青蒿琥酯抗中暑内毒素血症的机制研究

目的探讨青蒿衍生物青蒿琥酯抗中暑内毒素血症的作用机制,为该类药物应用于重症中暑的治疗提供依据。方法在干球温度(34.5±0.5)℃,相对湿度(60±5)%的条件下建立小鼠中暑内毒素血症模型,将32只小鼠随机分为青蒿琥酯组、高温对照组、生理盐水组和正常对照组。用ELISA法检测血浆肿瘤坏死因子-a(TNF-a)含量变化,RT-PCR检测腹腔巨噬细胞Toll样受体4(TLR4)mRNA表达情况。结果青蒿琥酯组TNF-a的含量和TLR4mRNA表达低于高温对照组和生理盐水组(P<0.05),与正常对照组相近。结论下调内毒素信号转导通路中TLR4mRNA表达,减少TNF-a的含量,应是青蒿琥酯拮抗中暑内毒素血症的重要机制之一。     

青蒿琥酯拮抗小鼠中暑内毒素血症的作用

中暑是环境高温和／或剧烈体力活动时，因热的作用而引起的一组急性热致疾病．预防和控制中暑及其并发症是医学研究的重点，中暑内毒素血症就是其中要克服的难题。青蒿琥酯是近来发现具有抗外源性内毒索血症的新药物，但其在中暑领域的应用还处于探讨阶段。本通过建立中暑内毒素血症的动物模型.观察青蒿琥酯抗中暑内毒素血症的作用。结果报告如下。     

青蒿琥酯对中暑内毒素血症小鼠腹腔巨噬细胞内CD14和Toll样受体4的影响

目的探讨青蒿琥酯对中暑内毒素血症小鼠腹腔巨噬细胞内CD14和Toll样受体4 (TLR4)表达的影响。方法昆明种小鼠随机分为常温组、高温组、生理盐水组和青蒿琥酯组(均按60 mg/kg连续5 d腹腔注射),常温组在干球温度25℃±0．5℃、相对湿度43%±5%的条件下暴露2 h,其他组在干球温度35℃±0．5℃、相对湿度65%±5%的条件下热暴露,观察不同时间点(1、2 h)小鼠腹腔巨噬细胞内CD14和TLR 4 mRNA的表达及血浆中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。结果常温组CD14和TLR 4 mRNA表达分别为0．34%±0．047%和0．31%±0．062%；高温1 h组分别为0．53%±0．085%和0．45%±0．049%,与常温组的差异均有统计学意义(P＜0．01),并在2 h时呈现继续升高的趋势；生理盐水1 h组CD14和TLR4表达升高,但在2h时有轻度下降；青蒿琥酯1 h组CD14和TLR4的表达则分别为0．26%±0．051%和0．25%±0．084%,并在2 h有轻微的下降。各组TNF-α含量的变化呈现出与CD14、TLR 4变化基本一致的趋势。结论青蒿琥酯能明显降低内毒素信号转导通路上CD14和TLR 4的表达,减少TNF-α的产生,这可能是其抗中暑内毒素血症的机制之一。     

青蒿琥酯对高温内毒素复合因素下巨噬细胞吞噬功能的影响

目的 研究青蒿琥酯(AR)对高温内毒素(IUS)复合因素下巨噬细胞吞噬功能的影响。方法 采用体外培养的巨噬细胞系PAW264．7细胞,分成空白对照组、AR组、LPS组及AR LPS组,分别于37℃和40℃,含95％O2、5％CO2条件下培养1、2、3、4h后,台盼蓝染色计数细胞存活数,吞噬中性红实验检测巨噬细胞的吞噬功能。结果 经不同条件处理3h后各组细胞存活数无差异,均大于95％;高温内毒素复合因素使巨噬细胞的吞噬功能明显降低,青蒿琥酯亦使巨噬细胞的吞噬功能下降,但青蒿琥酯加内毒素组的吞噬功能明显强于单纯内毒素组。结论 青蒿琥酯对高温内毒素复合因素下的巨噬细胞的吞噬功能有增强作用。     

青蒿琥酯对内毒素信号转导通路中CD14的影响

目的 探讨中暑内毒素血症时，青蒿琥酯对内毒素信号通路中CD14表达的影响。方法 昆明鼠随机分为常温组、高温组、生理盐水组和青蒿琥酯组（连续5d按60mg/kg腹腔注射青蒿琥酯），用反转录PCR（RT—PCR）技术分别检测常温下和热暴露后各级小鼠腹腔巨噬细胞内CD14 mRNA的变化，酶联免疫法（ELISA）检测血浆中肿瘤坏死因子α（TNF—α）的含量。结果 与常温组比较，高温组和生理盐水组CD14 mRNA的表达和TNF—α的含量均显著升高（P〈0．01），但青蒿琥酯组CD14 mRNA的表达明显降低，TNF—α的含量轻度升高。结论 青蒿琥酯能显著降低内毒素信号转导通路上CD14的表达，减少TNF—α的分泌，可能是其抗中暑内毒索血症的机制之一。     

