二氯乙酸钠联合顺铂诱导人肺腺癌A549细胞株凋亡的实验研究

目的研究二氯乙酸钠(Sodium dichloroacetate,DCA-Na)、顺铂(DDP)联合对人肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法用MTT法检测DCA-Na、DDP应用对A549细胞增殖抑制作用的影响;流式细胞仪(Annexin V-FITC/PI法)检测DCA-Na、DDP单药及两药联合作用于A549细胞凋亡率的变化;用分光光度法检测DCA-Na作用于A549细胞后半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3、-8、-9蛋白的活性。结果DCA-Na、DDP单药组均对A549细胞增殖有抑制作用,且呈明显的剂量-时间依赖性。0.4、2μg/mL的DDP与37.5、75、150μg/mL的DCA-Na联合作用A549细胞24、48、72 h后的抑制率显著高于同浓度DDP单药组(P<0.05),且2μg/mL的DDP与75μg/mL的DCA联合在48 h表现为协同作用。流式细胞仪检测显示,A549细胞联合组凋亡率显著高于各单药组(P<0.05)。DCA-Na作用于A549细胞后,分别在12、24、48、72 h测得Caspase-3、-8、-9蛋白活性显著高于对照组(P<0.05)。结论 DCA-Na对人肺腺癌A549细胞的增殖有抑制作用,并且随着药物浓度增加、作用时间延长,其抑制作用也增加(呈剂量和时间依赖性)。一定浓度范围的DCA-Na和DDP联合作用于人肺腺癌A549细胞能够产生协同作用。DCA-Na可诱导人肺腺癌A549细胞凋亡,且与DDP联合后其诱导凋亡作用更为显著。     

粒细胞集落刺激因子受体在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的 研究粒细胞集落刺激因子受体(G-CSFR)在qP4,细胞肺癌(NSCLC)中的表达及在NSCLC发生、发展中的作用.方法 应用免疫组化SP法检测35例NSCLC及9例肺良性病变组织中G-CSFR的表达;PI单标流式细胞术检测肺腺癌细胞株A549上G42SFR的表达;BRDU标记法检测rhG-CSF对A549细胞的增殖影响及Annexin V-FITC/PI法检测细胞的凋亡.结果 NSCLC中有明显的G-CsFR蛋白表达,并高于肺良性病变组织(P<0.05);G-CSFR 阴性表达与年龄、性别及肿瘤病理分期无关,而与肿瘤大小有关(P<0.05).A549细胞高表达G-CSFR;rhG-CSF对A549细胞的增殖无明显影响,但可抑制其凋亡.结论 G-CSFR在NSCLC中的表达较肺良性病变组织明显上调,G-CSFR的阳性表达与肿瘤大小有关,其表达可能对肿瘤细胞的凋亡有抑制作用,进而促进肿瘤的发生发展.     

姜黄素对急性肺栓塞大鼠细胞凋亡的影响

目的观察姜黄素对急性肺栓塞(PTE)后细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法健康雄性SD大鼠40只,随机分为5组(n=8):假手术组、模型组及姜黄素低剂组、中剂组、高剂组(腹腔注射50、100、150mg/kg)。采用颈总静脉注射自体血栓的方法制备大鼠PTE模型。取肺组织,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR和Western blot方法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9 mRNA及蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型组细胞凋亡率及Bax、Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白表达明显上升,Bcl-2表达明显下降(P<0.01);与模型组比较,姜黄素能明显降低细胞凋亡率及Bax、Caspase-3、Caspase-9表达,升高Bcl-2表达(P<0.05和P<0.01)。结论姜黄素能抑制PTE大鼠的肺组织细胞凋亡,与下调Bax、Caspase-3、Caspase-9表达,上调Bcl-2表达有关。     

MAP30-PEG结合物对A549体外细胞增殖作用的研究

目的探讨苦瓜籽核糖体失活蛋白MAP30及其聚乙二醇修饰物对人肺腺癌细胞A549增殖、细胞凋亡的影响和caspase3相关凋亡途径的诱导作用。方法用MTT法测定MAP30和MAP30-PEG结合物对人肺腺癌细胞A549的抑制率;通过Hoechst33258荧光染色观察A549细胞凋亡形态,并用流式细胞术测定细胞凋亡率以及用western blot检测凋亡细胞caspase3表达。结果 MAP30和MAP30-PEG结合物均对A549有抑制作用,且呈时间和剂量依赖性关系;MAP30-PEG结合物对A549细胞增值抑制率约为MAP30的60%;Hoechst33258荧光染色后均呈典型凋亡形态;流式细胞术检测显示,MAP30和MAP30-PEG结合物作用于A549细胞48 h后均可使A549细胞呈现Sub-G1凋亡峰,凋亡率分别为58.7%、42.7%;MAP30和MAP30-PEG结合物对胞内caspase3在凋亡过程中显示有激活作用。结论 MAP30和MAP30-PEG结合物均对A549增殖有明显的抑制作用;两者均能通过caspase3途径诱导细胞凋亡。     

