脊髓神经干细胞在Sapeptide材料上增殖与分化的研究

目的观察脊髓神经干细胞在Sapeptide材料上的增殖和分化情况，并对分化的细胞进行一定功能检测，探讨其细胞假体在脊髓损伤中应用的可能性。方法观察塑形的Sapeptide材料，将培养的脊髓神经干细胞接种其上，然后鉴定干细胞并通过体积分数5％胎牛血清诱导分化，鉴定分化细胞的类型及比例，并与无材料的干细胞的分化情况相比较，最后对材料上的分化细胞进行缝隙连接蛋白32（CX32）和生长相关蛋白43（GAP-43）染色评价。结果Sapeptide材料在等渗盐水中可塑形，扫描电镜示具有规则的网状排列，脊髓神经干细胞在其上可增殖和分化，分化的细胞较无材料的差异无统计学意义（P〉0．05），并且具有大量的CX32和GAP-43阳性细胞。结论脊髓神经干细胞在Sapeptide材料上增殖和分化良好，假体在脊髓损伤的修复中可能具有潜在的应用前景。     

神经干细胞培养影响因素的研究

神经干细胞是指具有分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质和对疾病损伤具有反应性修复潜能的细胞。神经干细胞的发现对神经系统的难治性疾病的治疗带来了希望。然而,内源性神经干细胞的数量在机体内特别是在成体内存在极少,使其在反应性疾病损伤中的修复作用体现非常有限,因此,体外有效培养和扩增神经干细胞仍然是目前科研工作者获取神经干细胞的主要手段。本文就影响神经干细胞培养的主要影响因素如取材、分离培养、接种密度及传代纯化方法等方面进行分析,为神经干细胞的体外培养提供参考。     

神经干细胞研究进展

随着神经分子生物学的研究 ,已经从人胚胎、成人脑和脊髓内分离出神经干细胞。并成功建立了永生化细胞系。神经干细胞 (Neuralstemcell,NSC)是指具有分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞的能力 ,能自我更新并足以提供大量神经组织细胞的细胞。1　神经干细胞的基本生物学特性1 .1　自我复制能力 :分裂增殖过程中子代细胞仍具有干细胞样属性 ,包括增殖能力、多分化潜能和表达NSC特有的生物学标记神经巢蛋白 (Nestin)。NSC自我复制的有丝分裂原主要包括表皮生长因子 (Epitheliumgrowthfactor,EGF)、碱性成纤维细胞生长因子 (Basic…     

脑神经干细胞移植的磁共振活体成像研究进展

随着对干细胞的深入研究，已有明确的证据表明神经干细胞能促进神经元和胶质细胞的再生及脑组织的修复。MRI在无创性、活体研究移植神经干细胞在宿主体内的分布、存活、分化、移行等功能状态以及评价治疗效果等方面具有独特的价值。就MRI在脑神经干细胞移植的示踪研究中的进展作一综述。     

恒河猴骨髓基质细胞体外诱导分化成神经干细胞的实验研究

为研究恒河猴骨髓基质细胞（BMSC）体外培养及诱导分化为神经干细胞的可行性，分离恒河猴BMSC，在体外应用神经干细胞培养液和细胞因子进行诱导分化，利用免疫细胞化学方法进行鉴定。结果发现，恒河猴BMSC能在体外培养中增殖，分化和表达干细胞特异性抗原神经巢蛋白（Nestin)，并最终能分化为胶质细胞样细胞和神经元样细胞；免疫细胞化学检测可见有神经元特异性烯醇化酶（NSE）和胶质原性纤维酸性蛋白（GFAP）抗原表达；未发现维甲酸（RA），表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)对骨髓基质干细胞的诱导分化具有明显影响作用。提示恒河猴BMSC是具有较强的自我更新能力和多分化潜能的细胞，在一定条件下，可分化为表达神经系细胞（神经元和神经胶质细胞）抗原的细胞，可作为神经细胞的种子细胞。     

