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目的: 了解氨肽酶抑制剂乌苯美司(bestatin)能否增强全反式维甲酸(ATRA)对NB4细胞的诱导分化作用,及此过程中NB4细胞c-myc mRNA表达水平的改变。 方法: MTT法检测药物抑制细胞生长的作用。流式细胞仪测细胞表面分化抗原CD11b及四氮唑蓝(NBT)还原实验检测NB4细胞的分化。RT-PCR检测细胞c-myc mRNA表达水平。 结果: 50 mg/L、75 mg/L、100 mg/L乌苯美司与10 nmoL/L ATRA联合处理72 h,均能明显增强NB4细胞的NBT还原能力,与10 nmoL/L ATRA组差异显著(P<0.05,P<0.01)。从48 h到96 h,100 mg/L乌苯美司时间依赖性地增强10 nmoL/L ATRA诱导NB4细胞的NBT还原能力,与相应时点10 nmoL/L ATRA组差异明显(P<0.01)。100 mg/L乌苯美司与10 nmoL/L ATRA联合应用72 h,NB4细胞CD11b表达率明显高于10 nmoL/L ATRA组(P<0.01)。50 mg/L、75 mg/L、100 mg/L乌苯美司与10 nmoL/L ATRA联合处理4 h,NB4细胞c-myc mRNA表达水平明显低于单用ATRA组(P<0.05,P<0.01);药物联合应用各组NB4细胞的c-myc mRNA表达水平与NBT还原能力之间呈负相关(r=-0.917,P<0.05)。 结论: 乌苯美司可能通过下调NB4细胞c-myc mRNA的表达,从而增强ATRA诱导NB4细胞分化的作用。 相似文献
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目的:研究sentrin特异性蛋白酶3(SENP3)对大鼠成骨细胞端粒酶活性及端粒长度的影响。方法:首先0.2 mmol/L H_2O_2处理体外培养的大鼠成骨细胞后,Western blotting法检测SENP3及特异性蛋白1(Sp1)的表达。pc DNA3.0-SENP3转染成骨细胞,分别于24 h、48 h、72 h后采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力的变化。转染48 h后,Western blotting法检测Sp1和端粒酶逆转录酶(TERT)的表达,PCR-TRAP法及PCR法检测端粒酶活性及端粒长度;ELISA检测上清中碱性磷酸酶(ALP)和骨桥蛋白(OPN)的含量;放射免疫法(RIA)检测骨钙蛋白(OCN)的含量。最后将pc DNA3.0-SENP3与siRNA-Sp1共转染成骨细胞,并检测以上指标。结果:H_2O_2处理成骨细胞后,SENP3和Sp1的表达显著上升。pc DNA3.0-SENP3转染成骨细胞后,Sp1和TERT的表达显著上升,细胞活力、ALP、OPN及OCN含量也都显著上升;端粒酶活性显著增加及端粒长度缩短显著延缓。而当pc DNA3.0-SENP3与siRNA-Sp1共转染成骨细胞后,细胞活力,ALP、OPN及OCN含量,端粒酶活性及端粒长度均未发生显著变化。结论:SENP1通过上调Sp1的表达促进TERT的表达,增加端粒酶活性上升及延缓端粒长度缩短,从而增强成骨细胞增殖能力。 相似文献
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IL-4基因转染诱导肝母细胞瘤分化及抑制端粒酶活性 总被引:5,自引:0,他引:5
目的 研究人白细胞介素4(human interleukin-4,hIL-4)基因转染对肝母细胞瘤细胞的诱导分化和对端粒酶活性的影响。方法 以逆转录病毒载体(PL-IL-4-SN)将hIL-4基因导入人肝母细胞瘤细胞系Hep G2细胞。台盼蓝拒梁,放射免疫测定,流式细胞仪细胞周期分析,原位杂交,PCR-ELISA等方法检测基因转染后细胞形态,甲胎蛋白合成,原癌基因的表达及端粒酶活性变化。 相似文献
