HPLC-ELSD测定浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的含量

 目的建立HPLC-ELSD测定浙贝母中贝母素甲、贝母素乙含量的方法,并对市售17批样品进行考察,制定含量限度。方法色谱柱:Agilent Hypersil BDS-C₁₈(4.0 mm×250 mm,5μm);流动相:乙腈-水-二乙胺(70:30:0.03),流速:0.8 mL·min^-1; ELSD参数:漂移管温度为85℃,载气流速为2.2 L·min^-1。结果贝母素甲、贝母素乙线性范围分别为47.02～1 003.46.92～1 001 mg·L^-1,平均回收率分别为102.7%,98.7%,RSD分别为2.1%,2.5%(n=6)。通过市售17批样品中贝母素甲、贝母素乙含量的测定,制定了不同规格浙贝母的含量限度。结论此法简便,快捷,结果可靠,可用于浙贝母的质量评价,为2005年版药典中浙贝母质量标准的修订提供了依据。     

HPLC-ELSD法测定皖贝止咳胶囊中贝母素甲和贝母素乙的含量

目的:建立皖贝止咳胶囊中贝母素甲和贝母素乙的含量测定方法。方法:采用迪玛C₁₈柱,乙腈-0.1%三乙胺溶液(70∶30)为流动相;ELSD参数:漂移管温度:93℃,载气流量:2.2mL·min^-1。结果:贝母素甲的回收率为97.35%,RSD=1.24%(n=5);贝母素乙的回收率为97.46%,RSD=1.27%(n=5)。结论:本法简便、快速、重复性好,可作为制剂的定量分析方法。     

HPLC测定不同产地平贝母中贝母甲素的含量

 目的建立平贝母中贝母甲素含量的反相离子对HPLC测定方法。方法采用Kromasil ODS C₁₈(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-水(69∶31),内含7.5 mmol·L^-1 SDS,pH=4.5±0.1;体积流量:0.5 mL·min^-1;柱温:27℃;检测波长为208nm,并与TLC对照测定了10种不同产地平贝母中贝母甲素的含量。结果贝母甲素在0.515～3.09μg与峰面积线性关系良好(r=0.999 7),平均加样回收率为98.54%,RSD为2.12%(n=5)。不同产地平贝母中贝母甲素含量有一定的差异,其中黑龙江省的铁力和辽宁省的新宾平贝母中贝母甲素含量较高。而其他吉林省的8个产地贝母甲素含量均较低。结论本方法灵敏度高,而且简便、准确、重现性好,可用于平贝母的内在质量控制。     

高效液相色谱法分析小鼠血浆中贝母乙素及其药代动力学研究

 目的 研究小鼠腹腔注射贝母乙素的药代动力学。方法 反相液相色谱法定量分析。血浆样品经乙醚提取后,柱前用2,4-二硝基苯肼衍生,分析色谱柱：Hypersil C₁₈,流动相：乙腈-乙酸铵(0.1 mol·L^-1,pH=5)(39∶61),UV375 nm检测。结果 在0.114～1.26 μg·ml^-1区间,标准曲线线性方程为Y=0.126X-0.0013,相关系数r=0.9923,平均日间、日内精密度 RSD 分别为5.85%和5.30%。平均相对回收率为96.5%。结论 小鼠注射贝母乙素(1.5 mg·kg^-1)的血药浓度-时间曲线符合一室开放模型,t_1/2为0.84 h,c_max为0.87 μg·ml^-1,t_max为0.15 h。     

HPLC-ELSD同时测定平贝母中贝母素甲和贝母素乙含量

目的建立同时测定中药材平贝母中贝母素甲、贝母素乙含量的测定方法。方法采用Agilent TC-C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,以甲醇-乙腈-0.5%醋酸溶液(8:19:73)为流动相,流速为0.6mL·min-1,蒸发光散射检测器检测。结果贝母素甲、乙的线性范围分别为0.400～3.200mg·mL-1(r=0.9998)和0.304～2.432mg·mL-1(r=0.9999),平均回收率分别为101.6%和102.6%。结论该方法便捷、有效,适用于检测贝母类生物碱等无紫外吸收的化学成分。     

不同生长年限平贝母中贝母素甲和贝母素乙的含量测定

目的:比较一、二、三年生平贝母鳞茎中贝母素甲、贝母素乙的含量。方法:采用Agilent TC-C18(4.6×250mm,5μm)色谱柱,以甲醇-乙腈-0.5%醋酸溶液(8∶19∶73)为流动相,流速为0.6mL·min-1,蒸发光散射检测器检测。结果:三年生以内平贝母鳞茎中贝母素甲、贝母素乙含量随生长年限的增加而增加。结论:从贝母素甲、贝母素乙含量来看,三年生平贝母药材质量优于一、二年生平贝母药材。     

