三维球体间充质干细胞移植对大鼠缺血再灌注损伤脑组织Nogo-A及NgR表达的影响

目的 探讨胎盘来源间充质干细胞移植对脑缺血再灌注后大鼠脑组织Nogo—A及其受体NgR的mRNA及蛋白表达的影响及意义。方法 实验动物随机分为假手术组(Sham组)及模型组,模型组再分为治疗组(MSCs组)以及溶剂对照组(Vehicle组),应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血模型,缺血2h后拔除鱼线再灌注,1d后MSCs组注射间充质干细胞,Vehicle组注射等量培养基溶液,移植后1d,3d,7d应用RT-PCR法检测mRNA表达水平;Western blot法检测蛋白表达水平。结果 与Vehicle组相比,MSCs组大鼠7d神经运动功能有明显改善(P<0.05);MSCs组1,3,7dmRNA及蛋白水平均较Vehicle组降低(P<0.05)。结论 胎盘间充质干细胞移植可以改善脑缺血再灌注后神经运动功能,其机制可能与下调脑组织Nogo—A及其受体NgR水平有关。     

骨髓间质干细胞移植对大鼠脑缺血再灌注凋亡蛋白Caspase-3的影响

目的 研究静脉移植骨髓间充质干细胞 (MSCs) 对脑缺血再灌注模型大鼠神经功能及凋亡相关蛋白caspase-3的影响.方法体外培养及扩增 MSCs 后,用绿色荧光染料羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂 (CFSE) 标记,通过静脉途径移植给大脑中动脉缺血 2 h 再灌注的SD 大鼠,按不同时间点取材,荧光显微镜观察BMSCs在脑内的分布,免疫组织化学染色及RT-PCR检测大鼠脑内caspase-3蛋白表达情况.结果移植组在移植后第6天神经功能明显好于对照组 (P<0.05).移植组移植后3、 12、24、48、72 h caspase 3 免疫组化阳性目标面密度分别为 (1.34±0.31)%、(3.98±0.67)%、(5.58±0.92)%、(4.65±0.69)%、(3.51±0.63)%,对照组分别为 (2.09±0.19)%、(5.23±0.30)%、(6.89±0.57)%、(5.93±0.56)%、(4.39±0.57)%,移植组和对照组比较均 (P< 0.05).6 h 及 7 d 移植组 caspase 3 阳性目标面密度分别为 (2.81±0.35)%、(1.64±0.29)%,与对照组 (3.92±0.44)%,(2.29±0.21)% 比较差异显著 (P< 0.01).移植组相应时间点caspase-3的表达明显低于对照组 (P<0.05, P<0.01);移植组大鼠缺血侧皮层的caspase-3 mRNA相对量明显低于对照组 (P<0.01).结论经静脉注射骨髓间充质干细胞可明显改善神经功能.其可能通过下调caspase-3表达方式对脑缺血再灌注损伤起保护作用.     

骨髓间充质干细胞移植对缺血再灌注大鼠脑神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对缺血再灌注大鼠脑组织神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法:SD大鼠84只,随机分为假手术组(n=12)、模型组(n=24)、磷酸盐缓冲液(PBS)组(n=24)和MSCs组(n=24).模型组、PBS组和MSCs组采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血模型,假手术组除不插尼龙线外,其余步骤相同.PBS组和MSCs组分别于建模成功后24 h分别经颈动脉注入等体积的PBS液和已制备好的同种异体MSCs悬液.每组于脑缺血2 h再灌注2 d、4 d、6 d、8 d时行神经功能缺损评分及脑灌注固定取材,采用免疫组化染色及TUNEL检测脑组织Bcl-2、Bax蛋白的表达及凋亡细胞数.结果:假手术组在各时间点神经功能评分为0分,无神经功能缺损,未见细胞凋亡,未见Bcl-2和Bax表达.与模型组和PBS组比较,脑缺血2 h再灌注4 d开始,MSCs组神经细胞凋亡数、Bax蛋白表达和神经功能缺损评分较低,Bcl-2蛋白表达较高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:骨髓间充质干细胞移植能改善脑损伤大鼠的功能;上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,减少神经细胞凋亡,可能是其主要机制之一.     

骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠脑缺血的实验研究

目的 研究经静脉移植的骨髓间充质干细胞(MSCs)在缺血大鼠脑组织的分布、改善神经功能的情况及对凋亡相关蛋白Bcl-2表达的影响.方法 体外培养扩增MSCs后,用绿色荧光染料羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)标记,静脉途径移植给大脑中动脉缺血2 h再灌注的SD大鼠,观察各组的神经功能,观察MSCs在脑内的分布,...     

骨髓间充质干细胞对缺血再灌注损伤肾小管上皮细胞Bcl-2/Bax表达的影响

目的 探讨外源性骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对缺血再灌注损伤(I/R)后肾小管上皮细胞凋亡和Bcl-2/Bax表达的影响.方法 将雄性SD大鼠MSCs用DAPI标记后注入受体雌性SD大鼠体内.30只受体大鼠随机分为3组(n=10):假手术对照组(C组)、MSCs+I/R组(M组)、DMEM-F12+I/R组(D组).7d后观察肾功能,肾脏病理改变,采用原位末端标记法检测细胞凋亡指数,免疫组化法检测Bcl-2和Bax的表达,并观察DAPI标记的MSCs在受体大鼠肾脏的分布情况.结果 M组在肾功能、肾脏病理改变上,均明显好于D组;M组Bcl-2蛋白表达高于D组,Bax/Bcl-2比值和凋亡指数均低于D组.I/R后7 d内未发现MSCs定位于肾组织中.结论 外源性MSCs可以减少I/R损伤后肾小管上皮细胞的凋亡,促进Bcl-2表达,从而有利于肾小管损伤的早期恢复.     

Bcl-2重组腺病毒载体在小肠缺血再灌注损伤中的保护作用

目的 探讨携带鼠Bcl-2基因的重组腺病毒载体对大鼠小肠缺血再灌注损伤的保护作用.方法 利用复制缺陷型腺病毒AdEasy-1系统,通过基因重组技术构建Ad-Bcl-2及Ad-eGFP.建立大鼠小肠缺血再灌注模型.将大鼠分为假手术组(sham组)、缺血灌注组(IR组)、Ad-eGFP阴性干预组(Ad-eGFP组)及Ad-Bcl-2干预组(Ad-Bcl-2组).检测缺血再灌注小肠黏膜细胞Ca2+-Mg2+ATPase活性及血清中丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)及CK-B活性,RT-PCR检测上皮细胞中Caspase-3 mRNA转录水平,免疫印迹测定上皮细胞中Bcl-2和Caspase-3的表达.结果 缺血再灌注IR组小肠Caspase-3 mRNA转录、Bcl-2和caspase-3的表达及血清MDA、CK-B含量明显高于sha组;Ca2+-Mg2+ATPase及SOD活性明显低于sham组(P＜0.05).与IR组及Ad-eGFP组相比,Ad-Bcl-2组caspase-3蛋白表达及MDA、CK-B含量下调,而Bcl-2表达、Ca2+-Mg2+ATPase活性及血清中超氧化物岐化酶(SOD)活性明显上调(P＜0.05).结论 Bcl-2重组腺病毒载体对肠缺血再灌注引起的肠黏膜损伤具有明显保护作用.     

