阿片受体κ亚型在大鼠心肌细胞热应激反应中的作用

目的 :U5 0 488H是阿片肽受体 κ亚型的选择性激动剂 ,本实验研究 U5 0 488H预处理是否可增强心肌细胞对热应激的耐受性 ,同时观察与热休克蛋白 70及 90表达的关系。方法 :采用分离的大鼠心肌细胞作为研究对象 ,以心肌细胞释放乳酸脱氢酶 （L DH）的多少反映其损伤程度并用 Western blot分析热休克蛋白表达的变化。结果 :在 5～ 30 μmol/ L 浓度范围内 ,U5 0 488H预处理 30 min剂量依赖性的减低心肌细胞热应激后 L DH的释放。同时热休克蛋白 70和 90的表达明显增加。结论 :U5 0 488H激活阿片受体后具有保护心肌细胞的作用 ,其保护机制可能与调节热休克蛋白的表达有关。     

从凋亡信号通路探讨热休克蛋白保护过氧化氢所致心肌细胞凋亡的机制

为探讨热休克蛋白保护过氧化氢所致心肌细胞凋亡的分子机制，采用热休克对原代培养的新生大鼠心肌细胞进行预处理，以诱导热休克蛋白的表达，观察热休克蛋白对过氧化氢所致心肌细胞凋亡的保护作用。结果发现，热休克预处理导致心肌细胞热休克蛋白70及αB-晶状体蛋白表达明显增加，同时显著抑制过氧化氢所致细胞色素C从线粒体释放，抑制Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3活化及随后的心肌细胞凋亡。以上结果提示，热休克蛋白通过抑制线粒体信号通路与死亡受体通路的活化保护过氧化氢导致的心肌细胞凋亡，为临床防治心血管疾病提供了新的信息。     

热休克蛋白70对过氧化氢所致乳鼠心肌细胞核仁损伤的保护作用

为探讨氧化应激时体外培养的新生Wistar大鼠心肌细胞核仁损伤以及热休克蛋白70对损伤核仁的保护作用。用0.5mmol/L过氧化氢处理原代培养的心肌细胞0,30,60min，采用甲苯胺兰染色核仁及电镜技术观察核仁结构的改变；并通过热休克预处理及反义技术诱导或阻断热休克蛋白70的表达，观察其对核仁损伤的保护作用。结果发现，光镜下过氧化氢损伤组心肌细胞核仁染色颗粒数增多，电镜下核仁结构松散，核仁组份分离。热休克预处理导致心肌细胞中热休克蛋白70表达明显增加，并使过氧化氢缺致心肌细胞核仁损伤明显减轻，免疫组织化学显示过氧化氢可引起热休克蛋白70从胞浆到胞核，再到核仁的移位，热休克蛋白70反义寡核苷酸很大程度上能阻断热休克预处理对心肌细胞核仁损伤的保护作用。结果提示，过氧化氢可导致体外培养的新生大鼠心肌细胞核仁结构损伤，热休克蛋白70高表达及其向核仁的移位对上述损伤具有明显保护作用。     

热休克蛋白90在硫化氢对抗化学性缺氧引起的心肌细胞损伤中的作用

目的 探讨热休克蛋白90在硫化氢保护H9C2心肌细胞对抗氯化钴诱导的损伤中的作用.方法应用不同浓度的氯化钴处理H9C2心肌细胞,建立化学性缺氧诱导心肌细胞损伤的实验模型.硫氢化钠(硫化氢的供体)在氯化钴处理H9C2心肌细胞前30 min加入培养基中,作为预处理.应用细胞计数试剂盒8检测细胞存活率;Hoechst 33258染色荧光显微镜照相术检测凋亡心肌细胞的形态学改变;免疫印迹法检测热休克蛋白90的表达.结果 在600～1000 μmol/L浓度范围内,氯化钴处理H9C2心肌细胞24 h,呈剂量依赖性地抑制细胞存活率.在应用不同浓度氯化钴处理H9C2心肌细胞前30 min,应用400 μmol/L硫氢化钠可分别显著地抑制600、800、1000μmol/L氯化钴对心肌细胞的损伤作用,使细胞存活率明显升高.400 μmol/L硫氢化钠可促进H9C2心肌细胞的HSP90表达,在硫氢化钠作用6～9 h时,HSP90表达最多,作用18 h时表达恢复到基础水平.2 μmol/L热休克蛋白90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素自身对H9C2心肌细胞无损伤作用,但是能加重氯化钴对心肌细胞的损伤作用,并能明显地阻断硫化氢抑制氯化钴对心肌细胞的损伤作用,使H9C2心肌细胞存活率降低,凋亡细胞数量增多.结论 硫化氢能保护心肌细胞对抗氯化钴诱导的损伤作用,并能上调热休克蛋白90表述.热休克蛋白90介导硫化氢的心肌细胞保护作用.     