不同损伤时期人脑挫裂伤对神经干细胞分化影响的体外研究

目的：将人神经干细胞与不同损伤时期人挫裂伤脑组织（3 d、2月、6月）匀浆上清液体外培养,研究不同时期挫裂伤脑组织对神经干细胞分化的影响,探讨神经干细胞移植的最佳时机。方法：从12周流产胎儿脑组织提取神经干细胞,传代培养。加入不同时期脑挫伤组织匀浆上清液共培养,观察神经干细胞分化情况。结果：胎儿脑组织提取的神经干细胞具有分化增殖能力,与挫伤脑组织共培养后可分化成神经元和神经胶质细胞,越早期的挫伤脑组织诱导神经干细胞分化成神经元细胞的比例越高。结论：脑挫裂伤后早期组织可以诱导神经干细胞分化成更多的神经元,脑挫裂伤后早期行神经干细胞移植可能有助于提高疗效。     

成体小鼠脊髓实质神经干细胞的分离培养及其多能性的鉴定

目的从成年小鼠脊髓实质中分离培养并鉴定成体神经干细胞。方法采用无血清培养基及单细胞克隆技术，从成年小鼠脊髓实质中分离培养获得大量具备单细胞克隆能力的细胞，经免疫荧光染色证实单克隆细胞表达Nestin抗原并在分化后表达各种特异性的神经细胞抗原。结果从成年小鼠脊髓实质中分离培养获得的具备连续克隆能力的细胞可表达神经干细胞的Nestin抗原，并且分化后表达神经元及胶质细胞的特异性抗原。结论成功地从成年小鼠的脊髓实质中分离出具备增殖分化能力的成体神经干细胞，为进一步利用其进行脊髓损伤治疗的研究提供了实验基础。     

神经干细胞分化调节因子的研究进展

近年来随着干细胞研究的发展,神经干细胞的发现为干细胞治疗神经系统疾病提供了前提条件。在脑损伤后中枢神经系统的神经干细胞可分化成为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,神经干细胞周围微环境会影响神经干细胞的增殖、存活、迁移和分化。本文综述了肾上腺髓质激素、生长因子和低氧诱导因子等细胞因子对神经干细胞的增殖分化的影响,分析了这一领域目前存在的问题,并就今后的发展进行了积极的思考。     

成人骨髓源性神经干细胞诱导分化实验研究

为探讨成人骨髓分离培养神经干细胞的可行性和有效性 ,无菌条件下行骨穿 ,梯度密度离心分离获取成人骨髓源细胞 ,以“CYTOKINE·神经干细胞培养液”培养 ,确定神经干细胞的最佳体外生存环境。以细胞克隆方法判断神经干细胞增殖情况 ;以NESTIN、NSE及GFAP免疫细胞化学方法分别鉴定神经干细胞、神经元和神经胶质细胞。细胞培养所涉及的细胞因子主要有GDNF(2 0ng/ml)、LIF(10ng/ml)和RA(0 5 μg/ml)等。结果发现 ,成人骨髓源细胞在相应培养条件下快速分裂增殖为大而圆并含粗大胞质颗粒的神经干细胞 ,后者形成细胞球 (或称“神经球”) ,该细胞球表达特殊的神经干细胞NESTIN抗原 ;若进一步将这些细胞球分离成单细胞并重新以克隆密度培养 ,单个的细胞又很快形成新的神经球。神经干细胞球进一步分化 ,可见到有的细胞胞体增大并出芽 ,逐渐发育成为较成熟的长突起细胞 ,长突起相互连接、交织成网并建立有神经纤维样联系 ,表达NSE或GFAP抗原。说明成年人骨髓在一定条件诱导下可以生成神经干细胞 ;用人骨髓组织诱导神经干细胞作为种子细胞具有可行性和有效性     

脑神经干细胞移植的磁共振活体成像研究进展

随着对干细胞的深入研究,已有明确的证据表明神经干细胞能促进神经元和胶质细胞的再生及脑组织的修复.MRI在无创性、活体研究移植神经干细胞在宿主体内的分布、存活、分化、移行等功能状态以及评价治疗效果等方面具有独特的价值.就MRI在脑神经干细胞移植的示踪研究中的进展作一综述.     