骨髓间充质干细胞移植对缺血再灌注大鼠脑神经细胞凋亡及survivin、caspase-3蛋白表达的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞(MSC)移植对缺血再灌注大鼠脑组织神经细胞凋亡及存活蛋白(survivin)、胱天蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达的影响.方法 健康SD大鼠42只,随机分为假手术组(n=6)、磷酸盐缓冲液(PBS)组(n=18)和MSC组(n=18).PBS组和MSC组采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,假手术组除不插入尼龙线外,其余步骤相同.PBS组和MSC组分别于建模成功后3 h分别经尾静脉注射等体积的PBS液和已制备好的同种异体MSC悬液.每组于脑缺血90 min再灌注1 d、3 d、6 d时分别采用Western blot及免疫组化方法检测缺血侧脑组织survivin和caspase-3蛋白的表达,运用TUNEL方法检测细胞凋亡.结果 假手术组无神经功能缺损,未见细胞凋亡及未见survivin和caspase-3蛋白表达.与PBS组比较,MSC组于脑缺血90 min再灌注1 d开始,caspase-3蛋白表达减少,再灌注3 d开始,神经细胞凋亡数较少,神经功能缺损评分较低,survivin蛋白表达较高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 骨髓间充质干细胞移植能改善脑缺血再灌注大鼠的神经功能,上调survivin蛋白表达,下调caspase-3蛋白表达,减少神经细胞凋亡,推测可能是其作用机制之一.     

丹参和干细胞移植对脑损伤大鼠神经元的影响

目的探讨丹参注射液联合骨髓间充质干细胞移植对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后海马神经元Bax、Bcl-2蛋白表达的影响及其治疗作用。方法建立新生SD大鼠HIBD模型,每组实验随机分为4组：假手术组（S组）、生理盐水对照组（C组）、MSCs治疗组（M组）和丹参＋MSCs治疗组（DM组）。观察缺氧缺血组28d内生存情况;检测缺氧缺血前2h,缺氧缺血后12h、24 h,3、7、14、28d各时间点新生大鼠海马CA1区神经元Bax、Bcl-2蛋白的表达。移植后28d进行大鼠迷宫行为学实验。结果 DM组较C组和M组比较,Bax表达明显下调（〈0.05）,而Bcl-2表达显著上调（〈0.05）,生长发育和生存情况明显好于后两者。迷宫实验显示结论：丹参合并MSCs改善了新生大鼠HIBD后的生长发育,提高了其空间记忆能力。结论丹参合并骨髓间充质干细胞移植能减少Bax的产生,发挥对新生鼠HIBD时的脑保护和治疗作用。     

清热化瘀方联合HP-BMSCs移植对脑缺血损伤大鼠PI3K/Akt表达影响

目的:观察清热化瘀方联合缺氧预处理(HP)骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对脑缺血再灌注损伤大鼠PI3K/Akt m RNA和蛋白表达的影响。方法:SD大鼠216只,随机分为6组:假手术组(SO)、模型组(MCAO)、MSCs移植对照组(N-MSCs)、经HP后的MSCs移植组(HP-MSCs)、清热化瘀方联合MSCs移植组(MSCs+QRHY)、清热化瘀方联合HP-MSCs移植组(HP+QRHY)。每组按再灌注时间点又分为7 d、14 d、28 d 3个亚组。栓线法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,根据分组情况给予清热化瘀颗粒灌胃及经颈内动脉注入BMSCs或HP-BMSCs,采用改良神经功能缺损评分法进行神经功能评分(NSS),并运用q RT-PCR、Western blot技术检测PI3K/Akt m RNA及其蛋白在缺血半暗带的表达变化。结果:(1)移植组与模型组各时间点比较,神经功能评分严重程度显著降低(P0.05),各移植组间以HP+QRHY组神经功能改善最为显著(P0.05)。(2)MCAO组及各移植组PI3K/Akt m RNA和蛋白表达均较SO组明显增加(P0.05);其表达均于7 d达到高峰(P0.05),14 d、28 d表达开始逐渐下降;其中在7 d、14 d亚组间相比较,HP-MSCs组、MSCs+QRHY组及HP+QRHY组二者的表达均明显优于N-MSCs组(P0.01或P0.05),而以HP+QRHY组增高最为显著(P0.05)。结论:清热化瘀方联合HPBMSCs移植可改善大鼠的神经功能,这可能和其促进大鼠脑缺血半暗区PI3K/Akt的表达相关。     

