吡咯烷二硫氨基甲酸酯对大鼠胃缺血/再灌注损伤的影响

目的 研究核因子κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸酯(PDTC)对大鼠胃缺血/再灌注(gastricischemia/reperfusion.GI/R)损伤的影响.方法 采用夹闭大鼠腹腔动脉30 min,去除动脉夹再灌注1 h的GI/R损伤模型,于静脉注射PDTC后,肉眼计数胃黏膜损伤指数,并运用免疫组化及TdT介导dUTP缺口末端标记(TUNEL)实验技术,观察PDTC对大鼠GI/R后胃黏膜细胞坏死、增殖和凋亡的影响.结果 夹闭大鼠腹腔动脉30 min再灌注1 h后可造成胃黏膜明显损伤,静脉注射PDTC 200 mr/ks可明显减轻GI/R损伤,并使胃黏膜细胞增殖增加、凋亡减少.结论 静脉注射PDTC对GI/R损伤具有保护作用,这种保护作用是通过促进胃黏膜细胞增殖、抑制胃黏膜细胞凋亡而实现的.     

室旁核内微量注射催产素对大鼠胃缺血/再灌注后胃黏膜胃泌素表达的影响

目的 研究室旁核(paraventricular nucleus,PVN)内微量注射催产素(oxytocin,OT)对大鼠胃缺血/再灌注(gastric ischemia/reperfusion,GI/R)后胃黏膜细胞胃泌素表达的影响.方法 采用夹闭大鼠腹腔动脉30 min,去除动脉夹再灌注1 h的GI/R损伤模型,于单侧PVN微量注射OT.肉眼计数胃黏膜损伤指数,并运用免疫组化实验技术观察了PVN微量注射OT对胃黏膜细胞胃泌素蛋白表达的影响.结果 PVN微量注射OT可明显减轻GI/R损伤;PVN内微量注射OT能明显减少GI/R后胃黏膜细胞胃泌素的表达,侧脑室给予OT特异性拮掂剂atosiban后阻断OT对大鼠GI/R损伤的保护作用并使胃泌素的表达增加.结论 PVN微量注射OT后对GI/R损伤具有显著的保护作用,这种保护作用在脑内是由OT受体介导的,在胃黏膜局部与抑制胃黏膜细胞胃泌素的表达有关.     

Bcl-2和Bax参与内源性一氧化氮对大鼠胃黏膜缺血/再灌注损伤的保护作用

目的 研究Bcl-2和Bax是否参与内源性一氧化氮（nitric oxide,NO）对大鼠胃黏膜缺血/再灌注损伤的保护作用.方法 采用大鼠胃缺血/再灌注（gastric ischemia/reperfusion, GI/R）模型（夹闭腹腔动脉30 min后再灌注）,应用免疫组织化学、蛋白免疫印迹方法研究NO前体物质左旋-精氨酸（L-arg）和NO合成酶抑制剂L-NG-硝基精氨酸甲酯（L-NAME）对缺血/再灌注后大鼠胃黏膜细胞凋亡、增殖以及Bcl-2、Bax的影响.实验分为4组：GI/R组、L-arg组（L-arg＋GI/R）、L-NAME组（L-NAME＋GI/R）、L-NAME＋L-arg组（L-NAME＋L-arg＋GI/R）,L-NAME和L-arg于手术前20 min一次性腹腔注射.结果 与GI/R组相比,L-arg组胃黏膜凋亡细胞减少,增殖细胞增加,Bcl-2阳性细胞百分比和蛋白水平明显升高,Bax显著降低（P＜0.05）;L-NAME组与GI/R组相比胃黏膜凋亡细胞增加,增殖细胞减少,Bcl-2阳性细胞百分比和蛋白水平明显降低,Bax显著升高（P＜0.05）;同时给予L-arg和L-NAME对胃的缺血/再灌注损伤无明显影响.结论 Bcl-2和Bax参与内源性NO对大鼠胃黏膜缺血/再灌注损伤的保护作用.     

