磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶在肝脏疾病中的作用研究进展

磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶(PEMT)能够催化磷脂酰乙醇胺(PE)转化为磷脂酰胆碱(PC),并参与肝细胞内多种代谢反应,与肝脂质代谢、内质网应激反应及细胞自噬等过程均密切相关。越来越多的研究表明PEMT酶活性的异常能促进脂肪肝炎、肝衰竭、肝癌等多种疾病的发展。文章对PEMT在肝脏疾病中的作用作一综述。     

磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶基因G175A多态性与非酒精性脂肪肝的关系

目的研究磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶(PEMT)基因外显子8的G175A多态性与非酒精性脂肪肝(NAFLD)的关系。方法采用聚合酶链反应限制性片段长度多态法检测并比较51例NAFLD患者和50名健康对照者PEMT基因外显子8的G175A基因型、等位基因频率,分析不同基因型对各临床指标的影响。结果NAFLD组和正常对照组PEMT基因175位点的基因多态性分布差异有显著性(GG、GA、AA在两组中的比例分别是58.8%、78.0%和39.2%、22.0%和2.0%、0.0%,χ2=4.289,P=0.038),NAFLD组A等位基因频率高于对照组(21.6%比11.0%,χ2=4.127,P=0.042),NAFLD患者中G175A突变型的高密度脂蛋白水平低于野生型患者(2.88±1.02 vs 2.04±0.96,P<0.05),而低密度脂蛋白水平明显高于野生型(3.22±0.88 vs 3.87±0.35,P<0.01),Logistic回归分析显示基因位点pemtG175A突变型、低密度脂蛋白是脂肪肝形成的主要危险因素(P<0.05)。结论PEMT基因外显子8的G175A多态性与NAFLD发病易感性相关。     

STAT1和STAT2在磷脂酰乙醇胺诱导肝癌HepG2细胞生长抑制中的作用

目的探讨磷脂酰乙醇胺(PE)诱导肝癌HepG2细胞生长抑制中STAT1和STAT2的作用。方法实验以人肝癌细胞系HepG2为材料,分别设置了空白对照组、0.125、0.25、0.5和1 mmol/L PE处理组。应用MTT法检测细胞生长,荧光免疫组化检测细胞内STAT1和STAT2表达。结果与对照组相比,PE各处理组对HepG2细胞生长的抑制作用具有剂量依赖性,并可诱导STAT1和STAT2高表达,而AG490可以部分逆转PE的效应。结论 STAT1和STAT2参与了PE诱导HepG2细胞的生长抑制过程。     

实时聚合酶链反应检测切割穹窿海马伞大鼠海马内磷脂酰乙醇胺结合蛋白mRNA的表达变化

目的探讨切割穹窿海马伞大鼠海马与正常海马内磷脂酰乙醇胺结合蛋白（PEBP）mRNA的表达差异。方法42只SD大鼠随机分成正常对照组和切割穹隆海马伞后1、3、7、14、21及28d组,每组6只。提取各组大鼠的海马组织总RNA,应用实时PCR技术观察切割穹窿海马伞后海马中PEBPmRNA的表达变化。结果PEBPmRNA在切割后3d表达开始上升,7d达最高水平,随后缓慢下降,21d时降至正常。结论切割穹窿海马伞后海马中PEBP的高表达可能与诱导神经干细胞向胆碱能神经元分化的海马神经再生有关。     

大鼠正常肝细胞与肝癌细胞磷脂酰胆碱及脂肪酸组成的比较研究

目的 :探讨肝癌细胞的膜磷脂组分变化。方法 :采用高效薄板层析方法并配合无机磷的测定 ,比较了大鼠正常肝细胞与癌变细胞磷脂的组成及摩尔分数 ,用气相色谱法对其中含量最多的磷脂组分磷脂酰胆碱 (PC)的脂肪酸组成进行了测定。结果与结论 :肝癌细胞的PC含量明显减少 (P <0 .0 5 ) ,PC中长链及不饱和脂肪酸含量显著减少 (P <0 .0 5 )。     

热休克蛋白-27与磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3在原发性肝癌中的表达及意义

目的通过检测热休克蛋白-27(HSP-27)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC-3)在原发性肝癌(PHC)中的表达,探讨二者在诊断PHC的作用及其临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学染色法检测32例PHC组织、30例肝硬化组织、25例肝脏良性占位组织及31例肝炎组织中GPC-3、HSP-27的水平,并分析其与PHC的临床因素之间的关系。结果 HSP-27和GPC-3均在肝癌组织中高表达,与肝硬化、肝脏良性占位、肝炎组织中的表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。HSP-27在肝癌组织的表达与肿瘤的病理分级及TNM分期有关,但GPC-3的表达与肿瘤的病理分级及TNM分期无关。结论 HSP-27、GPC-3在肝癌组织中高表达,与肝癌的发生、发展、转移有关,可能成为新的肿瘤标志物。     