脐带间充质干细胞移植对急性脑缺血/再灌注损伤大鼠脑组织内CD_(31)及白细胞介素6的作用

目的探讨脐带间充质干细胞(UC-MSCs)对急性脑缺血/再灌注损伤脑组织内CD_(31)和白细胞介素6(IL-6)的影响。方法 24只SD大鼠随机分为对照组、缺血/再灌注组以及缺血/再灌注+干细胞治疗组,每组8只。对照组为仅在颈内动脉下穿线不结扎;缺血/再灌注组为结扎30 min后恢复血流灌注;缺血/再灌注+干细胞治疗组为结扎30 min后恢复血流灌注,并给予干细胞干预治疗,即将2×10~6脐带干细胞通过尾静脉注射途径输注至大鼠体内。采用免疫组织化学、反转录聚合酶链反应和Western blot技术等检测各组缺血脑组织内CD_(31)和IL-6的变化。结果三组实验大鼠脑组织中IL-6 mRNA和CD_(31)mRNA及其蛋白表达比较差异均有统计学意义(P<0.05)。组间两两比较情况:与对照组相比较,脑缺血/再灌注组大鼠IL-6 mRNA、IL-6蛋白水平升高,缺血/再灌注组+干细胞治疗组降低(P<0.05);与缺血/再灌注组比较,缺血/再灌注组+干细胞治疗组IL-6 mRNA、IL-6蛋白水平降低(P<0.05)。与对照组相比较,缺血/再灌注组和缺血/再灌注组+干细胞治疗组的CD_(31)mRNA、CD_(31)蛋白水平均升高,且缺血/再灌注组+干细胞治疗组高于缺血/再灌注组(P<0.05)。结论行UC-MSCs移植术治疗大鼠急性脑缺血/再灌注损伤可有效提高CD_(31)的表达,改善损伤区域血管重建,并通过降低IL-6的表达水平有效抑制炎症进展。     

银杏内酯A、B混合物抑制永久性大脑中动脉栓塞大鼠神经细胞JNK凋亡途径

目的 研究银杏内酯A、B混合物（GKAB）对永久性大脑中动脉栓塞（pMCAO）大鼠神经元的保护作用及相关分子机制。方法 取雄性SD大鼠60只,随机分为假手术组、pMCAO模型组和GKAB处理低、中、高剂量组。除假手术组（仅分离动脉而不阻断）外,其余4组均采用阻断右侧大脑中动脉的方法制备大鼠pMCAO模型。GKAB处理低、中、高剂量组于术后10 min分别经舌下静脉注射GKAB 12.5、25、50 mg/kg,假手术组、pMCAO模型组给予中剂量组药物等容量的生理盐水。用药12 h后,采用TUNEL法检测各组大鼠脑组织神经细胞凋亡率,免疫组织化学法检测神经细胞磷酸化JNK（p-JNK）表达,蛋白质印迹法检测脑组织中p-JNK、Bcl-2、Bax、细胞色素C（Cyt C）、caspase-9、caspase-3以及cleaved caspase-9、cleaved caspase-3蛋白的表达。结果 与假手术组相比,pMCAO模型组大鼠神经细胞凋亡率和p-JNK表达水平均增加（P<0.01）,凋亡相关蛋白Bax、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3的表达均升高（P<0.01）,Bcl-2、caspase-9、caspase-3的表达均降低（P<0.01）;给予GKAB处理后,与pMCAO模型组比较,GKAB处理低、中、高剂量组大鼠神经细胞凋亡率和p-JNK水平均降低（P<0.01）,凋亡相关蛋白Bax、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3的表达也呈下降趋势（P<0.01）,而Bcl-2、caspase-9、caspase-3的表达呈升高趋势（P<0.01）,并表现出一定的剂量依赖性。与假手术组相比,pMCAO模型组神经细胞胞质Cyt C表达升高,线粒体Cyt C表达降低（P<0.01）;与pMCAO模型组比较,GKAB低、中、高剂量组神经细胞胞质Cyt C表达逐渐降低,线粒体Cyt C表达逐渐升高（P<0.05,P<0.01）。结论 GKAB可抑制pMCAO大鼠脑神经细胞凋亡,其机制可能与其抑制JNK磷酸化、抑制JNK信号通路的激活、阻断线粒体凋亡途径有关。     