内源性一氧化氮对大鼠胃黏膜缺血/再灌注损伤的保护作用

目的研究内源性一氧化氮（nitric oxide，NO）对大鼠胃黏膜缺血，再灌注损伤的保护作用。方法采用大鼠胃缺血，再灌注（gastric ischemia／reperfusion，GI／R）模型（夹闭腹腔动脉30min后再灌注），通过组织学、免疫组化等方法，研究N0的前体物质左旋-精氨酸（L-arg）和N0合成酶抑制剂L-NG-硝基精氨酸甲酯（L-NAME）对缺血，再灌注后大鼠胃黏膜细胞坏死、凋亡和增殖的影响。结果与GI／R组相比，L-arg组胃黏膜损伤明显减轻，胃黏膜损伤面积明显缩小，凋亡细胞减少，增殖细胞增加（P〈0．05）；L-NAME组与GI／R组相比胃黏膜损伤明显加重，胃黏膜损伤面积明显增加，凋亡细胞增加，增殖细胞减少（P〈0．05）。结论内源性NO对胃黏膜缺血，再灌注损伤具有保护作用。     

N-乙酰-L-半胱氨酸对大鼠胃缺血/再灌注损伤的影响

目的 研究抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyleysteine,NAC)对胃缺血/灌注(gastric ischemia/reperfusion,GI/R)损伤的影响.方法 采用股静脉注射NAC后,夹闭大鼠腹腔动脉30 min,再灌注1 h的GI/R模型,计数胃黏膜损伤指数(gastric mueosal damage index,GMDI),测定胃黏膜组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性,RT-PCR法检测凋亡相关因子环氧合酶-2(COX-2)的表达.结果 股静脉注射NAC能降低GI/R胃黏膜损伤指数,使胃黏膜组织中MDA含量减少,SOD活性增强,凋亡相关因子COX-2的表达减少.结论 NAC对大鼠GI/R损伤具有保护作用,这种保护作用是通过抑制氧化应激,减少胃黏膜细胞凋亡而实现的.     

外周神经参与室旁核对大鼠胃缺血-再灌注损伤的调控作用

目的　探讨迷走神经、交感神经在电刺激下丘脑室旁核 (paraventricularnucleus,PVN)对大鼠胃缺血 -再灌注损伤 (gastricischemia-reperfusioninjury,GI-RI)调控中的作用。方法　采用夹闭大鼠腹腔动脉 30min ,松开动脉夹血流复灌 1h的GI-RI模型和核团内电刺激的方法 ,观察切断膈下迷走神经或切除腹腔交感神经节及应用受体阻断剂后对电刺激下丘脑室旁核调控大鼠胃GI-RI的影响。结果　切断双侧膈下迷走神经 ,切除腹腔交感神经节后再电刺激PVN +GI-RI,损伤较电刺激组分别减轻 6 9.0 2 %、5 5 .16 % ,差异具有显著性 (P <0 .0 1) ;静脉给予β -受体阻断剂心得安能完全消除电刺激PVN引起的GI-RI的保护作用 (P <0 .0 1) ,损伤较电刺激组加重 2 11.7% ;给予M -受体阻断剂阿托品、α -受体阻断剂酚妥拉明不影响电刺激PVN引起的GI -RI的保护作用。结论　迷走神经、交感神经参与了PVN对GI-RI的保护作用     

核因子κB在大鼠胃缺血再灌注损伤中的表达及意义

目的研究核因子κB(NF-κB)在大鼠胃缺血再灌注损伤中的表达及意义。方法采用大鼠胃缺血再灌注(gastric ischemia/reperfusion,GI/R)模型(夹闭腹腔动脉30 min后再灌注),分别于再灌注0.5、1、32、4 h取胃,计算胃黏膜损伤指数。应用免疫组化、Western blot方法检测胃黏膜NF-κB p65。结果大鼠GI/R后引起胃黏膜损伤,再灌注1 h时损伤最明显,随后降低,24 h接近正常。GI/R后胃黏膜NF-κB阳性细胞数和蛋白表达量增多,与胃黏膜损伤变化规律一致。结论NF-κB在大鼠GI/R损伤过程中发挥着重要作用。     

