Clusterin对膀胱癌细胞抗凋亡作用机制的研究

目的：探讨新的抗细胞凋亡因子Clusterin对膀胱癌EJ细胞的作用机制。方法用丝裂霉素（MMC）诱导膀胱癌EJ细胞凋亡，采用流式细胞术（FCM）检测不同浓度的Clusterin对抗EJ细胞的凋亡率。结果：小剂量Clusterin可以特异性抑制MMC诱导的EJ细胞凋亡作用。结论Clusterin通过抗凋亡机制作用于膀胱癌EJ细胞，可能与膀胱癌细胞的复发、耐药等临床特性有关、此项研究对阐明膀胱癌发生发展的生物学机制以及临床应用Clusterin抗体的治疗胱癌提供帮助。     

Clusterin在膀胱癌细胞中的表达及作用机制

目的：探讨抗细胞凋亡因子Clusterin在膀胱癌EJ细胞中的表达及抗凋亡机制。方法：应用免疫细胞化学染色检测Clusterin在EJ细胞中的表达,应用3‘末端脱氧核苷酰转移酶介导生物素标记法（TUNEL）检测Clusterin对EJ细胞的抗凋亡作用。结果：Clusterin在EJ细胞中有明显的阳性表达。细胞外加入Clusterin后,EJ细胞胸浆内染色加深,呈颗粒状,为强阳性染色。提示细胞外加入小剂量Clusterin可以明显抑制MMC诱导的EJ细胞凋亡作用。结论：Clusterin在细胞外可以通过细胞膜进入细胞浆内发挥抗凋亡作用。检测Clusterin的表达特性有助于临床评估膀胱癌复发、耐药等生物学特性。     

阿霉素协同TRAIL真核表达载体诱导前列腺癌细胞凋亡的研究

目的探讨阿霉素与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）真核表达载体诱导前列腺癌细胞凋亡的协同作用.方法 RT-PCR方法克隆人TRAIL全长基因,并插入真核表达载体pLXIN多克隆位点,经酶切和测序鉴定.将pLXIN-TRAIL质粒转染PC3-M细胞,RT-PCR方法检测外源性TRAIL表达率,TUNEL染色和流式细胞术比较单独表达TRAIL和联合应用阿霉素对PC3-M细胞凋亡率的影响,Western blot法检测经阿霉素诱导前后PC-3M细胞死亡受体-5（DR5）的表达变化.结果成功构建pLXIN-TRAIL真核表达载体,外源性TRAIL表达可以诱导PC-3M细胞凋亡,阿霉素能够增强TRAIL的凋亡诱导效应,6μg pLXIN-TRAIL质粒DNA组,加入1 mg/L阿霉素前后平均凋亡率分别为11.8%和20.7%,同时可提高PC-3M细胞DR5的表达. 结论 TRAIL真核表达载体介导的细胞凋亡是治疗前列腺癌的新途径,阿霉素可以通过提高DR5表达而增强PC-3M细胞对TRAIL诱导的凋亡敏感性.     

抑制前列腺癌细胞凋亡的特异介质—Clusterin

Clusterin是一种硫糖蛋白的异构二聚体，普遍分布于人体的多种组织中，具有促进细胞聚集，调节补体作用和参与脂类运输，交换等功能，新近的研究发现Clusterin在细胞凋亡的调控，特别是在前列腺癌细胞的凋亡过程中，为重要的负性调控因子，本文对其生化特点及前列腺癌的关系作一综述。     

