猪血小板衍生生长因子对NIH3T3细胞DNA合成的影响

目的 :检测猪血小板衍生生长因子 （p PDGF）的致丝裂活性。方法 :以 NIH3T3细胞作为靶细胞 ,利用 3H- Td R掺入合成 DNA的方法 ,检测 p PDGF的致丝裂活性。结果 :p PDGF可促进处于静止状态的 NIH3T3细胞 DNA合成 ,并呈现出明显的浓度依赖关系 ,在 30 ng/ m l的浓度时 DNA合成达到高峰 ,2 4 h DNA合成最为显著 ,经 2 -巯基乙醇处理的 p PDGF其致丝裂活性基本丧失。结论 :p PDGF具有良好的生物学活性 ,2 -巯基乙醇可使其丧失生物学活性     

TGFα与bFGF联结皂草毒素蛋白对增殖平滑肌细胞和内皮细胞的特异性细胞毒作用

目的:为比较生物导向药物转化生长因子-皂草毒素蛋白(TGFα-SAP)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)-SAP对增殖平滑肌细胞特异性细胞毒性作用。方法:用SPDP化学联结的方法合成了导向药物TGFα-SAP和bFGF-SAP,以3H-亮氨酸渗入法观察了TGFα-SAP及bFGF-SAP对平滑肌细胞(SMCs)和内皮细胞(ECs)蛋白质合成的影响,并以MTS法和3H-胸腺嘧啶核苷(TdR)渗入法比较TGFα-SAP及bFGF-SAP对SMCs和ECs的增殖和DNA合成的抑制作用。结果:10-9mol/L的TGFα-SAP可明显抑制SMCs增殖,SMCs细胞增殖抑制率达到77.5%,而相同浓度bFGF-SAP的抑制率仅46.1%;并且TGFα-SAP也比bFGF-SAP更明显抑制了培养SMCs的蛋白质合成。与空白对照组比较,3H-亮氨酸掺入量降低了47.3%;该浓度的TGFα-SAP和bF-GF-SAP对ECs却未显示出明显的细胞毒性作用。10-9mol/L的TGFα-SAP明显抑制了SMCs的DNA合成,使3H-TdR掺入量较对照组降低了29.5%,但同样浓度的bFGF-SAP仅使3H-TdR掺入量较空白对照组降低了9.86%。在10-7mol/L浓度下的TGFα-SAP未显示出明显对ECs的细胞毒性作用,而bFGF-SAP具有明显降低ECs的3H-TdR掺入量。结论:TGFα-SAP通过表皮生长因子受体介导具有明显增强的细胞毒性作用,其对增殖SMCs的细胞毒性作用较bFGF-SAP更为敏感,而在10-7mol/L浓度下,bFGF-SAP比TGFα-SAP对ECs显示出更明显的细胞毒性作用。本实验为TGFα-SAP在经皮冠脉成形术后再狭窄临床防治中的应用前景提供进一步实验依据。     

血小板衍生生长因子-BB对血管内皮细胞、平滑肌细胞及成纤维细胞增殖的影响

目的观察血小板衍生生长因子-BB对培养的人血管内皮细胞、兔平滑肌细胞和人成纤维细胞增殖的影响.方法采用培养的人脐静脉血管内皮细胞、兔动脉血管平滑肌细胞和人血管成纤维细胞,应用3H-TdR掺入方法,观察血小板衍生生长因子-BB对三种细胞DNA合成的影响.结果血小板衍生生长因子-BB可促进处于静止状态的三种细胞DNA的合成,并呈现出明显的浓度依赖关系,在30 ng/ml的浓度时成纤维细胞DNA的合成达到高峰,在40 ng/ml的浓度时内皮细胞、平滑肌细胞DNA的合成达到高峰.成纤维细胞、平滑肌细胞分别在PDGF-BB作用24 h和36 h达到DNA合成的高峰,内皮细胞在48 h时DNA合成量最高.结论血小板衍生生长因子-BB可明显促进培养的人脐静脉血管内皮细胞、兔动脉血管平滑肌细胞和人血管成纤维细胞的增殖.     

