃癌细胞凋亡

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)通过活化线粒体途径诱导人胃癌BGC823细胞凋亡的作用机制.方法 MTT法检测EGCG对BGC823细胞生长的影响;PI染色流式细胞术(FCM)分析测定细胞凋亡率;细胞线粒体跨膜电位(△(Ψ)m)用荧光染料罗丹明123染色FCM分析测定;Westem blot检测线粒体凋亡信号传导通路相关蛋白的表达.结果 EGCG对BGC823细胞生长有显著抑制作用,呈时间和剂量依赖性.EGCG以剂量依赖方式诱导BGC823细胞凋亡.EGCG(20μg/mL、40 μg/mL、80μg/mL)作用48 h后,BGC823细胞中△(Ψ)m降低,细胞色素c(Cyt c)释放增加,caspase-9蛋白表达增加,呈剂量依赖性.结论 EGCG通过活化线粒体信号传导途径诱导BGC823细胞凋亡.     

盐酸小檗碱抑制人胃癌细胞与诱导凋亡的实验研究

目的：探讨盐酸小檗碱体外对人胃癌细胞的抑制与诱导凋亡的影响。方法：以人胃腺癌细胞株SGC-7901为实验模型，用盐酸小檗碱大(8μg／ml)、小(4μg／ml)两个剂量组进行干预，采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法，光镜、扫描电镜、流式细胞术方法对细胞抑制、凋亡进行定性、定量检测，并设对照组对比。结果：不同浓度的盐酸小檗碱作用不同时间后，均对SGC-7901细胞产生抑制作用，且药物浓度越高、作用时间越长，抑制作用越强。扫描电镜下观测到细胞固缩，微绒毛消失，细胞间连接稀疏，凋亡小体形成。凋亡细胞发生率与药物浓度呈正相关。结论：盐酸小檗碱对人胃癌细胞生长具有明显抑制作用，并能显著诱导凋亡，这可能为该药抗胃癌作用的重要机理。     

紫杉醇与顺铂诱导下的凋亡卵巢癌细胞对树突细胞提呈功能的研究

目的探讨紫杉醇与顺铂诱导下的凋亡卵巢癌细胞对树突细胞提呈功能的研究。方法联合应用巨噬细胞集落刺激因子及白介素24刺激人外周血单核细胞诱导分化为树突状细胞（DC）,然后将树突状细胞和经紫杉醇联合顺铂在体外诱导发生凋亡的人卵巢癌细胞株共同培养,并共培养DC组为治疗组,生理盐水组和单独DC组作对照,分别注射于人卵巢癌移植瘤裸鼠尾部,2周后剥取瘤组织,计算抑瘤率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,观察裸鼠人卵巢癌移植瘤的发生率及治疗效果。结果紫杉醇、顺铂诱导的凋亡卵巢癌细胞对DC提呈功能显著增强,其诱导的CTL对卵巢癌细胞具有显著的杀伤作用。DC激活的CTL具有抑制移植瘤生长,促进肿瘤细胞凋亡的作用（P〈0．05）。结论紫杉醇、顺铂诱导的凋亡卵巢癌细胞对树突细胞提呈功能具有较强的免疫原性,可以在免疫治疗卵巢癌中发挥重要作用。     

熊果酸诱导肺腺癌SPC-A-1细胞凋亡及其机制

目的 研究熊果酸(UA)对人肺腺癌SPC-A-1细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 应用MTT法检测UA对SPC-A-1细胞增殖的作用.透射电镜观察细胞形态学变化.流式细胞仪(FCM)分析细胞周期和细胞凋亡率.RT-PCR探讨UA对SPC-A-1细胞GDF15和p21基因表达的影响.结果 UA抑制SPC-A-1细胞增殖,并呈浓度和时间依赖性.透射电镜观察UA作用的SPC-A-1细胞,出现胞质大量空泡变性、细胞核凝集等细胞凋亡形态学改变.流式细胞术检测到凋亡峰.30、40、50μmol/L的UA作用SPC-A-1细胞48h后,其凋亡率分别为1.83%、18.6%、22.6%,细胞周期阻滞于S期,且呈浓度依赖性.RT-PCR证实UA能使SPC-A-1细胞GDF15、p21基因表达上调.结论 UA对SPC-A-1细胞具有抑制增殖和诱导凋亡作用,其机制可能与上调GDF15和p21基因表达相关.     