半枝莲总黄酮对非小细胞肺癌细胞增殖及迁移的影响

目的观察半枝莲总黄酮对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移及凋亡的影响并对其机制进行初步探索。方法体外培养非小细胞肺癌 A549细胞,分为阴性对照组、实验组、阳性对照组。阴性对照组用 1640培养液 200 μL处理细胞,实验组分别用 1, 5,10,20,40 μg/mL半枝莲总黄酮处理细胞 24 h,阳性对照组用 200 μL 40 μg/mL芦丁溶液处理细胞。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法( MTT)观察细胞增殖情况;通过流式细胞术检测细胞凋亡情况;蛋白质印迹法( Western Blot)检测凋亡抑制蛋白 Survivin和促凋亡蛋白酶 Caspase?3蛋白的表达;迁移划痕实验检测迁移的情况。结果 MTT检测结果显示,阳性对照组的增殖抑制率为( 57.234±0.533)%,实验组的增殖抑制率分别为( 14.852±1.059)%、(23.486±1.366)%、(36.396±0.321)%、(46.179± 1.334)%和( 51.530±1.054)%,随浓度增加抑制率显著升高,呈浓度依赖( F＝1 408.303,P＜0.001);式细胞术检测细胞凋亡率,阴性对照组( 9.09±0.50)%、阳性对照组( 67.27±1.48)%、实验组分别为( 24.62±0.70)%、(34.67±0.46)%、(46.92±0.29)%、(55.67±0.57)%和( 59.29±0.73)%,实验组的细胞凋亡率均高于阴性对照组( F＝1 467.681,P＜0.001); Western Blot结果显示,实验组 Survivin蛋白表达均低于阴性对照组, Caspase?3蛋白表达均高于对照组( F＝34.176,P＜0.001;F＝57.730,P＜0.001);迁移划痕实验结果显示,半枝莲总黄酮抑制肺腺癌 A549细胞迁移并呈现剂量依赖性。结论半枝莲总黄酮可抑制人肺腺癌 A549细胞的增殖,可能与 Survivin蛋白降低和 Caspase?3蛋白表达量升高有关;另外,半枝莲总黄酮可抑制人肺腺癌 A549细胞的迁移。     

铁树提取物对人肺腺癌细胞凋亡的诱导及相关机制的初步研究

目的探讨中药铁树提取物(Cvcas revolute Thunb extracts,CTE)对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响及其相关机制.方法应用四氮唑盐(MTT)法观察CTE对A549细胞增殖的影响,采用Gimsa染色和吖啶橙(AO)/澳化乙锭(EB)荧光染色观察细胞凋亡形态学变化;流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳方法检测A549细胞凋亡、细胞周期变化;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测凋亡基因Bcl-2,Bax和Caspase-3 mRNA水平表达的变化.结果CTE可以抑制A549细胞增殖.经CTE作用后,A549细胞出现明显的细胞凋亡形态学变化;细胞DNA琼脂糖凝胶电泳呈现特征性的DNA降解梯形条带;A549细胞被阻滞在G2-M期,细胞凋亡率可达34.37％.CTE可抑制A549细胞Bcl-2和Caspase-3mRNA的表达,促进Bax mRNA的表达.结论CTE能明显诱导A549细胞凋亡,其机制之一可能是改变与凋亡相关基因的表达.     