热诱导延迟损伤大鼠心肌细胞凋亡机理的探讨

目的探讨热诱导延迟过氧化氢(H2O2)造成大鼠心肌细胞凋亡机理。方法体外培养大鼠乳鼠心肌细胞同时温度诱导细胞产生热休克蛋白70(HSP70)，用H2O2造成心肌细胞损伤。采用Western Blottmg、流式细胞仪、Bcl-2原位杂交、免疫组化检测Caspase-3等作为检测指标，观察心肌细胞损伤，以及HSP70对心肌细胞的保护作用。结果温度诱导后HSP70在胞浆中大量表达，保护组凋亡率显著低于损伤组，Bcl-2和Caspase-3在损伤组大量表达。结论HSP70可延迟细胞凋亡，对心肌细胞具有保护作用。     

血清-葡萄糖剥夺抑制热休克蛋白90致心肌细胞损伤

目的 探讨热休克蛋白90(HSP90)表达下调是否参与血清-葡萄糖剥夺(SGD)引起的心肌细胞损伤.方法 用血清-葡萄糖剥夺处理H9c2心肌细胞,建立缺血性心肌细胞损伤的体外模型;在血清-葡萄糖剥夺处理前,应用HSP90选择性抑制剂17-AAG预处理心肌细胞60 min;CCK-8比色法检测细胞存活率;Fluo-3AM染色结合荧光显微镜照相术检测细胞内游离钙水平;Western blot检测HSP90和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达.结果 血清-葡萄糖剥夺处理24h可明显抑制H9c2心肌细胞内HSP90的表达,诱导细胞内钙超载及上调内质网应激蛋白GRP78的表达.选择性HSP90抑制剂17-AAG预处理不仅可以加重血清-葡萄糖剥夺引起的心肌细胞存活率降低,而且进一步加重血清-葡萄糖剥夺引起的H9c2心肌细胞内钙超载及内质网应激蛋白GRP78的表达上调.结论 抑制HSP90可能是血清-葡萄糖剥夺损伤心肌细胞的重要机制之一.     

κ阿片受体介导的抗心律失常作用

目的：研究激动κ阿片受体对大鼠心肌缺血性心律失常的影响。方法：在结扎大鼠冠状动脉的同时，静脉注射选择性κ阿片受体激动剂U50488H，观察其对大鼠心率(HR)、左心室内压(LVSP)和室性心律失常发生的影响；分离大鼠心室肌细胞，观察U50488H对细胞内钙和L—型钙电流的影响。结果：心肌缺血后，大鼠HR无明显变化，LVSP显著降低，心电图显示了缺血性改变和心律失常发生；心肌缺血并给予U50488H后，HR显著减慢，LVSP进一步降低，大鼠心肌缺血性心律失常的发生率以及心律失常评分明显降低。U50488H可明显降低心肌细胞的钙瞬变，并能显著降低L—型钙电流。U50488H的作用均可被选择性κ阿片受体阻断剂nor—BNI阻断。结论：激动κ阿片受体可减少大鼠心肌缺血性心律失常的发生，其机制可能与其抑制L一型钙通道和细胞内钙有关。     

U50488H对缺血/再灌注心脏的保护作用

研究已证实,κ阿片受体选择性激动剂U50488H可明显降低缺血/再灌注(I/R)后的心肌细胞凋亡数、心肌梗死面积,降低心律失常的发生率,改善心脏及冠脉微循环的功能。与吗啡等传统阿片类药物相比较,U50488H有较强的镇痛、降压及心脏保护作用,其相关作用机制日益成为近年来研究的热点之一。现就U50488H对I/R心脏的保护作用的最新进展进行综述。     

