P58^IPK基因在糖尿病鼠视网膜中表达的动态变化

背景糖尿病视网膜病变（DR）的分子生物学发病机制仍不清楚,以往的研究表明内质网应激相关因子在糖尿病患者外周血中呈高表达,而P58^IPK可以抑制这些因子的表达,因此P58^IPK和糖尿病之间的关系值得深人研究。目的检测P58^IPK。在糖尿病大鼠模型视网膜中的动态表达,为进一步研究P58^IPK抑制DR的机制奠定基础。方法18只sD大鼠腹腔注射60mg／kg链脲佐菌素（STZ）制作糖尿病动物模型,分别于造模后1、3、6个月各处死6只大鼠;另6只匹配的正常SD大鼠作为正常对照组。取视网膜组织采用实时定量聚合酶链反应（real—timePCR）法检测P58^IPKmRNA在大鼠视网膜中的表达,观察P58^IPKmRNA随糖尿病的发展出现的动态变化。结果造模后糖尿病组大鼠表现出多饮、多食、多尿,血糖均≥16．5mmol／L,造模成功率为100％。造模后1个月、3个月鼠视网膜中P58^IPKmRNA／β-actinmRNA的A值分别为0．800±0．005和0．975±0．008,明显高于对照组的0．725±0．006,差异有统计学意义（t=22．589、t=62．784,P〈0．05）,造模后6个月鼠视网膜P58^IPK／β—actin的A值为0．671±0．004,并明显低于对照组,差异有统计学意义（t=-17．984,P〈0．05）。结论P58^IPK。参与DR的发病机制,可能具有延缓DR发生和发展的作用。     

糖尿病大鼠视网膜中内质网应激蛋白、HIF-1α和血管内皮生长因子的表达

目的：探索糖尿病大鼠视网膜中内质网应激相关BIP (蛋白重链结合蛋白)、HIF-1α(低氧诱导因子-1α)和VEGF (血管内皮生长因子)的表达及意义。
　　方法：72只雄性SD大鼠,随机分为6组：正常2月对照组(C2m),糖尿病2月组(D2m),正常4月对照组(C4m),糖尿病4月组(D4m),正常6月对照组(C6m),糖尿病6月组(D6m),每组各12只。实验组给予一次性腹腔注射65mg/kg STZ建立糖尿病模型。 ELISA法检测BIP、HIF-1α和VEGF表达水平,免疫组化法观察大鼠BIP、HIF-1α和VEGF视网膜内定位情况。
　　结果：BIP表达随DM 病程的延长而增加( P<0.05),且DM各组与对照组相比,其差异均有统计学意义( P<0.01)。 HIF-1α在DM组中表达较对照组增加,其差异有统计学意义(P<0.05),但DM组各组间差异无统计学意义。 VEGF蛋白在D2 m组与对照组间差别无统计学意义,但 D4 m、D6 m 与对照组间差别有统计学意义( P<0.05),且D4 m和D6 m两组间差别有统计学意义。免疫组化：BIP在对照组视网膜神经节细胞层中少量表达,DM组主要分布于视网膜内核层和神经节细胞层;HIF-1α在对照组基本不表达, DM组各层均有表达;VEGF在对照组大鼠中视网膜各层中少量表达,而DM组大鼠的内核层、外核层及视网膜血管、神经节细胞层中 VEGF 阳性表达。
　　结论：糖尿病大鼠视网膜组织中的 BIP、HIF-1α、VEGF均较对照组增加且随糖尿病病程进展而增加,内质网应激和低氧诱导因子途径均可能在糖尿病视网膜病变的进展中起重要作用。     