斑蝥酸钠联合多西紫杉醇诱导A549细胞凋亡及对Caspase-8 表达的影响

目的探讨斑蝥酸钠联合多西紫杉醇抑制人肺腺癌A549细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用,初步探讨其作用机制。方法采用MTT法测定细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI染色,流式细胞仪测定细胞凋亡率;Western印迹法测定Caspase-8活性。结果斑蝥酸钠和多西紫杉醇均能抑制人肺腺癌A549细胞的增殖(P<0.05),合用与单用相比抑制率明显提高,诱导12 h时CI值为0.88,24 h时为0.96,36 h时为1.02。Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测提示斑蝥酸钠可增强多西紫杉醇的凋亡诱导作用。Western印迹法显示多西紫杉醇、斑蝥酸钠及联合加药组均可见凋亡相关蛋白Caspase-8的裂解条带,联合加药组的裂解条带最明显。结论多西紫杉醇和斑蝥酸钠均可明显抑制人肺腺A549细胞增殖诱导细胞凋亡,联合使用作用更强,多西紫杉醇和斑蝥酸钠诱导细胞凋亡可能与促进Caspases-8表达有关。     

多西紫杉醇联合斑蝥酸钠对人肺腺癌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨多西紫杉醇联合斑蝥酸钠对人肺腺癌A549细胞的抑制作用。方法:采用MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果:斑蝥酸钠和多西紫杉醇均能显著抑制人肺腺癌A549细胞的增殖诱导细胞凋亡(P<0.05),联合使用抑制率及凋亡率均显著高于单药组(P<0.05)。结论:多西紫杉醇和斑蝥酸钠均可明显抑制人肺腺A549细胞,联合使用抑制作用增强。     

紫杉醇对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响

目的:探讨紫杉醇在体外对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:采用MTT法测定紫杉醇对A549细胞增殖的影响;Hoechst33258检测紫杉醇作用48h后细胞凋亡情况;流式细胞仪检测药物作用48h后的细胞周期和凋亡率;Western Blot检测的Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果:紫杉醇抑制A549细胞增殖呈时效和量效关系;Hoechst33258检测紫杉醇作用48h后可见凋亡细胞;紫杉醇作用48h后药物组G2～M期细胞百分比均高于对照组(均P<0.01),药物组细胞凋亡率高于对照组(均P<0.01),且凋亡率随药物浓度增加而增加;Western Blot显示,不同浓度紫杉醇作用于A549细胞48h,Bax的表达随药物浓度增加而增加,Bcl-2的表达随药物浓度增加而减低。结论:紫杉醇能抑制肺腺癌A549细胞株的增殖,其抑制作用可能通过将细胞周期阻滞于G2～M期和通过上调Bax、下调Bcl-2的表达而诱导细胞凋亡来实现的,并且紫杉醇抑制A549细胞增殖和诱导凋亡作用随药物浓度增加而增加。     

非小细胞肺癌凋亡相关基因与神经内分泌分化表达的研究

目的:探讨非小细胞肺癌神经内分泌分化特征与细胞凋亡及凋亡相关基因Apaf-1和Caspase-3表达之间的关系。方法:对100例非小细胞肺癌手术标本应用TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组织化学SP法检测癌组织中神经内分泌标志物神经特异性烯醇化酶、嗜铬素A、突触素及凋亡相关基因Apaf-1、Caspase-3蛋白的表达。结果:30例非小细胞肺癌具有神经内分泌分化特征,其平均凋亡指数及Apaf-1、Caspase-3蛋白表达均显著高于不伴神经内分泌分化者(P<0.05或P<0.01);Apaf-1和Caspase-3表达之间呈正相关(r=0.2877,P<0.01),两者与细胞凋亡之间亦呈正相关关系(r分别为0.3859和0.2316,均P<0.05)。腺癌和腺鳞癌组织的Apaf-1蛋白表达阳性率较高(P<0.01),Caspase-3蛋白表达阳性率在老年患者、中高分化癌和伴淋巴结转移者较高(P<0.05或P<0.01)。结论:伴神经内分泌分化的非小细胞肺癌具有较高凋亡活性,是其对放、化疗敏感的生物学基础,Apaf-1和Caspase-3高表达发挥了重要作用。     

EGFR纳米抗体抑制雌激素依赖的人子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖与迁移

纳米抗体是骆驼来源的一种轻链缺失的抗体,具有与单克隆抗体相似的抗原结合特异性和亲和力,此外还具有分子量小、稳定性好、易于制备等优点,因而具有巨大的生物医药应用价值。本研究利用基因工程技术在大肠杆菌中成功制备出了高纯度的EGFR纳米抗体(antiEGFRnano)。CCK-8法检测细胞增殖及迁移实验(细胞划痕实验和Transwell法检测)证明,重组的EGFR纳米抗体具有显著的抑制子宫内膜癌细胞增殖及迁移的活性,这为靶向EGFR治疗子宫内膜癌提供了一种全新的思路和方法。     