HPLC-ELSD法测定散结镇痛片中贝母素甲、贝母素乙

目的建立散结镇痛片中贝母素甲、贝母素乙的测定方法。方法采用HPLC-ELSD方法,以Thermo HypersilGold C18ODS色谱柱(5μm,4.6 mm×250 mm)为固定相;以乙腈-0.06%二乙胺溶液(70∶30)为流动相;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃。结果贝母素甲在170.2～3 404 ng、贝母素乙在123.2～2 464 ng范围内,进样量对数值与峰面积的对数值呈良好线性;平均回收率分别为100.08%(RSD为1.60%)、99.66%(RSD为1.83%)。3批样品中贝母素甲与贝母素乙的总含量分别为0.190 mg/片、0.179 mg/片、0.183 mg/片。结论本方法专属性、重现性好,可用于散结镇痛片中贝母素甲、贝母素乙的质量检测,暂定散结镇痛片中贝母素甲与贝母素乙的总含有量不得低于0.170 mg/片。     

HPLC-ELSD测定猴枣牛黄散中乔松素、小豆寇明、西贝母碱和西贝母碱苷

目的: 采用高效液相色谱-蒸发光散射法测定猴枣牛黄散(HZNHS)中乔松素、小豆寇明、西贝母碱和西贝母碱苷的含量。 方法: Hypersil C₁₈色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),流速0.9 mL·min^-1,流动相(乔松素和小豆寇明)A为甲醇,B为0.5% 磷酸溶液,检测波长300 nm;流动相(西贝母碱和西贝母碱苷)乙腈-水-二乙胺(65:35:0.5),ELSD漂移管温度80 ℃,载气(N₂)流速2.3 SLPM·min^-1。 结果: 乔松素和小豆寇明分别在0.052 7~1.054 μg(r=0.999 4),0.036 2~0.724 0 μg(r=0.999 8)进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.14%,97.64%,RSD分别为1.10%,1.39%;西贝母碱和西贝母碱苷分别在0.057 1~1.142 μg(r=0.999 1),0.081 3~1.626 μg(r=0.999 5)进样量的自然对数值与峰面积的自然对数值呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.55%,98.09%,RSD分别为1.75%,1.80%。 结论: 方法测定结果准确、灵敏、重复性好,可用于猴枣牛黄散中乔松素、小豆寇明、西贝母碱和西贝母碱苷的测定。     

HPLC-ELSD测定太白贝母和瓦布贝母中贝母辛的含量

 目的 测定川贝母新的基源植物太白贝母（Fritillaria taipaiensis P. Y. Li）、瓦布贝母[Fritillaria unibracteata Hsiao et K. C. Hsia var.wabuensis (S. Y. Tang et S. C. Yue) Z. D. Liu, S. Wang et S. C. Chen]鳞茎中贝母辛的含量。方法 采用HPLC-ELSD法,色谱柱为Agilent Hypersil BDS-C₁₈(4.0 mm×250 mm,5 μm),流动相为乙腈-水-二乙胺溶剂系统,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,蒸发光散射检测器检测。结果 贝母辛在40.75～815.00 μg·mL-1内,峰面积对数与进样量对数呈良好线性关系（r=0.999 4）,贝母辛加样回收率为98.7%,RSD为2.5% (n= 6);太白贝母中贝母辛含量为0.017 3%～0.037 6%,瓦布贝母中贝母辛含量为0.023 3%～0.052 8%。结论 所测太白贝母和瓦布贝母样品中贝母辛的含量高于曾报道过的川贝母其他基源植物样品。     