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乳腺良恶性病变组织端粒长度和端粒酶活性检测 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 比较乳腺良恶性病变端粒长度改变及其在肿瘤发生发展中的意义 ;探讨端粒酶活性与临床病理参数的关系及其在乳腺癌诊断中的价值。方法 Southern印迹杂交检测TRF长度 ,端粒重复扩增分析 (TRAP)方法检测端粒酶活性。结果 乳腺癌组织平均TRF为 (5 2± 2 8)kb ,与正常组织比较明显缩短 (P <0 0 0 1) ,从正常乳腺组织到乳腺良性病变、乳腺原位癌及浸润性癌平均TRF呈递减趋势。 5 8例乳腺癌中 4 9例端粒酶阳性 (84 7% ) ,端粒酶活性与临床病理参数无相关性 ;癌旁组织端粒酶为阴性 ,而 7例乳腺增生症和 6例乳腺纤维腺瘤中分别有 1例端粒酶阳性 ,与乳腺癌比其差异有显著性 (P <0 0 0 1)。结论 端粒长度在肿瘤发生发展过程中渐进性缩短 ,并最终触发端粒酶的激活 ;端粒酶活性检测有望成为乳腺癌诊断的可靠标记物 相似文献
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黄开 《医学分子生物学杂志》2003,25(6):321-324
端粒是位于染色体末段的一种特殊结构 ,具有维持染色体稳定的功能。不同的细胞 ,同一细胞的不同染色体具有不同的端粒长度 ;端粒长度是由基因控制的 ,并受到各种外界因素的影响 ;端粒长度随细胞的增殖与分化而缩短或者延长 ,细胞内在的端粒长度调控机制控制着端粒长度在一定的范围内变化。本文还分析了在端粒长度研究方面存在的问题 相似文献
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目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)诱导HL-60细胞分化过程中WT1基因及其异构体表达水平及比例变化.方法 采用ATRA诱导HL-60细胞分化,以硝基四氮唑蓝(NBT)还原实验及细胞免疫标记CD11b检测判断细胞分化程度;即时荧光定量RT-PCR方法检测HL-60细胞在诱导分化过程中总WT1、WT1(17AA+)及WT1(KTS+)的表达,并计算出WT1(+/+)、WT1(+/-)、WT1(-/+)、WT1(-/-)四种异构体的比例.结果 ATRA诱导HL-60细胞分化过程中NBT阳性率及CD11b表达阳性率与诱导分化前(0 h)相比均显著增加(P<0.05,P<0.001).随着细胞分化,WT1表达水平由0 h的(4.17±2.21)× 10~(-3)降低至96 h的(7.53±2.30)×10~(-4);17AA+和KTS+两类异构体的比例也逐渐下降,17AA+异构体比例由0 h的0.60±0.05降到96 h的0.42±0.08(P<0.05).KTS+异构体比例由0.53±0.08降至96 h的0.41±0.04(P<0.05);四种异构体的比例变化表现不一致,WT1(+/+)比例由0 h的0.32±0.06降至96 h的0.17±0.03,而WT1(-/-)比例由0 h的0.19±0.04升至96 h的0.34±0.05,另外两类异构体比例变化差异无统计学意义.结论 ATRA诱导HL-60细胞分化过程中总WT1表达水平逐渐降低,分化前异构体以WT1(+/+)为主,而分化后以WT1(-/-)为主,提示WT1基因可能通过调节四种异构体比例而发挥抑制或促进分化的作用. 相似文献
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广义的端粒由帽子、双链的串联重复序列的DNA核心部分及亚端粒构成,其结合蛋白是一个复合体,由TRF1、TRF2、TIN2、Pot1、TPP1、RAP1 6个亚单位组成;另外,还结合组蛋白的特定成分H3K9三甲基聚合体和H4K20三甲基聚合体.端粒酶主要由hTerc、hTert、dyskerin构成.端粒的功能主要受端粒酶的活性调控;而端粒酶活性主要受hTert及hTerc的转录水平和转录后的剪切、hTert的翻译等因素的调控.端粒与端粒酶结构和功能的异常与细胞衰老及肿瘤的发生、发展关系密切. 相似文献