泰素诱导MKN-45胃癌细胞凋亡及对cyclinE、cyclinD1表达的影响

目的探讨泰素（紫杉醇注射液）对人胃癌细胞系MKN45细胞的细胞毒作用及cyclinE、cyclinD1表达的影响。方法将MKN-45细胞与不同浓度的泰素共同孵育，应用形态学观察、流式细胞术（FACS）、Annexin—V标记等方法检测细胞凋亡的发生。在不同时间点应用MTT方法检测不同浓度泰素对MKN-45细胞生长抑制率的影响，同时应用流式细胞术（FACS）对泰素作用后的MKN-45细胞进行细胞周期分析及周期蛋白cyclinD1、cyclinE表达检测。结果不同浓度的泰素对人胃癌细胞系MKN-45细胞的生长有明显的抑制作用，均具有时间和剂量依赖性；泰素使MKN-45细胞分裂阻滞于G2／M期；泰素作用MKN-45细胞24h后cyclinE表达下调，cyclinD1表达基本不变；应用Annexin—V标记的方法检测发现泰素能诱导肿瘤细胞发生凋亡，并出现凋亡后坏死。结论泰素能使胃癌细胞MKN-45坏死，发生细胞周期阻滞，还可诱导MKN-45细胞发生凋亡及周期蛋白cyclinE表达下调。     

附子提取物抗胃癌SGC-7901细胞增殖及诱导癌细胞凋亡实验研究

[目的]观察附子提取物诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用及机制。[方法]分别采用不同浓度(20、40、80 mg·mL~(-1))的附子溶液干预SGC-7901胃癌细胞24h、48h、72h,用四唑盐(MTT)比色法检测附子提取物对肿瘤细胞的抑制作用:采用以上浓度梯度的附子干预SGC-7901细胞24h(或采用80 mg·mL~(-1)的附子干预0h、24h、48h),应用Annexin V-FITC/PI双重染色,通过流式细胞仪观察SGC-7901的凋亡情况。[结果]附子提取物能显著地抑制SGC-7901细胞的生长,并具有浓度及时间依赖性,细胞有明显的凋亡改变。[结论]附子提取物具有抗胃癌SGC-7901细胞增殖和诱导癌细胞凋亡的作用。     

胃癌细胞凋亡的研究进展

胃癌是常见的消化道恶性肿瘤，严重危害人类的身心健康。细胞凋亡则是近几年肿瘤细胞动力学研究的热点，本文对当前胃癌凋亡的研究进展进行了综述。     

芹菜素选择性抑制人胃癌细胞活力和诱导细胞凋亡

目的:对比研究芹菜素对人胃癌BGC-823细胞和永生化人胃粘膜上皮GES-1细胞活力和细胞凋亡的影响。方法:体外培养BGC-823和GES-1细胞。MTS比色法测定细胞活力。PI染色FCM分析细胞凋亡率。ELISA法检测细胞Caspase-3活性。结果:芹菜素对BGC-823细胞活力有显著抑制作用(P<0.05),呈浓度依赖性,其IC50是22μmol/L;然而,对GES-1细胞活力抑制作用弱,其IC50达到77μmol/L;选择指数是3.5(77/22)。芹菜素选择性诱导BGC-823细胞Sub G1百分率增高(P<0.05),同时,活化BGC-823细胞Caspase-3(P<0.05)。结论:芹菜素具有选择性抑制人胃癌BGC-823细胞活力和诱导细胞凋亡作用。     

半夏泻心汤对胃癌SGC-7901细胞株细胞凋亡及细胞周期的影响

目的:研究半夏泻心汤对胃癌SGC-7901细胞株细胞凋亡及细胞周期的影响。方法:将半夏泻心汤分为半夏泻心汤低浓度组(0.125 g·L-1)、半夏泻心汤中浓度组(0.5 g·L-1)、半夏泻心汤高浓度组(2 g·L-1),按细胞凋亡检测试剂盒说明书及细胞DNA含量检测试剂盒说明进行,流式细胞仪检测样品,CELLQuest软件获取并分析数据。结果:半夏泻心汤能够增加SGC-7901细胞在G1期的比例,促进细胞凋亡,其中半夏泻心汤高浓度组优于半夏泻心汤中浓度(P<0.05),但半夏泻心汤低浓度对此没有作用。结论:一定程度半夏泻心汤可抑制细胞增殖,并有浓度依赖性,其机理可能与药物阻滞细胞至G1期和诱导细胞凋亡有关。     

加味六君子汤含药血清对胃癌细胞BGC-823增殖和凋亡的影响

目的:观察加味六君子汤含药血清对胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响。方法:以加味六君子汤不同浓度含药血清培养BGC-823细胞后,以MTT法检测对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡变化。结果:浓度为10%、15%、20%、30%、40%的含药血清作用于BGC-823细胞24、48、72小时后,细胞存活率显著降低,且与时间和剂量呈依赖关系。浓度为10%、15%、20%的含药血清作用于BGC-823细胞24小时后,G2期细胞增多,S期细胞减少。加药组BGC-823细胞凋亡率分别为(13.27±0.88)%、(19.97±0.60)%和(33.09±0.58)%,与空白对照组相同浓度空白血清细胞凋亡率(0.34±0.02)%、(0.19±0.04)%和(0.18±0.03)%比较,差异均有统计学意义(P0.01)。结论:加味六君子汤含药血清对BGC-823细胞生长有明显抑制作用,并可诱导BGC-823细胞凋亡。     

