羧甲基壳聚糖的制备研究

目的 :研究壳聚糖羧甲基化条件、收率及产物的某些性质。方法 :在碱性条件下壳聚糖与一氯醋酸缩合成羧甲基壳聚糖 ,产物用等电点沉淀法分离纯化 ,同时测定了产物等电点。结果 :壳聚糖羧甲基化产率在 90 %～95 %之间。等电点为 7.17～ 7.5 6 ,除了溶液的 pH值在等电点外 ,产物在水溶液中完全溶解。 结论 :壳聚糖羧甲基化后 ,溶解性改变 ,扩大了其在医药领域的用途。     

壳聚糖和羧甲基壳聚糖纳米银复合物的抑菌作用

目的研究自制的壳聚糖和羧甲基壳聚糖纳米银复合物对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和大肠埃希菌的抑制作用。方法采用纸片琼脂扩散法及试管液体培养基稀释法进行试验。结果壳聚糖纳米银复合物对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的抑菌效果均明显优于壳聚糖、AgNO3及壳聚糖银。羧甲基壳聚糖纳米银复合物抑菌效果稍低于AgNO3和羧甲基壳聚糖银。结论壳聚糖和羧甲基壳聚糖纳米银复合物对这三种常见致病细菌均有抑制作用。     

不同取代羧甲基壳聚糖体外酶降解的研究

目的:研究不同取代羧甲基壳聚糖(CMC)的生物降解性.方法:通过体外酶解试验,用粘度测定法研究了在溶菌酶作用下CMC的分子量.结果:溶菌酶作为催化CMC降解的非专一性酶,能有效地催化CMC降解;酶解反应程度与酶浓度成线性关系;随着羧甲基壳聚糖取代度的增加,CMC的降解速度加快.结论:通过控制取代度,可以得到不同生物降解要求的羧甲基壳聚糖.     

羧甲基壳聚糖对氧化应激损伤的保护作用

目的探索羧甲基壳聚糖(CMC)对小鼠氧化应激损伤的保护作用。方法用含100μmol.L-1H2O2的培养基培养小鼠腹腔巨噬细胞制作细胞氧化应激模型。测定小鼠腹腔巨噬细胞总NOS活力和巨噬细胞的凋亡率;以小鼠皮下注射D-半乳糖制备动物氧化应激模型,测定小鼠脑组织和肝组织蛋白质羰基化程度;结果 CMC能降低巨噬细胞的总NOS活力,降低氧化应激所致的细胞凋亡,并可使D-半乳糖所致小鼠蛋白质羰基化含量降低,结论 CMC对D-半乳糖引起的氧化损伤有一定的保护作用。     

羧甲基壳聚糖体外抗幽门螺杆菌作用的研究

目的研究羧甲基壳聚糖体外对Hp的抑菌作用,为其体内应用提供理论和实验依据。方法①将羧甲基壳聚糖溶于不同浓度乙酸溶液中,得到不同pH值和浓度的溶液。②采用打孔法检测羧甲基壳聚糖溶液对Hp菌株的抑菌作用,并分别做对照。结果①羧甲基纤维素及乙酸对照液对Hp无抗菌作用。②羧甲基壳聚糖在pH值为6和5时无抗Hp作用,只在pH为4时有抗Hp作用,相比之下差异显著（P〈0.01）;羧甲基壳聚糖抗Hp作用存在菌株间差异（P〈0.01或P〈0.05）。③在1%～5%浓度范围内羧甲基壳聚糖抗Hp作用无显著差异。结论①羧甲基壳聚糖对Hp有普遍抑菌作用,可望成为一种新型的抗Hp药物。②其抗Hp作用受pH值影响最为明显。     

羧甲基壳聚糖对人肺上皮细胞短路电流影响的研究

目的探讨羧甲基壳聚糖对人肺上皮细胞短路电流的影响及其在肺上皮液体转运中的作用。方法应用尤斯灌流室装置测定H441单层细胞的短路电流。由总电流减去阿米洛利可抑制的电流算得阿米洛利敏感性电流,以用药前H441单层细胞的阿米洛利敏感性电流初始值为100%对照。结果羧甲基壳聚糖能够剂量依赖性增加H441单层细胞的短路电流,此电流可被阿米洛利明显抑制;0.1%、0.2%、0.3%羧甲基壳聚糖处理的人H441单层细胞阿米洛利敏感性电流分别增加至(151±16)%、(192±27)%、(222±34)%,与对照值相比P均<0.05。结论羧甲基壳聚糖通过增加人肺上皮细胞阿米洛利敏感性电流而增加肺泡上皮离子转运,可能参与肺水肿液的吸收。     