室旁核内血管紧张素Ⅱ对大鼠胃缺血/再灌注后胃黏膜NF—κB表达的影响

目的 研究室旁核（paraventricular nucleus，PVN）内注射血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）对大鼠胃缺血／再灌注（gastricischemia／reperfusion，GI／R）后的胃黏膜核因子κB（NF-κB）表达的影响。方法采用核团微量注射法以及夹闭大鼠腹腔动脉30min后松开动脉夹血流复灌1h的GI／R模型，计数胃黏膜损伤指数并应用免疫组化方法检测胃黏膜NF-κBp65的表达。结果①GI／R可引起胃黏膜损伤，PVN内微量注射AngⅡ（0．3μl含30ng）后GI／R损伤显著减轻；侧脑室注射（icv）AngⅡ受体拮抗剂洛沙坦，能阻断AngⅡ对GI／R损伤的保护作用，使GI／R损伤明显加重；②正常大鼠胃黏膜可见NF-κB表达，并主要在胞质表达；GI／R后，NF-κB表达增多，尤其是胞核表达明显增加；PVN内微量注射AngⅡ后，可使胃黏膜NF-κB表达量减少；icv给予洛沙坦可阻断AngⅡ的效应，即GI／R损伤后胃黏膜NF-κB阳性细胞数表达量增加。结论PVN内微量注射AngⅡ对大鼠GI／R损伤有明显的保护作用，且该作用可被洛沙坦翻转；NF-κB在PVN内微量注射AngⅡ减轻大鼠GI／R损伤过程中可能发挥着重要作用。     

核因子kB在大鼠胃缺血再灌注损伤中的表达及意义

目的研究核因子kB（NF-kB）在大鼠胃缺血再灌注损伤中的表达及意义。方法采用大鼠胃缺血再灌注（gustric ischemia/reperfusion, CI／R）模型（夹闭腹腔动脉30min后再灌注），分别于再灌注0．5、1、3、24h取胃，计算胃黏膜损伤指数。应用免疫组化、Western blot方法检测胃黏膜NF-kB p65。结果大鼠GUR后引起胃黏膜损伤，再灌注1h时损伤最明显，随后降低，24h接近正常。GI／R后胃黏膜NF—kB阳性细胞数和蛋白表达量增多，与胃黏膜损伤变化规律一致。结论NF-kB在大鼠CI／R损伤过程中发挥着重要作用。     

银杏叶提取物对肾缺血再灌注损伤肾小管细胞凋亡调控基因表达的影响

目的 观察银杏提取物（Egb）对大鼠肾缺血再灌注后肾小管细胞凋亡调控基因bcl-2和bax表达的影响,探讨Egb肾保护作用的分子生物学机制.方法 用动脉夹夹闭大鼠双侧肾蒂45 min再灌注24 h方法制成急性肾缺血再灌注损伤模型.采用脱氧核苷酸末端转移酶介导的DNA原位末端标记技术检测细胞凋亡的情况.免疫组化检测Bcl-2、Bax表达.结果 缺血再灌注组较假手术组肾小管凋亡细胞数明显增多,Bcl-2、Bax表达均增强,Bax/Bcl-2比值增高;银杏叶提取物处理组较缺血再灌注组凋亡细胞数明显减少,Bcl-2表达进一步增强,而Bax表达减弱,Bax/Bcl-2降低.结论 银杏叶提取物可能通过影响Bcl-2、Bax表达,抑制细胞凋亡,从而发挥对缺血再灌注损伤肾脏的保护作用.     

