梅毒螺旋体嵌合抗原的重组克隆与表达

目的 连接梅毒螺旋体特异抗原TpN17和TpN15的基因，克隆并表达此嵌合抗原。方法 PCR分别克隆TpN17和TpN15的基因，利用T4 DNA连接酶将二者连接在一起并插入到pRSET B质粒中，在BL21(DE3)菌株中用IPTG诱导表达。结果 连接的TpN17—15基因，测序结果与GenBank数据吻合。结论 SDS—PAGE电泳中显示表达的目的蛋白与预期的蛋白分子量一致。     

梅毒螺旋体TpN15-47融合基因原核表达系统的构建

目的构建梅毒螺旋体TpN15-47融合基因及其原核表达系统。方法分别克隆TpN15和TpN47基因,利用T4连接酶构建TpN15-47融合基因,常规方法构建其原核表达系统。采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白TpN15-47表达情况。结果连接的TpN15-47基因测序分析表明,插入的基因片段为TpN15-47融合基因,与GenBank报道相同。目的重组蛋白TpN15-47表达产量约为细菌总蛋白85.79%,主要以包涵体形式存在。结论所构建的原核表达系统能高效地表达TpN15-47融合蛋白,为后期梅毒螺旋体基因疫苗和临床检测试剂盒的研制奠定了基础。     

重组表达梅毒螺旋体抗原血清反应性研究

重组表达了梅毒螺旋体免疫反应性主要膜蛋白抗原(r-Tp 15kDa,Tp 17kDa,Tp42kDa,Tp47kDa)及多表位嵌合抗原(r-TP 15kDa-Tp 17kDa-Tp42kDa-Tp47kDa)。以间接免疫酶联检测人血清梅毒抗体进行评价，结果:Tp17kDa抗原的反应性优于其它抗原，而多表位嵌合抗原的反应性优于单个抗原。     

经修饰的重组梅毒螺旋体膜蛋白及其应用

目的　寻找高灵敏度、高特异性、检测结果定量、简便易行的梅毒螺旋体抗体酶联免疫检测方法。　方法　采用重组技术 ,在现有已公布的梅毒螺旋体基因组中筛选出公认抗原性最强的三个基因片段 Tpp1 5、Tpp1 7、Tpp47进行克隆。为了获得水溶性高、特异性强、可标记性好的重组抗原蛋白 ,有针对性地设计引物以便对表达的梅毒螺旋体膜蛋白进行修饰和改造 ,同时在收获高效表达的目的蛋白后采取了一系列针对性切割和高特异性纯化。以纯化的重组梅毒螺旋体膜蛋白 (r-KTp1 5 ,r-KTp1 7及 r-KTp47)为抗原 ,建立了诊断梅毒螺旋体抗体的双抗原夹心酶联检测方法 (DAGS ELISA)。　结果　在大肠杆菌中获得了重组梅毒螺旋体膜蛋白的高效表达 ,经修饰纯化之后的目标蛋白水溶性提高 ,特异性增强 ,可标记性优于常规不修饰的重组蛋白。应用该三种蛋白为抗原建立的双抗原夹心法血清学诊断试剂盒共检测各期梅毒阳性患者 2 1 0例 ,灵敏度达 98.6% (2 0 7/2 1 0 ) ,检测正常献血者 1 3 2 7例 ,特异性达 1 0 0 .0 % (1 3 2 7/1 3 2 7) ,优于常规梅毒血清学初筛诊断方法 RPR及 TRUST法 ,与 TPHA法的符合率为 1 0 0 .0 %。　结论　以双抗原夹心法酶联免疫诊断试剂盒在梅毒血清学初筛实验室进行梅毒螺旋体抗体的筛查 ,在灵敏度、特异     