内质网应激与糖尿病鼠视网膜神经节细胞凋亡的研究

目的 探讨葡萄糖调节蛋白(GRP78/Bip)半胱天冬酶12(Caspase-12)在糖尿病(DM)大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)中的表达及其与RGCs凋亡的关系.方法 STZ法建立24只DM模型鼠,按饲养时间1个月、3个月分为DM1个月组和DM 3个月组,12只正常SD大鼠为对照组.TUNNEL法检测视网膜细胞凋亡及存在的部位;免疫组织化学、Western blot及RT-PCR方法检测视网膜GRP78、caspase-12蛋白及Mrna的表达.结果 DM 1个月组出现RGCs凋亡,DM 3个月组凋亡增加.GRP78蛋白表达于正常组,DM 1个月、DM 3个月组表达较正常组增加(P＜0.01);caspase-12在正常视网膜中不表达,DM 3个月组表达与DM 1个月组差异有统计学意义(P＜0.01).GRP78、caspase-12mRNA均随着DM病程表达升高.结论 DM大鼠RGCs的凋亡随着DM病程延长而增加,RGCs的凋亡可能存在着内质网应激途径.     

单核细胞趋化蛋白-1在早期糖尿病大鼠视网膜中的表达及意义

目的　探讨单核细胞趋化蛋白 1 (MCP 1 )在早期糖尿病大鼠视网膜中的表达及其与糖尿病视网膜病变(DR)的关系。 方法　Wistar大鼠随机分为正常对照组 (NC组 )和糖尿病模型组 (DM组 ),每组 12只。大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱发糖尿病模型。8周时全部处死,采用Western免疫印迹法和免疫组织化学法,分析MCP 1在早期DM大鼠视网膜中的表达,对免疫印迹结果采用计算机图像分析系统处理。 结果　8周时,免疫印迹结果显示视网膜中MCP 1的表达DM组明显高于NC组(P<0 01),免疫组织化学法显示 8周时DM大鼠视网膜表面血管、内核层均可见MCP 1阳性着染细胞。 结论　MCP 1在视网膜组织中的表达与DR的发生有密切关系。     

血管内皮生长因子在糖尿病大鼠视网膜中的表达

目的 :观察血管内皮生长因子 (VEGF)蛋白在链脲佐菌素 (STZ)诱导的糖尿病大鼠视网膜中的表达情况 ,以探讨其在早期糖尿病视网膜病变 (DR)中的作用。方法 :选择健康成年Wistar大鼠 4 0只 ,随机分成正常对照组 (CON)、糖尿病 1个月组 (DM1)、糖尿病 3个月组 (DM3)及糖尿病 6个月 (DM6 )组 ,每组 10只。大鼠腹腔内注射STZ诱发大鼠糖尿病。制备大鼠视网膜石蜡切片行免疫组化ABC法染色 ,光镜观察。结果 :VEGF于CON和DM1组只表达于内核层及节细胞层部分细胞 ;病程 3个月时 ,尚可见视网膜血管的阳性反应 ;6个月时 ,阳性反应范围又扩大至视杆内节和色素上皮细胞。结论 :随病程进展 ,VEGF在视网膜中的表达呈逐渐增强的趋势 ,提示它在早期DR的发生、发展中起重要作用     

血管内皮生长因子在糖尿病在鼠视网膜中的表达

目的：观察血管内皮生长因子（VEGF）蛋白在链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病大鼠视网膜中的表达情况，以探讨其在早期糖尿病视网膜病变（DR）中的作用。方法：选择健康成年Wistar大鼠40只，随机分成正常对照组（CON）、糖尿病1个月组（DM1）、糖尿病3个月组（DM3）及糖尿病6个月（DM6）组，每组10只。大鼠腹腔内注射STZ诱发大鼠糖尿病。制备大鼠视网膜石蜡切片行免疫组化ABC法染色，光镜观察。结果：VEGF于CON和DM1组只表达于内核层及节细胞层部分细胞；病程3个月时，尚可见视网膜血管的阳性反应；6个月时，阳性反应范围又扩大至视杆内节和色素上皮细胞。结论：随病程进展，VEGF在视网膜中的表达呈逐渐增强的趋势，提示它在早期DR的发生、发展中起重要作用。     