血小板衍生生长因子—BB对血管内皮细胞、平滑肌细胞及成纤维细胞增殖的影响

目的 观察血小板衍生生长因子—BB对培养的人血管内皮细胞、兔平滑肌细胞和人成纤维细胞增殖的影响。方法 采用培养的人脐静脉血管内皮细胞、兔动脉血管平滑肌细胞和人血管成纤维细胞，应用^3H—TdR掺入方法，观察血小板衍生生长因子—BB对三种细胞DNA合成的影响。结果 血小板衍生生长因子—BB可促进处于静止状态的三种细胞DNA的合成，并呈现出明显的浓度依赖关系，在30ng／ml的浓度时成纤维细胞DNA的合成达到高峰，在40ng／ml的浓度时内皮细胞、平滑肌细胞DNA的合成达到高峰。成纤维细胞、平滑肌细胞分别在PDCF-BB作用24h和36h年到DNA合成的高峰，内皮细胞在48h时DNA合成量最高。结论 血小板衍生生长因子—BB可明显促进培养的人脐静脉血管内皮细胞、兔动脉血管平滑肌细胞和人血管成纤维细胞的增殖。     

非洲臀果木提取物对由bFGF所致NIH3T3细胞增生的抑制作用

目的通过体外观察非洲臀果木提取物对由碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）所致NIH3T3细胞增生的作用来了解其治疗良性前列腺增生的机理。方法在体外培养NIH3T3细胞后,分别在其中加入bFGF和非洲臀果木提取物。继续培养48h,然后每个样本取细胞悬浮液在光学显微镜下进行细胞观察,并用溴化甲基噻唑基四唑（MTT）法测定细胞OD值。最后比较各组细胞生长情况,并进行统计学分析。结果在NIH3T3细胞中加入bFGF后,细胞记数明显增多,再加入非洲臀果木提取物后,细胞记数明显减少。用MTT法测定细胞OD值,加入bFGF后,OD值明显增加,再加入非洲臀果木提取物后,吸光度（OD值）明最减少。以上结果有统计学意义。结论bFGF对NIH3T3细胞有明显刺激生长的作用。非洲臀果木提取物不论有元bFGF存在对NIH3T3细胞的生长均有抑制作用。     

全反式维甲酸对血管平滑肌细胞增生和细胞周期素依赖激酶抑制蛋白P27蛋白表达的影响

目的：探讨全反式维甲酸对细胞周期素依赖激酶抑制蛋白P27蛋白表达，血管平滑肌细胞DNA合成和增生的影响。方法：取Wistar大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞培养，用^3H—TdR掺入率检测血管平滑肌细胞DNA合成和增生，用western—blotting印迹和图像分析方法检测细胞周期素依赖激酶抑制蛋白P27蛋白表达。结果：全反式维甲酸（2．5μmol／L）明显抑制胎牛血清（20％FBS）诱导的血管平滑肌细胞P27蛋白表达；全反式维甲酸明显抑制胎牛血清诱导的血管平滑肌细胞增生和DNA合成。结论：全反式维甲酸具有抗血管平滑肌细胞增生作用，其机制与促进P27蛋白表达有关。     

卡托普利对动脉腔内成形术局部平滑肌细胞超微结构影响的实验研究

本实验在建立兔右髂动脉粥样硬化狭窄模型的基础上,观察卡托普利对成形术局部血管内膜平滑肌细胞(SMCs)超微结构的影响.结果表明,扩张术后1～2周血管内膜SMCs.由收缩型转变为合成型;卡托普利可使SMCs胞浆中与合成及增生功能有关的细胞器(粗面内质网和线粒体)明显减少,单位体积SMCs胞浆内细胞器作密度显著降低.提示卡托普利可有效抑制SMCs增殖程度,对防止再狭窄发生有重要意义.     

脂质过氧化对血管内皮细胞促增殖活性的影响

为探讨脂质过氧化对血管内皮细胞源生长因子的影响，以氢过氧化枯烯作用于培养的牛主动脉内皮细胞后，收集内皮细胞条件培养基，并用肝素亲和层析法处理，分组测定其对3T3细胞3H-胸腺嘧啶核苷掺入率的影响，并用放射免疫法测定各脂质过氧化作用组内皮细胞培养基中内皮素的含量。结果发现．氢过氧化枯烯使培养的内皮细胞的脂过氧化物蓄积增加，且内皮细胞条件培养基对3T3细胞的DNA合成有促进作用．对Swiss3T3细胞的促增殖活性主要存在于非肝素结合部分。氢过氧化枯烯作用后的内皮细胞的内皮素分泌水平比对照组增加。由此推测脂质过氧化作用引起的内皮细胞对平滑肌细胞的促增殖活性可能与内皮素等非肝素结合的分子有关。     