羧甲基壳聚糖对锌离子的吸附作用研究

本文对羧甲基壳聚糖与Ｚｎ＾２＋的吸附作用进行了研究,探讨了反应时间、离子强度、溶液的ｐＨ值、羧甲基取代度、温度等因素对吸附性能的影响。与水溶性低聚壳聚糖相比。羧甲基壳聚糖具有更强的络合能力。羧甲基壳聚糖－锌络合物可用于生物活性研究,为开发生物多糖型补锌剂提供理论依据。     

羧甲基壳聚糖的制备与质量分析

用氯乙酸对壳聚糖进行了化学改性,其产物羧甲基壳聚糖有良好的水溶性。还对此产物进行了质量分析。     

羧甲基壳聚糖对大鼠心室肌细胞钠电流的影响

目的研究羧甲基壳聚糖对大鼠心室肌细胞钠电流(I_(Na))的作用,在离子通道水平探讨羧甲基壳聚糖的抗心律失常作用机制。方法急性分离大鼠心室肌细胞,利用膜片钳制技术全细胞记录法,设保持电位为-120mV,指令电位为-80～+20 mV,步阶脉冲10 mV,波宽50 ms,刺激间隔2 s的方波钳制方案进行刺激。结果羧甲基壳聚糖抑制心室肌细胞I_(Na),且具有剂量依赖性关系。3种浓度(0.1%,0.2%,0.3%)羧甲基壳聚糖可使I_(Na)电流密度峰值分别降低至给药前的57.4%±6.7%,40.9%±5.4%和16.1%±4.3%(P<0.01,n=7)。结论羧甲基壳聚糖剂量依赖性的抑制大鼠单一心室肌细胞I_(Na),这可能是其抗心律失常的机制之一。     

羧甲基壳聚糖络合碘复合材料的合成和止血活性评价

目的研究羧甲基壳聚糖接枝聚丙烯酸钠/乙烯基吡咯烷酮络合碘材料的止血活性。方法在偶氮二异丁腈引发下,以丙烯酸钠、N-乙烯基吡咯烷酮、羧甲基壳聚糖和N,N′-亚甲基双丙烯酰胺为原料制备羧甲基壳聚糖接枝聚丙烯酸钠/乙烯基吡咯烷酮。然后与碘络合生成羧甲基壳聚糖接枝聚丙烯酸钠/乙烯基吡咯烷酮络合碘材料,同时进行止血活性测试。结果合成的材料具有很强的吸水性能,平均吸水倍率为103g/g,并且具有很好的耳静脉和股静脉止血效果。结论合成材料的止血效果优于止血海绵和Quikclot。     

羧甲基壳聚糖抗肿瘤及免疫增强活性研究

目的:评价羧甲基壳聚糖抗肿瘤和免疫增强活性。方法:MTT法研究羧甲基壳聚糖体外活性,S180实体瘤模型用于评价羧甲基壳聚糖体内抗肿瘤活性,流式细胞术分析肿瘤细胞的周期变化和细胞凋亡,ELISA法测定羧甲基壳聚糖对免疫功能的调节。结果:羧甲基壳聚糖抑制肿瘤细胞增殖,IC_(50)为30μg/mL,肿瘤抑制率为27.9%～43.6%。用药后细胞周期阻滞在G_1期,肿瘤细胞凋亡明显增加。体内具有明显的抑瘤和免疫增强作用。结论:羧甲基壳聚糖可以通过直接杀伤肿瘤细胞和增强免疫而发挥抗肿瘤效应。     

海参皂苷Echinoside A和ds-Echinoside A抑制小鼠Lewis肺癌生长和转移作用

目的探讨海参皂苷Echinoside A(EA)和ds-Echinoside A(DSEA)对小鼠肿瘤生长和自发肺转移的抑制作用及机制。方法建立C57BL/6J小鼠Lewis肺癌自发性肺转移模型,连续腹腔注射给药21 d,剥离原位肿瘤和双侧肺,分别称瘤重和计数肺表面转移灶结节数;采用RT-PCR法检测肿瘤组织中半胱氨酸蛋白水解酶3(Cysteine-requiring Aspartate Protease,Caspase 3)、基质金属蛋白酶-2/9(matrix metalloproteinase-2/9,MMP-2/9)、金属蛋白酶组织抑制剂-1/2(tissue inhibitor of metalloproteinase-1/2,TIMP-1/2)、乙酰肝素酶(heparanase,HPA)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA的表达。结果 EA和DSEA均能抑制Lewis肺癌小鼠移植瘤的生长,并显著抑制减少肺表面转移灶结节数。EA和DSEA可以显著提高荷瘤小鼠肿瘤组织中Caspase 3和TIMP-1/2mRNA的表达,降低MMP-2/9、HPA和VEGF mR-NA的表达(P<0.05,P<0.01)。结论 EA和DSEA能显著抑制小鼠Lewis肺癌生长和自发性肺转移,其机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡,调节细胞外基质(extracellular matrix,ECM)降解相关基因的表达、抑制VEGF的释放,从而抑制肿瘤细胞的转移和血管新生有关。     

