人工饲养恒河猴、食蟹猴的繁殖性能初报

目的 探索北京地区人工饲养恒河猴与食蟹猴的繁殖性能,为温带地区猕猴的人工饲养和繁殖方式提供借鉴.方法 对军事医学科学院实验动物中心饲养的317只恒河猴繁殖群(30只雄猴,287只雌猴)和78只食蟹猴繁殖群(8只雄猴,70只雌猴)近两年的繁殖性状进行观察和统计分析.结果 恒河猴母猴妊娠率、繁殖率和成活率分别为60.73%、54.45%和96.89%.食蟹猴母猴妊娠率、繁殖率和成活率分别为79.86%、56.12%和75.00%.结论 食蟹猴和恒河猴可以成功的在温带地区饲养和繁殖,但人工饲养食蟹猴的妊娠率与产仔率较恒河猴高,而仔猴成活率则低于恒河猴.     

巢式PCR检测食蟹猴和猕猴中SRV和SFV

目的利用巢式PCR方法检测圈养的食蟹猴(Macaca fascicularis)和猕猴(Macaca mulatta)中猴D型逆转录病毒(Simian Type D Retrovirus SRV)和猴泡沫病毒(Simian foamy virus SFV)。方法针对SRV-env和SFV-pol基因的保守区序列设计特异性外引物,然后再设计特异性内引物。将外引物扩增出的片段克隆到PJET1.2blunt载体中作为阳性对照,运用NCBI中BLAST软件比对测序结果。用巢式PCR方法分别检测食蟹猴和猕猴中SRV和SFV。结果发现食蟹猴中SFV感染率为65.2%,SRV感染率为9.5%,猕猴中SFV感染率为60.5%,SRV感染率为12.8%。结论圈养的食蟹猴和猕猴SFV的感染率均较高,SRV感染率很低。     

昆明地区恒河猴、食蟹猴种群繁殖规律和繁殖性能研究

目的探索昆明地区人工饲养恒河猴与食蟹猴种群的繁殖规律及繁殖性能,为恒河猴和食蟹猴繁育基地建设、生殖生物学研究及生物资源的保护提供数据参考。方法对昆明某规模化实验猕猴饲养基地饲养的150只恒河猴繁殖群(20只雄猴,130只雌猴)和900只食蟹猴繁殖群(120只雄猴,780只雌猴)全年12个月的繁殖规律及繁殖性能进行观察和统计分析。结果昆明地区恒河猴种群产仔具有明显的季节性变化,而食蟹猴种群产仔没有明显的季节性变化;恒河猴种群的妊娠率、繁殖率、仔猴成活率分别是76.15%、69.23%和90.70%;食蟹猴种群的妊娠率、繁殖率、仔猴成活率分别是78.98%、74.87%和94.81%;恒河猴的月经周期和妊娠期分别是(28.80±2.33)d和(165.87±7.52)d;食蟹猴的月经周期和妊娠期分别是(29.35±3.05)d和(157.93±5.42)d;恒河猴仔猴平均出生体重和幼猴平均断奶体重分别是(425.00±100.50)g和(1491.67±172.35)g;食蟹猴仔猴平均出生体重和幼猴平均断奶体重分别是(314.33±61.18)g和(1013.50±115.50)g。结论明确了昆明地区恒河猴和食蟹猴种群的繁殖规律,详实地报道了恒河猴和食蟹猴种群繁殖性能参考值,为昆明地区恒河猴和食蟹猴的繁殖及开展实验猴生殖生物学的科研活动提供了基础数据。     

印度尼西亚源食蟹猴干扰素-γ基因的克隆和序列分析

目的获得印度尼西亚食蟹猴的干扰素-γ基因,为常用实验猕猴干扰素-γ的基因工程生产奠定基础。方法根据GenBank上公布的恒河猴干扰素-γ基因序列设计特异性引物,从印度尼西亚食蟹猴的外周血液中分离单核淋巴细胞,利用Trizol试剂,提取淋巴细胞的总RNA,通过RT-PCR的方法获得干扰素-γ基因片段,并对该片段进行克隆、鉴定和序列分析。结果扩增到一498bp的目的片段,经序列测定证实为印度尼西亚食蟹猴的干扰素-γ基因,与恒河猴、人及狒狒的干扰素-γ基因相比,同源性分别为100%、96%、99%。结论常用的两种实验猕猴食蟹猴与恒河猴的干扰素-γ基因完全相同。     