液相色谱-串联质谱联用测定人血浆中伪麻黄碱、O-去甲基右美沙芬和苯海拉明的浓度

 目的建立同时测定人血浆中伪麻黄碱、苯海拉明和O-去甲基右美沙芬的液相色谱-串联质谱方法。方法血浆中加入内标酚妥拉明后,进行固相萃取,以甲醇-0.5%甲酸水溶液(55∶45)为流动相,经C₁₈柱分离后;采用三重四极杆串联质谱,电喷雾离子源(ESI),以正离子多反应监测(MRM)方式进行定量分析,用于监测的离子为m/z 166.4→m/z 115.2(伪麻黄碱),m/z258.2→m/z157.1(O-去甲基右美沙芬),m/z256.2→m/z167.2(苯海拉明),m/z282.2→m/z212.2(内标,酚妥拉明)。结果线性范围为伪麻黄碱1.0～200μg·L^-1(r=0.9993),O-去甲基右美沙芬为0.05～10μg·L^-1(r=0.9991),苯海拉明为1.0～200μg·L^-1(r=0.9988);提取回收率为伪麻黄碱在67.4%～73.4%之间,O-去甲基右美沙芬在74.6%～75.7%之间,苯海拉明在81.9%～83.9%之间,日内、日间RSD均小于6.2%,伪麻黄碱、苯海拉明和O-去甲基右美沙芬的最低定量浓度分别为1.0,1.0和0.05μg·L^-1。结论该方法专属性强、灵敏度高、准确,适用于伪麻黄碱、O-去甲基右美沙芬、苯海拉明的临床药动学研究。     

高速逆流色谱法分离纯化浙贝母中贝母素甲, 贝母素乙

目的:采用高速逆流色谱技术分离提纯浙贝母中的活性成分贝母素甲,贝母素乙.方法:采用氯仿-无水乙醇-0.2mo1.L-1盐酸(4:3:2)系统,上相为固定相,下相为流动相.主机转速为800r.min-1,流动相流速为1.2mL·min-1.结果:一次进样分离得到贝母素甲、贝母素乙,经高效液相(HPLC)分析纯度,经MS,1HNMR鉴定结构.结论:利用本实验条件可从浙贝母中分离制备贝母素甲,贝母素乙,两者纯度分别达到:97.5%,94.5%.     

LC-MS/MS测定人血浆中依折麦布和总的依折麦布含量及其药动学研究

 目的建立测定人血浆中依折麦布和总的依折麦布浓度的LC-MS/MS方法,进行依折麦布片po给药的药动学研究。方法22名志愿者血样经叔丁基甲醚萃取吹干重组后进样测定依折麦布浓度,另取血样经β-葡萄糖苷酸酶水解后叔丁基醚萃取吹干重组后进样测定总的依折麦布浓度。分析柱:Capcell C₁₈柱(2mm×50mm,5μm),内标(IS)¹³C6-依折麦布。流动相:5mmol·L^-1醋酸铵水溶液(A泵)和乙腈(B泵)组成,梯度洗脱。采用电喷雾去质子化三重四极杆二级串联质谱,多反应监测方式(MRM)测定样品浓度,依折麦布的监测离子对为m/z408.5→m/z270.8,内标为m/z414.5→m/z276.8。结果依折麦布在0.020～20μg·L^-1内线性关系良好,相关系数r=0.9994(n=9)。总的依折麦布在0.25～250μg·L^-1内线性关系良好,相关系数r=0.9998(n=9)。最低定量线(LLOQ)、低、中、高浓度的依折麦布和总的依折麦布质控样品的日内、日间精密度均小于12%,方法回收率在97%～104%内。志愿者口服10mg依折麦布后采血72h,依折麦布和总的依折麦布的药动学参数分别为AUC_0-inf(121.9±41.7)和(536.8±182.7)μg·h·L^-1;AUC_0-t(102.1±31.4)和(478.8±170.0)μg·h·L^-1;ρ_max(4.9±1.6)和(48.46±17.3)μg·L^-1;t_max(5.2±6.4)和(1.5±0.9)h;t_1/2(26.4±28.8)和(22.5±11.0)h;MRT(23.6±3.8)和(19.7±3.8)h。结论该方法符合生物样品分析要求,可用于依折麦布血浆浓度的测定,依折麦布和总的依折麦布的药动学参数与文献相近。     

LC-MS测定人血浆中盐酸舍曲林的浓度及相对生物利用度

 目的建立人血浆中盐酸舍曲林浓度的LC-ESI-MS测定方法,研究盐酸舍曲林在健康人体内的药动学行为,评价两种制剂的生物等效性。方法血浆样品经碱化后,环己烷提取,HPLC-ESI-MS内标法分析。检测离子为m/z 306.2(盐酸舍曲林加氢离子)、m/z 306.1(内标扎来普隆加氢离子)。20名健康受试者交叉口服供试片和参比片,剂量均为50 mg。结果盐酸舍曲林测定的线性范围为0.5～30μg·L^-1;盐酸舍曲林受试制剂和参比制剂的t_max分别为(4.8±0.8)和(5.1±1.3)h,ρ_max分别为(15.86±2.78)和(15.24±2.52)μg·L^-1,t_1/2分别为(29.53±5.40)和(29.32±5.02)h,AUC_{0～96 h}分别为(338.0±29.34)和(347.96±41.0)μg·h·L^-1。结论本法灵敏、准确、简便。统计学结果表明,两种制剂生物等效。     