局部热应激预处理对缺血/再灌注损伤的心脏保护作用

目的探讨热应激预处理诱导产生的热休克蛋白70（HSP70）对缺血/再灌注损伤心脏的保护作用的机制。方法应用冠脉结扎法制备心脏缺血/再灌注损伤模型及热应激预处理模型。将实验大鼠随机分为热应激预处理组（HP+IR组）与非预处理组（IR组）,对比观察两组动物心脏缺血/再灌注后0、4、8、12、24h时心脏HSP70的表达一氧化氮合酶、（NOS）活力及大鼠血清门冬氨酸转氨酶（AST）,丙氨酸转氨酶（ALT）和乳酸脱氢酶（LDH）的活性与心脏病理组织学改变。结果热应激预处理组各时间点心脏HSP70的表达均比非预处理组同一时间点高,而NOS活力及血清AST、ALT、LDH的酶活性较非预处理组低,病理损伤也比非预处理组减轻。结论热应激预处理诱导产生的HSP70可能通过抑制NO的产生,从而降低氧自由基对心脏的损害,起到保护心脏的作用。     

寒冷应激对心肌细胞HSP70的影响

目的 研究寒冷应激对心肌细胞热休克蛋白-70(HSP70)功能的影响,探讨寒冷环境与冠心病关联的病理生理基础.方法 H9c2(2-1)心肌细胞株在37℃正常条件下培养,然后降低至32℃延续培养5h,结束培养后收集心肌细胞,免疫印迹杂交方法测定HSP70蛋白水平.结果 低于正常温度5℃的寒冷应激处理5h后,H9c2(2-1)心肌细胞内的HSP70蛋白水平与对照相比,升高了(95.85±32.01)％,有统计学差异(P=0.0064).结论 HSP70对于心肌细胞寒冷应激具有高度敏感性,提示其在冠心病的环境病因中具有重要的调节功能.     

血清热休克蛋白70与急性心肌梗死后心力衰竭的相关性

血清热休克蛋白70是一种高度保守的分子蛋白,其在应激时总被高度诱导。研究发现在动脉粥样硬化斑块中有热休克蛋白70的表达,且抗原递呈细胞也高度激活。热休克蛋白70与冠心病密切相关,且与冠状动脉病变程度有关,新近国外研究报道,热休克蛋白70在急性心肌梗死后心力衰竭患者中高度表达。现综述热休克蛋白70与急性心肌梗死后心力衰竭的相关性,热休克蛋白70有望成为急性心肌梗死后心力衰竭的新诊断标记物及判断病情的重要指标。     

热休克蛋白70系列与应激性溃疡之间的相互关系

生物细胞在受到各种理化因素刺激后,可以产生一系列的应激反应,诱导热休克蛋白(heat shock protein,HSP)表达.在众多的HSP中,HSP70家族是生物进化过程中最为保守也是目前人们研究最多的一组蛋白.应激可以诱导机体胃黏膜的损伤并可以降低胃黏膜的屏障保护作用,进而导致应激性溃疡的产生,同时加速热休克蛋白的合成,而热休克蛋白反过来又可预防应激性溃疡的发生,抑制胃黏膜细胞凋亡,促进胃溃疡的愈合.本文综述了主要的热休克蛋白分子的分类、调节以及在应激性溃疡中的表达和应用,并简要论述了通过诱导热休克蛋白表达而作为胃黏膜保护剂的几种药物.     

沉默信息调节因子1参与依达拉奉对抗异丙肾上腺素致心肌细胞损伤

目的 探讨沉默信息调节因子1（Sirt1）在依达拉奉（EDA）保护心肌细胞对抗异丙肾上腺素（ISO）诱导的损伤中的作用。方法 用ISO处理培养的大鼠H9c2心肌细胞，建立β1-肾上腺素能受体（ADRB1）持续兴奋诱导心肌损伤的体外模型。在ISO处理前给予EDA预处理以观察EDA的心肌细胞保护作用。为了明确Sirt1的作用，在ISO或EDA处理前给予其选择性抑制剂Sirtinol预处理。检测细胞存活率、乳酸脱氢酶（LDH）的释放、胞内脂质过氧化物丙二醛（MDA）的含量以及Sirt1和内质网应激蛋白葡萄糖调节蛋白78（GPR78）的表达。结果 ISO处理可降低细胞存活率，诱导细胞损伤使LDH释放增加，并抑制Sirt1的表达。20 μmol/L Sirtinol预处理30 min可加重80 μmol/L ISO处理48 h诱导的细胞损伤（P<0.01）。在ISO处理前给予40 μmol/L EDA预处理1 h，可部分抑制ISO诱导的Sirt1表达下调（P<0.01）。EDA预处理具有明显的细胞保护作用，提高细胞存活率（P<0.01），减少细胞释放LDH（P<0.01），抑制MDA的产生（P<0.01）以及下调GRP78的表达（P<0.01）。EDA的这些保护效应可被Sirtinol预处理所削弱。结论 Sirt1参与了EDA的抗ISO心肌损伤作用。     