缬沙坦对糖尿病大鼠视网膜组织ERK1/ERK2表达的影响

目的观察缬沙坦(Valsartan)对糖尿病大鼠视网膜ERK1/ERK2表达的影响,揭示其抑制肾素血管紧张素系统在糖尿病视网膜病变中的治疗机制。方法将60只Wistar大鼠随机分为3组:正常组、糖尿病组和治疗组。通过链脲佐菌素腹腔注射的方法建立糖尿病大鼠模型,治疗组给予Valsartan治疗,分别于培养1个月、3个月、6个月时利用免疫组织化学方法检测ERK1/ERK2在各组视网膜组织中的表达情况。结果HE染色光镜下6个月糖尿病大鼠后极部视网膜神经节细胞层细胞数较正常组明显减少(30.42±1.09,68.47±2.69),视网膜厚度明显变薄[(29.88±1.55)mm,(70.82±2.84)mm];正常组、糖尿病组和治疗组1个月大鼠视网膜中未见ERK1/ERK2的表达;糖尿病组视网膜组织中3个月时可见轻度表达,6个月时表达强阳性;治疗组视网膜组织中3个月时可见微弱表达,6个月时轻度表达。糖尿病组同正常组比较,ERK1/ERK2的表达在3个月、6个月时差异具有统计学意义(P<0.01),治疗组同糖尿病组比较在3个月、6个月差异有统计学意义(P<0.01)。治疗组与正常组比较,6个月时ERK1/ERK2表达差异有统计学意义(P<0.01)。结论视网膜肾素血管紧张素系统通过其效应分子血管紧张素Ⅱ激活ERK1和ERK2参与了糖尿病视网膜病变的发生;Valsartan抑制糖尿病大鼠视网膜中ERK1/ERK2的表达。     

脯氨酰羟化酶在糖尿病大鼠视网膜的表达及其意义

目的 观察探讨糖尿病(DM)大鼠视网膜组织中脯氨酰羟化酶(PHD-2)的表达及意义.方法 雄性Wistar大鼠108只,随机分为DM模型组和正常对照组,分别为60、48只.对DM模型组大鼠进行一次性腹腔注射1％链脲霉素枸橼酸(STZ)溶液建模,正常对照组腹腔注射等量的构橼酸缓冲液.造模后1、3、6个月,荧光显微镜下观察大鼠视网膜血管分布形态.造模后1～6个月,采用伊凡思蓝(EB)灌注视网膜铺片检测视网膜组织内EB浓度;免疫组织化学染色法观察大鼠视网膜PHD-2阳性染色的分布特点;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测大鼠视网膜中PHD-2、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果 荧光显微镜观察结果显示,正常对照组大鼠视网膜血管走行规则,浅深层血管形态清晰;DM模型组大鼠视网膜血管渗漏持续存在.造模后1～6个月,DM模型组大鼠视网膜血管外组织内EB含量较正常对照组明显增加,差异有统计学意义(t=3.810,2.722,2.845,2.342,2.456,3.823;P＜0.05).免疫组织化学染色结果显示,DM模型组及正常对照组大鼠视网膜中均可见PHD-2阳性染色,主要分布于视网膜内核层、神经节细胞层及血管壁.Western blot检测结果显示,DM模型组大鼠视网膜中PHD-2表达在造模后1、2个月时较正常对照组下降(t=16.230,16.390;P＜0.05);HIF-1a表达在造模后1、2、3个月时较正常对照组明显升高(t=27.073,36.709,10.176; P＜0.05);VEGF表达在造模后1～6个月均较正常对照组升高(t=13.547,31.984,21.897,8.912,9.019,14.046;P＜0.05).结论 PHD-2在DM大鼠视网膜组织中有丰富表达.PHD-2可能在糖尿病视网膜病变发生发展中有一定的调控作用,其作用途径及机制与VEGF作用通路有关.     