葛根素对围绝经期抑郁症模型小鼠神经元凋亡的影响及机制研究

目的 探讨葛根素对围绝经期抑郁症模型小鼠神经元凋亡及相关凋亡蛋白表达影响。方法 清洁级昆明小鼠适应性饲养1周以适应环境。旷场实验（OFT）筛选后,随机分为假手术组、围绝经期抑郁症模型组、氟西汀（3mg/kg）+雌激素（0.15mg/kg）组、葛根素组（92mg/kg）,每组10只。采用小鼠双侧卵巢切除（OVX）联合慢性不可预知性温和应激（CUMS）法建立围绝经期抑郁症动物模型。各给药组于每日应激前1h灌胃给药,其余各组给予等体积生理盐水,共计21天。观察小鼠动情周期变化,测定行为学变化,尼氏染色及电镜观察海马神经元凋亡情况,Western blot法测定Bcl-2、Bax、caspase-3及caspase-9蛋白表达。结果 除假手术组外,各OVX组小鼠连续7天内连续监测未见动情周期变化,证明去势成功。与假手术组比较,围绝经期抑郁症模型组小鼠呈现抑郁样行为,表现为自发活动及探索行为减少、行为绝望时间增加,海马神经元损伤、数量减少、尼氏体减少及早期凋亡变化,Bcl-2蛋白表达减少而Bax、caspase-3及caspase-9蛋白表达增加（P<0.01或P<0.05）。与围绝经期抑郁症模型组比较,给予葛根素治疗后,可逆转小鼠抑郁样行为,表现为自发活动及探索行为增加,减轻海马神经元损伤及凋亡,增加Bcl-2蛋白表达,减少Bax、caspase-3及caspase-9蛋白表达（P<0.01或P<0.05）。结论 葛根素具有抑制围绝经期抑郁症模型小鼠神经元损伤及凋亡作用,其作用机制可能与调控凋亡信号通路相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3及caspase-9蛋白表达异常有关。     

度洛西汀对大鼠心肌缺血再灌注心律失常的影响及机制

目的 探讨度洛西汀对大鼠心脏缺血再灌注心律失常的影响及机制。方法 30只Sprague Dawley（SD）大鼠随机分为假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（IR组）和度洛西汀组（Dulo组）。IR组大鼠左前降支结扎30min后再灌注120min,Dulo组大鼠结扎左前降支30min前腹腔注射盐酸度洛西汀40mg/kg,之后处理同IR组,Sham组仅暴露左前降支,未行结扎。二导联心电监测并记录3组心律失常发生情况,应用LabChart8软件分析心电图参数。Triphenyltetrazolium chloride（TTC）染色对比IR组及Dulo组大鼠心肌梗死面积。蛋白免疫印迹试验检测各组心脏组织Akt、细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases,Erk）、caspase-3、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）1、SOD2和连接蛋白43（connexin 43,Cx 43）蛋白改变。结果 与IR组比较,缺血期Dulo组大鼠室性期前收缩次数和室性心动过速次数减少（P<0.05）;再灌注期Dulo组的室性心动过速减少（P<0.05）,室性期前收缩次数差异无统计学意义（P>0.05）。度洛西汀抑制缺血和再灌注所致校正后Q-T间期（QTc）的延长（P<0.05）,并减小心肌梗死面积（P<0.05）。度洛西汀抑制Akt和Erk蛋白的磷酸化,减少cleaved caspase-3、cytochrome C蛋白表达并增加SOD1、SOD2和Cx43蛋白表达。结论 度洛西汀降低Akt和Erk蛋白磷酸化,抑制氧化应激及细胞凋亡,减低心脏缺血再灌注损伤过程中室性心律失常发生,减少梗死面积。     