右旋甲硫氨酸联合化疗诱导胃癌细胞凋亡的机制

目的 探索右旋甲硫氨酸(D-Met)和联合应用周期特异性化疗药物诱导胃癌细胞凋亡的机制和途径。方法 将人胃癌细胞株SGC-7901分别置于六种不同培养基中：含L-Met、含D-Mel、不含Met而替以同型半胱氨酸(Met^-Hcy^ )，或在上述培养基中分别加入5-FU。培养48h后，在蛋白和mRNA水平检测凋亡相关基因bcl-2、bax和p53的表达，以及caspase-3、caspase-8和caspase-9的活性。结果 各组间bcl-2、bax和p53蛋白表达无明显差异；各组均见bax mRNA和p53 mRNA表达，但未见bcl-2 mRNA表达。三种培养基组间caspase-3活性无统计学差异，而D-Met组的caspase-8活性明显低于L-Met和Met-Hcy^ 组，L-Met组的caspase-9活性显著高于Met^-Hcy^ 和D-Met组；与未加入化疗药物时相比，联合应用5-Fu后，各组caspase-3、caspase-8和caspase-9活性均明显提高。结论 D-Met诱导胃癌细胞凋亡至少部分系通过p53非依赖途径所介导，且可能以caspase非依赖方式进行；无证据支持bcl-2和bax参与凋亡的调节；5-FU可能既通过死亡受体信号传递途径，又通过线粒体途径诱导肿瘤细胞凋亡。     

重组人白细胞介素24蛋白的纯化及其对胃癌细胞凋亡的影响

目的 纯化人白细胞介素24的原核重组表达质粒pET-21a（＋）-IL-24在大肠杆菌BL（DE3）中的表达产物rhIL-24，并观察重组表达蛋白rhIL-24在体外对胃癌细胞株SGC-7901凋亡的影响。方法IPTG诱导原核表达载体pET-21a（＋）-IL-24在大肠杆菌中表达rhIL-24，经纯化、复性后作用于人胃癌细胞株SGC-7901。MTT法检测rhIL-24对细胞生长的影响。流式细胞仪检测凋亡峰，荧光染色观察细胞凋亡形态。结果rhIL-24对体外培养的胃癌细胞SGC-7901有明显的生长抑制作用，且呈时间、剂量依赖性。rhIL-24蛋白30μg／ml作用于SGC-7901细胞24h后。流式细胞仪检测结果显示有明显的凋亡峰出现，荧光染色后显示染色质固缩。细胞核呈致密浓染或呈碎块状致密浓染。结论本实验成功纯化IL-24原核表达产物rhIL-24．对体外培养的胃癌细胞株SGC-7901有明显的生长抑制、诱导凋亡作用。     

紫杉醇诱导人食管癌细胞凋亡的实验研究

目的：研究紫杉醇诱导人食管癌细胞的凋亡作用,并探讨其诱导凋亡的分子机制。方法：通过形态学观察,流式细胞仪技术分析研究紫杉醇对人食管癌细胞的凋亡作用,免疫组化测定bcl-2、p53、p21在紫杉醇处理前后的变化。结果：紫杉醇作用于Eea109细胞后,可见到较典型的细胞凋亡形态学变化：细胞核固缩、解聚以及凋亡小体。流式细胞仪检测显示,G1峰前有一明显的凋亡峰。免疫组化显示,bcl-2、p53在紫杉醇处理前后无变化,而p21表达增加。结论：紫杉醇可能通过p21诱导人食管癌细胞凋亡。     

异丙肾上腺素对人胃癌细胞株凋亡的影响

目的研究异丙肾上腺素(ISO)对人胃癌细胞株(NKM45细胞)凋亡的影响。方法把NKM45细胞置含不同浓度(15,30,60μmol/L)ISO的培养液中培养24h。用TUNEL试验检测凋亡率。用免疫组化技术检测Bcl2和P53基因的表达。结果ISO显著地增加NKM45细胞的凋亡率(P<0.01),并随ISO浓度的增高而增高。Bcl2和P53的表达随ISO浓度的降低而降低(P<0.01)。NKM45细胞凋亡率与Bcl2和P53的表达密切相关(r=-0.93,P<0.01和r=-0.99,P<0.01)。结论ISO可促进NKM45细胞凋亡。NKM45细胞凋亡与Bcl2和P53表达减少相关。