凝血酶介导肾小球系膜细胞细胞间粘附分子1表达上调及水蛭素？…

为了阐明凝血酶对肾小球系膜细胞细胞间粘附分子表达的影响。方法 利用体外培养的人肾小球系膜细胞，分别采用噻唑蓝掺入法，流式细胞术。间接免疫荧光，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交等方法分别观察了凝血酶对系膜细胞增殖和表达ＩＣＡＭ－１蛋白和ｍＲＮＡ的影响，并同时进行了人工重组水蛭素的阻断实验。     

细胞间黏附分子-1刺激系膜细胞增生及己酮可可碱和氯沙坦的抑制作用

肾小球系膜细胞（ＭＣ）是肾小球炎性疾病，尤其是系膜区炎症发生、发展中病理生理变化的重要组成部分，在致病因素的作用下，ＭＣ产生了表型的转化并增殖。研究表明在此过程中。细胞黏附分子及其黏附机制可能与ＭＣ增殖、基质增加及系膜区域扩大有关［１］。我们采用体外ＭＣ与巨噬细胞共同培养的方法，探讨细胞黏附分子中免疫球蛋白超家族成员之一，细胞间黏附分子－１（ＩＣＡＭ－１）在肾小球ＭＣ增殖过程中的作用，并观察肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）、血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）对ＭＣ与巨噬细胞黏附的影响及中药己酮可可碱（ｐｅｎ…     

肾小球肾炎中系膜细胞α-平滑肌肌动蛋白表达与细胞表型变化的关系

目的探讨系膜细胞α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ）表达与细胞表型变化的关系。方法应用免疫组化技术并结合计算机图像分析，检测人类系膜增殖性肾小球肾炎（ＭｓＰＧＮ）及局灶节段硬化性肾炎（ＦＳＧＮ）时系膜细胞内α－ＳＭＡ的表达程度、系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的情况。结果在系膜增殖性肾炎，随着系膜细胞增殖程度的加重，细胞外基质积聚增多，α－ＳＭＡ的表达程度也增加，三者呈平行变化并具有高度相关性。在出现硬化病变后，系膜细胞增殖下降，α－ＳＭＡ表达也降低，但细胞外基质未见减少。结论α－ＳＭＡ可作为人类肾小球疾病状态下系膜细胞表型转化的稳定标志，它的出现标志着系膜细胞被激活并处于增殖／分泌表型     

内皮素在大鼠系膜增生性肾小球肾炎中的表达

目的 研究内皮素－１（ＥＴ－１）在系膜增生性肾小球肾炎（ＭｓＰＧＮ）模型中的表达。方法 以小鼠抗大鼠Ｔｈｙ１．１单克隆抗体单次尾静脉注射诱导的大鼠ＭｓＰＧＮ模型,,病理观察分析该模型的系膜细胞和系膜基质增生;Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析肾小有内此素（ｐｐＥＴ－１）ｍＲＮＡ表达水平;放射免疫分析（ＲＩＡ）测定肾小球ＥＴ－１蛋白水平。结果 在大鼠ＭｓＰＧＮ模型中,第２ｄ系膜细胞溶解消失,第４ｄ系膜细胞增生     

血小板活化因子及其受体对颈髓损伤后血脊髓屏障损害的分子机制研究

目的：探讨血小板活化因子（ＰＡＦ）及其受体对颈髓损伤后血脊髓屏障损害的分子机制。方法：采用蛛网膜下腔注射ＰＡＦ及静脉注射ＰＡＦ受体拮抗剂ＢＮ５２０２１，应用地高辛标记ｃＤＮＡ探针原位杂交技术检测颈髓损伤后颈髓血管内皮细胞细胞间粘附分子－１ｍＲＮＡ（ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ）和内皮细胞白细胞粘附分子－１ｍＲＮＡ（ＥＬＡＭ－１ｍＲＮＡ）表达。观察ＰＡＦ及其受体拮抗剂对颈髓损伤后血脊髓屏障、ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ、ＥＬＡＭ－１ｍＲＮＡ表达的影响。结果：伤后颈髓血管内皮细胞ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ、ＥＬＡＭ－１ｍＲＮＡ表达、伊文思蓝含量、水含量呈不同程度的增加；ＰＡＦ可使伤后血管内皮细胞ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ、ＥＬＡＭ－１ｍＲＮＡ表达、伊文思蓝含量、水含量增加更为显著，ＰＡＦ受体拮抗剂可抑制ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ、ＥＬＡＭ－１ｍＲＮＡ表达，降低颈髓组织伊文思蓝含量及水含量。结论：ＰＡＦ通过增加伤后颈髓血管内皮细胞粘附分子的表达是导致血脊髓屏障损害的重要分子基础。ＰＡＦ受体对伤后血管内皮细胞细胞粘附分子的表达具有调控作用。     