糖尿病大鼠视网膜中缺氧诱导因子-1α的表达与超微结构研究

目的 研究糖尿病大鼠视网膜中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达与超微结构变化。方法 将132只SD大鼠随机分为对照组与糖尿病视网膜病变（DR）组，DR组采用链脲佐菌素（STZ）一次性腹腔注射建立糖尿病模型。应用免疫组织化学SP法和RT-PCR技术分别于1、3、6个月检测视网膜中HIF-1α蛋白及其mRNA的表达，透射电镜观察视网膜的超微结构。结果 免疫组织化学与RT-PCR检测结果均显示，HIF-1α蛋白及其mRNA在对照组视网膜中不表达，在DR组中呈进行性表达增强（P〈0．05）；透射电镜观察：正常对照组大鼠视网膜血管未见异常，DR组随着病程发展逐渐出现视网膜血管内皮细胞肿胀，基底膜厚薄不均。结论 DR中HIF-1α的异常表达和超微结构改变与视网膜缺氧关系密切，两者与DR的发生发展密切相关。     

黏附分子E选择素在大鼠糖尿病视网膜 病变中的表达

目的研究黏附分子E选择素在早、中、晚期糖尿病视网膜病变(DR) 大鼠微血管中的表达。方法雄性SD大鼠90只，随机分为6、9、12个月正常对照组，每组10只大鼠；及链脲佐菌素（STZ）DR大鼠6、9、12个月模型组，每组20只大鼠。STZ DR组用STZ按60 mg/kg的剂量腹腔一次性注射，制备DR模型。分别按期处死大鼠，取眼球进行视网膜微血管消化铺片，免疫组织化学EnVision方法显示微血管黏附分子E选择素，采用Leica Q550W图像分析仪定量分析E选择素在大鼠视网膜微血管中含量表达，并同时观察其形态学改变，了解DR病损程度与E选择素表达有无相关性。结果形态改变： DR 6个月组内皮细胞增生，周细胞减少。DR 9、12个月组毛细血管网排列紊乱，基底膜明显增厚，毛细血管腔内有较多白细胞黏附、聚集，大面积无细胞毛细血管形成和周细胞内皮细胞凋亡。定量分析结果：正常组无E选择素表达， DR各组均有不同程度E选择素表达，DR各组之间差异有统计学意义（P<0.01），其中以DR 9、12个月组表达量最高。结论随DR病程延长，视网膜毛细血管E 选择素表达逐渐增高，并与DR微血管的病损程度呈正相关。(中华眼底病杂志,2005,21:318-321)     

Determination of the location of the fovea on the fundus

PURPOSE: To evaluate whether the distance between optic nerve head and fovea in healthy eyes determined by scanning laser ophthalmoscope may facilitate estimation of the location of the fovea relative to the optic disc in patients with macular disease. METHODS: The angular distance was measured, in horizontal and vertical directions, between the center of the optic nerve head and the fovea in 104 eyes of 104 healthy probands. For additional evaluation of intraindividual variation in 70 of these persons the contralateral eye was measured as well. RESULTS: The distance between the optic disc and the fovea differed vertically more than horizontally (-1.5 +/- 0.9 degrees [-3.65 to +0.65 degrees ] vs. 15.5 +/- 1.1 degrees [13.0-17.9 degrees ]). There was a mean angle between the fovea and the center of the optic disc versus the horizon of -5.6 +/- 3.3 degrees. The intraindividual difference between right and left eyes was markedly lower, with average angles being 0.2 +/- 1.3 degrees vertically and 0.0 +/- 1.1 degrees horizontally. CONCLUSIONS: The distance between the optic nerve head and the fovea does not allow for a meaningful determination of the location of the fovea in eyes in which morphologic changes have occurred. The angle of rotation of the fovea relatively to the center of the optic nerve head is relatively stable. Therefore, the size of a central scotoma can be determined by movement of the blind spot according to the change of the preferred retinal locus (PRL). In addition, the knowledge of the location of the fovea enables determination of the position in the contralateral eye of the same patient.