塞来昔布联合吉西他滨对Lewis肺癌皮下移植瘤的抑制作用

目的研究塞来昔布(CEL)与吉西他滨(GEM)联用对Lewis肺癌皮下移植瘤的抑制效应。方法 40只小鼠随机分为对照组(A组)、GEM组(B组)、CEL组(C组)和CEL/GEM联用组(D组),每组10只。A、B组给予普通饲料;C、D组自接种后第2天给予含CEL 1mg/g的饲料喂养。B、D组于肿瘤接种后第7天,给予GEM 100mg/kg溶液0.2ml腹腔注射;A、C组给予等量生理盐水。每周注射1次,连续3周。实验期间测量肿瘤长短径,并绘制肿瘤生长曲线,4周后处死,称量瘤重,计算抑瘤率;检测移植瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)表达、微血管密度(MVD)和肿瘤细胞的凋亡。结果 B、C和D组抑瘤率分别为54.18%、49.52%和88.59%;D组移植瘤组织的VEGF表达及MVD低于A、B和C组(P<0.05),而凋亡指数高于A、B和C组(P<0.05)。结论 CEL和GEM均能抑制Lewis肺癌移植瘤的生长,两者联用通过抑制肿瘤微血管生成及诱导肿瘤细胞凋亡发挥协同抗肿瘤效应。     

羧甲基壳聚糖与阿霉素联合用药的体外抗肿瘤作用

目的：探讨羧甲基壳聚糖与阿霉素联合应用对人宫颈癌Hela细胞及人结肠腺瘤LS174-T细胞增殖的影响。方法：采用MTT比色法测定单独和合用羧甲基壳聚糖与阿霉素对癌细胞的生长抑制作用。应用金氏公式进行联合用药分析。结果：羧甲基壳聚糖和阿霉素均可有效地抑制癌细胞生长,且同时给药对癌细胞可产生单纯相加至增强的协同杀伤效果。序贯给药法中先给阿霉素后给羧甲基壳聚糖结果为协同作用,先给羧甲基壳聚糖后给阿霉素为拮抗作用。结论：羧甲基壳聚糖与阿霉素同时联合用药可产生协同作用,序贯联合用药产生单向协同作用。     

土贝母苷甲对小鼠B16黑色素瘤和Lewis肺癌转移的抑制作用

目的:本研究旨在探讨土贝母苷甲对小鼠B16黑色素瘤和Lewis肺癌转移的影响。方法:采用裸BALB/c小鼠B16黑色素瘤实验转移和裸BALB/c小鼠Lewis肺癌自发转移模型研究土贝母苷甲对肿瘤转移的影响;采用免疫组织化学法检测土贝母苷甲对转移相关基因CD44v6、ErbB-2和nm23-H1表达的影响。结果:腹腔注射低于全身中毒水平剂量的土贝母苷甲明显减少接种B16黑色素瘤细胞小鼠的肺重和肺转移灶数量,而对小鼠的健康和活力无明显影响;土贝母苷甲(2、3 mg.kg-1.d-1×14 d)和环磷酰胺(50 mg.kg-1.wk-1×2 d)对B16黑色素瘤细胞肺转移的抑制率分别为68.8%、82.8%和49.1%。土贝母苷甲治疗组小鼠Lewis肺癌原发肿瘤的平均瘤重明显低于对照组(P<0.05)。土贝母苷甲(2、3 mg.kg-1.d-1×14 d)和环磷酰胺(50 mg.kg-1.w-1×2 d)治疗组小鼠的肝转移抑制率分别为46.3%、52.0%和54.7%。土贝母苷甲显著下调促转移基因CD44v6和ErbB-2的表达,上调抑转移基因nm23-H1的表达。结论:土贝母苷甲对小鼠B16黑色素瘤的实验性转移和Lewis肺癌的自发性转移都有显著的抑制作用。土贝母苷甲对肿瘤转移的这种抑制作用与其抑制原发肿瘤生长、下调促转移基因CD44v6和ErbB-2及上调抑转移基因nm23-H1的表达有关,提示土贝母苷甲是一个阻止癌扩散和转移的候补化合物。     

复方丹参对高转移性人肺癌细胞与血管内皮细胞黏附及黏附分子表达的影响

目的：探讨复方丹参抗肿瘤转移机理。方法：应用共聚焦显微镜和流式细胞仪荧光标记法,体外研究高转移性肺癌细胞(PG细胞)与血管内皮细胞的黏附性、黏附分子表达以及复方丹参抗肿瘤转移作用。结果：复方丹参可明显抑制PG细胞表面CD44,CD54的表达。复方丹参对PG细胞与激活和静息血管内皮细胞的黏附性也具有明显的抑制作用,并可抑制黏附分子CD44,CD45的表达,呈剂量依赖关系。结论：复方丹参具有抗肿瘤转移作用,抑制肿瘤细胞与内皮细胞黏附及黏附分子表达可能是复方丹参抗肿瘤转移的机制之一。     