Apoptin对前列腺癌细胞的促凋亡作用研究

目的构建野生型及变异型apoptin的真核表达质粒pApoptin-EGFP、pM-apoptin-EGFP,并探讨其对人前列腺癌细胞系LNCaP、PC3的促凋亡作用。方法采用PCR的方法从变异型apoptin质粒p3×flag-m-apoptin- myc扩增出野生型apoptin片段及变异型apoptin片段m-apoptin,将其定向克隆于pEGFP-N1载体的EcoR I和BamH I酶切位点之间,构建EGFP标记的野生及变异型apoptin真核表达质粒pApoptin-EGFP及pM-apoptin-EGFP,酶切、测序鉴定,RT-PCR、荧光显微镜分析融合蛋白表达,脂质体介导瞬时转染人前列腺癌细胞系LNCaP、PC3,流式细胞仪检测凋亡及细胞周期变化。结果成功构建pApoptin-EGFP、pM-apoptin-EGFP重组质粒,并在被转染细胞检测到基因表达;瞬时转染后48h可检测到细胞凋亡,与空质粒组相比具有非常显著意义,细胞周期变化表现为G2/M期阻滞。结论apoptin对雄激素依赖及非依赖型前列腺癌均具有明显的促凋亡作用,末端突变影响其促凋亡作用,为进一步探讨apoptin应用于前列腺癌的治疗奠定基础。     

细胞凋亡与前列腺癌

前列腺癌的发生除了与多种癌基因、抑癌基因的激活和表达有关以外 ,细胞凋亡过程的抑制也是其形成的重要机制。本文从细胞凋亡的概念、特征和有关机制及调控等方面进行综述 ,并探讨细胞凋亡在前列腺癌发生、发展中的作用及相关机理。     

Clusterin对膀胱癌细胞抗死亡作用的研究

目的 探讨Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎ在细胞外水平抗膀胱癌细胞的自然死亡作用。方法 应用流式细胞术（ＦＣＭ）、ＭＴＴ试验和伊红染色等方法,通过检测不同深度Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎ对膀胱癌ＥＪ细胞的自然死亡率及丝裂素杀伤后的膀胱癌细胞死亡率的影响,分析Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎ对ＥＪ细胞的抗死亡作用。结果 Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎ可以明显降低膀胱癌细胞的自然死亡率,还可以对抗丝裂霉素对ＥＪ细胞的杀伤作用。结论 检测Ｃｌｕｓｔｅｒ     

前列腺癌细胞凋亡通路基因表达与凋亡反应性的关系

目的　探讨凋亡通路基因表达改变与前列腺癌细胞凋亡反应性的关系。　方法　凋亡诱导剂鬼臼乙叉甙分别作用前列腺癌激素敏感与不敏感细胞LNCaP和PC 3,Hoechst 332 5 8染色检测凋亡发生率。收集LNCaP和PC 3细胞后提取总RNA ,合成cDNA探针并以生物素标记 ,在凋亡通路特异基因寡核苷酸片段cDNA膜上进行杂交反应 ,检测基因mRNA表达。　结果　鬼臼乙叉甙能诱导两种细胞凋亡 ,但PC 3细胞的凋亡反应性小于LNCaP细胞。与LNCaP细胞比较 ,PC 3细胞显著下调的基因为Bcl1 0、CIDE A、GADD4 5a和RIP2 ,以及Caspase 4、5和 6 ,显著上调的基因为TRAF4。两种细胞均强烈表达Caspase 1 4和TNFR2。　结论　凋亡通路基因表达改变与前列腺癌细胞凋亡反应性不同有关 ,在前列腺癌激素敏感性转化中可能有重要作用     

细胞凋亡与晚期前列腺癌的治疗

对晚期前裂腺癌，目前尚无十分有效的方法。常规的去势治疗是通过使雄激素依赖型的前裂腺癌细胞发生凋亡而起作用，通过对细胞凋亡机制的研究，发现雄激素非依赖型的前列腺癌细胞仍保存着细胞凋亡的能力。因此，探索使雄激素非依赖型的前列腺癌细胞发生凋亡的方法，将为晚期前列腺癌的治疗开辟一条新的途径。     

