缺氧诱导因子-1α反义寡核苷酸抑制HBx诱导的血管内皮生长因子的表达

目的 探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)反义寡核苷酸对乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)诱导的人肝癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)表达的抑制作用。方法 用编码HBx基因全长的pHA-HBx质粒转染肝癌HepG2细胞;Western Blot方法鉴定HBx基因的整合和表达;用转染后的细胞建立表达HBx的裸鼠人肝癌模型。实验组用HIF-1α反义寡核苷酸作肿瘤组织内注射,对照组以相同体积的生理盐水作瘤体注射,观测不同时间点裸鼠肿瘤的生长状况。采用免疫组织化学染色方法检测肿瘤组织中HIF-1α、VEGF表达水平和微血管密度。结果 HBx基因成功整合人肝癌HepG2细胞基因组并表达;实验组经反义寡核苷酸处理后肿瘤体积和重量均低于对照组,两组间差异有显著性意义(P<0.05);实验组肿瘤组织中HIF-1α表达下调;实验组肿瘤组织中VEGF表达为(21.6±6.7)％,低于对照组的(78.6±10.2)％(P<0.01),微血管密度为19.75±7.38,低于对照组的36.64±12.25(P<0.01)。结论 HIF-1α反义寡核苷酸肿瘤组织注射可以抑制肝癌组织中HBx诱导的VEGF表达,抑制表达HBx的肿瘤生长。     

靶向肝癌HepG2细胞VEGF基因siRNA表达载体裸鼠成瘤抑制作用

目的 探讨靶向肝癌HepG2细胞VEGF基因siRNA表达载体对人肝癌细胞株裸鼠成瘤的抑制作用.方法 将设计并合成构建好的靶向肝癌HepG2细胞VEGF基因的psuper.retro.neo-VEGF-siRNA表达载体转入HepG2细胞,通过G418抗性筛选出稳定株(HepG2/psuper.retro.neo-VEGF-siRNA,实验组),同时设对照组(HepG2/psuper.retro.neo组)和空白组(HepG2组).分别移植BALA/c裸鼠成瘤,计算各组鼠成瘤潜伏期和接种20 d后瘤重,Western-blotting检测肿瘤组织中VEGF的表达变化,免疫组织化学SP法检测瘤组织内微血管密度(MVD).结果 实验组、对照组和空白组裸鼠成瘤潜伏期分别为(9.2±1.2)、(3.9±0.7)和(3.8±0.9)d;接种20 d后3组平均瘤重分别为(194±57)、(566±86)和(626±96)g;瘤组织VEGF蛋白表达水平分别为(0.075±0.012)、(0.198±0.009)和(0.205±0.008);MVD分别为(13.6±2.8)、(34.3±2.9)和(35.3±3.5),实验组与对照组和空白组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 合成和构建的靶向人肝癌HepG2VEGF基因干扰质粒具有抑制人肝癌细胞裸鼠成瘤和血管生成的作用.     

5-LOX siRNA对人肝癌HepG2细胞裸鼠瘤生长的作用和ERK的影响

目的研究5-脂氧合酶(5-LOX)siRNA转染人肝癌HepG2细胞后对裸鼠移植瘤生长的作用及对细胞外信号调节激酶(ERK)1/2信号通路的影响。方法将5-LOX siRNA转染人肝癌HepG2细胞,验证在细胞水平5-LOX表达受抑制。再用转染后的细胞建立裸鼠移植瘤模型。裸鼠分3组:转染组(接种5-LOX siRNA转染的HepG2)、转染空载体组(接种空白质粒转染的细胞)、未转染组(接种未转染的HepG2)。接种21 d后处死裸鼠,测量移植瘤体积。Westernblot和RT-PCR检测瘤体5-LOX、ERK1/2的蛋白和mRNA表达。结果转染组肿瘤平均体积与转染空载体组、未转染组比较明显减小(P<0.01),检测瘤体5-LOX、ERK1/2蛋白水平及mRNA表达量明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论抑制5-LOX表达可显著抑制肝肿瘤生长,测得ERK1/2表达下降,提示其作用机制可能通过抑制ERK信号转导途径抑制肿瘤增殖。     