恒河猴与食蟹猴微卫星DNA多态性的比较分析

目的 分析恒河猴和食蟹猴群体间的遗传多样性,确立一种对恒河猴和食蟹猴种群个体的遗传鉴别方法.方法 利用聚合酶链反应 (PCR) 扩增技术采用15个多态性微卫星DNA位点对50只恒河猴和50只食蟹猴个体进行了DNA多态性的分析,对比两群体间等位基因数目差异.结果 筛选的15个具有显著多态性的微卫星DNA位点对恒河猴和食蟹猴种群可以进行DNA多态性分析,其等位基因数目均在7个以上,且两群体间有11个位点的等位基因数存在一定的差异.结论 利用这些多态性微卫星DNA位点建立一种有效鉴别恒河猴和食蟹猴种群遗传背景的方法具有一定的可行性.     

食蟹猴感染猕猴瓦特松吸虫的调查及药物治疗

对来自云南省中越边境地区的工４２只食蟹猴进行了猕猴瓦特松吸虫感染情况的调查。发现食蟹猴的吸虫感染率随年龄增长而增加。群体总感染率为１９．７２％。药物驱治试验表明，吡喹酮对猕猴瓦特松吸虫病有较好的疗效。     

利用实验小鼠建立Chandipura病毒动物模型

[目的]摸清STLV-1感染现状,从而有效地降低STLV-1在猕猴、食蟹猴群中的的感染率。[方法]采用STLV-1ELISA法对猕猴、食蟹猴血清进行抗体检测。结果本中心送美国BioReliance公司的2455只出口猴血清,103份血清呈STLV-1抗体阳性,19份血清呈STLV-1抗体可疑,其余血清均为STLV-1抗体阴性。[结论]猕猴、食蟹猴群中STLV-1的平均感染率为4.97%,其中猕猴STLV-1感染率为2.7%,食蟹猴STLV-1感染率为5.4%,是猕猴STLV-1感染率的2倍;随着年龄的增长,猕猴(食蟹猴)STLV-1的感染率也随之升高。     

原发性肝癌组织中螺杆菌相关基因的检测

目的 探讨原发性肝细胞癌(HCC)与螺杆菌感染关系.方法 选取经病理诊断的38例HCC病人的癌组织作为实验组,28例非肝癌肝病组织、29例胃癌组织、18例结肠癌组织和18例子宫肌瘤组织作对照组.采用聚合酶链反应(PCR)扩增螺杆菌属16S rRNA基因,扩增产物经Southern杂交确认,并进行测序及同源性比较.阳性者再扩增幽门螺杆菌的特异基因26-kDa 及相关基因cagA、vacA、rps4、glmM以进一步验证是否为幽门螺杆菌感染.结果 38例HCC标本中有27例检出螺杆菌属16S rRNA基因,阳性率为71.1%;29例胃癌标本有23例检出螺杆菌属16S rRNA,阳性率为79.3%,两组比较差异无显著性(P>0.05);与其他对照组(均未扩增出16S rRNA基因)比较差异有显著性(χ2=24.70～33.67,P<0.01).16S rRNA PCR 产物经Southern杂交证实为幽门螺杆菌.序列测定表明,HCC和胃癌组织中的螺杆菌16S rRNA序列与幽门螺杆菌序列有97.8%的同源性.Hp特异相关基因检测结果,26-kDa基因扩增阳性率82.0%;cagA基因扩增阳性率18.3%;glmM基因扩增阳性率15.0%;均未扩增出vacA和 rps4基因.结论 HCC病人肝组织中存在螺杆菌感染且感染率较高,螺杆菌感染与HCC可能存在相关性.     