肝癌的CT表现与磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3,热休克蛋白70表达及病理分级的相关性

目的探讨肝细胞癌(HCC)术前CT表现与术后癌组织磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC-3),热休克蛋白70(HSP70)的表达水平、病理分级的关系。方法搜集2013年7月至2015年8月经病理证实为HCC的患者62例,所有病例术前行CT平扫及3期增强扫描,通过对比患者术前CT表现与术后癌组织GPC-3,HSP70的表达水平、病理分级,统计分析其是否存在相关关系。结果本研究62例HCC患者中肝癌的大小、动脉期血管强化及肝癌的供血类型与GPC-3表达水平存在相关性,不同供血类型的肝癌HSP70的表达水平存在差异;肝癌的大小、边缘、瘤内出血坏死与其病理分化程度相关;肝癌的病理分化程度越低GPC-3及HSP70的表达水平越高。结论肝癌的CT征象可在一定程度上反映癌组织GPC-3及HSP70的表达情况及肝癌的病理分化程度,GPC-3和HSP70表达水平与肝癌的病理分级相关。     

蛋白精氨酸甲基转移酶在E3大鼠哮喘模型中表达变化的研究

目的 观察1～6型蛋白精氨酸甲基转移酶(PRMTs)在E3大鼠急性哮喘模型肺脏和脾脏中的表达变化.方法 构建卵清蛋白诱导的E3大鼠急性哮喘模型,分为对照组和哮喘组,每组各10只大鼠,病理及生化检测评估模型构建情况,半定量PCR检测1～6型PRMTs的表达差异.结果 和对照组相比,哮喘组大鼠肺脏组织中PRMT1(P<0.01)、PRMT2(P<0.01)、PRMT3(P<0.05)、PRMT5(P<0.05)的表达有显著性升高,而PRMT4(P<0.05)的表达显著性降低;哮喘组大鼠脾脏组织中PRMT2(P<0.05)、PRMT5(P<0.05)的表达也出现显著性升高.结论 蛋白精氨酸甲基转移酶在E3大鼠急性哮喘模型肺脏和脾脏中有差异性表达,这可能在哮喘发病的基冈转录后调节过程中发挥着重要的作用.     

非小细胞肺癌磷脂酰肌醇蛋白聚糖-2的表达与临床病理特征及预后的关系

目的 探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖-2(GPC2)在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达水平,并分析其与临床病理特征及预后的关系。方法 选择2018年6月～2019年6月在浙江省丽水市中心医院行肿瘤根治性切除术的NSCLC患者90例,收集癌组织及相应癌旁组织标本,采用免疫组化染色法观察NSCLC组织中GPC2表达情况,Western Blot法检测组织中GPC2的表达水平;利用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,分析GPC2表达与预后的关系。结果在NSCLC患者癌组织中GPC2阳性表达率73.33%(66/90)显著高于癌旁组织22.22%(20/90),差异有统计学意义（t=47.115,P<0.01）;NSCLC患者癌组织中GPC2表达与患者年龄、性别、临床分期、T分期、N分期、M分期、肿瘤直径、病理类型无显著关系（P>0.05）,与肿瘤分化程度有关,差异有统计学意义（P<0.01）;Kaplan-Meier分析结果显示,GPC2阳性表达患者3年生存率57.58%(38/66),显著低于阴性表达患者83.33%(20/24),差异有统计学意义（χ2=4.308,P=0...     

热休克蛋白27与磷脂酰肌醇蛋白聚糖3在原发性肝癌组织中的表达及其临床意义

目的通过检测热休克蛋白27（HSP27）,磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC3）在原发性肝癌中的表达,探讨两者在诊断原发性肝癌及临床病理特征的意义。方法采用免疫组织化学染色SP法检测重庆市巴南区人民医院32例手术切除的原发性肝癌组织、30例肝硬化组织、25例肝脏良性占位组织及31例肝炎组织中GPC3、HSP27的表达,并分析其与原发性肝癌临床因素之间的关系。结果 HSP27其在肝癌组织中高表达阳性率为56.25%（18/32）,GPC3在肝癌中的阳性率为87.50%,HSP27和GPC3均在肝癌组织中高表达,与肝硬化、肝脏良性占位、肝炎组织中的表达水平比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。HSP27在肝癌组织的表达与肿瘤的病理分级及TNM分期有关,但GPC3的表达与肿瘤的病理分级及TNM分期无关。结论 HSP27、GPC3在肝癌组织中高表达,与肝癌的发生、发展、转移有密切联系,可能成为新的肿瘤标志物。     