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系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞亚群的端粒长度和端粒酶活性 总被引:3,自引:0,他引:3
本研究检测19例系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T、B细胞亚群的端粒长度和端粒酶活性,初步探讨其在SLE发病中的作用。 相似文献
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亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡及分化 总被引:2,自引:0,他引:2
急性早幼粒细胞白血病(APL)约占成人急性髓性白血病(AML)的10%,APL的特征为在粒系发育过程中,细胞的分化被阻滞于早幼粒阶段。有研究发现:与其他白血病细胞株相比,NB4细胞(APL的细胞株)抗氧化应激的能力较弱,一些临床上有效治疗APL的药物如AS2O3,可通过诱导氧化应激进而诱导NB4细胞凋亡。已经发现,作为有效的癌化学预防剂,一些硒化合物在体外能抑制多种肿瘤细胞的生长,而含硒酶或蛋白在细胞的氧化调节过程中扮演着重要的角色。本研究以NB4细胞为模型,研究了单独应用Na2SeO3在2、5、10和20μmol/L等浓度下,或… 相似文献
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目的:研究干扰素-α(IFN-α)联合高三尖杉酯碱(HHT)对K562细胞端粒酶逆转录酶及端粒酶的作用,并探讨其与细胞凋亡的关系。方法:IFN-α、HHT以及两药联合作用K562细胞后用MTT法检测细胞增殖,吉姆萨-瑞氏染色观察细胞形态,PI-Annexin VFITC双染色、流式细胞仪检测细胞凋亡,Krupp改良的荧光素标记的端粒重复扩增方法(TRAP)检测K562细胞端粒酶活性,RT-PCR方法检测hTERT mRNA表达变化。结果:5×106U·L-1 IFN-α分别联合5-40 μg·L-1 HHT诱导K562细胞凋亡从而抑制其生长,单用HHT时IC50为27.35 μg·L-1,联用5×106 U·L-1 IFN-α后IC50降为18.72 μg·L-1;IFN-α与HHT联用明显下调hTERT mRNA表达并抑制K562细胞的端粒酶活性。结论:IFN-α联合HHT可以诱导细胞凋亡,这可能与下调细胞hTERT mRNA的表达水平,抑制端粒酶活性有关。两药联合作用强于单独用药,提示临床IFN-α联合HHT治疗慢性髓细胞白血病(CML)可能比单用HHT效果更好。 相似文献
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宋述梅 《医学分子生物学杂志》1996,(6)
人类染色体的终末区域一端粒在大多数正常体细胞中随每次细胞分裂而缩短。端粒酶,一种合成端粒DNA到染色体末端的核糖核蛋白在生殖细胞和几乎所有肿瘤细胞中被活化。端粒酶维持端粒长度的稳定性,导致细胞无限增生。本研究中作者检查了56例伴有细胞遗传改变的急性髓样白血病(AML)病人中的端粒酶活性,结果在56例病人中有41例 相似文献
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端粒酶活性测定及其临床医学应用 总被引:2,自引:0,他引:2
端粒酶是由RNA和蛋白亚基组成的一种核酸蛋白复合物,它能以自身RNA为模板反转录合成端粒DNA序列,然后添加至染色体末端,以补偿细胞分裂时染色体末端的缩短,使端粒延长,端粒功能得以恢复.从而使某些增殖旺盛的细胞和肿瘤细胞的端粒保持一个动态的平衡.随着人们对端粒认识的深化,特别是1989年Morin首先在人的癌细胞系中发现端粒酶以来,肿瘤细胞永生化的"端粒-端粒酶"学说已为越来越多的研究结果所证实.端粒酶几乎在所有的恶性肿瘤进程中都有表达,但良性病变和正常组织除生殖细胞和干细胞外均不表达,由于它的广泛表达和可能作为癌症治疗的新靶点,使得端粒酶成为目前全世界的研究热点,并使之成为诊断恶性肿瘤的重要标记物之一,本文就端粒酶活性测定及其在临床医学中的应用情况作一简要综述. 相似文献