食蟹猴与猕猴血液生理和生化指标的比较

目的检测食蟹猴和猕猴血液生理、血液生化指标，分析食蟹猴和猕猴的生物学特性，初步建立食蟹猴和猕猴的常规血液生理生化检测指标。方法用日本光电MEK-5126K血球计数仪（动物芯片）、配套试剂盒检测及人工涂片染色镜检血液生理指标；贝克曼全自动生化分析仪CX5型分析血液生化指标。并对食蟹猴和猕猴猴雌雄之间及食蟹猴和猕猴之间进行比较。结果猕猴AST／ALT；食蟹猴的嗜酸性细胞、ALP、CK、GGR、CREA雌雄之间差异显著。食蟹猴与猕猴之间WBC、MCH、MCHC、嗜酸、单核、ALB、ALB／GLB、AST、AST／ALT、CK、LDH、GGR、CREA差异显著，其它指标差异不显著。结论初步建立了猕猴和食蟹猴的常规生物学数据，为评价食蟹猴和猕猴的生物学特性提供一定的数据基础，为其应用提供数据参考。     

食蟹猴猕猴瓦特松吸虫病例

对野生食蟹猴感染猕猴瓦特松吸虫的病例和病理解剖情况进行了描述。猕猴瓦特松吸虫的感染可引起猴精神沉郁、食欲不振、腹泻等体征。吸虫的感染部位为盲肠和结肠,可导致动物肠壁发炎增厚、粘膜脱落、出血、溃疡等。吸虫的感染密度为每只猴100～1000条。猴年龄越大,吸虫感染所引起的病症越严重。     

活体长爪沙鼠幽门螺杆菌检测方法的建立

目的应用巢式PCR方法通过胃液活体检测长爪沙鼠幽门螺杆菌感染,从而建立可以持续监测长爪沙鼠幽门螺杆菌感染的检测技术。方法体外培养幽门螺杆菌并接种至长爪沙鼠体内,在感染后第10周使用普通PCR方法检测长爪沙鼠胃液,使用巢式PCR方法对长爪沙鼠胃液、胃组织、十二指肠内容物、结肠粪便进行检测;同时还利用快速尿素酶试验和血清ELISA方法等对比分析巢式PCR方法的准确性,上述PCR产物均经过测序验证。结果普通PCR方法检测胃液、巢式PCR方法检测胃液、胃组织、十二指肠内容物,结肠粪便以及快速尿素酶试验、血清ELISA检测方法检验结果阳性率分别为30%、100%、100%、90%、10%、100%和0%。比较不同检测方法的检测结果发现,胃液巢式PCR、胃组织巢式PCR和快速尿素酶试验均有100%的检测率,普通PCR检测胃液的方法、结肠粪便巢式PCR方法及血清学ELISA检测方法检测率均比较低。结论胃液巢式PCR检测方法由于其特异性、准确性及灵敏性较高等特点可以用于长爪沙鼠幽门螺杆菌的长期检测,特别是对于预防和治疗幽门螺杆菌感染的实验具有重要价值。     

成都地区幽门螺杆菌感染现状及相关影响因素分析

目的 了解成都地区人群幽门螺杆菌 （Helicobacler pylori, Hp）感染现状及相关影响因素,为制定本地区Hp防治方案提供依据。方法 以在四川大学华西医院健康体检中心行常规体检的成都籍常住居民为研究对象,通过¹⁴C尿素呼气试验 （¹⁴C-urea breath test,¹⁴C-UBT）检测Hp感染状况;随机抽取部分个体进行问卷调查,了解Hp感染的相关影响因素。结果 共纳入体检者8 365例,500份问卷中共收集合格问卷497份。受检人群的Hp总感染率为53.1%,男性高于女性〔54.1% （2 673/4 941）vs. 51.7%（1 771/3 424）, P<0.05〕;30岁及30岁以上各年龄段的Hp感染率均达到或超过50%。藏族人群的Hp感染率高于汉族〔74.2% (23/31) vs. 48.6%(216/444),P<0.05〕;生吃大蒜者Hp感染率低于不食用者〔52.6% (231/439) vs. 67.9%(38/56),P<0.05〕;有呕吐症状者的Hp感染率高于无症状者〔63.4%(59/93) vs. 52.2%(211/404), P<0.05〕。男性〔标准偏回归系数(β)=0.155 9〕、藏族(β=0.148 9)、有呕吐症状(β=0.146 9)是Hp感染的危险因素,生吃大蒜(β=-0.149 0)是防止Hp感染的保护因素。结论 成都地区人群具有较高的Hp感染率。男性、藏族、有呕吐症状是Hp感染的独立危险因素;而经常生吃大蒜则对Hp感染有一定的保护作用。     