免疫PCR技术检测梅毒螺旋体特异性蛋白的意义

目的探讨免疫PCR技术检测梅毒螺旋体特异性蛋白TpN47的意义。方法应用PCR法、甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）法和酶素螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）法进行检测,比较三者的敏感性和特异性。分别用棉拭子取患者泌尿道处渗出液或血清为标本,所有操作严格按照试剂使用说明书进行,PCR方法用细菌基因组DNA提取试剂盒提取TP基因组DNA,设计TpN47基因的引物,取PCR扩增产物进行电泳检测,然后进行T-A克隆、亚克隆及测序,进行提纯、分析,TRUST法和TPPA法按常规进行。结果单用三种检测方法 ,检出率无显著差异（P〉0.05）,三种方法的灵敏度、特异性不同,PCR法优于TRUST法和TPPA法（P〈0.05）。结论免疫PCR技术检测TpN47抗原具有较高的敏感性和特异性,值得临床重视,对有效控制梅毒的蔓延和胎传梅毒的发生具有重要意义。     

梅毒螺旋体TPN17重组抗原的表达及其在献血筛查中的应用

梅毒是严重危害人类健康的疾病之一。近年来,梅毒的发病率呈上升趋势,在一些高危人群中更为严重。检测感染者血清梅毒螺旋体抗体是诊断梅毒螺旋体感染的主要方法。常用的方法有性病实验室研究试验(VDRL)、荧光螺旋体吸收试验(FTA-ABS)和梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA),近年来国外开始采用酶联免疫吸附实验方法(ELISA)检测血清梅毒螺旋体抗体［1］。建立检测梅毒螺旋体抗体的关键是制备特异的梅毒螺旋体抗原。梅毒螺旋体不能体外培养,获得其自然抗原通常是从完整梅毒螺旋体中分离其抗原成分,制备相当困难［2］。因此,用基因工程方法表达梅毒螺旋体蛋白抗原是制备特异抗原的有效途径。TPN17蛋白(Treponema pallidum 17 kilodalton protein, TPN17抗原)是梅毒螺旋体重要的结构蛋白之一,在梅毒螺旋体感染免疫中具有重要作用。笔者用基因工程表达梅毒螺旋体的TPN17抗原,并建立了检测梅毒螺旋体抗体的ELISA方法。现将结果报告如下。     

梅毒螺旋体基因重组抗原及其血清学诊断研究进展

梅毒是由梅毒螺旋体也称苍白密螺旋体（Treponemapallidum,Tp）感染引起的传染性强、危害较大的人类性传播疾病。长期以来由于Tp人工培养困难,致使以Tp抗原为基础的血清学研究受到严重制约。随着Tp全基因序列的解释,为基因工程制备Tp抗原开辟了广阔的空间。当前,Tp重组抗原的基因研究已由单基因发展到多表位嵌合基因,部分基因已通过原核生物成功表达,解决了Tp血清学研究的抗原瓶颈问题,使之在血清学检测中得到广泛应用。我们就与血清学诊断相关的Tp基因重组抗原的特性及其临床运用作一综述。     

梅毒螺旋体抗原血清试验方法的比较

梅毒(Syphilis)是由苍白螺旋体(Treponemapallidum,TP)所引起的一种性传播疾病,近年来在我国有逐年上升趋势。选择好的检测方法,可直接影响到梅毒的治疗和预防。目前我国梅毒螺旋体抗原血清试验方法主要有梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)、梅毒微粒凝集试验(TP.PA)、荧光螺旋体吸收试验(FTA-Abs)、19S-IgM-TPHA和近几年才发展起来的梅毒酶联免疫吸附试验(ELISA)、梅毒印迹试验(WB)、TP-DNA测定试验(PCR)及梅毒胶体金法(SYP)等试验方法。本文应用其中三种梅毒螺旋体抗原血清方法,对63例梅毒抗体阳性血清进行检测,并同非梅毒螺…     