Role of mitogen-activated protein kinases in the regulation of paraventricular nucleus to gastric ischemia-reperfusion injuries

Background We investigated the role in electrical stimulations of paraventricular nucleus （PVN） on gastric mucosal cells and the activity of mitogen-activated protein kinases （MAPKs） family members induced by gastric ischemia-reperfusion （GI-R）. And we elucidated the molecular mechanisms of the protection of PVN from GI-R injuries. Methods Sprague-Dawley rats were divided randomly into 4 groups： Group I, the sham-operated GI-R control group; Group II, the sham-operated electrical stimulations to PVN ＋ sham-operated GI-R control group; Group III, the GI-R group; and Group IV, the electrical stimulations to PVN ＋ GI-R group. In all of the experiments, the PVN was stimulated prior to the induction of GI-R. The GI-R model was established by clamping the celiac artery for 30 minutes to induce ischemia and then was released to allow reperfusion for 30 minutes, 1 hour, 3 hours and 6 hours, respectively. The gastric mucosal cellular apoptosis, proliferation, and the expression and activity of MAPKs protein were observed by immunohistochemistry and Western blotting, respectively. Results Compared with the GI-R group, the application of electrical stimulations in the PVN significantly depressed gastric mucosal cellular apoptosis and enhanced gastric mucosal cellular proliferation following the 30-minute, 1-hour and 3-hour intervals of reperfusion; it also promoted the activation of p-ERK during the early phase of reperfusion but inhibited the activation of p-JNK1/2 and p-p38 following the 30-minute, 1-hour and 3-hour intervals of reperfusion. Conclusions The protection of PVN against GI-R injuries may attribute to the inhibition of apoptosis and the promotion of the proliferation of gastric mucosal cells during GI-R. This protective effect is mediated by activating the ERK pathway and depressing the JNK, the JNK. p38 MAPK oathwavs of the oastric mucosal cells.     

NAC对大鼠脑缺血再灌注引起胃黏膜损伤的影响

目的研究N-乙酰-L-半胱氨酸（N-acetylcysteine,NAC）对大鼠脑缺血再灌注引起应激性胃损伤的影响。方法采用四动脉结扎法建立大鼠全脑缺血模型,缺血后静脉注射NAC（150 mg/kg）,取胃后计数胃黏膜损伤指数（gastric mucosal damage index,GMDI）,测定胃黏膜组织中丙二醛（malonaldehyde,MDA）含量、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性,采用原位检测（TUNEL）法检测胃黏膜细胞凋亡情况。结果 NAC可以降低大鼠脑缺血再灌注引起应激性胃损伤时的胃黏膜损伤指数,使胃黏膜组织中MDA含量减少、SOD活性增强,抑制胃黏膜细胞凋亡。结论 NAC对大鼠脑缺血再灌注引起的应激性胃损伤具有保护作用,这种保护作用是通过抑制氧化应激、减少胃黏膜细胞凋亡而实现的。     

电刺激中缝背核对大鼠应激性胃粘膜损伤的影响

以寒冷加束缚制备大鼠应激必占膜损伤模型，观察电刺激中缝背核对应激性胃粘膜损伤的影响，结果表明：（１）电刺激ＤＲＮ能明显地减轻应激性胃粘膜损伤，这一效应可被腹腔注射５－ＨＴ合成阻断剂对氯苯丙氮酸所逆转；（２）电解损毁ＤＲＮ可使就激性胃占膜损伤加重，向ＤＲＮ内胞体毒性剂Ｌ－谷氨酸与电解损毁ＤＲＮ的效应相同。     