聚集素抗LNCaP细胞凋亡作用的研究

目的研究聚集素抗LNCaP细胞凋亡的作用及聚集素反义寡核苷酸(AS-ODN)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)细胞毒性作用的影响。方法培养转染全长聚集素序列的LNCaP细胞(A)为实验组,野生型LNCaP细胞(L)及转染PIRES2-EGFP空载体的LNCaP细胞(M)为对照组,以20 ng/ml TNF-α进行诱导,MTT及ELISA法检测3组细胞增殖活性与凋亡程度；转染聚集素AS-ODN后A细胞分4组,①对照组：常规培养；②AS-ODN组：转染AS-ODN,培养液不含TNF-α；③TNF-α组：未转染AS-ODN,培养液含20ng/ml TNF-α；④TNF-α+AS-ODN组：转染AS-ODN,培养液含20ng/ml TNF-α,观察4组细胞增殖活性与凋亡程度的变化。结果L、M、A3组细胞增殖活性分别为0.84±0.03、0.85±0.04、0.95±0.03,L与M间差异无统计学意义(P＞0.05),L、M与A相比增殖活性显著降低(P值均＜0.01)。3组细胞ELISA吸光度值分别为0.59±0.04、0.62±0.03、0.33±0.04,L与M间差异无统计学意义(P＞0.05),但L、M与A相比凋亡程度显著增高(P值均＜0.01)。A细胞①～④组细胞增殖活性吸光度值分别为1.30±0.03,1.25±0.03,0.99±0.03,0.80±0.03,两两比较组间差异均有统计学意义(P值均＜0.05)；4组细胞凋亡程度吸光度值分别为0.02±0.00,0.21±0.02,0.63±0.07,1.16±0.04,两两比较组间差异均有统计学意义(P值均＜0.01)。结论转染并永久表达全长序列聚集素后,TNF-α对LNCaP细胞的细胞毒性作用显著降低,转染聚集素AS-ODN显著增强TNF-α的细胞毒性作用,聚集素具有抗LNCaP细胞凋亡的作用。     

聚集素在前列腺正常、增生、癌组织中的表达及意义

目的　通过检测聚集素 (Clusterin)在前列腺正常、增生、癌变组织中的表达 ,探讨其与前列腺疾病发生发展的关系。　方法　采用免疫组织化学染色法检测 12例正常前列腺组织、15例良性前列腺增生组织 (BPH)、5 6例前列腺癌标本中Clusterin的表达水平。　结果　 3种组织中Clusterin的阳性及弱阳性表达率为 81% (67/83 ) ,其中前列腺正常、增生、癌组织中阳性及弱阳性表达率分别为17% (2 /12 )、73 % (11/15 )、96% (5 4/5 6)。前列腺癌组织中Clusterin表达水平明显高于前列腺正常 (t=8 82 ,P <0 0 1)及增生 (t =7 63 ,P <0 0 1)组织 ,且在癌组织中与肿瘤病理分级 (r =0 64 9,P <0 0 1)、临床分期 (r=0 60 9,P <0 0 1)呈正相关。　结论　Clusterin可能通过抗凋亡机制在前列腺癌的生物特性中发挥着重要的作用     

聚集素在前列腺癌细胞不同周期时相的表达

目的探讨凋亡相关基因聚集素（clusterin）在前列腺癌不同周期时相的差异表达及意义。方法应用改良的胸腺嘧啶核苷（TdR）和高压笑气双阻断法将前列腺癌细胞系PC-3同步在不同的周期时相，应用流式细胞术检测同步化的效率。应用RT-PCR及Western blotting方法检测不同周期时相聚集素在mRNA和蛋白水平的表达。结果前列腺癌细胞系PC-3的M、G1、S和G2期细胞同步化效率分别为92．1％、87．0％、80．2％和75，9％；聚集素在不同周期时相均有表达且存在差异，G1和S期表达水平较低，M期和G2期表达水平较高，RNA和蛋白表达具有一致性。结论细胞周期对聚集素的表达有较大的影响，对于采用聚集素途径治疗前列腺癌具有指导意义。     