梅毒螺旋体特异性表面抗原的克隆表达与血清鉴定

梅毒病原体为苍白密螺旋体 (Ｔｐ) ,俗称梅毒螺旋体。对Ｔｐ的诊断目前主要依据病史与临床检查 ,辅助以一些血清学方法 ,如血球凝集试验 (ＴＰＨＡ)和荧光抗体吸收试验 (ＦＴＡ ＡＢＳ) [1] 。蛋白分子量 170 0 0与 4 70 0 0是Ｔｐ特异性表面抗原[2 ,3 ] ,患者感染Ｔｐ后能够产生相应的特异性抗体。我们利用基因工程的方法 ,通过大肠埃希菌表达Ｔｐ的 170 0 0与 4 70 0 0特异性抗原 ,以建立一种Ｔｐ血清学诊断方法。一、材料和方法1 分子量 170 0 0与 4 70 0 0基因的扩增 :用蛋白酶Ｋ消化的方法纯化ＴｐＤＮＡ。通过聚合酶链反应 (ＰＣＲ)扩…     

酶切与PCR联用合成梅毒抗原TpN17全长DNA及其表达活化和ELISA检测

目的在大肠埃希菌中重组表达梅毒密螺旋体TpN17抗原，用其建立梅毒诊断血清学方法。方法酶切与PCR联用。合成全长TpN17基因，亚克隆后克隆到pET-HIS质粒并转化到大肠杆菌BL21株中表达。亲和层析纯化。纯化rTpN17包被微孔板，ELISA方法检测临床8份梅毒阳性血清和4份阴性血清。结果获得了重组表达并纯化的TpN17，ELISA检测结果表明重组蛋白能被梅毒患者阳性血清所识别．特异性100％．灵敏度100％。结论证明了该重组蛋白具有良好的免疫反应性，可用于梅毒感染的血清学检测。     

医院病人梅毒抗体筛查中的阳性反应

[目的]调查医院就诊病人梅毒检查中的阳性反应与病人年龄、疾病史等的关系，对4种常用的梅毒血清学检测方法进行比较。[方法]对医院就诊病人常规送检血标本作梅毒抗体检测，阳性者作4种方法的检测，对部分病例查询病史分析。[结果]医院就诊病人梅毒抗体阳性率为1．66％，其中老年病人阳性率明显高于其它组病人。梅毒抗体阳性与病种无关，绝大多数病人否认不洁性接触史及其它传染。[结论]有必要对术前、输血前病人作梅毒抗体筛查，但对阳性结果的解释要慎重。     

梅毒螺旋体嵌合抗原的克隆表达及其临床应用

目的 在大肠埃希菌中表达梅毒螺旋体Tp15—17嵌合抗原,用于临床检测梅毒感染。方法 利用PCR法从Tp全基因组中分别扩增目的基因Tp15和Tp17,用T4DNA连接酶连接后,克隆进表达载体pGEX-6P-1中,构建重组质粒pGEX-6P-1＋Tp15-17,在大肠埃希菌中表达重组Tp嵌合蛋白,重组蛋白经亲和层析柱纯化后包被微孔板,初步建立间接ELISA法检测血清中的抗Tp抗体。结果 重组嵌合抗原获得了高效表达,免疫印迹试验显示重组抗原具有很强的抗原性。用重组嵌合抗原建立间接ELISA法,对梅毒螺旋体抗体阳性参比血清及梅毒患者血清的检测符合率100％。结论 重组梅毒螺旋体嵌合抗原Tpl5—17能够作为梅毒螺旋体诊断性ELISA抗原。     

ELISA和TRUST法在梅毒检测中的应用价值

目的探讨梅毒酶联免疫吸附试验(ELISA)、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)在梅毒诊断中的应用价值。方法应用TRUST、ELISA法分别检测2862例患者血清;梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)检测的43例患者与ELLSA、TRUST结果进行了对比观察。结果ELISA法检出率为1.61%(46/2862);TRUST法检出率为1.11%(32/2862),两者之间的总符合率为99.13%(2840/2862);ELISA法假阳性、假阴性率分别为0.06%(l/17)、7.69%(22/26);TRUST法假阳性、假阴性率分别为29.41%(5/17)、57.69%(15/26)。结论在输血前、疑似梅毒血清学检查中两者联合检测具有重要临床价值。     