红细胞生成素(EPO)对脑源性神经干细胞增殖与分化的调控作用

目的探讨红细胞生成素(EPO)对大鼠海马神经干细胞(NSCs)体外增殖和分化的影响。方法利用无血清培养、单细胞克隆技术,体外培养SD大鼠海马组织源NSCs,在NSCs增殖和分化过程中添加不同剂量EPO,以免疫细胞化学方法对NSCs及其分化后的细胞进行鉴定。结果与对照组相比,不同接种密度条件下的NSCs加入EPO后,增殖期表达Nestin的细胞增加2～4倍,分化期表达Nestin的细胞数明显减少;表达Tuj1和GFAP的细胞出现早,且Tuj1阳性细胞较对照组明显增加(P<0.05),加入antiEPO后Tuj1阳性细胞较对照组明显减少(P<0.01);相同细胞接种密度下,添加不同剂量EPO后Tuj1阳性细胞数呈剂量依赖性增加。结论EPO可促进大鼠海马源NSCs的增殖,并使其呈剂量依赖性的向神经元分化。     

内源性NSPCs与脊髓损伤治疗的研究进展

脊髓损伤治疗是当今研究的热点和难点。目前脊髓损伤治疗主要包括移植外源性神经干/祖细胞(neural stem/progenitor cells,NSPCs)和激活内源性NSPCs。移植外源性NSPCs治疗脊髓损伤面临细胞来源受限、伦理道德、移植细胞的存活等问题。内源性NSPCs治疗脊髓损伤,面临如何促使内源性NSPCs的激活、增殖、迁移、分化、转归等问题。本文就内源性NSPCs及脊髓损伤治疗的研究进展进行综述。     

Magnetosonoporation: Instant magnetic labeling of stem cells

The purpose of this study was to develop an instant MR cell labeling technique, called magnetosonoporation. First, a magnetosonoporation apparatus was successfully established for MR labeling of stem cells. Then, the safety of this new cell labeling approach was confirmed by evaluation of cell viability, proliferation, and differentiation of magnetosonoporation‐labeled and unlabeled C17.2 neural stem cells. Subsequently, the feasibility of using in vivo MRI to detect magnetosonoporation/Feridex‐labeled stem cells was validated in living animals and confirmed by histologic correlation. The magnetosonoporation technique is expected to be convenient, efficient, and safe for future clinical application of MRI‐guided cell therapies. Magn Reson Med 63:1437–1441, 2010. © 2010 Wiley‐Liss, Inc.     

骨髓间充质干细胞功能异常在雌激素所致骨质疏松发病中的作用研究

目的通过研究去势骨质疏松小鼠骨髓间充质干细胞（BMMSC）增殖及分化功能的改变,揭示其在骨质疏松发病中的作用。方法建立去势小鼠骨质疏松模型,检测BMMSC增殖和多向分化能力变化,采用反转录酶-聚合酶链反应（RT-PCR）和小核糖核酸（microRNA）芯片对骨质疏松BMMSC的分化相关基因和microRNA表达谱进行检测。结果在雌激素缺乏所致的骨质疏松中,BMMSC的增殖能力和成骨分化能力出现了一定的下降,而成脂分化能力却明显增强,同时发现一组分化功能相关基因及microRNA表达出现改变。结论 BMMSC的功能缺陷与骨质疏松的病理改变相一致,可能在骨质疏松发生中起到重要作用。而部分功能基因及microRNA的改变可能是导致BMMSC功能异常的分子机制。     