芹黄素对肾缺血再灌注损伤后Fas/FasL介导凋亡反应的影响

目的 探讨芹黄素抑制大鼠肾缺血再灌注损伤凋亡Fas、FasL基因表达的影响。方法 建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型,将60只大鼠分为5组：假手术组、缺血再灌注组、芹黄素低浓度组（2mg/kg）、芹黄素中浓度组（10mg/kg）、芹黄素高浓度组（50mg/kg）,每组大鼠各12只。检测血清肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）,测定肾组织氧化损伤和抗氧化指标（SOD、MDA和GSH-Px）含量,观察肾组织病理学变化,免疫组化检测FasL、caspase-3和Bcl-2表达,Western blot法检测Fas、FasL和Bcl-2表达水平。结果 与假手术组比较,缺血再灌注组Cr和BUN水平均明显增高;SOD和GSH-Px含量明显降低,MDA含量显著升高;病理组织显示肾小管损伤严重;免疫组化示FasL、caspase-3蛋白表达增强,Bcl-2表达降低;Western blot法检测结果显示Fas和FasL表达水平明显升高,Bcl-2表达水平明显降低,差异有统计学意义（P<0.01）。与缺血再灌注组比较,芹黄素组Cr和BUN水平均明显降低;SOD和GSH-Px含量明显升高,MDA含量显著下降;病理组织显示肾小管损伤显著改善;免疫组化显示FasL、caspase-3蛋白表达较表达下调,Bcl-2表达上调;Western blot法检测结果显示,Fas和FasL和表达水平明显下降,Bcl-2表达水平明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 芹黄素能减轻肾脏缺血再灌注损伤,其机制可能与其上调Bcl-2基因和阻断Fas/FasL系统有关,从而抑制肾缺血再灌注损伤后所造成的细胞凋亡。     

人羊膜间充质干细胞移植后慢性酒精性肝损伤大鼠血生化指标含量的变化

目的有研究表明人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs)具有多种分化和增殖功能,其可以诱导分化成肝样细胞,从而对肝损伤有一定的修复作用。方法体外复苏培养人羊膜间充质干细胞,66只健康雌性Wistar大鼠,随机取22只,不做任何处理为正常对照组,余44只采用白酒灌胃30 d的方式建立大鼠慢性酒精性肝损伤模型,建模后将其随机分为模型组(尾静脉注射1 m L PBS),h AMSCs组(经尾静脉注入1 m L h AMSCs(2×106个),每组各22只。于移植后4周,采用全自动生化分析仪分别检测各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、血清总胆红素(TBIL)、血清白蛋白(ALB)、血清总蛋白(Tp);同时检测检测各组大鼠肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT)、以及丙二醛(MDA)、IL-4含量变化;免疫荧光显微镜观察PKH-26标记的h AMSCs分布情况,TUNEL法检测各组肝细胞凋亡情况。结果各组大鼠血生化检测结果显示,与正常对照组比较,模型组中ALT、AST、TBIL、Tp含量均显著升高,而与模型组比较,h AMSCs移植组中ALT、AST、TBIL、Tp含量均显著下降(P0.05),与正常对照组比较,模型组中ALB含量明显下降,而与模型组比较,h AMSCs移植组中ALB含量明显升高(P0.05);与模型组比较,h AMSCs移植组SOD、GSH-PX、CAT含量均显著增高,MDA、IL-4含量均显著下降,与正常对照组比较,h AMSCs移植组SOD、GSH-PX、CAT含量均降低,MDA、IL-4含量均升高(P0.05);移植组可见移植的PKH-26标记阳性的h AMSCs细胞分布于肝脏组织内,其余各组未见此类细胞分布(P0.05);TUNEL法检测各组肝细胞凋亡可见凋亡细胞数,模型组最多(34.27±5.71),h AMSCs移植组次之(18.42±3.95),正常对照组未见凋亡细胞。结论人羊膜间充质干细胞移植能够改善大鼠肝硬化的血生化指标水平,h AMSCs移植后可以减轻慢性酒精性肝损伤大鼠的肝脏细胞凋亡。     