青蒿琥酯对高温复合内毒素致细胞凋亡保护作用

目的 探讨高温复合内毒素(LPS)作用下,青蒿琥酯(AR)对RAW264.7细胞热休克蛋白70(HSP70)合成及细胞凋亡的影响。方法 采用体外培养的巨噬细胞系RAW264.7细胞,分为空白对照组、高温复合内毒素组、AR组(又分为4个亚组),于40℃、95%O₂、5%CO₂条件下共同孵育24h。用RT-PCR技术检测细胞内HSP70mRNA及其蛋白的表达量,用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 空白组和高温复合内毒素组HSP70m RNA的表达率分别为10%,23%,而AR组可显著提高HSP70mRNA的表达率,为54%,并与高温内毒素组差异有统计学意义(P<0.05)。HSP70蛋白的表达情况与HSP70mRNA一致,而细胞凋亡率的变化则呈相反趋势。结论 AR进一步诱导高温复合内毒素作用下RAW264.7细胞HSP70m RNA和HSP70蛋白的表达,且可明显降低细胞的凋亡率,可能是其抗损伤保护作用的机制之一。     

青蒿琥酯预防日本血吸虫病

测定血吸虫童虫的同功酶活性,同时采用扫描电镜和透视电镜对虫体超微结构的观察,发现青蒿琥酯可完全抑制血吸虫童虫的苹果酸脱氢酶、6-磷酸甘露糖酶和酸性磷酸酶的活性,使其超微结构发生改变：表皮坏死糜烂、上皮细胞核模糊、染色体消失;皮下肌层肿胀坏死,吸盘破损,肠腔上皮破坏,微绒毛脱落。因此,可影响虫体的糖蛋白合成、有氧代谢供能和肠壁对红细胞的消化作用。     

青蒿琥酯预防血吸虫病效果观察

９９８年８～９月,某部紧急赴湖北灾区抗洪抢险。部队所在村镇均为血吸病重疫区。为防止部队发生血吸虫病,保障抗洪抢险任务的完成,我们采用青蒿琥酯片预防早期血吸虫（童虫）感染,并对预防效果进行了观察。１材料和方法（１）预防用药：青蒿琥酯片。（２）抗原：制冻...     

青蒿琥酯对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

[目的]观察青蒿琥酯（Art）对大鼠肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cells,GMCs）增殖的影响并探讨其作用机制。[方法]用不同浓度的青蒿琥酯刺激大鼠肾小球系膜细胞,4-甲基偶氮四唑蓝（tetrazolium salt,MTT）法观察其增殖情况。[结果]与正常对照组相比,LPS具有明显诱导GMC增殖的作用（P﹤0.05或P﹤0.01）;青蒿琥酯作用24、48、72 h,GMC增殖水平均可受到抑制（P﹤0.05或P﹤0.01）,且随药物浓度增大、作用时间延长,抑制作用增强,高浓度组（60 mg/L）72 h抑制率可达51.18%。[结论]青蒿琥酯能够抑制脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖。     

中药复方热毒平提高中暑小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的机制探讨

目的探讨中药复方制剂热毒平提高中暑内毒素血症小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的机制,为该类药物在重症中暑治疗中的运用打下基础。方法在干球温度(34.5±0.5)℃,相对湿度(60±5)%的条件下建立小鼠中暑模型,将40只小鼠随机分为热毒平组、西黄芪胶组、生理盐水组、高温对照组和正常对照组。采血并提取小鼠腹腔巨噬细胞,用中性红法观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能,流式细胞仪检测其凋亡情况,试剂盒检测血中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的值。结果热毒平组小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力高于西黄芪胶组、高温对照组、生理盐水组(P<0.001),与正常组相近;凋亡百分率较其他三组有明显降低(P<0.001),与正常组相近;血中TNF-α的值低于西黄芪胶组、高温对照组、生理盐水组(P<0.001),与正常对照组相近。结论热毒平抗中暑内毒素血症的主要机制之一是在增强巨噬细胞吞噬能力,降低TNF-α的含量,减少巨噬细胞的凋亡中发挥重要作用。     