平滑肌细胞源性趋化因子的研究

以兔主动脉平滑肌细胞条件培养基作为趋化因子的来源,用微孔滤膜法检测其对平滑肌细胞及NIH 3T3纤维母细胞的趋化活性。结果表明,该条件培养基对培养的平滑肌细胞有明显的趋化活性,而对NIH 3T3纤维母细胞则否;该条件培养基对平滑肌细胞的迁移作用是一种趋化作用而非化学促动作用。     

血小板衍化生长因子对血管平滑肌细胞增殖及胶原蛋白合成的影响

目的 :观察血小板衍化生长因子 （PDGF）对培养的血管平滑肌细胞 （VSMC）增殖及胶原蛋白合成的影响。方法 :采用培养的兔动脉 VSMC,应用 3H- Td R的 3H-脯氨酸掺入方法 ,观察 PDGF- BB对兔 VSMC DNA合成以及胶原蛋白合成的影响。结果 :PDGF- BB可促进处于静止状态的兔 VSMC DNA及胶原蛋白的合成 ,并呈现明显的浓度依赖关系 ,在 40 μg/ L 的浓度时 DNA及胶原蛋白的合成达到高峰 ,DNA及胶原蛋白分别处于 36 h和 48h合成最为显著。结论 :PDGF- BB可明显促进培养的 VSMC增殖及胶原蛋白的合成。     

血小板源生长因子对动脉平滑肌细胞增殖,Ⅰ、Ⅲ型前胶原信使核糖核酸的表达及胶原蛋白合成的调节作用

目的：研究血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）对培养的人主动脉平滑肌细胞增殖、胶原蛋白合成、分泌及Ⅰ、Ⅲ型前胶原信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）表达和转移生长因子βｍＲＮＡ表达的调节作用。方法：氚胸腺嘧啶脱氧核苷（３ＨＴｄＲ），氚脯氨酸参入及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析。３ＨＴｄＲ，氚脯氨酸参入的比较采用ｔ检验。结果：ＰＤＧＦ能促进人主动脉平滑肌细胞脱氧核糖核酸（ＤＮＡ）合成和胶原蛋白合成、分泌；ＰＤＧＦ能上调Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ表达和转移生长因子βｍＲＮＡ表达。结论：血小板源生长因子能通过上调Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ表达和转移生长因子βｍＲＮＡ表达促进平滑肌细胞胶原蛋白的合成、分泌。     

黄芪和当归对血管平滑肌细胞表型标志基因表达和细胞增殖的影响

为了观察黄芪和当归对血管平滑肌细胞表型转化和增殖的影响，采用体外培养的血管平滑肌细胞，以碱性成纤维细胞生长因子诱导其表型转化和增殖，在此基础上，通过Northern和Western印迹法检测平滑肌细胞表型标志基因表达的变化，研究黄芪和当归注射液对碱性成纤维细胞生长因子上述效应的抑制作用。结果发现，碱性成纤维细胞生长因子可明显下调分化型标志基因平滑肌α-肌动蛋白的表达，上调去分化型标志基因平滑肌胚胎型肌球蛋白重链和骨桥蛋白表达，诱导原癌基因c-jun表达及促进血管平滑肌细胞DNA合成。黄芪和当归可上调分化型标志基因的表达活性，下调去分化型标志基因的表达，不同程度地抑制碱性成纤维细胞生长因子诱导的血管平滑肌细胞表型转化和DNA合成，有效抑制血管平滑肌细胞增殖，其作用机制可能与抑制碱性成纤维细胞生长因子诱导的c-jun基因表达有关。二者相比，当归的作用大于黄芪。结果提示，黄芪和当归可从多位点上拮抗碱性成纤维细胞生长因子促血管平滑肌细胞表型转化及细胞增殖。     