Protective effects of trimetazidine on bone marrow mesenchymal stem cells viability in an ex vivo model of hypoxia and in vivo model of locally myocardial ischemia

Bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs) have shown potential for cardiac repair following myocardial injury,but this approach is limited by their poor viability after transplantation.The present study was to investigate whether trimetazidine (TMZ) could improve survival of MSCs in an ex vitro model of hypoxia,as well as survival,differentiation,and subsequent activities of transplanted MSCs in rat hearts with acute myocardial infarction (AMI).MSCs at passage 3 were examined for their viability and apoptosis under a transmission electron microscope,and by using flow cytometry following culture in serumfree medium and exposure to hypoxia (5% CO2,95% N2) for 12 h with or without TMZ.Thirty Wistar rats were divided into 3 groups (n=10 each group),including groupⅠ(AMI control),groupⅡ (MSCs transplantation alone),and group Ⅲ (TMZ+MSCs).Rat MSCs (4×107) were injected into peri-infarct myocardium (MSCs group and TMZ+MSCs group) 30 min after coronary artery ligation.The rats in TMZ+MSCs group were additionally fed on TMZ (2.08 mg?kg-1?day-1) from day 3 before AMI to day 28 after AMI.Cardiac structure and function were assessed by echocardiography at 28th day after transplantation.Blood samples were collected before the start of TMZ therapy (baseline),and 24 and 48 h after AMI,and inflammatory cytokines (CRP,TNF-α) were measured.Then the sur-vival and differentiation of transplanted cells in vivo were detected by immunofluorescent staining.The cellular apoptosis in the peri-infarct region was detected by using TUNEL assay.Furthermore,apoptosis-related proteins (Bcl-2,Bax) within the post-infarcted myocardium were detected by using Western blotting.In hypoxic culture,the TMZ-treated MSCs displayed a two-fold decrease in apoptosis under serumfree medium and hypoxia environment.In vivo,cardiac infarct size was significantly reduced,and cardiac function significantly improved in MSCs and TMZ+MSCs groups as compared with those in the AMI control group.Combined treatment of TMZ with MSCs implantation demonstrated further decreased MSCs apoptosis,further increased MSCs viability,further decreased infarct size,and further improved cardiac function as compared with MSCs alone.The baseline levels of inflammatory cyto-kines (CRP,TNF-α) had no significant difference among the groups.In contrast,all parameters at 24 h were lower in TMZ+MSCs group than those in MSCs group.Furthermore,Western blotting indicated that the expression of antiapoptotic protein Bcl-2 was upregulated,while the proapoptotic protein Bax was down-regulated in the TMZ+MSCs group,compared with that in the MSCs group.It is suggested that implantation of MSCs combined with TMZ treatment is superior to MSCs monotherapy for MSCs viability and cardiac function recovery.     