梅毒螺旋体特异性IgM抗体检测的临床评价

目的探讨梅毒螺旋体特异性IgM抗体检测在各个时期梅毒诊断中的意义。方法采用蛋白印迹法(WB)检测IgM、甲苯胺红不加热血清反应素试验(TRUST)、梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)和暗视野检查梅毒螺旋体(TP)4种方法,对21例一期梅毒患者、8例二期梅毒患者、4例潜伏期梅毒患者、3例怀疑先天性梅毒婴儿、7例正规治疗18个月后梅毒患者及5例健康对照者进行检测分析。结果一期梅毒患者组IgM、TRUST、TPPA、TP阳性率分别为100.0%、42.9%、57.1%和66.7%。二期梅毒患者组、潜伏期梅毒、先天性梅毒患者组IgM、TRUST、TPPA阳性率均为100.0%。正规治疗18个月后梅毒患者组IgM、TRUST、TPPA阳性率分别为0、28.6%和100.0%。健康对照组IgM、TRUST、TPPA均为阴性。结论梅毒螺旋体特异性IgM抗体检测灵敏度高、特异性强,适用于未经治疗的各个时期的梅毒诊断。     

Reactivity of recombinant treponema pallidum (r-Tp) antigens with anti-Tp antibodies in human syphilitic sera evaluated by ELISA

We evaluated the immunoreactivity of recombinant Treponema pallidum (r-Tp) antigens with human sera by indirect enzyme-linked immunoabsorbant assay (ELISA). We expressed antigens with a molecular weight (MW) of 17KDa, 15KDa, 47KDa, and 42KDa, which are believed to be major immunoreactive membrane proteins of Tp cells. The expressed proteins were described by adding the prefix M, S, and G to the corresponding Tp antigens, namely, mature antigens, signal sequence containing antigens, and glutathione s-transferase (GST)-fused antigen in this report. A rather high expression occurred for M47 and S42 proteins in the Escherichia coli system, whereas for M15 and M17 proteins, a poor expression was observed. However, a fairly high expression occurred for G15 and G17. Thus expressed proteins were purified by means of chromatographies to a level of > 95%, and the purified proteins were found to be reactive with TPHA positive serum by Western blotting (WB). An ELISA performed with a serum of 1/1000 dilution using these purified antigens for coating on the solid phase showed that G17 antigen was more effective in detecting syphilis antibodies in human serum than M47, S42, and G15. There was a good consistency between ELISA and TPHA, whereby the cutoff indexes (CI) on ELISA showed a correlation coefficient of 0.7276 in logarithmic TPHA titers. J. Clin. Lab. Anal. 11:315–322, 1997. © 1997 Wiley-Liss, Inc.     

低浓度梅毒螺旋体抗体的调查与分析

目的 探讨改进梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)以检出酶联免疫吸附试验(ELⅠSA)检出的低浓度梅毒螺旋体抗体.方法 使用标准品和家兔免疫血清测试两种方法对低浓度梅毒螺旋体抗体的灵敏度,改进TPPA,从原倍稀释开始检测低浓度梅毒螺旋体抗体标本.结果 两种方法的灵敏度不一致,ELⅠSA初筛试验约可出现11%的低浓度样本,改进TPPA可检出这部分低浓度样本.结论 ELⅠSA检出的低浓度梅毒螺旋体抗体TPPA可通过改进稀释方法检出.     

梅毒螺旋体血清学筛查和确诊试验的临床应用

目的探讨2种梅毒螺旋体血清学试验同时用于梅毒螺旋体感染的筛检和确诊的重要性和必要性。方法快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)及梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)。结果对我院6 528名输血前筛查及皮肤科患者的血清样本同时作RPR和TPPA检测,阳性者再进一步检测其滴度。RPR阳性率为1.29%,TPPA阳性率为1.90%;2种方法同时阳性率为1.15%。结论为早期确诊梅毒螺旋体感染并阻断其传播途经,对输血前筛查及疑似梅毒螺旋体感染患者应采用RPR和TPPA2种方法同时进行检测。