王不留行提取物对内皮细胞增殖、迁移及其黏附的作用评价

目的体外分析王不留行抑制人微血管内皮细胞(HMEC)增殖、迁移和黏附的有效部位。方法SRB法测定药物干预细胞增殖的IC50和药物作用时间与药效学的关系;划线灼伤法研究细胞迁移;体外基质胶分析药物对细胞黏附能力的影响;HE染色观察药物对细胞染色体的影响。结果王不留行有效部位对HMEC增殖抑制的IC50为3.60mg.L-1,加药4h后起作用。加药48h后HMEC迁移受到明显抑制(迁移率为40.33%,对照组迁移率为77.68%)。加药组细胞黏附受到明显抑制,且呈浓度依赖关系。结论王不留行提取物能明显抑制内皮细胞增殖、迁移及黏附,因此具有潜在的价值用于抑制血管生成。     

大鼠肝实质及非实质细胞分离和质量检测

目的　探索分离肝实质细胞及非实质细胞的合理条件。方法　应用胶原酶 /蛋白酶E消化分离和低速离心技术 ,以细胞活率、细胞产量和细胞纯度等指标检测细胞质量。结果　在 37℃ ,0 5g·L-1的胶原酶作用 30min ,80 0r·min-1离心条件下 ,肝实质细胞产量 (98× 10 9± 4× 10 9·L-1)、纯度 (97%± 2 % )和活率 (>90 % )最好。胶原酶和蛋白酶E合用 ,肝非实质细胞产量最高 (2 8 6× 10 9± 3 7× 10 9·L-1) ,Kupffer细胞纯度合理 (16 0 %± 3 5 % ) ,且Kupffer细胞含量符合体内正常分布。结论　本实验方法分离细胞对于进一步研究肝实质 ,尤其肝非实质细胞功能有实际意义。     

四丁基丙二胺对人MG63骨髓瘤细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响

目的分析新多胺类似物四丁基丙二胺(tetrabutylpropanediamine,TBP)对人骨髓瘤MG63细胞生长的影响及其机制。方法 MTT法用于分析细胞增殖,流式细胞分析用于细胞周期和凋亡细胞鉴定,琼脂糖凝胶电泳用于分析DNA片段化,Western blot用于分析细胞凋亡相关蛋白的表达水平,Transwell技术用于分析细胞的迁移能力。结果TBP明显抑制MG63细胞的增殖和迁移能力,抑制效应呈时间和剂量依赖性。流式细胞分析发现,TBP干扰细胞周期,导致G1和G2期细胞比例升高,但S期细胞比例明显下降,同时凋亡细胞数量大幅增加。TBP处理后,细胞染色体DNA出现凋亡细胞典型的DNA片段化现象,细胞质中促凋亡蛋白Bax和细胞色素C含量明显升高。结论 TBP具有抑制人骨髓瘤MG63细胞增殖的药理活性,其机制与抑制细胞周期和诱导细胞凋亡有关,提示TBP具有用于临床骨髓瘤治疗的潜在价值。     

人参总甙及单体对脐血CD34+细胞体外增殖及分化的影响

目的：探讨人参总甙、人参皂甙单体对脐血CD34^ 细胞体外增殖及分化的影响。方法：用MethoCult^TM H4435半固体培养基加入不同浓度的人参总皂甙(GS)、Rgl、Rbl，计数CFU—E、BFU—E、CFU—GM集落。结果：GS、人参皂甙单体Rg1、Rb1具有刺激脐血CD34^ 细胞集落形成的作用，人参皂甙单体的作用优于GS。不同浓度的人参皂甙对脐血CD34^ 细胞集落刺激不同，但其集落形成能力明显高于对照组。GS的最佳浓度为50mg／L，Rg1和Rb1最佳浓度为5mg/L。高浓度的GS、Rgl、Rb1集落形成能力下降，但并不显示抑制作用。结论：人参总甙、人参皂甙单体能促进造血干或祖细胞增殖，并且能诱导定向分化，具有类似生长因子和协同生长因子作用。     