二甲双胍预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤模型的影响及机制研究

目的 探讨二甲双胍预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤模型的影响及可能的机制。方法 健康清洁级成年雄性SD大鼠体重220~250g,共30只,采用数字表法将其随机分为3组（n=10）：假手术组（Sham组）,缺血再灌注组（I/R组）和二甲双胍组（metformin+I/R组）。metformin+I/R组在建立I/R模型前给予二甲双胍0.125mg/（kg·d）腹腔注射,共14天,Sham组和I/R组给予等容量生理盐水连续14天。给药结束后I/R组和metformin+I/R组采用切除右肾、夹闭左肾动静脉45min后恢复灌注的方法制备大鼠肾缺血再灌注模型,Sham组切除右肾、不夹闭左肾动静脉。分别于再灌注24h时抽取下腔静脉血测定血清肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）浓度;然后处死大鼠取肾,光镜下观察肾组织形态学变化,免疫组化法测定Bcl-2、Bax、caspase-3表达,并行Tunel染色评估肾小管上皮细胞凋亡程度。结果 跟Sham组比较,I/R和metformin+I/R组的BUN、Cr均明显升高;同时,相比I/R组,metformin+I/R组的BUN和Cr均明显降低,且差异均有统计学意义（P<0.05）。免疫组化检测结果显示,跟Sham组比较,I/R组和metformin+I/R组Bcl-2、Bax、caspase-3表达明显增高;跟I/R组比较,metformin+I/R组Bax、caspase-3表达明显降低,同时Bcl-2的表达明显强于I/R组。Tunel结果显示,相比Sham组,I/R和metformin+I/R组肾小管上皮细胞凋亡数目明显增多;同时,metformin+I/R组肾小管上皮细胞凋亡数目明显少于I/R组,且差异有统计学意义（P<0.05）。结论 二甲双胍预处理能改善大鼠肾缺血再灌注损伤过程中肾功能损害,其机制可能与抑制肾小管上皮细胞凋亡有关。     

中国地鼠口腔颊囊黏膜癌变过程凋亡相关基因caspase-3、caspase-9、Bax、Bcl-2的表达

目的 探讨凋亡相关基因caspase-3、caspase-9、Bax、Bcl-2在中国地鼠口腔正常黏膜、上皮单纯增生、上皮异常增生和鳞状细胞癌组织中的表达及其意义。方法 采用免疫组织化学法、RT-PCR检测正常中国地鼠口腔黏膜上皮、单纯增生上皮、异常增生上皮和鳞癌组织中caspase-3、caspase-9、Bax、Bcl-2蛋白及mRNA的表达。结果 在口腔黏膜癌变过程中,鳞癌组织中抑制凋亡蛋白Bcl-2表达明显高于口腔正常黏膜、上皮单纯增生、上皮异常增生（P<0.05）;异常增生上皮caspase-3、caspase-9、Bax表达均明显高于正常组（P<0.05）,但随着增生程度的加重,caspase-3、caspase-9、Bax表达明显降低（P> 0.05）。相关性分析显示,鳞癌组织中Bcl-2与Bax、caspase-3、caspase-9呈负相关（P< 0.05）。RT-PCR结果表明,与正常组织相比,鳞癌组织中Bcl-2高表达,而caspase-3、caspase-9、Bax的mRNA表达显著下调（P<0.05）。结论 本实验在中国地鼠鳞癌组织中caspase-3、caspase-9、Bax表达降低而Bcl-2表达上升,揭示了caspase-3、caspase-9、Bax、Bcl-2表达与口腔鳞癌的发生、发展密切相关,可以为口腔颊囊黏膜癌的基因治疗提供一些线索或并为评价OSCC的生物学特征及预后提供参考。     

Caspase-9抑制剂对SD大鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡的影响

目的 探讨caspase-9抑制剂对低胎牛血清培养诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡影响的研究。方法 取3月龄SD大鼠椎间盘软骨终板，序贯消化法获取细胞原代培养，以1％FBS培养48h为诱导凋亡条件。实验分为1％FBS凋亡组、caspase-9抑制剂组（Z-LEHD-FMK）及DMSO对照组，分别处理细胞48h，后经流式细胞仪检测细胞凋亡率、western blot检测procaspase-9，active caspase-9及active caspase-3的表达。结果 流式细胞仪检测显示，caspases-9抑制剂组细胞凋亡率（26．3±2．56）％与1％FBS组（40．8±0．84）％及DMSO组（40．2±1．56）％相比凋亡率较低，有显著统计学差异（P＜0．05）；western blot检测caspases-9抑制剂组active caspase-9及active caspase-3较1％FBS凋亡组及DMSO对照组表达均明显减少，有显著统计学意义（P＜0．05）。结论 caspase-9抑制剂能明显抑制低胎牛血清培养诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡，有望成为治疗椎间盘退变的新型药物。