羧甲基壳聚糖与阿霉素联合用药的体外抗肿瘤作用

目的：探讨羧甲基壳聚糖与阿霉素联合应用对人宫颈癌Hela细胞及人结肠腺瘤IS174-T细胞增殖的影响。方法：采用MTT比色法测定单独和合用羧甲基壳聚糖与阿霉素对癌细胞的生长抑制作用。应用金氏公式进行联合用药分析。结果：羧甲基壳聚糖和阿霉素均可有效地抑制癌细胞生长,且同时给药对癌细胞可产生单纯相加至增强的协同杀伤效果。序贯给药法中先给阿霉素后给羧甲基壳聚糖结果为协同作用,先给羧甲基壳聚糖后给阿霉素为拮抗作用。结论：羧甲基壳聚糖与阿霉素同时联合用药可产生协同作用,序贯联合用药产生单向协同作用。     

川芎嗪对小鼠Lewis肺癌的治疗作用

目的:研究中药川芎嗪(TMP)对实体肿瘤的疗效及其可能的作用机理。方法:本研究运用Lewis肺癌小鼠模型,观察TMP对小鼠Lewis肺癌的疗效、免疫功能、生存质量及不良反应的影响。结果:TMP治疗小鼠Lewis肺癌能抑制肿瘤的生长,稳定病灶,提高荷瘤小鼠的生存质量,改善免疫功能。结论:TMP对小鼠Lewis肺癌有明显疗效,其作用机理与其本身对Lewis肺癌实体瘤有抑制作用和提高荷瘤小鼠免疫功能有关。     

TESTIN在鼻咽癌中的表达及对鼻咽癌细胞系增殖、上皮-间质转化和侵袭转移的影响

目的 观察TESTIN在鼻咽癌组织和细胞中的表达,分析TESTIN过表达对鼻咽癌细胞增殖、上皮-间质转化(EMT)和侵袭转移的影响.方法 采用免疫组化、Real time-PCR、Western-blot检测TESTIN在鼻咽癌组织和细胞系的表达状况.利用脂质体LipofectamineTM2000转染鼻咽癌5-8F细胞,Real time-PCR、Western-blot验证转染效率.MTT、细胞划痕实验、细胞侵袭实验检测TESTIN过表达对5-8F细胞增殖、EMT和侵袭转移的影响.Western-blot检测TESTIN过表达对侵袭转移相关基因表达的影响.结果 TESTIN在鼻咽癌组织的阳性表达率和表达水平明显低于正常鼻咽部组织,差异有统计学意义(P<0.05).与人正常永生化鼻咽上皮细胞系NP69比较,鼻咽癌细胞系CNE1、CNE2、C666-1、5-8F、6-10B中TESTIN表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05).转染pcDNA3.1/TESTIN的5-8F细胞中TESTIN表达显著上调(P<0.05).TESTIN过表达显著抑制5-8F细胞增殖、EMT和侵袭转移,同时上调E-cadherin表达,下调N-cadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9表达(P<0.05).结论 鼻咽癌组织和细胞系中TESTIN表达显著降低,TESTIN过表达可抑制鼻咽癌5-8F细胞增殖、EMT和侵袭转移.     

Ad-ING4抑制人A549肺癌细胞及其裸鼠移植瘤的生长

目的 研究腺病毒介导的ING4基因(Ad-ING4)对肺癌体内外的抑制作用及其潜在的分子机制.方法 体外采用50 MOI的Ad-ING4感染A549肺癌细胞,并用MTT法检测Ad-ING4对A549细胞的抑制作用,流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡率.采用A549细胞株建立人肺癌裸鼠模型,瘤体局部注射干预用药,每隔5天测量一次肿瘤体积,并计算瘤重抑瘤率;瘤块免疫组化检测ING4、生存素(survivin)、CD34、HIF-1等基因的表达.结果 Ad-ING4感染A549细胞抑制率可达47.62%;72 h凋亡率为18.5%;荷瘤裸鼠经治疗后,Ad-ING4组和顺铂(DDP)组的肿瘤体积、瘤重均明显缩小,其抑瘤率分别达到42.43%和46.47%,DDP组出现不良反应;免疫组化检测Ad-ING4组和DDP组与对照组比较,生存素、CD34、HIF-1的表达下调(P<0.01).结论 Ad-ING4对人A549肺癌细胞及其裸鼠移植瘤的生长具有明显的抑制作用.其抑瘤机制可能与下调生存素、CD34、HIF-1的基因表达进而诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤血管形成等有关.