短期新辅助治疗对前列腺癌组织内聚集素蛋白表达的影响

目的　探讨短期新辅助治疗(NHT)后前列腺癌组织学及癌细胞内聚集素蛋白表达的变化及其临床意义。方法　采用免疫组织化学方法,对未行雄激素阻断治疗的 26例前列腺癌患者前列腺癌根治术(RP)标本(26份,无NHT组 ), 19例行 3个月NHT患者NHT前穿刺活检标本及NHT后的RP标本(NHT组),行前列腺癌组织内聚集素蛋白表达水平的测定,观察NHT对癌组织中聚集素蛋白表达水平的影响。结果　聚集素主要存在于前列腺癌细胞的细胞浆中,部分存在于细胞外间质。NHT组NHT前癌组织中聚集素表达较弱,染色强度平均值为 1 .42±0 .51,NHT后表达较强,染色强度平均值为 2 .16±0. 60(t=7. 10,P<0. 01);NHT组NHT后聚集素表达高于无NHT组 (染色强度平均值为 1 .57±0. 70,t=2 91,P<0 .01)。结论　雄激素阻断治疗可使前列腺癌细胞内聚集素适应性上调,针对聚集素的辅助治疗可提高激素阻断治疗的效果。     

膀胱移行细胞癌组织中聚集素、Ki-67蛋白表达和细胞凋亡的测定

目的 探讨聚集素在膀胱移行细胞癌组织中的表达及其与细胞增殖和凋亡的关系。方法制作87例膀胱移行细胞癌组织的组织芯片,分别应用免疫组织化学和末端脱氧核苷酸转移酶介导缺口末端标记方法,检测膀胱移行细胞癌组织中聚集素和Ki-67蛋白表达及细胞凋亡情况,分析聚集素蛋白表达与肿瘤分化、临床分期等病理特征及肿瘤细胞凋亡、增殖及Ki-67蛋白表达的关系。结果43％（37／87）患者为聚集素蛋白过度表达,且聚集素蛋白表达与肿瘤细胞的分化程度、肿瘤的浸润深度均有显著的相关性（r分别为14．1,10．2,P均〈0．01）;71％（20／28）低分化（G3）和62％（23／37）浸润型（T2-4期）患者的肿瘤组织聚集素蛋白过度表达,过度表达率明显高于分化较好（G1-2,29％,17／59）和浅表型（Ta-1期,28％,14／50）者。聚集素蛋白表达与肿瘤的凋亡指数（AI）呈负相关（r=7．31,P〈0．01）,但与Ki-67的表达水平无关;聚集素过度表达的肿瘤,57％（21／37）表现为低AI值（≤1．2％）,而聚集素正常表达的肿瘤,则72％（36／50）为高AI值。结论膀胱移行细胞癌组织中聚集素蛋白过度表达与肿瘤的分化程度和浸润深度呈正相关,与肿瘤细胞的AI呈负相关。     

脂质体介导的聚集素反义寡核苷酸对膀胱癌EJ细胞的作用

目的探讨clusterin对膀胱癌EJ细胞生物学特征的影响. 方法应用脂质体包裹的clusterin反义寡核苷酸转染EJ细胞,阻断其表达,通过3′端末端标记、MTT试验、伊红排斥实验等方法观察clusterin反义基因对EJ细胞增殖、凋亡、坏死等生物学行为的影响. 结果转染clusterin反义寡核苷酸组(反义组)EJ细胞凋亡增加,第5天达峰,凋亡率80%,与转染clusterin正义寡核苷酸组(正义组)比较,差异有显著性意义(P<0.05).反义组细胞死亡率增加,以转染后1～4 d明显(13.8%～33.3%),显著高于相应正义组(P<0.05).反义组细胞增殖活性降低,以转染后第6、7天明显,显著高于相应正义组(P<0.05). 结论 clusterin是重要抗凋亡因子,其表达与膀胱癌细胞的生存、增殖、抗凋亡发展密切相关.     