к阿片受体介导的抗心律失常作用

目的:研究激动к阿片受体对大鼠心肌缺血性心律失常的影响. 方法:在结扎大鼠冠状动脉的同时,静脉注射选择性к阿片受体激动剂U50488H,观察其对大鼠心率(HR)、左心室内压(LVSP)和室性心律失常发生的影响;分离大鼠心室肌细胞,观察U50488H对细胞内钙和L-型钙电流的影响. 结果:心肌缺血后,大鼠HR无明显变化,LVSP 显著降低,心电图显示了缺血性改变和心律失常发生;心肌缺血并给予U50488H后,HR显著减慢,LVSP进一步降低,大鼠心肌缺血性心律失常的发生率以及心律失常评分明显降低.U50488H可明显降低心肌细胞的钙瞬变,并能显著降低L-型钙电流.U50488H的作用均可被选择性к阿片受体阻断剂nor-BNI阻断.结论:激动к阿片受体可减少大鼠心肌缺血性心律失常的发生,其机制可能与其抑制L-型钙通道和细胞内钙有关.     

激活K阿片受体与远程预处理诱导心肌缺血耐受的作用

目的:比较K阿片受体激动剂U50488H预处理与远程预处理诱导心肌缺血耐受对心肌梗塞(MI)范围与心肌酶的影响。方法:32只雄性新西兰大白兔随机分成四组(各组8例):对照组、U50488H组、远程缺血预处理(RPC)组和选择性K阿片受体阻断剂(Nor-BNI)+U50488H组。对照组心肌缺血前1.5h静脉给予戊巴比妥钠30mg/kg;RPC组在心肌缺血前1.5h静脉给予戊巴比妥钠30mg/kg麻醉动物后,行双后肢短暂缺血预处理2次(充气式压力止血带环扎双后肢腘窝上1/3,压力26.6kPa,每次10min,间隔10min);U50488H组在心肌缺血前105min静脉注射U50488H1.5mg/kg,余同RPC组;Nor-BNI+U50488H组在预处理前15min给予Nor-BNI2mg/kg,余同U50488H组。各组最后制作急性心肌缺血模型:冠状动脉左前降支完全闭塞45min,松开结扎圈再灌注2h。依据美蓝、TTC组织染色,观察各实验组MI质量比、肌钙蛋白T、心肌酶的变化。结果:U50488H可模拟RPC对心肌的保护作用,较对照组明显减少心肌缺血-再灌注损伤所致的MI[(0.15±0.11)g∶(0.29±0.11)g],肌钙蛋白T[冠脉阻闭45min(3.86±1.19)ng/ml∶(9.16±2.82)ng/ml],心肌酶的含量,P均0.01。该作用可被选择性K阿片受体阻断剂Nor-BNI所阻断。结论:RPC诱导心肌缺血耐受与K阿片受体激活具有密切关系,激活K阿片受体是RPC诱导心肌缺血耐受的机制之一。     

热休克预处理抑制过氧化氢所致C2C12肌原细胞释放天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物及细胞凋亡

为探讨热休克预处理对过氧化氢所致C2C12肌原细胞凋亡和第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物从线粒体释放的影响，采用0.5mmol／L过氧化氢作用于C2C12肌原细胞。Hoechst33258荧光染色，观察细胞形态学改变并计算凋亡百分率，抽提DNA作琼脂糖电泳，以确定细胞凋亡情况。采用天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶活性定量检测试剂盒及蛋白质印迹观察天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3，天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9的活化情况。采用免疫荧光及细胞成分分离后蛋白质印迹检测第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物从线粒体的释放。结果发现，过氧化氢处理1～2h，第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物逐渐从线粒体释放入胞浆；处理4h天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3，天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9活性升高，12h达高峰；处理24h细胞明显出现凋亡，凋亡百分率明显升高。热休克预处理可诱导C2C12肌原细胞中热休克蛋白90，热休克蛋白70及αβ-晶状体蛋白的表达增高：抑制第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物释放、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3，天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9的活化及细胞凋亡的发生。结果提示，线粒体信号通路在过氧化氢所致的心肌细胞凋亡中发挥重要作用；热休克预处理通过抑制上述通路而减轻过氧化氢所致的细胞凋亡，其机制与其诱导热休克蛋白表达、阻断第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物从线粒体向胞浆释放、从而抑制天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3，天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9的活化有关。     