Effects of 5-LOX siRNA on growth and ERK signal transduction pathway of HepG2 cell xenografts in nude mice

目的 研究5-脂氧合酶(5-LOX)siRNA转染人肝癌HepG2细胞后对裸鼠移植瘤生长的作用及对细胞外信号调节激酶(ERK)1/2信号通路的影响.方法 将5-LOX siRNA转染人肝癌HepG2细胞,验证在细胞水平5-LOX表达受抑制.再用转染后的细胞建立裸鼠移植瘤模型.裸鼠分3组:转染组(接种5-LOX siRNA转染的HepG2)、转染空载体组(接种空白质粒转染的细胞)、未转染组(接种未转染的HepG2).接种21 d后处死裸鼠,测量移植瘤体积.Western blot和RT-PCR检测瘤体5-LOX、ERK1/2的蛋白和mRNA表达.结果 转染组肿瘤平均体积与转染空载体组、未转染组比较明显减小(P<0.01),检测瘤体5-LOX、ERK1/2蛋白水平及mRNA表达量明显下降(P<0.05,P<0.01).结论 抑制5-LOX表达可显著抑制肝肿瘤生长,测得ERK1/2表达下降,提示其作用机制可能通过抑制ERK信号转导途径抑制肿瘤增殖.     

腺病毒介导人IL-2基因治疗的抗肿瘤作用及机理分析

目的　观察重组人白介素 2腺病毒 (advh IL- 2 )在小鼠肝癌 H2 2中的转染效率、表达时程、体内抗肿瘤作用及其免疫机理。方法　小鼠皮下接种肝癌 H2 2 ,将肿瘤生长至体积为 10 0～ 2 0 0 mm3的荷瘤小鼠随机分组 ,经肿瘤局部注射给药。用 X- gal染色法检测重组腺病毒载体 adv L ac Z的转染效率 ;用 RT- PCR检测人 IL- 2基因的持续表达时间 ;以 H2 2瘤体生长及荷瘤小鼠存活时间评价 advh IL - 2抗肿瘤作用 ;以 51 Cr 4小时释放法测定治疗小鼠脾细胞的 L AK与 CTL 杀伤活性 ,免疫荧光法分析肿瘤组织内 CD4 +与 CD8+ T细胞浸润情况。结果　肿瘤局部单次注射 1× 10 9pfu重组腺病毒 ,可在肿瘤组织中进行有效的转染及表达 ,人 IL- 2基因的表达时间长于 12 d。AdvhIL- 2的抗肿瘤作用具有剂量依赖性 ,与 PBS组比较 ,2× 10 9pfu advh IL- 2可非常明显地抑制 H2 2皮下瘤的生长、延长荷瘤小鼠的生存时间 (P<0 .0 1) ,同时明显增强脾细胞 L AK与 CTL杀伤活性 (P<0 .0 1) ,增加肿瘤组织内CD4 + 与 CD8+ T细胞的浸润。结论　 Advh IL - 2通过介导人 IL - 2基因在小鼠 H 2 2肿瘤组织中的持续表达 ,产生明显的体内抗肿瘤作用 ,其机理与激活荷瘤小鼠抗肿瘤免疫反应有关     

靶向Notch1基因的siRNA对裸鼠人肝细胞癌移植瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨Notch1基因在人肝细胞癌HepG2细胞裸鼠移植瘤中的作用。方法于裸鼠腋下接种0.2×108/mL的HepG2细胞悬液,建立人肝细胞癌裸鼠移植瘤模型,将其分为3组:未处理组(接种PBS悬浮的未转染细胞)、空载体转染组(接种空载体转染的细胞)和Notch1转染组(接种靶向Notch1基因的siRNA转染的细胞)。连续2周观察转染荷瘤裸鼠的生长情况,采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)研究肿瘤组织中的细胞凋亡,利用R T-PCR和蛋白质印迹技术检测肿瘤组织中Notch1、bcl-2和bax mR NA和蛋白的表达。结果 Notch1 siRNA转染组中肿瘤的生长明显受到抑制,其肿瘤的重量为(0.685±0.138)g,显著低于未处理组(2.896±0.513)g和空载体转染组(2.776±0.623)g(F=29.672,均P<0.01)。TUNEL结果表明,Notch1 siR NA转染组每500个细胞中凋亡的细胞数为(91±3),明显高于未处理组(10±3)和空载体转染组(11±2)中细胞凋亡的数目(P<0.05);此外,RT-PCR和Western印迹结果表明Notch1 siRNA转染组中裸鼠肿瘤组织Notch1和bcl-2 mRNA和蛋白表达均显著下降,而bax的表达显著上升,3组间比较差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论降低Notch1基因的表达能抑制人肝细胞癌细胞HepG2裸鼠皮下移植瘤的生长,诱导HepG2细胞凋亡,后者可能与bax表达的上升和bcl-2表达的下调相关。     