人脐带间质干细胞来源的外切体对大鼠心肌细胞缺血/再灌注损伤的作用

［摘要］目的： 研究人脐带间质干细胞来源的外切体（hucMSC exosome）对大鼠缺血/再灌注（I/R）损伤心肌细胞的修复作用。方法： 在体内,建立大鼠I/R模型：经冠状动脉左前降支（LAD）结扎缺血30 min后取消结扎恢复灌注,与此同时,尾静脉注射hucMSC exosome。在体外,建立大鼠H9C2(2 1)心肌细胞缺氧/复氧（H/R）模型：细胞于无血清低糖培养基中缺氧（5% CO2/93% N2）24 h后,用含hucMSC exosome的高糖10% FBS培养液复氧24 h。采用MTT法、TUNEL法、心肌酶谱以及线粒体膜电位等方法检测大鼠心肌细胞的增殖和凋亡状况。结果： 在体内,心肌细胞经I/R损伤后,hucMSC exosome与hucMSC处理组较PBS处理组血清乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶同工酶（CK MB）值均下降;TUNEL结果显示,前两组较PBS处理组心肌细胞凋亡明显减少;在体外,心肌细胞经H/R损伤后,MTT实验表明细胞增殖显著减弱,hucMSC exosome作用后,TUNEL及线粒体膜电位(ΔΨm)结果分别显示受损心肌细胞凋亡以及膜电位下降明显减少。结论： hucMSC exosome能有效抵抗心肌细胞因缺血/再灌注损伤而引起的细胞凋亡。     

缺血后处理对再灌注损伤大鼠胃黏膜细胞ERK表达的影响

目的探讨缺血后处理（ischemic post-conditioning,I-postC）对大鼠胃黏膜再灌注（GI-R）损伤的影响及细胞机制。方法制备胃缺血后处理模型。实验分为3组（n=6）：假手术组（Sham组）、缺血-再灌注组（I-R组）、缺血后处理组（I-postC组）。用末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记法（TUNEL）检测胃黏膜细胞的凋亡,用免疫组化方法检测胃黏膜细胞增殖及凋亡相关基因p-ERK的表达。结果与Sham组相比,I-R组胃黏膜细胞凋亡增加及增殖减少,p-ERK表达下调;与I-R组相比,缺血后处理显著降低胃黏膜细胞凋亡率,同时可以增加胃黏膜增殖率及p-ERK的表达。结论缺血后处理可抑制胃黏膜细胞凋亡,促进细胞增殖。其机制可能与p-ERK的表达上调有关。     

长链非编码RNA ZEB1-AS1通过HMGB1/TLR-4信号轴加剧大鼠脑缺血/再灌注损伤

目的 探讨长链非编码RNA ZEB1-AS1在脑缺血/再灌注损伤（CI/RI）中的作用及其机制。方法 通过脑中动脉闭塞构建雄性SD大鼠局灶性CI/RI模型,实时定量PCR和Western blot分别检测ZEB1-AS1和HMGB1的时序表达并确定了CI/RI最佳时间（2 h/24 h）。将大鼠分为Sham组、CI/RI组、CI/RI+si-NC组、CI/RI+si-ZEB1-AS1组、CI/RI+OE-NC组、CI/RI+OE-ZEB1-AS1 组。向CI/RI大鼠侧脑室注射ZEB1-AS1沉默/过表达载体及对照载体后,通过神经功能缺损评分和转盘实验分析认知功能;干湿重法分析脑水含量;Western blot检测白蛋白水平以评价血脑屏障完整性;ELISA法分析脑脊液和血清IL-1β和TNF-α水平。分别用FJC和TUNEL法检测CI/RI大鼠皮层中神经元丢失和细胞凋亡情况,Western blot分析HMGB1和TLR-4水平。此外,体外建立SH-SY5Y细胞氧-糖剥夺/复氧模型来模拟缺血/再灌注微环境,TUNEL法、Hoechst 33258染色、流式细胞术检测ZEB1-AS1 沉默对神经元凋亡的影响;Western blot 分析 HMGB1 和 TLR-4 水平。结果 qPCR 和 Western blot 结果显示,ZEB1-AS1和HMGB1在CI/RI大鼠脑组织中的表达随着再灌注时间的延长升高（24 h达到峰值）,而后逐渐降低。神经功能缺损评分和转盘试验结果显示,与OE-NC组相比,ZEB1-AS1过表达加重了CI/RI大鼠认知功能受损（P<0.05）;而si-ZEB1-AS1组大鼠的认知功能则好于 si-NC 组（P<0.01）。OE-ZEB1-AS1 组大鼠的脑水含量高于 OE-NC 组（P<0.05）;而与 si-NC 组相比,si-ZEB1-AS1组大鼠的脑水含量减少（P<0.01）。血脑屏障渗漏检测数据提示,si-ZEB1-AS1组大鼠脑脊液中白蛋白的含量低于si-NC组（P<0.01）;OE-ZEB1-AS1组大鼠脑脊液中的白蛋白含量则高于OE-NC组（P<0.05）。ELISA结果显示,si-ZEB1-AS1组大鼠脑脊液和血清IL-1β和TNF-α水平低于si-NC组（P<0.01）;而OE-ZEB1-AS1组大鼠脑脊液和血清IL-1β和TNF-α含量高于OE-NC 组（P<0.01）。OE-ZEB1-AS1 组大鼠皮层 FJC 阳性神经元数量高于 OE-NC 组（P<0.01）;与此相反,si-NC 组相比,ZEB1-AS1敲减则降低了FJC阳性神经元数量（P<0.01）。Western blot结果显示,与OE-NC组相比,ZEB1-AS1过表达促进了HMGB1和TLR-4水平（P均<0.01）;而ZEB1-AS1敲减则产生相反的结果（P<0.01）。细胞水平上,与si-NC组相比,ZEB1-AS1敲减降低了 TUNEL阳性细胞数（P<0.01）;流式细胞术检测结果进一步证实该现象。此外,Western blot结果进一步证实,ZEB1-AS1敲减下调了HMGB1和TLR-4水平（P均<0.01）。结论 长链非编码RNA ZEB1-AS1通过HMGB1/TLR-4信号轴加剧脑缺血/再灌注损伤。     