热休克蛋白70抑制c-Jun氨基末端激酶通路对H2O2诱导心肌细胞凋亡的保护作用

目的观察热休克蛋白70(HSP70)对H_2O_2诱导乳鼠心肌细胞凋亡的保护作用及其机制。方法培养大鼠心肌细胞,随机分为5组:对照组、H_2O_2组、热休克组、c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂组、热休克 JNK抑制剂组。生化法测定各组细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶(CK)活性和丙二醛(MDA)水平,流式细胞仪分析心肌细胞凋亡,噻唑蓝(MTr)法测定心肌细胞相对活力,Western blot法检测JNK的表达。结果H_2O_2组LDH、MDA水平和CK活性明显高于其他组(P<0.01),而SOD活性则明显低于其他组(P<0.01)。细胞凋亡率H_2O_2组明显高于其他各组(P<0.01)。细胞活力H_2O_2组明显低于对照组(P<0.01),而热休克组、JNK抑制剂组、热休克 JNK抑制剂组的细胞活力明显高于H_2O_2组(P<0.01)。JNK只在H_2O_2组有表达。结论HSP70对H_2O_2诱导的心肌细胞凋亡具有保护作用,其机制可能是HSP70大量表达后抑制了JNK信号的转导。     

热休克蛋白对短暂心肌缺血所致蛋白质聚集的影响

为了观察短暂心肌缺血后心肌中蛋白质聚集物的产生，探讨热休克蛋白70及αB-晶状体蛋白对心肌中蛋白质聚集物的影响，采用雄性Wistar大鼠制备在体心缺血—再灌注损伤模型。通过乙醇磷钨酸电镜观察蛋白质聚集物产生，采用免疫电镜观察热休克蛋白70及αB-晶状体蛋白对蛋白质聚集物的影响。结果发现：①缺血15min再灌注30min时，心肌细胞中开始出现形态不规则的蛋白质聚集物，聚集物主要分布在核周、线粒体周围及其两极。再灌注4h，蛋白质聚集物达到高峰，24h后逐渐减少，72h基本恢复正常。②大鼠经热休克预处理及缺血预适应后，15min缺血及4h或24h再灌注所致的心肌蛋白质聚集物的产生明显减少，恢复速度加快，再灌注24h已基本恢复正常。③通过免疫电镜观察，在假手术对照组，心肌中热休克蛋白70表达水平很低。大鼠经热休克预处理后，心肌中热休克蛋白70表达增多，经缺血15min再灌注4h后，热休克蛋白70与心肌中蛋白质聚集物共分布。在假手术对照组心肌中，αB-晶状体蛋白有一定量的组成型表达，并均匀分布于胞浆之中。经热休克预处理、缺血预适应后缺血15min再灌注4h心肌中，αB-晶状体蛋白向肌丝移位，主要位于z线两侧的明带，且与蛋白质聚集物共分布。本研究首次揭示了缺血—再灌注损伤时心肌细胞中蛋白质聚集物的形成、空间分布及其动态变化规律；证实了热休克预处理及心肌缺血预适应可明显减轻缺血—再灌注所致心肌蛋白质聚集。     

热休克蛋白7O对大鼠脊髓损伤后凋亡的影响

热休克预处理能减轻脊髓损伤后的凋亡，其机理可能同热休克蛋白70合成增加，并进一步抑制NF-kB的表达有关。     

热休克预处理对大鼠烧伤后急性胃黏膜损伤的保护作用

目的观察热休克预处理对严重烧伤大鼠胃黏膜的影响。方法热休克预处理诱导热休克蛋白产生,然后制作烧伤大鼠急性胃黏膜损伤模型,进行胃黏膜损伤指数评分。运用免疫组化方法,检测胃黏膜热休克蛋白的表达,并进行图像分析。结果热休克预处理组胃黏膜损伤积分显著低于对照组(P<0.01)。免疫组化分析显示其胃黏膜热休克蛋白表达较对照组明显增强(P<0.01)。结论热休克预处理对烧伤大鼠胃黏膜具有保护作用,其保护机制可能与热休克蛋白诱导表达增强有关。