液相色谱-质谱联用测定鼠血浆中的23-羟基白桦酸

 目的建立测定小鼠血浆中23-羟基白桦酸的液相色谱-质谱联用法(LC-MS)。方法取血浆,加入内标物枸橼苦素,经二氯甲烷-水(6∶1)提取后,40℃水浴中氮气吹干,残渣用甲醇溶解,进行LC-MS测定。色谱柱为Intersil C₈(2.1mm×250mm,3.5μm);体积分数为70%乙腈为流动相(其中三乙胺为体积分数0.05%);流速0.2mL·min^-1;柱温30℃;电喷雾离子源(ESI),负离子检测(23-HBA,m/z 471;柠檬苦素,m/z 469)。结果23-羟基白桦酸的线性范围为10～1000μg·L^-1(r=0.9998),最低定量限为10μg·L^-1,方法平均回收率>88%,日内、日间精密度(RSD)均小于8%。小鼠血浆样品-20℃放置至少3周内稳定。结论本方法专属性强,灵敏度高,线性范围宽,操作简便,适用于药动学研究。     

LC-MS/MS测定人血浆中盐酸舍曲林的浓度

 目的建立LC-MS/MS测定人血浆中盐酸舍曲林浓度的方法。方法以盐酸帕罗西汀为内标,采用乙腈-0.1%甲酸溶液(50∶50)为流动相,以Discovery C₁₈色谱柱为分析柱,通过电喷雾电离源(ESI),以选择离子反应监测(SRM)方式进行检测。用于定量分析的离子反应分别为m/z306.0→274.9(盐酸舍曲林)和m/z 330.1→191.9(盐酸帕罗西汀)。结果盐酸舍曲林线性范围0.332～66.400μg·L^-1,定量下限为(0.334±0.002)μg·L^-1(n=5)。日内、日间精密度(RSD)小于9%,平均回收率大于95%。结论本法专属性强,样品处理方便,灵敏度高,适用于盐酸舍曲林临床药动学研究。     

硫磺熏蒸对浙贝母中贝母素甲和贝母素乙在大鼠体内药动学的影响

目的采用液相-质谱联用(LC-MS/MS)分析硫磺熏蒸(硫熏)对浙贝母中贝母素甲、贝母素乙在大鼠体内药动学的影响。方法 SD大鼠分别ig给予硫熏、鲜切浙贝母提取物(生药剂量15 g/kg),采用LC-MS/MS技术检测贝母素甲和贝母素乙的血药浓度,并用3P97软件计算药动学参数。结果硫熏浙贝母中贝母素甲和贝母素乙的主要药动学参数:达峰浓度(Cmax)分别为(66.40±4.65)、(146.72±10.88)ng/m L,药时曲线下面积(AUC0~t)分别为(181.79±7.85)、(457.38±58.81)ng·h/m L;鲜切浙贝母中贝母素甲和贝母素乙的主要药动学参数:Cmax分别为(186.37±18.80)、(227.65±7.01)ng/m L,AUC0~t分别为(197.70±18.69)、(566.16±41.55)ng·h/m L。硫熏浙贝母组大鼠体内贝母素甲、贝母素乙的Cmax、AUC0~t明显低于鲜切浙贝母组。结论硫熏降低浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的血药浓度,影响浙贝母中主要生物碱贝母甲素和贝母乙素的药动学行为。     

吲达帕胺人体药动学研究

 目的建立人血浆中吲达帕胺的HPLC-ESI-MS测定法,以研究健康志愿者口服吲达帕胺片后吲达帕胺的药动学过程。方法血浆样品加入内标,以1 mol·L^-1的盐酸水溶液酸化后以乙酸乙酯萃取,进行HPLC-MS分析。色谱柱为Licrospher C₁₈,流动相为甲醇-10 mmol·L^-1醋酸铵水溶液(78∶22),内标为格列本脲,检测离子为m/z364.3(吲达帕胺)和m/z492.4(内标)。20名健康受试者po 2.5 mg吲达帕胺片,计算主要药动学参数。结果在0.1～100μg·L^-1内吲达帕胺与内标峰面积的比值与浓度的线性关系良好。批内RSD<9.4%,批间RSD<10.6%;提取回收率为90.5%～93.8%。吲达帕胺的消除半衰期为(18.2±4.3)h;峰质量浓度为(55.8±8.4)μg·L^-1;达峰时间为(1.6±0.6)h。结论本试验所建立的HPLC-ESI-MS分析方法快速、灵敏,可用于吲达帕胺人体药动学研究。