新生儿缺氧缺血性脑病红细胞胞浆游离钙及脑血流动力学变化的临床意义

目的:探讨新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)对红细胞胞浆游离钙(RBC[Ca2+]i)水平及脑血流动力学的影响及意义。方法:HIE组30例,正常对照组20例。HIE患儿于生后24h内采集静脉血2ml,采用Fura-2/AM法检测RBC[Ca2+]i水平;应用经颅彩色多普勒超声仪监测脑血流动力学参数,包括大脑中动脉收缩期峰值流速(PSFV)、舒张末期血流速度(EDFV)、平均血流速度(Vm)、阻力指数(RI)。并与正常对照组进行对比。结果:①HIE患儿RBC[Ca2+]i水平显著高于正常对照组[(2.68±0.05)vs(2.15±0.18);(2.80±0.17)vs(2.15±0.18),P<0.01]。HIE程度与患儿体内RBC[Ca2+]i水平具有相关性(r=0.453,P<0.05)。②HIE患儿PSFV、EDFV及Vm均低于正常对照组(P<0.01);RI高于正常对照组(P<0.01),存在明显的脑血流动力学紊乱,血流速度减慢,阻力指数增大。结论:RBC[Ca2+]i参与了HIE的病理生理过程,在HIE发病机制中可能起重要作用。监测RBC[Ca2+]i水平和脑血流动力学变化可能有助于HIE的早期诊断和预后判断,并指导临床治疗。     

缺锌对生长期大鼠行为及海马细胞钙状态的影响

为探讨缺镜对生长期大鼠行为以及海马细胞内游离钙([Ca^2 ])和活性钙调素（CaM)水平的影响。选用21只雄性Wi star大鼠，随机分为缺锌组，对喂组，对照组，缺锌组组饲以缺锌饲料，对喂和对照组饲以普通饲料，喂饲3周后，用旷场试验进行为行为测定，之后处死大鼠，分别用Fura-2双波长荧光法和流式细胞术测定动物海马细胞[(Ca^2 ])i和活性CaM水平。结果表明，缺锌组组大鼠在旷场内的行为与对照组出现明显差异，其海马细胞[Ca^2 ]i明显高于对照和对喂组，缺锌组和对喂组大鼠海马细胞活性CaM水平均明显低于对照组，缺锌组组大鼠细胞活性CaM水平也明显低于对喂组，缺锌对生长期大鼠行为的影响可能与其影响海马神经元的钙状态有关。     

热毒平抗中暑内毒素血症的作用研究

在干球温度 (4 2± 0 . 5 )℃、湿球温度 (3 5± 0. 5 )℃、相对湿度 60 %± 5 %的条件下建立中暑模型 ,应用热毒平、地塞米松等药物 ,观察动物的肛温上升速率、存活时间、 3h死亡率。结果热毒平组比地塞米松组、西黄芪胶组和高温中暑组动物的肛温上升速率慢 ,分别为 0 . 0 2 3℃ /min、 0 . 0 48℃ /min、 0. 0 3 0℃ /min、 0 . 0 43℃ /min (P <0 . 0 5 ) ;较其他三组动物的存活时间长 ,分别为 198 88min、 113 88min、 164 63min、 12 5 63min (P <0. 0 5 ) ;比其他三组动物的3h死亡率低 ,分别为 2 5 %、 10 0 %、 75 %、 75 % (P <0. 0 5 )。提示热毒平对中暑内毒素血症具有良好的预防效果。     

孕哺期母鼠镧暴露对子代神经系统的影响

目的探讨孕哺期母鼠镧暴露对子代神经系统的影响。方法Wistar母鼠从妊娠起至仔鼠断乳止通过饮水连续染镧21 d,跳台实验检测仔鼠学习记忆能力,荧光分光光度计法测定细胞内Ca2+浓度,流式细胞仪法测定海马细胞凋亡率。结果随着三氯化镧(LaCl3)剂量的增加,镧暴露子代大鼠潜伏期显著下降,而错误次数显著增加;细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)显著升高;镧暴露组海马细胞凋亡率显著增加,而且差异均有统计学意义(P0.05)。结论孕哺期母鼠镧暴露可以损害子代大鼠学习记忆功能,可能与镧暴露使海马细胞内游离Ca2+浓度升高和细胞凋亡增加有关。     