CD基因联合5-FC治疗人卵巢癌裸鼠移植瘤的实验研究

目的　了解人卵巢癌裸鼠移植瘤经 CD基因联合 5 - FC治疗后的变化。方法　 10只荷瘤裸鼠随机分为实验组 (n=5 )和对照组 (n=5 )。实验组将整合有 CD基因的复制缺陷的腺病毒 0 .1m l〔1× 10 1 0 pfu(菌斑形成单位 ) /ml〕注入瘤体内 ,同时将 5 - FC按每次 4 0 0 mg/kg注入裸鼠腹腔内。对照组以生理盐水代替病毒液及 5 - FC溶液 ,以同体积、同样方法注入裸鼠体内。结束治疗后 2 4小时处死裸鼠。用流式细胞仪测定肿瘤中心及边缘部位细胞凋亡和细胞周期 ;用 CA 12 5标准试剂盒检测肿瘤组织及裸鼠血清 CA12 5值 ;HE染色观察肿瘤组织及肿大淋巴结的病理表现。结果　 1治疗前实验组与对照组肿瘤重量分别为 12 93± 342 m g和 12 6 7± 312 mg,治疗后分别为2 2 31± 6 4 0 mg和 2 92 5± 1195 m g,实验组瘤重量小于对照组。 2肿瘤病理类型为低分化浆液性乳头状囊腺癌。与对照组相比 ,实验组肿瘤组织内有较多的炎性细胞浸润及明显的纤维化。另外 ,对照组裸鼠有 2只 (2 /5 )发生肿瘤淋巴结转移 ,而实验组裸鼠未发生肿瘤淋巴结转移。 3实验组肿瘤细胞总的凋亡率为 11.96± 5 .6 9% ,高于对照组的凋亡率 (7.6 5± 5 .2 1% ) (P<0 .0 5 )。4实验组与对照组 G1 期及 S期细胞构成比均无统计学差异 (P>0 .0 5 ) ;实验组     

桩蛋白表达对裸鼠肝癌细胞增殖的影响

目的探讨裸鼠体内桩蛋白(PXN)表达对肝癌细胞增殖的影响。方法将24只裸鼠随机分为对照组、短发夹RNA(shRNA) PXN阴性对照组和shRNA PXN组,每组8只。3组裸鼠背部分别植入正常SMMC-7721细胞、转染shRNA PXN空质粒的SMMC-7721细胞和转染shRNA PXN的SMMC-7721细胞,观察3组裸鼠体内肿瘤的生长状况;于7周末采血并处死裸鼠,切取肿瘤组织称质量,并用甲醛固定、石蜡包埋。采用免疫组织化学法检测3组裸鼠肿瘤组织中PXN、黏着斑激酶(FAK)蛋白表达,反转录聚合酶链反应检测3组裸鼠肿瘤组织中PXN、FAK mRNA表达,酶联免疫吸附试验法检测3组裸鼠血清PXN、FAK水平。结果 shRNA PXN组裸鼠肿瘤质量低于对照组和shRNAPXN阴性对照组(P <0. 05),对照组与shRNA PXN阴性对照组裸鼠肿瘤质量比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。shRNA PXN组肿瘤组织中PXN和FAK蛋白表达显著低于对照组和shRNA PXN阴性对照组(P <0. 05),对照组与shRNA PXN阴性对照组肿瘤组织中PXN和FAK蛋白表达比较差异均无统计学意义(P> 0. 05)。shRNA PXN组裸鼠肿瘤组织中PXN和FAK mRNA表达显著低于对照组和shRNA PXN阴性对照组(P <0. 05),对照组与shRNA PXN阴性对照组裸鼠肿瘤组织中PXN和FAK mRNA表达比较差异均无统计学意义(P> 0. 05)。shRNA PXN组裸鼠血清PXN和FAK水平显著低于对照组和shRNA PXN阴性对照组(P <0. 05),对照组与shRNA PXN阴性对照组裸鼠血清PXN和FAK水平比较差异均无统计学意义(P> 0. 05)。结论下调PXN表达可以抑制裸鼠肝癌细胞的增长,FAK表达量随PXN的下调而减少,联合检测PXN和FAK的表达有望成为肝癌防控的新靶点。     