冬凌草甲素抑制肝癌细胞HepG-2生长的实验研究

目的 探讨冬凌草甲素诱导肝癌细胞株HepG-2凋亡的作用及其机制.方法 MTT法检测细胞存活率;Annexin V和PI染色后流式细胞术检测HepG-2细胞凋亡率;Hoechst染色后荧光显微镜观察细胞形态;Western blotting检测MAPK信号通路凋亡相关蛋白的表达.结果 冬凌草甲素作用HepG-2细胞24 h后,可剂量依赖性减少细胞存活率,半数抑制率IC50为38.41 μmol/L.高、中、低浓度冬凌草甲素处理24 h后的流式结果显示,随浓度增加细胞凋亡率明显增加,HepG-2细胞可见典型的凋亡核改变.Western blotting结果证实冬凌草甲素可降低HepG-2细胞Bcl-2、caspase-9和caspase-3的蛋白表达,增加p-JNK、p-p38、p-p53和活化的caspase-9的蛋白表达.结论 冬凌草甲素可诱导肝癌HepG-2细胞凋亡,MAPK信号转导通路凋亡相关蛋白的活化与冬凌草甲素诱导HepG-2细胞凋亡相关.     

靶向PDCD5-Caspase-3 融合基因过表达 对HepG2 肝癌细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨靶向PDCD5-Caspase-3 融合基因过表达对HepG2 肝癌细胞体外增殖与凋亡的影响。 方法 利用基因重组技术构建PDCD5-Caspase-3 融合基因,克隆到带有EGFP 基因的GV358 慢病毒表达载 体,与辅助质粒共同转染293T 细胞,通过同源重组,获得融合基因重组慢病毒PDCD5-Caspase-3。体外 转染人肝癌HepG-2 细胞72 h 后,Western bolt 检测肝癌HepG-2 细胞中PDCD5 蛋白和Caspase-3 蛋白表 达,CCK-8 法检测PDCD5-Caspase-3 融合基因过表达对HepG-2 肝癌细胞增殖的影响,流式细胞术观察其 对细胞凋亡的影响。结果 PDCD5-Caspase-3 融合基因过表达可增加HepG-2 肝癌细胞中PDCD5 蛋白和 Caspase-3 蛋白合成（P <0.05）;与对照组或空白组相比,转染72 h 后实验组细胞增殖能力下降（P <0.05）; 与对照组或空白组比较,转染72 h 后实验组细胞凋亡率增加（P <0.05）。结论 促凋亡基因PDCD5 和 Caspase-3 联合表达可抑制HepG2 肝癌细胞增殖,并促进其凋亡,可作为肝癌治疗潜在靶点。     

C-erbB-2蛋白表达与胃癌转移的关系

目的 探讨C—erbB—2基因表达与胃癌浸润、转移的关系。方法 用免疫组化方法检测30例胃癌C—erbB—2基因表达情况，并同时检测腹腔脱落癌细胞，比较两者的关系。结果 C—erbB—2基因表达阳性率为36．7％，C—erbB—2阳性染色与胃癌淋巴结转移、病理分期、腹腔脱落癌细胞检出率密切相关。结论 C—erbB—2癌基因表达参与了胃癌的浸润、转移机制，对判断胃癌的预后有一定意义。     

低密度脂蛋白诱导大鼠系膜细胞增殖与COX-2表达的关系

目的观察LDL刺激下大鼠系膜细胞的增殖情况和COX-2 mRNA和蛋白表达水平的变化。探讨COX-2表达和LDL、系膜细胞增殖之问的关系。方法以体外培养的大鼠系膜细胞为研究对象。应用不同浓度的LDL刺激系膜细胞。应用MTT法检测细胞增殖；应用KT-PCK和Westem Blot的方法检测COX-2 mKNA和蛋白的表达。分析COX-2 mRNA和蛋白的表达与LDL浓度、系膜细胞增殖的相关性。结果以浓度为3．125-100．000μg／mL的LDL刺激系膜细胞，可促进系膜细胞的增殖，在LDL 0．000-50．000μg／mL的浓度范围内，系膜细胞的增殖和LDL的浓度呈正相关；以浓度为3．125-100．000μg／mL的LDL刺激系膜细胞，可上调COX-2 mRNA和蛋白的表达。在LDL0．000-50.000μg／mL的范围内，COX-2 mRNA和蛋白的表达与LDL浓度、系膜细胞增殖呈正相关。结论LDL可以诱导系膜细胞增殖，上调COX-2表达，在LDL 0．000-50．000μg／mL的范围内，系膜细胞增殖与LDL浓度具有相关性，COX-2的表达与LDL浓度、系膜细胞增殖具有相关性。     