人神经干细胞在宿主鼠脑内分化成神经元呈脑位点特征

目的研究人胎脑神经干细胞植入年幼大鼠脑后的成神经元分化作用,探讨神经干细胞替代治疗小儿脑病的可行性。方法自孕16周的胎脑组织分离培养出神经干细胞球,在小儿脑脊液中培养诱导分化以证明其分化潜能。将培养14d的神经干细胞球移植10d龄鼠的侧脑室内,于移植后第4、7、14天杀鼠取脑,切片,行人神经丝特异性标志的免疫荧光分析,显示神经元的分布和细胞形态。结果培养获得典型神经干细胞球,呈漂浮生长,在小儿脑脊液中能分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。用抗人神经丝混合单抗检测移植物的成神经元分化,移植后的第4天,观察到阳性反应细胞在颗粒层表现为颗粒性细胞,锥体细胞层则出现长突起的锥体细胞,还有连接神经元样中间神经元,小脑内有单层排列的浦肯野细胞。对比各时间点的观察结果,阳性细胞分布位置未变。随着移植后天数的后延,阳性细胞数量呈减少趋势,但锥体细胞的突起明显加长。结论体外培养获得的人神经干细胞脑室途径移植年幼大鼠,在脑内发生迁移,并分化成形态上与其临近宿主细胞一致的神经元。提示宿主脑组织局部微环境在引导移植物分化成神经元中发挥了重要作用。     

间充质干细胞移植治疗作用机制

间充质干细胞治疗的疾病谱比造血干细胞更广。迄今为止,国外已有十多个间充质干细胞产品被批准临床应用,国内也有数个产品被批准临床试验研究。间充质干细胞通过直接和间接两种方式发挥治疗作用。直接方式包括归巢、促进外源干细胞植入患处,以及定向分化与多向分化等;间接方式包括双向调节免疫反应和炎症反应、抗氧化应激、抗纤维化、抗凋亡、造血支持作用及参与或促进血管再生、激活内源干细胞增殖分化及患病组织器官已分化的正常细胞去分化,以及抗衰老、抗瘢痕等。间充质干细胞移植治疗的作用机制十分复杂,迄今仍没有完全弄清,还需要进行深入研究。研究间充质干细胞的移植治疗作用机制,对于间充质干细胞临床应用具有重要意义。     

食蟹猴骨髓基质干细胞体外诱导分化的实验研究

为观察食蟹猴骨髓基质干细胞（BMSC）体外培养及诱导分化情况，分离食蟹猴的BMSC，以神经干细胞培养液和分化诱导因子进行体外培养和诱导分化。结果发现，分离得到的食蟹猴BMSC能在体外培养中增殖，分化，这些具有克隆能力的BMSC能表达神经干细胞特异性抗原Nestin，并能进一步诱导分化出胶质细胞样细胞和神经元样细胞，免疫细胞化学检测可见有GFAP和NSE抗原表达。提示灵长类BMSC是多分化潜能细胞，具有较强的自我更新和多分化能力，在适当的诱导分化条件下可形成具有神经系细胞（神经元和神经胶质细胞）特征的细胞；BMSC可作为神经干细胞的种子细胞。     

Stem cell profiling by nuclear magnetic resonance spectroscopy.

The classification of embryonic and adult stem cells, including their derivatives, is still limited, and often these cells are best defined by their functional properties. Recent gene array studies have yielded contradictory results. Also, very little is known about the metabolic properties of these exciting cells. In this study, proton (1H) NMR spectroscopy was used to identify the major low-molecular-weight metabolites in murine embryonic stem cells (ESC) and their neural stem cell (NSC) derivatives. ESC are characterized by an unusually low number of NMR-detectable metabolites, high phosphocholine (PC) content, and nondetectable glycerophosphocholine (GPC). The metabolic profiles of NSC resemble glial cells and oligodendrocyte progenitors, but with considerably higher PC, GPC, and myo-inositol content. The results suggest that NMR spectroscopy in vitro can provide markers to study the effects of differentiation on cell metabolism, and potentially to assess stem cell preparations for differentiation status.     

胚胎干细胞在脊髓损伤中的应用

神经干细胞具有自我增殖、分化、迁移及建立突触联系的特征,并可促进损伤神经组织的修复与再生。最近发现,经胚胎干细胞诱导的神经前体细胞植入受损伤的脊髓中,可分化为神经元和神经胶质细胞,并能促进脊髓功能的恢复,提示胚胎干细胞在中枢神经系统的治疗中具有广阔的应用前景。