吸烟与温石棉单独及联合作用对人胚肺细胞内[Ca2+]i的影响

目的　研究香烟烟雾溶液 (CSS)与温石棉混悬液 (CH)单独及联合作用对人胚肺 (HEL)细胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 ]i)的影响。方法　体外培养的HEL细胞用Fluo 3/AM标记细胞内Ca2 ,用不同浓度CSS和CH作用 1h ,荧光分光光度计测定细胞内 [Ca2 ]i。结果　 1.2 5× 10 -4 、2 .5 0× 10 -4 、5 .0 0× 10 -4 支 /mlCSS单独作用于HEL细胞 1h ,可使 [Ca2 ]i分别升高 5 0 .4%、75 .4%和10 9.3% ;2 0、40、80 μg/mlCH单独作用于HEL细胞 1h ,可使[Ca2 ]i分别升高 3 .0 %、5 3.1%和 116 .7%。CSS及CH单独作用均具有明显的剂量 -效应关系 (前者r =0 .96 3 ,P =0 .0 37;后者r =0 .976 ,P =0 .0 2 4) ;当 1.2 5× 10 -4 支 /mlCSS与 40 μg/mlCH联合作用、2 .5 0× 10 -4 支 /mlCSS与 2 0 μg/mlCH联合作用时均可协同增加 [Ca2 ]i。结论　CSS与CH可在诱导细胞信号转导方面发挥协同作用     

热休克反应对高温诱导的循环衰竭的保护作用

目的　探讨热休克反应 (HSR)对高温诱导的循环衰竭的保护作用及其机制。方法　本研究分为 2个实验 :(1)HSR的保护作用。大鼠分为 2组 :热休克组、对照组。热休克组予热休克预处理 ,对照组则否。两组常温恢复 2 0h后予以热暴露至死亡 ,监测记录血压、心电。运用Chart软件获取平均动脉压 (MAP)、生存时间等数据。 (2 )作用的机制。大鼠分为 3组 :热休克组、对照组和常温对照组。常温对照组不予任何处理。前两组处理同实验一 ,但在热暴露至 73min时终止实验 ,记录收缩压 (Ps)、舒张压 (Pd)等数据 ,并检测心肌一氧化氮 (NO)、热休克蛋白 (HSP70 )含量。结果　热休克组生存时间 [(10 2 .3± 11.4 )min]明显长于对照组 [(87.9± 7.7)min],且休克出现晚 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。热暴露早期热休克组与对照组MAP差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,6 0min后 ,前者高于后者。热暴露至 73min时 ,热休克组MAP、Ps、Pd、HR均较对照组明显升高 ,差异有显著性 (P <0 .0 5、P <0 .0 1) ,心肌HSP70、NO含量则较对照组明显降低 ,差异亦有显著性 (P <0 .0 1)。结论　HSR可能通过诱导心肌HSP70的高表达 ,抑制热暴露大鼠心肌NO过量生成 ,从而减轻高温诱导的循环衰竭。     

热毒平抗脂质过氧化及对腹腔巨噬细胞凋亡影响

目的研究热毒平抗脂质过氧化以及对腹腔巨噬细胞(macrophage,Mφ)凋亡的影响,为热毒平治疗重症中暑提供实验依据。方法昆明种小鼠50只,随机分为常温对照组、热毒平组、西黄芪胶组、生理盐水组和中暑模型组。在干球温度(34.5±0.5)℃,相对湿度(60±5)%的条件下建立中暑模型,测定用药组和对照组小鼠肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量;提取动物腹腔巨噬细胞DNA并行凝胶电泳;用流式细胞仪检测各组小鼠腹腔Mφ凋亡情况。结果热毒平均小鼠肝组织SOD活力升高,MDA含量降低;DNA电泳图中热毒平组无梯状条带;热毒平组腹腔Mφ凋亡百分率比其他组低且接近正常组。结论热毒平能有效的防止高温所致的脂质过氧化、减少其腹腔Mφ凋亡,对重症中暑有着良好的治疗作用。     

锰对皮层神经元胞浆游离钙离子浓度的影响

目的探讨皮层神经元胞浆游离钙离子浓度在锰(Mn)神经毒性作用中的变化。方法分离新生Wistar乳大鼠的皮层神经细胞进行体外培养,细胞生长至最佳状态时,予以分组处理。实验分染锰组和未处理组,染锰组分别与含低、中、高浓度氯化锰(MnCl_2·4H_2O)的培养液共培养,氯化锰的浓度分别为0．2、0．6、1．0mmol/L。未处理组则为正常培养的皮层神经细胞。各组处理24h后终止培养,钙离子荧光探针Fluo-3/AM标记后上激光扫描共聚焦显微镜检测荧光强度,以表示游离钙离子浓度,并用图像分析技术进行处理。结果氯化锰处理后引起皮层神经元胞浆游离钙离子不同程度的超载,中、高浓度锰组神经元的胞浆游离钙离子浓度明显高于低浓度锰组及未处理组,细胞钙离子荧光像素荧光强度增高且呈剂量依赖性,中、高浓度锰组分别为(131．1±16．7)、(183．2±22．9)；低浓度锰组为(84．6±10．2),差异有统计学意义(P＜0．05)。结论钙离子超载与锰的神经毒性有关,且钙离子超载与锰浓度呈剂量-反应关系。