NPPB 对肝癌细胞增殖的影响

目的观察氯通道阻断剂 5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸(NPPB)对人肝癌 HHCC 细胞增殖的影响.方法将 NPPB 作用于 HHCC 细胞,应用细胞计数法及 MTT 比色分析法观察细胞增殖情况;同时应用流式细胞仪检测其细胞周期时相的变化.结果 NPPB 使 HHCC 细胞数及 MTT 光吸收值(OD)较对照组均显著降低,去除 NPPB 后,OD 值便可逐渐恢复;经 100 μmol/L 的 NPPB 处理 48 h 时,HHCC 细胞 G1 期细胞比例比对照组明显增高,S 期及 G2 期细胞比例则明显低于对照组.结论 NPPB 能可逆抑制肝癌细胞增殖,并具有浓度依赖性;NPPB 使细胞增殖停滞在 G1 期.     

膜联蛋白A7与IGFBP2结合抑制肝癌细胞增殖

目的 分析膜联蛋白A7(ANXA7)与肝癌发生的相关性及筛选、鉴定ANXA7的相互作用分子,探讨ANXA7在肝癌发生中的机制.方法 通过实时定量PCR法检测48对肝癌与癌旁组织以及多种肝和肝癌细胞株中ANXA7表达量的差异,并通过肝癌细胞ANXA7过表达及特异性干扰抑制分析其对肝癌细胞增殖的影响.采用免疫共沉淀法筛选与ANXA7发生结合的蛋白,并以点突变法分析蛋白质相互作用的关键位点;用蛋白免疫印迹法分析了ANXA7对肝癌相关的重要信号通路中ERK1/2磷酸化水平的影响.结果 ANXA7在肝癌组织与肝癌细胞中均呈下调表达.胰岛素样生长因子结合蛋白2(insulin-like growth factor binding protein 2,IGFBP2)能与ANXA7蛋白发生特异性结合,且IGFBP2上的RGD序列是两者结合的关键位点.肝癌细胞中ANXA7表达上调能抑制肿瘤细胞增殖(P＜0.05),并能使IGFBP2介导的ERK1/2的磷酸化水平降低.下调ANXA7的表达可促进肝癌细胞增殖(P＜0.01),磷酸化ERK1/2的水平升高.结论 ANXA7可能作为一种抑癌基因,通过介导IGFBP2对ERK1/2磷酸化水平的影响参与对肝癌增殖的调控.     

ERK/AP-1途径在蛋白酶激活受体2促进肝癌细胞增殖中的作用

目的 探讨胰蛋白酶和蛋白酶激活受体2(PAR-2)激动剂SLIGKV-NH_2对肝癌细胞增殖的影响及其细胞内信号转导机制.方法 免疫荧光及逆转录(RT)-PCR法检测HepG2细胞PAR-2蛋白及mRNA的表达;用SLIGKV-NH_2、胰蛋白酶、反PAR-2激动肽VKGILS-NH_2及PD98059干预细胞生长.用流式细胞术检测细胞周期改变情况;噻唑蓝(MTT)法检测对细胞增殖能力的影响;RT-PCR法检测PAR-2、c-fos及增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA表达变化;Western印迹检测c-fos和PCNA蛋白表达变化.结果 肝癌HepG2细胞存在PAR-2蛋白和mRNA的表达.50μmol/LSLIGKV-NH_2、25 nmol/L胰蛋白酶处理细胞后,PAR-2 mRNA表达量(PAR-2/β-肌动蛋白)分别为0.70±0.04,0.99±0.05,高于对照组(0.35±0.05,F=135.534,P<0.01).胰蛋白酶、SLIGKV-NH_2组G_0/G_1期比例均明显低于对照组[(56.11±0.85)%、(57.85±0.46)%比(79.12±0.67)%,均P<0.01],S期、G_2/M期细胞比例和细胞增殖指数(PI)则明显高于对照组(均P<0.01).胰蛋白酶、SLIGKV-NH_2可以诱导肝癌HepG2细胞增殖(F=319.287,P<0.01),上调c-fos、PCNA mRNA和蛋白的表达(均P<0.01),且这些作用可被ERK激活性蛋白激酶(MEK)抑制剂PD98059抑制(均P<0.01);反PAR-2激动肽VKGILS-NH_2对HepG2细胞增殖能力的影响不明显,与对照组相比差异无统计学意义(均P>0.05).结论 肝癌HepG2细胞表达PAR-2.胰蛋白酶、SLIGKV-NH_2可以通过激活PAR-2诱导HepG2细胞的增殖活性,且该过程部分由ERK/AP-1信号通路所介导.     