内皮抑素重组腺病毒治疗肝癌裸鼠模型的实验观察

目的研究观察内皮抑素重组腺病毒Ad-endostatin对BALB/c裸鼠接种HepG2肝癌细胞肿瘤模型的治疗作用。方法用重组腺病毒Ad-endostatin感染HUVEC细胞,用MTT法和Western Blot法分别分析HUVEC细胞的增殖抑制作用和Endostatin蛋白表达。用Ad-endostatin接种HepG2肝癌细胞裸鼠模型,观察小鼠的肿瘤大小变化,用免疫组化法观察肿瘤组织中血管内皮细胞CD31的表达。结果用Ad-endostatin 50感染HU-VEC细胞24、48h后,HUVEC细胞活性分别下降到(79.30±3.76)%、(63.75±2.82)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。Ad-Endo接种HepG2肝癌细胞裸鼠21d后,肿瘤体积为435±26.67mm3,体积抑制率达51.40%,差异显著(P<0.001);Ad-Endo治疗组肿瘤的CD31阳性细胞数68.34±3.29,差异显著(P<0.001)。结论Ad-endostatin能明显抑制肝癌细胞生长,明显抑制肿瘤组织中血管内皮细胞生成,对小鼠荷瘤局部具有明显治疗作用。     

携带mIL-12基因的增殖腺病毒在鼻咽癌细胞中增殖及mIL-12高效表达

目的联合选择性增殖腺病毒溶肿瘤细胞和小鼠白细胞介素12(mouse interleukin-12, mIL12)免疫治疗的作用,提高对肿瘤细胞的杀伤作用。方法用携带mIL12的选择性增殖腺病毒CNHK200-mIL12转染鼻咽癌细胞株CNE3和915,测定其在鼻咽癌细胞株中的增殖能力和mIL12的表达水平。结果CNHK200-mIL12转染鼻咽癌细胞后,免疫组化染色显示大部分细胞腺病毒六联体蛋白(hexon)阳性,用流式细胞仪检测,转染24 h 后CNE3和915细胞的阳性率分别比0 h增高39%和4%,转染72 h后,病毒增殖超过1 000倍,增殖能力同dl1520相似,并能高水平表达mIL12,在1×104个CNE3和915细胞中分别达到(84.5±4.6)和(75.6±3.4)ng/105空斑形成单位(plaque forming unit, PFU)。结论携带mIL12 的CNHK200在p53缺陷的鼻咽癌细胞中增殖,并且高效表达mIL12,为进一步研究体内外对肿瘤杀伤作用奠定基础。     

高效液相色谱法测定5种品牌克拉霉素片的含量比较

目的考察国内外5个厂家的克拉霉素片的含量。方法采用高相液相色谱法,色谱柱:C8(5μm,4.6mm×150mm);流动相:0.067mol/L磷酸二氢钾—乙腈(60∶40);流速:1.0ml/min;检测波长:210nm;柱温:45℃;结果5个厂家的克拉霉素片含量没有明显差异,均符合2005版药典的要求,但各药的日均服药费用有很大差异。结论建议临床应选用安全、有效、经济的药物。     

卒中后遗症期中医药治疗进展

随着中医学的发展,治疗本病的方法日臻完善,目前较为一致的观点认为其发病机理为"本虚标实"."本虚"是指气血虚少,脾虚、肝虚、肾虚;"标实"是指风、火、痰、瘀等实邪的存在,通过中药单方、复方、针灸、磁疗等治疗手段予益气、活血、健脾、化痰、滋肝、补肾等法,从而达到中医药治疗的目的.     