幽门螺杆菌培养上清液对大鼠胃黏膜上皮细胞增殖的影响

目的:研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)的代谢产物在胃黏膜上皮细胞增殖中的作用.方法:用液体培养的方法培养产毒Hp菌株NCTC11637,然后提取上清液,用浓缩上清液(concentrated broth culture supernatant,CCS)灌鼠胃.采用放射免疫方法测定血请胃泌素,用免疫组织化学SP(streptavidin/perosidase)法检测胃黏膜增殖细胞核抗原 (proliferation cell nuclear antigen,PCNA)和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的表达.结果:灌服CCS组与对照组比较,胃黏膜PCNA标记指数阳性率升高、差异具有显著性,胃黏膜细胞表皮生长因子受体在灌服CCS组有4/8阳性,对照组无1例阳性;血清胃泌素升高,但统计学上差异无显著性.结论:产毒Hp培养上清液可以促进胃黏膜上皮细胞的增殖,可能促进胃癌的发生.     

miRNA-34a 对人胃癌 SGC-7901细胞增殖、凋亡的影响

目的：研究 microRNA-34a(mir-34a)在人胃癌细胞中的表达水平及对胃癌 SGC-7901细胞增殖、凋亡的影响。方法通过实时定量 PCR(RT-PCR)检测人正常胃黏膜上皮细胞 GES 及人胃癌细胞株 AGS、SGC-7901、MKN-45、BGC-823中 mir-34a 的表达水平。体外将表达人 mir-34a ( has-mir-34a)慢病毒感染人胃癌 SGC-7901细胞。荧光显微镜观察评估细胞感染情况,MTT 实验、流式细胞术检测感染后胃癌SGC-7901细胞的增殖、细胞周期及凋亡情况。结果胃癌细胞 AGS、SGC-7901、MKN-45、BGC-823中 mir-34a 的表达水平较正常胃黏膜上皮细胞 GES 明显降低,其中以胃癌 SGC-7901细胞降低最为明显(P <0．01)。与阴性对照组相比, mir-34a 感染组 SGC-7901细胞增殖明显减慢( P <0．01), G1/ G0期细胞比例显著增加(P <0．05),细胞凋亡率显著升高(P <0．01)。结论 mir-34a 在多种人胃癌细胞,尤其是SGC-7901细胞中呈低表达。 mir-34a 可以抑制胃癌 SGC7901细胞的增殖,诱导细胞周期停滞及细胞凋亡。