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目的:研究重组人白细胞介素13(recombinant human interleukine-13,rhIL-13)对巨核细胞白血病细胞株Dami细胞分化的影响,以及Dumi细胞白细胞介素13受体α1(Interleukine-13 receptor alpha 1,IL-13 Rα1)的表达,探讨IL-13诱导Dami细胞分化的机制。方法:Dumi细胞经无血清培养20小时后,以rhIL-13分别作用不同时间,提取总RNA,用RT—PCR检测Dumi细胞IL-13受体α1 mRNA、GPⅡb mRNA、c-myc mRNA表达水平。流式细胞仪检测在rhIL-13作用下,Dami细胞GPⅡb表达。免疫组化法检测在rhIL-13作用下,Dumi细胞c—myc的表达。图像分析仪对结果进行分析。结果:①Dami细胞表达IL-13 Rα1 mRNA,rhIL-13作用Dumi细胞4小时,IL-13 Rα1 mRNA表达降低,12小时IL-13 Rα1 mRNA表达恢复。②rhIL-13作用Dami细胞后,巨核细胞的分化标志物GPⅡb mRNA和蛋白质表达增加。③rhIL-13作用Dumi细胞,c—myc mRNA和蛋白质表达降低。结论:白细胞介素13下调c—myc表达。 相似文献
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preS2反义寡核苷酸降低端粒酶活性及诱导肝癌细胞凋亡的作用 总被引:2,自引:0,他引:2
反义核酸技术从分子水平破坏靶基因 ,已用于多种抗病毒的试验。我们以人工合成的硫代反义寡核苷酸研究针对HBV不同区段反义寡核苷酸HBV的抑制作用 ,从中筛选了效果最好的针对HBVpreS2的反义序列 (as preS2 )。为进一步探讨as preS2在肝癌治疗中的应用价值 ,以HBVDNA整合的肝母细胞瘤细胞HepG2 .2 .15为研究对象 ,采用FAC SCAN流式仪检测细胞凋亡率 ,TRAP银染测定细胞端粒酶活性 ,同时以RIA法检测培养上清中的血清铁蛋白浓度。设计合成针对pre S2基因 (per S2 )翻译起始区 (32 0 3… 相似文献
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原发性肝癌端粒酶活性的检测及临床意义 总被引:6,自引:0,他引:6
为探讨端粒酶活性化在原发性肝癌发生发展中的作用,本文采用TRAP技术,对42例手术切除的原发性肝细胞癌及癌旁组织的端粒酶活性进行检测。结果发现:42例肝癌组织有34例检出端粒酶活性,阳性率为81.0%,42例癌旁组织有12例检出端粒酶活性,阳性率为28.8%,端粒酶活性与肿瘤大小,组织学分级及肿瘤转移无显著相关,以上结果提示,检测原发性肝癌组织端粒酶活性对阐明原发性肝癌的发病机理,癌变危险性的预测 相似文献
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油酸诱导SW872前脂肪细胞分化及分化过程中促酰化蛋白的分泌 总被引:2,自引:0,他引:2
目的探讨油酸对SW872前脂肪细胞的诱导分化作用及SW872细胞分化过程中促酰化蛋白的分泌。方法体外培养SW872细胞,0.6mmol/L油酸作为诱导分化剂刺激SW872前脂肪细胞,油红O染色观察细胞形态的变化及脂滴的聚集,化学比色法测定甘油三酯的总量,ELISA方法测定培养上清中促酰化蛋白的含量。结果SW872细胞分化之前呈成纤维细胞样,胞内无脂滴,甘油三酯的含量较低;加入0.6mmol/L油酸诱导分化刺激72h时,SW872细胞已经完全分化,胞浆中脂滴明显增多,油红O染色可见胞浆中丰富的脂肪染色,甘油三酯的含量是诱导分化前的14倍(P<0.01)。诱导分化之前,SW872细胞分泌ASP的量非常低,几乎不能检测出;诱导分化72h,ASP的含量增加到1.12ng/mg细胞总蛋白质。结论油酸能诱导SW872前脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞;ASP的分泌与脂肪细胞的分化程度密切相关。 相似文献