异紫杉脂素的酶法糖基化

目的 以异紫杉脂素为例，探索酶法糖基化的可行性，为其他具有重要生理活性的天然化合物提供可行的生物转化方法。方法 利用半乳糖苷酶转糖基活性对异紫杉脂素进行了糖基化修饰。结果 通过薄层层析，质谱，红外光谱，^1HNMR,^13CNMR数据显示产物即是异紫杉脂素半乳糖苷。结论 E.coli和脆壁酵母来源的β-半乳糖苷酶可以对异紫杉脂素进行糖基化修饰。     

200例肿瘤CT诊断与病理诊断对比分析

将２００例ＣＴ诊断为肿瘤的患者手术后进行病理组织学诊断，两者的诊断符合率为９０．５％，ＣＴ误诊率为９．５％。对误诊的原因进行了分析，强调在肿瘤诊断中ＣＴ与病理诊断互补性的重要意义。     

酶促萘普生酯的选择性水解拆分

柱状假丝酵母脂肪酶可以选择性催化S－萘普生甲酯、乙酯和乙氧基乙基酯发生水解,从而对化学合成的混旋萘普生进行拆分,制备具有高光学纯度的S－对映体。利用中等极性大孔吸附树脂HZ－806作为固定化载体,可在酶分子周围营造一个有利于反应的微环境,有效地提高酶的催化活力及解决酶的回收。在中等极性大孔吸附树脂固定化酶填充床反应器中,混旋乙氧基乙基萘普生酯可被连续水解拆分,当流量为72mL/h时,酯的水解率为17％,光学纯度为89．1％。     

布鲁氏菌病实验室初筛阳性而确认实验阴性标本的分析

目的了解平顶山市2011-2013年布鲁氏菌病(简称布病)高危人群血清学筛查中初筛假阳性的现状,指导今后布病实验室检测工作。方法采用虎红平板凝集试验(Rose Bengal Plane Test,RBPT)进行初筛,阳性标本再进行试管凝集试验(Standard Tube Agglutination Test,SAT)确诊。结果 33份标本为RBPT初筛阳性SAT确认阴性,假阳性比例为40.24%。各年度间和不同人群间的假阳性比例差异均无统计学意义(χ2年度=0.89,P=0.64;χ2性别=0.46,P=0.50;χ2年龄=0.94,P=0.63;χ2职业=2.52,P=0.47;χ2民族=1.71,P=0.19)。对其中21份低滴度进行回顾性SAT检测,有2份转阳。结论要对RBPT阳性而SAT阴性的标本进行回顾性检测,进一步规范布病实验室检测,减少漏诊。     

通过辅助生育技术出生的婴儿数目增加12％

全世界每年有超过200000名婴儿通过辅助生育技术（ART）出生。 一项报告估计,2002年有2190130～246000名ART婴儿出生,相较于2000年的数据（由911000～1025000个周期估算出）增长12％（Human Reproduction 2009 May 27,doi：10.1093／humrep／dep098）。     

磨损颗粒刺激人单核细胞thp-1分泌TNF-α及其诱导成骨细胞凋亡作用

[目的]研究磨损颗粒刺激单核细胞thp-1后,细胞分泌TNF含量和刺激后条件培养基引起成骨细胞的凋亡。[方法]L929细胞测活和ELISA方法检测单核细胞TNF-α的分泌和分泌的量;TUNEL方法检测磨损颗粒条件培养基对成骨细胞的凋亡作用。[结果]不同种类磨损颗粒加入thp-1后TNF-α的结果用方差分析比较, 3组数据之间有显著性差异(P<0．05)。将不同颗粒的100 ng／ml组和10 ng／ml组分别两两比较,两组之间结果有显著性差异(P<0．05),100 ng／ml比10 ng／ml TNF值高。[结论]磨损颗粒PE、Co-Cr-Mo、Ti-6Al-4V刺激体外培养单核细胞thp-1分泌TNF-α,3种磨损颗粒之间有显著差异(P<0．05)。磨损颗粒PE、Co-Cr-Mo、Ti-6Al-4V刺激单核细胞thp-1的条件培养基可以引起体外培养成骨细胞凋亡。