新型化合物F-2对人肺癌NCI-H520细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的：探讨新型化合物F-2对人非小细胞肺癌NCI-H520细胞增殖迁移及凋亡的影响。方法： CCK-8实验检测肺癌细胞增殖情况;采用划痕实验检测化合物对H520细胞迁移的情况;倒置显微镜观察化合物刺激对细胞形态的影响;流式细胞术实验检测化合物对细胞凋亡的影响;Western blot实验检测化合物对细胞迁移及凋亡相关蛋白表达的影响。结果：化合物对H520细胞增殖有明显的抑制作用,且与浓度和时间呈依赖性关系。划痕实验结果表明化合物能够明显抑制肿瘤细胞迁移,并且western blot 实验结果表明化合物处理H520细胞后可上调Ｅ-cadherin的表达,下调N-cadherin蛋白的表达。Annexin-V／PI双染法结果显示,化合物可诱导H520细胞发生凋亡,且随着药物浓度增加凋亡率上升,并且增加了BaX/BcL-2蛋白表达比率。结论：化合物能够明显抑制肺癌细胞的增殖、迁移及诱导细胞凋亡,可能是通过阻断肿瘤细胞EMT过程,调节细胞凋亡过程中相关基因表达从而发挥抗肿瘤作用。     

新化合物D261抑制非小细胞肺癌NCI-H460细胞增殖及其作用机制

<正>肺癌是当今恶性肿瘤死亡率最高的癌症。早期肺癌主要以手术治疗为主,并辅以放疗化疗。但是化疗药物毒副作用大,且抗药性在一些肿瘤靶向性药物中逐渐显现。因此,亟需新的抗肿瘤药物。天然产物是小分子新药的主要来源。我们在对天然小分子化合物的筛选过程中发现D261(从固体发酵物中提取,纯度大于95%)具有潜在的抗肿瘤活性,且对非小细胞肺癌的抑制作用最显著。因此,本文对D261影响非小细胞肺癌NCI-H460及其相关机制作了初步     

B,T淋巴细胞免疫表型染色分析

应用免疫组化方法探讨Ｂ，Ｔ淋巴细胞免疫表型染色的特异性和交叉反应性，发现Ｂ细胞表型标志的ＣＤ２０和ＣＤ７４细胞对非何杰金氏淋巴瘤染色阳性率达８８．２％～１００％，但ＣＤ７４特异性不强，而ＣＤ２０表现出高度的特异性，交叉反应性为０％，Ｔ细胞表型标志的ＣＤ４５ＲＯ，ＣＤ４３和ＣＤ３对Ｔ细胞非何杰金氏淋巴瘤染色阳性率达８５．７％～１００％，但ＣＤ４５ＲＯ和ＣＤ４３特异性不强，而多克隆性的ＣＤ３仅与５．９     

尿石素C对胶质母细胞瘤生物学行为的调控作用及机制

目的　探讨尿石素C（UC）对胶质母细胞瘤（GBM）U251和U87 MG细胞生物学行为的影响及调控机制。方法　将U251和U87 MG细胞分为0、20、40、80、120和160 μmol/L UC处理组,通过CCK-8法分别检测各组细胞24、48和72 h时增殖率。将细胞分为0、40、80和120 μmol/L UC处理组,通过细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,划痕愈合实验检测24 h和48 h时细胞迁移能力,Transwell小室侵袭实验检测24 h时细胞侵袭能力,流式细胞术检测24 h时细胞凋亡率及细胞周期,Western blot检测AMP依赖的蛋白激酶（AMPK）、细胞外调节蛋白激酶（ERK）和丝裂原活化蛋白激酶p38（p38 MAPK）蛋白表达水平和磷酸化水平。结果　与0 μmol/L组比较,U251细胞中不同浓度UC组于48 h开始增殖率均降低,而U87 MG细胞中40 μmol/L及以上浓度组于48 h时增殖率开始降低（P＜0.05）。与0 μmol/L组比较,40、80和120 μmol/L组U251和U87 MG细胞的克隆形成率、24 h和48 h时的细胞迁移能力和24 h时的细胞侵袭能力降低,且均呈浓度依赖性（P＜0.05）。与0 μmol/L组比较,120 μmol/L组U251和U87 MG细胞凋亡率均增加,40、80和120 μmol/L组U251和U87 MG细胞周期均阻滞在S期（P＜0.05）。与0 μmol/L组比较,40、80和120 μmol/L组U251和U87 MG细胞中p-AMPK和p-p38 MAPK水平均升高,80和120 μmol/L组U251细胞中p-ERK水平升高,但仅120 μmol/L组U87 MG细胞p-ERK水平升高（P＜0.05）。结论　一定浓度的UC可抑制GBM细胞增殖、迁移和侵袭,诱导肿瘤细胞凋亡和细胞周期阻滞,其机制可能与调控AMPK/ERK/p38 MAPK信号通路有关。