突变的大肠癌线粒体DNA转染NIH3T3及LST细胞的研究

目的了解大肠癌细胞株（SW480，LOVO，HT29）线粒体DNA的突变，克隆突变的大肠癌线粒体DNA（mtDNA）基因，构建peDNA3．1（＋）-mtDNA真核表达重组体，并导入NIH3T3及LST细胞，以探讨线粒体基因突变与肿瘤发生的关系。方法提取大肠癌细胞株（SW480，LOVO，HT29）mtDNA，扩增D—LOOP区，产物用DNA自动测序法进行序列分析。利用DNA重组技术将其定向插入真核表达质粒peDNA3．1（＋），并用脂质体法导人NIH3T3及LST细胞。用MitoCa．ptureMitochondrialApoptosisDetectionKit试剂盒染色后用流式细胞仪及荧光显微镜检测转染细胞的凋亡情况。扩增并测序分析转染细胞的D—LOOP区突变特点。结果检测出大肠癌细胞株SW480，LOVO，HT29细胞mtDNAD—LOOP分别有10，9，8个突变位点。转染前后，各组间细胞凋亡无明显变化。转染细胞的核基因组可扩增出目的基因及Neo基因。4株NIH3T3转染细胞mtDNAD-环区分别检测到9，11，8，4个突变点，并相应有3，4，3，2个多态性变化。结论（1）转染突变的大肠癌细胞mtDNA后转染细胞的mtDNA均可发生多处的突变位点。（2）通过转染后突变的外源性的mtDNA可以整合到核基因组内。（3）突变的mtDNA转染LST细胞及NIH3T3细胞后，不影响转染细胞的凋亡改变。（4）mtDNA的突变可能通过影响体细胞mtDNA的突变和通过外源性mtDNA在核内的整合从而影响癌基因或抑癌基因的表达异常，从而参与肿瘤的发生发展。     

前列腺癌特异突变DNA聚合酶β表达载体转染NIH3T3的细胞生物学行为变化

目的观察前列腺癌(CPa)特异突变DNA聚合酶β(polβ)表达载体转染NIH3T3的细胞生物学行为变化。方法采用业已成功构建的2例特异突变polβ表达载体(pCDNA3.1-M1和pCDNA3.1-M2),采用脂质体包裹转染NIH3T3细胞,观察比较这些突变对细胞polβ基因mRNA和蛋白表达的影响以及引发的相应的细胞周期和细胞自发突变率等细胞生物学行为的变化。结果筛选得到高表达PCa特异突变polβ的NIH3T3细胞株(NIH3T3-M1,NIH3T3-M2)和高表达野生型polβ的NIH3T3细胞株(NIH3T3-W)。RT-PCR和Western印迹结果显示,外源DNApolβ在转化的NIH3T3细胞中呈现高表达。与转染空载体和未转染的NIH3T3细胞相比,转染PCa特异突变polβ的2个细胞株和转染野生型polβ的细胞株的细胞周期的S期比例及转染细胞的HGPRT(次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶)基因的自发突变率均显著增加,且转染野生型polβ的细胞株亦显著高于转染PCa特异突变DNApolβ的细胞株。结论 DNApolβ高表达介导了肿瘤发生的分子机制。     

氧化低密度和极低密度脂蛋白对单核细胞血小板源性生长因子B链表达的影响

在单核细胞的培养基中分别加入25mg·L^-1低密度脂蛋白(lowdensitylipoprotein,LDL)、氧化LDL(oxidizedLDL,OLDL)、极低密度脂蛋白(verylowdensiylipoprotein,VLDL)和氧化极低密度脂蛋白(oxidizedVLDL,OVLDL),培养24h后再用无血浆脂蛋白培养基收集条件培养基,并观察此条件培养基对￣3H-TdR投入血管壁平滑肌细胞DNA的影响。用抗血小板源性生长因子B链抗体(抗PDGF-B抗体)作疫组织化学染色。结果表明,单核细胞能表达PDGFB,OLDL和OVLDL能明显地促进单核细胞PDGF-B的表达,其条件培养基亦能促进￣3H-TdR掺入平滑肌细胞DNA内。上述结果提示,OLDL和OVLDL通过加强单核细胞分泌PDGF-B并促进平滑肌细胞增殖而在动脉粥样硬化的发病过程中起作用。     

生物导向药物转化生长因子α-皂草毒素蛋白Saporin对增殖血管平滑肌细胞具有特异性的生长抑制作用

目的 :证实导向药物转化生长因子α 皂草毒素蛋白Saporin (TGFα SAP)对增殖血管平滑肌细胞特异性的生长抑制作用。　　方法 :用SPDP化学联结的方法合成了导向药物TGFα SAP ,并以四唑盐 (MTS)比色法和3 H 胸腺嘧啶掺入法进一步探讨了TGFα SAP对血管平滑肌细胞增殖的作用 ,及对血管平滑肌细胞和内皮细胞DNA合成的影响。　　结果 :实验显示TGFα SAP对血管平滑肌细胞的增殖有明显抑制作用 ,并可使其3 H 胸腺嘧啶掺入量降低 ,而皂草毒素蛋白Saporin显示的细胞毒性作用则很弱 ;同时TGFα SAP对增殖的内皮细胞的DNA合成几乎未显示明显的细胞毒性作用。　　结论 :TGFα SAP通过表皮生长因子 (EGF)受体介导较皂草毒素蛋白Saporin具有了明显增强的细胞毒性作用 ,可选择性抑制血管平滑肌细胞的增殖而对内皮细胞未显示出明显的毒性作用。     