ABO血型与幽门螺杆菌感染风险的meta分析

目的 通过meta分析探讨ABO血型系统与幽门螺杆菌感染发生的关系.方法 以PubMed、EMBASE、CNKI等作为文献来源数据库,并追溯相关参考文献和引文,进行全面、系统的文献检索.收集ABO血型系统与幽门螺杆菌感染关系的文献研究,根据纳入和排除标准,由2名研究者独立筛选文献、提取数据并进行文献质量评价,采用Review Manager 5.0、Stata 11.0软件进行meta分析、敏感性分析及发表偏倚的评估.以比值比(OR)作为评估ABO血型与幽门螺杆菌感染关系的指标,采用Egger法及漏斗图评价发表偏倚.结果 本研究共纳入文献31篇.敏感性分析的结果显示Lin等的研究明显影响了系统分析的结果,剔除该研究后,重新合并OR值.Meta分析结果表明:ABO血型与幽门螺杆菌感染发生无关(血型A:OR=0.98,95％CI 0.84～1.15,P=0.82;血型B:OR=0.93,95％CI 0.84～1.03,P=0.15;血型O:OR=1.10,95％CI0.93～1.29,P=0.26;血型AB:OR=0.84,95％CI 0.67～1.06,P=0.14).Egger法计算结果显示不存在发表偏倚,而漏斗图则显示存在潜在发表偏倚.亚组分析结果也显示ABO血型与幽门螺杆菌感染发生无关.结论 ABO血型与幽门螺杆菌感染的发生无关.     

幽门螺杆菌与食管鳞状细胞癌相关性研究进展

幽门螺杆菌被认为与消化性溃疡和胃癌等疾病相关，最近也被发现可能与许多胃外疾病相关。本综述通过在PubMed上检索目前幽门螺杆菌与食管鳞状细胞癌相关性研究文献，发现二者相关性研究结果存在争议，并从幽门螺杆菌检测方法差异、人群异质性、幽门螺杆菌致病异质性三个方面综述了可能的原因。同时分析了幽门螺杆菌在食管鳞状细胞癌中的作用机制，认为幽门螺杆菌可能通过间接和直接作用影响食管鳞状细胞癌的发生和发展，并且其作用具有两面性。     

幽门螺杆菌感染和老年颈动脉粥样硬化的关系

目的 研究幽门螺杆菌（Hp）感染和老年颈动脉粥样硬化间的关系。方法 选取确诊为老年颈动脉粥样硬化250例,检测Hp感染状况、颈动脉粥样硬化程度、血清氧化型低密度脂蛋白（Ox-LDL）及各项血脂水平,对统计结果进行比较分析。结果 Hp感染组总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）及血清Ox-LDL各项指标水平与非Hp感染组比较,差异有统计学意义（P<0.05）;而重度Hp感染组TC、TG及血清Ox-LDL指标水平均明显高于轻度Hp感染组,且差异有统计学意义（P<0.05）;重度Hp感染组的动脉硬化程度达重度所占比例为52.78%,明显的高于非Hp感染组（6.92%）和轻度Hp感染组（23.81%）,且差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 幽门螺杆菌感染能够引起老年颈动脉粥样硬化患者血脂代谢紊乱,导致血脂水平升高。     

Stable surface expression of a gene for <Emphasis Type="Italic">Helicobacter pylori</Emphasis> toxic porin protein with pBAD expression system

Helicobacterpylori （1f. pylori） infection causes peptic and duodenal diseases in humans. Among a 32-protein family of outer membrane proteins, a porin-like protein, HopE, has been a subject of note, mainly for its conservative nature among 11. pylori, and for its potential as a vaccine candidate. To achieve stable surface expression of this host cell-toxic protein, hopE gene was introduced into pBAD expression system. After induction with arabinose, all 15 randomly-chosen E. coli LMG 194 colonies from 3 successive passages could express Hope protein, while only 1 from 5 E. coli colonies that contained lac operon-regulated plasmid encoding hopE gene could express HopE. Indirect immunofluorescence confirmed the expression of HopE on E. coli cell surface     