胰岛素对大鼠血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的　探讨胰岛素对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响 .方法　体外进行大鼠血管平滑肌细胞的培养 ,以 5～ 10代细胞为实验对象 ,随机分成空白对照组和胰岛素组 ,胰岛素组又按浓度 1× 10 - 9、1× 10 - 8、1× 10 - 7和 1× 10 - 6 mol· L- 1分为 4小组 ,在加药后 2 4 h、4 8h和 72 h用 MTT法分析细胞增殖活力 ,免疫细胞化学观察细胞核增殖抗原 (PCNA)的表达 ,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的 d UTP缺口末端标记法检测 H2 O2 诱导的细胞凋亡 .结果　加药 4 8h后 ,1× 10 - 9mol· L- 1胰岛素组的 MMT A值 (0 .4 2± 0 .0 4 )高于空白组(0 .30± 0 .0 2 ) ,P<0 .0 5 ,低于 1× 10 - 6 mol· L- 1 胰岛素组(0 .5 2± 0 .0 5 ) ,P<0 .0 5 ;1× 10 - 9mol·L- 1胰岛素作用 4 8h后细胞的 MMT A值比空白组增加 4 0 % ,高于 2 4 h细胞的MMT A值增加率 (2 7% ) ,P<0 . 0 5 ;1× 10 - 9～ 1× 10 - 6mol· L- 1 胰岛素作用 4 8h后细胞 PCNA的表达率 (5 0 %～80 % )均高于空白对照组的 (30 % ) P<0 .0 5 ;加药 2 4 h后 ,1× 10 - 6 mol· L- 1胰岛素组细胞凋亡率 (30 % )低于空白组(70 % ) P<0 .0 5 .结论　胰岛素有明显促 VSMC(vascularsmooth m uscle cells)增殖的作用 ,并且这种作用时间和浓度依赖性 ;同时胰岛素     

西瑞香素对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的 探讨西瑞香素对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 用不同浓度的西瑞香素作用于体外培养的HepG2细胞,采用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测西瑞香素对HepG2细胞增殖抑制能力;采用AnnexinV/PI双染流式细胞术测定西瑞香素对HepG2细胞凋亡的影响;采用PI单染流式细胞术检测西瑞香素对HepG2细胞周期的影响.结果 西瑞香素可抑制HepG2细胞的增殖,且存在明显的浓度和时间依赖关系;流式细胞术检测显示西瑞香素作用48 h后,实验组细胞未出现明显的早期凋亡细胞群.但实验组处于S期的细胞数较对照组明显减少（P＜0.05）,G0/G1期的细胞较对照组明显增多（P＜0.05）.结论 西瑞香素对人肝癌HepG2细胞的体外增殖具有抑制作用,可能与阻滞细胞周期有关.     

亚砷酸对肝癌细胞增殖及PCNA,c-Myc蛋白表达的影响

目的:探讨亚砷酸对人肝癌BEL-7402细胞增殖及增殖细胞核抗原(PCNA),c-Myc蛋白表达的影响.方法:应用四氮唑盐(MTT)比色法、细胞群体倍增时间(TD)、细胞集落形成试验观察亚砷酸对BEL-7402细胞增殖的影响,免疫组织化学法观察亚砷酸对BEL-7402细胞PCNA,c-Myc蛋白表达的影响.结果:亚砷酸处理后BEL-7402细胞生长抑制率上升(2.0,4.0,8.0 μmol/L的亚砷酸作用24,48,72 h后抑制率分别为27.13%,42.65%,47.74%;35.52%,53.24%,60.41%;50.61%,65.88%,70.81%;与对照组比较P＜0.05),TD逐渐延长[2.0,4.0,8.0 μmol/L的亚砷酸作用48h后TD分别为(24.68±3.99);(32.42±4.46);(36.95±8.91);与对照组比较P＜0.05及P＜0.01],集落形成率下降(0,8.0 μmol/L的亚砷酸作用7d后集落形成率分别为46.00%,18.80%;P＜0.05),免疫组化结果显示亚砷酸处理后的BEL-7402细胞PCNA,c-Myc蛋白的表达明显减弱.结论:亚砷酸能抑制BEL-7402细胞增殖,其机制可能与PCNA,c-Myc蛋白的表达下调有关.