TGF-SAP对平滑肌细胞增殖和内膜增生的抑制作用

目的　探讨生物导向药物TGFα SAP对平滑肌细胞增殖及动脉损伤后内膜增生的特异性抑制作用。方法　用SPDP化学联结的方法合成TGFα SAP ,采用细胞计数方法观察TGFα SAP对培养中的增殖平滑肌细胞的细胞毒性作用 ,并以3H leucine渗入法进一步了解TGFα SAP对平滑肌细胞的蛋白质合成的影响 ;在体实验中将Sprague Dawle大鼠随机分为治疗组和对照组 ,均行右颈总动脉球囊内膜剥脱术 ,治疗组术后局部注射TGFα SAP ,对照组予以生理盐水 ;于不同时间点处死动物取动脉段行光镜观察及计算机图像分析。结果　从体外实验可见TGFα SAP能明显抑制SMCs的生长增殖及蛋白质合成 ;在体实验中图像分析结果显示 :动脉损伤后TGFα SAP治疗组在第 3 ,9和 2 8天内膜 /内膜加中膜面积显著小于对照组 (P <0 .0 5 )。结论　TGFα SAP与Saporin相比对增殖平滑肌细胞具有明显增强的细胞毒性 ,在体实验中亦可见其对损伤后的内膜增生具有明显的抑制作用     

尿蛋白诱导活化的肾小管上皮细胞对肾间质成纤维细胞的作用

目的：探讨尿蛋白诱导活化的肾小管上皮细胞对肾间质成纤维细胞(RIF)的作用及其相关机制。方法：用肾小球微小病变患者尿液中提取的总蛋白成份刺激肾小管上皮细胞(HK—2)，用刺激后的肾小管上皮细胞条件培养基（HK2-CM)与RD共培养。以^3H—TdR掺人法测定RIF细胞增生情况，用Western Blot方法检测RIF细胞的单核细胞趋化因子(MCP—1)及α—平滑肌肌动蛋白(α—SMA)蛋白表达，间接竞争酶联免疫吸附法检测纤维粘连蛋白(Fn)分泌水平。结果：尿蛋白须处理的HK2-CM可刺激RIF增生，使其MCP—1及α-SMA蛋白表达明显增加，并可促进分泌Fn蛋白。转化生长因子—β1(TGF—-β1)中和抗体可部分阻断尿蛋白(5g/L)预处理的HK2-CM对RIF的促分泌Fn、刺激MCP—1和α—SMA蛋白合成的作用。结论：人类微小病变来源尿蛋白诱导活化的肾小管上皮细胞可进一步促进RIF增生，使其合成Fn和MCP—1，并可诱导其发生表型转化，这一效应可能部分通过TGF—-β1 的作用介导。     

生长激素、催乳素和IGF-I对大鼠INS-1细胞中IGFBP-3基因表达的调控

激素和生长因子一直是胰岛生长发育的重大研究课题。目前 ,尚未发现任何一种激素或生长因子是胰岛细胞生长和分化的决定性因素 ,但不论在体还是离体 ,生长激素 (GH)及其相关的激素 ,如催乳素 (PRL)、胎催乳激素 (PL) ,对胰腺 β细胞具有促进细胞增生和胰岛素分泌的作用 [1 ]。 Swenne等 [2 ]已证明 ,人生长激素(h GH)能促进正常β细胞的增生 ,而在肝细胞中 ,GH通过其受体促使肝细胞分泌 IGF- 1。 IGF- I对细胞的增生作用主要通过自分泌和旁分泌两种途径。IGFs根据不同的靶器官与相应的特异性蛋白结合 (IGFBPs) ,来调节自身的生物…     

血管肽对人内乳动脉平滑肌细胞增殖及原癌基因表达的影响

目的 :观察血管肽 (AP)对血小板衍化生长因子 BB(PDGF- BB)刺激下人内乳动脉平滑肌细胞(h IMASMC)增殖及 c- m yb m RNA表达的影响 ,并探讨其作用机制。方法 :采用细胞计数及 3H- Td R掺入法观察细胞增殖及 DNA合成 ;以 N orthern blot观察 c- m yb m RN A表达。结果 :AP对 h IMASMC、DNA合成及 c- m ybm RNA表达具有剂量依赖性抑制作用。结论 :AP可抑制 h IMA SMC增殖 ,其作用与原癌基因表达有关