基于高通量测序技术的实验动物沙门氏菌检测方法的建立与评价

目的建立基于高通量测序技术的实验动物沙门氏菌检测方法,应用于实验动物沙门氏菌的检测。方法提取小鼠粪便DNA样本,分别针对16S r DNA区域、23S r DNA区域、16S~23S r DNA IS、23S~5S r DNA IS、gyr B优选区域设计通用引物,对各个引物进行测试分析,优化扩增条件并建库,利用Illumina高通量测序技术检测区分42个样本中的沙门氏菌,评价该方法的特异性和稳定性。结果筛选发现沙门氏菌的菌种分类优选区域为gyr B基因,gyr B基因引物序列为FP5’-AACCACCGCAATCAGACCTT3’,FP5’-AGCCACGAAACCTTCACYA-3’。对引物进行优化,确定最佳扩增条件及样品上样量并正式建库,通过高通量测序和序列分析能检测出42个样品中极微量的沙门氏菌,检测方法稳定,灵敏度高,检测限可达0~102的cfu。结论本实验利用高通量测序技术,建立了一套完整检测实验动物沙门氏菌的生物体系,能检测出实验动物体内极微量的沙门氏菌,检测方法稳定性好,灵敏度高,可沿用至其他种类病原微生物的检测。     

幽门螺杆菌感染性胃癌组织microRNA-17、microRNA-490-3p的表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的 探讨幽门螺杆菌（Hp）感染性胃癌组织microRNA-17（miR-17）、microRNA-490-3p（miR-490-3p）的表达及其与临床病理特征和预后的关系。方法 选取2012年1月—2014年6月东莞市人民医院收治的146例Hp阳性及阴性胃癌患者的癌组织及癌旁组织。实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测癌组织及癌旁组织中miR-17、miR-490-3p的表达。分析Hp阳性胃癌患者癌组织miR-17、miR-490-3p表达与临床病理特征的关系;Kaplan-Meier生存曲线评估miR-17、miR-490-3p表达与Hp阳性胃癌患者术后5年生存率的关系;Cox回归模型分析影响Hp阳性胃癌患者预后的危险因素。结果 Hp阳性及阴性胃癌患者的癌组织中miR-17 mRNA相对表达量高于癌旁组织（P <0.05）,miR-490-3p mRNA相对表达量低于癌旁组织（P <0.05）。经Pearson相关分析,miR-17和miR-490-3p在不同胃癌组织中的表达无相关性（P >0.05）。不同肿瘤直径、淋巴结转移、远处转移及TNM分期的Hp阳性胃癌患者癌组织miR-17 mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）;不同肿瘤直径、淋巴结转移及远处转移的Hp阳性胃癌患者癌组织miR-490-3p mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）。Kaplan-Meier生存分析表明,miR-17高表达Hp阳性胃癌组、miR-490-3p低表达Hp阳性胃癌组术后5年生存率均分别低于miR-17低表达Hp阳性胃癌组、miR-490-3p高表达Hp阳性胃癌组（P <0.05）。有远处转移、较高的TNM分期、miR-17高表达、miR-490-3p低表达是影响Hp阳性胃癌患者预后的危险因素（P <0.05）。结论 Hp阳性胃癌组织miR-17表达增加、miR-490-3p表达降低,与患者较差临床病理参数和不良预后有关,监测癌组织miR-17、miR-490-3p表达可能有利于患者的预后判断。     

幽门螺杆菌多表位重组原核表达工程菌的构建及表达特性研究

目的 构建含有幽门螺杆菌尿素酶（UreI、UreB）及粘附素（HpaA）的多表位原核表达质粒pET28a(+)/ureI-ureB-hpaA〔pET28a(+)/IBA〕及相应的原核表达工程菌,研究其表达特性。 方法 通过生物信息学方法从ureI 、ureB和 hpaA基因中筛选T细胞和B细胞优势表位基因序列,人工合成并构建原核重组表达质粒pET28a(+)/IBA。经限制性内切酶（Nde Ⅰ,Xho Ⅰ）酶切鉴定及DNA测序鉴定后导入大肠杆菌BL21 (DE3) 。该工程菌经IPTG诱导后,用SDS-PAGE检测重组蛋白（rIBA）的表达情况,以抗幽门螺杆菌悉尼株（SS1株）特异卵黄抗体采用Western blot检测rIBA的抗原性。 结果 构建的多表位原核表达质粒pET28a(+)/IBA双酶切和测序鉴定与设计序列100%一致。工程菌经 IPTG 诱导后SDS-PAGE电泳显示在相对分子质量40×10 ³左右有一条明显蛋白条带,Western blot显示有相应位置特异反应条带。 结论 成功构建幽门螺杆菌多表位重组原核表达质粒pET28a(+)/IBA及相应原核表达工程菌,该工程菌表达的rIBA具有抗原性,表明该重组蛋白与幽门螺杆菌有高度相关性。