人类雄激素非依赖性前列腺癌细胞模型的建立

目的　建立并论证雄激素非依赖性前列腺癌细胞模型。　方法　将雄激素依赖性父代LNCaPC 3 3细胞常规传代培养 ,LNCaP细胞生长对雄激素依赖性逐渐降低 ,建立前列腺癌雄激素非依赖性细胞模型。　结果　通过连续传代培养 ,雄激素依赖性C 3 3细胞 (传代次数 <3 3次 )生物学行为发生改变。C 81细胞 (传代次数 >80次 )表现出更强的生长能力 ,对雄激素的依赖性低于C 3 3和C 51细胞 (传代次数介于 3 4～ 81次之间 )。　结论　在未去除雄激素情况下建立的雄激素非依赖性LNCaPC 81细胞模型 ,可贴切反映临床前列腺癌进展过程 ,为前列腺癌雄激素非依赖性生长分子机理的研究提供实用的细胞模型     

VP-16诱导PC-3细胞凋亡和p53基因表达的研究

目的 研究ＶＰ－１６诱导雄激素非依赖型前列腺癌细胞ＰＣ－３凋亡和抑癌基因ｐ５３表达的关系。方法 以末端标记法（ＴＵＮＥＬ）和流式细胞术（ＦＣＭ）研究ＰＣ－３细胞凋亡及细胞周期分布;以免疫组化方法研究ｐ５３蛋白的表达。结果 末端标记法显示凋亡的ＰＣ－３细胞呈明显的形态学改变,流式细胞术和免疫组化检测结果表明,随ＶＰ－１６作用浓度的增加利用和作用时间的延长,ＰＣ－３细胞的凋亡率和其ｐ５３基因表达阳性的     

聚集素在前列腺癌中的表达及意义

目的　探讨抗细胞凋亡因子聚集素 (clusterin)在前列腺癌中的表达及意义。　方法　RT PCR方法检测聚集素在前列腺癌组织 (3例 )、癌细胞系 (1株 )及正常前列腺组织 (3例 )中的表达水平。　结果　 3例前列腺癌组织及 1例前列腺癌细胞株中聚集素与内参基因 β actin相比较的相对表达量明显高于 3例正常前列腺组织。　结论　聚集素在前列腺癌中高表达 ,提示聚集素可能通过抗凋亡机制在前列腺癌的生物特性中发挥作用。     

人抑癌基因PTEN对前列腺癌细胞系生物学行为的影响

目的　探讨外源性人抑癌基因PTEN表达对前列腺癌细胞系LNCaP、DU 14 5细胞增殖和侵袭转移能力的影响。　方法　利用携带人PTEN基因的可调控性腺病毒 (Ad PTEN ) ,体外转染人前列腺癌细胞系LNCaP、DU 14 5,RT PCR、Westernblot检测目的基因不同水平的表达 ,通过细胞生长试验、流式细胞仪分析技术以及Boyden小室法检测LNCaP、DU 14 5转染前后细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和细胞体外侵袭力的变化。　结果　转染Ad PTEN后LNCaP、DU 14 5细胞的PTEN表达由阴性转为阳性 ,转染后对LNCaP、DU 14 5细胞生长有抑制作用 ,阻滞于G0 ～G1期 ,早期细胞凋亡率增加 ,LNCaP细胞 (6.89± 0 .51) % ;DU14 5细胞 (5.44± 1.13 ) % ,与对照组相比差异有显著性 ,Boyden小室法检测转染后体外侵袭力受到明显抑制。 　结论　重组腺病毒介导的人PTEN基因在体外对前列腺癌细胞系LNCaP、DU 14 5的细胞增殖和体外侵袭力有明显抑制作用 ,可望作为前列腺癌基因治疗的有效工具