白介素1β对肾小球系膜细胞表达纤维蛋白溶解酶原激活物抑？…

目的 探讨白介素１β（ＩＬ－１β）对人肾小球系膜细胞表达纤维蛋白溶解酶原（纤溶酶原）激活物抑制物－１（ＰＡＩ－１）和纤维连接蛋白（ＦＮ）的影响。方法 应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测体外培养的肾小球系膜细胞在ＩＬ－１β刺激后ＰＡＩ－１和ＦＮ的ｍＲＮＡ表达，采用纤维蛋白平板法检测系膜细胞培养上清中ＰＡＩ－１的活性，利用ＥＬＩＳＡ法检测ＦＮ的水平。结果 ＩＬ－１β刺激组系膜细胞ＰＡＩ－１和ＦＮ ｍＲＮＡ的     

肝细胞肝癌细胞间粘附分子-1 mRNA表达的研究

寻找甲胎蛋白（ＡＦＰ）以外更新、更敏感的血清标记物是肝癌研究中的重要课题。近年有关细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）和肝细胞肝癌（ＨＣＣ）的研究提示,ＩＣＡＭ－１在ＨＣＣ病人组织及血清中（ｃＩＣＡＭ－１）呈高水平表达＾〔１,３〕。本研究通过检测ＨＣＣ组织中ＩＣＡＭ－１信使核糖核酸（ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ）的表达,探讨血清中高水平ＩＣＡＭ－１与ＨＣＣ组织中ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ的相互关系,为ｃＩＣＡＭ－测定在ＨＣＣ早期诊断及术后复发监测中的作用寻找理论依据。     

肾小球肾炎中系膜细胞α—平滑肌肌动蛋白表达与细胞表型变化？…

探讨系膜α－平滑肌肌动蛋白表达与细胞表型变化的关系。方法应用免疫组化技术并结合计算机图像分析，检测人类系膜增殖性肾小球肾炎及局灶节段硬化性肾炎时系膜细胞内α－ＳＭＡ的表达程度，系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的情况。     

低密度脂蛋白及氧化修饰低密度脂蛋白对人系膜细胞增殖及基质合成的影响

目的 观察不同浓度低密度脂蛋白（ＬＤＬ）及氧化修饰低密度脂蛋白（ｏｘ－ＬＤＬ）对人系膜细胞（ＨＭＣ）增殖和细胞毒性作用,及对培养细胞上清Ⅳ型胶原的含量及表达Ⅳ型胶原α１链ｍＲＮＡ的影响。方法 采用体外ＨＭＣ培养,Ｈ＾３－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ掺入研究人系膜细胞增殖,ＬＤＬ释放实验研究细胞毒作用,ＥＬＩＳＡ法测定Ⅳ型胶原含量和逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法研究Ⅳ型胶原α１链ｍＲＮＡ表达。结果 Ｌ     

烧伤大鼠早期切痂对内皮细胞间粘附分子—1及E—选择素mRNA表？…

目的 研究烧伤血清对体外培养的内皮细胞的细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）及Ｅ－选择素（Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ）ｍＲＮＡ表达的影响,探讨实施休克期切痂上述指标的变化。方法 Ｗｉｓｔａｒ大鼠１７６只,３０％Ⅲ度烫伤,收集不同时间点血清,采用逆转录ＰＣＲ方法分别观察伤后不同时相点血清刺激内皮细胞ＩＣＡＭ－Ⅰ、Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ ｍＲＮＡ的表达的规律。结果 烫伤后血清可刺激内皮细胞ＩＣＡＭ－１、Ｓ－ｓｅ     

肾小球系膜细胞表达基质金属蛋白酶组织抑制物—1,—2及凝？…

目的探讨人肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMP-1、-2)的表达及凝血酶对它们的调节作用,进一步阐明凝血酶促进肾小球损伤及硬化过程中的分子生物学机制.方法利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、Northern杂交和Western印迹等分子生物学方法,观察了凝血酶对体外培养的人肾小球系膜细胞表达TIMP-1、-2的诱导作用.结果在无血清RPMI1640培养12h后,RT-PCR、Northem和Western分析显示,系膜细胞可表达基础水平的TIMP-1、-2mRNA及其蛋白质;凝血酶(0.5、1.5、4.5HIU/ml)可浓度依赖性地上调系膜细胞TIMP-1、-2mRNA的表达水平,Western印迹分析证明凝血酶还可以上调系膜细胞表达TIMP-1、-2蛋白水平;凝血酶的上述作用可被其特异性抑制物一水蛭素部分性阻断.结论正常人肾小球系膜细胞在基础状态下可以表达TIMP-1、-2,我们首次证实凝血酶在基因转录和蛋白质翻译水平促进系膜细胞表达TIMP-2,从而参与病理状态下肾小球内细胞外基质的异常代谢过程.     

肾小球系膜细胞表达基质金属蛋白酶组织抑制物-1、-2及凝血酶调控的研究

目的探讨人肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMP-1、-2)的表达及凝血酶对它们的调节作用,进一步阐明凝血酶促进肾小球损伤及硬化过程中的分子生物学机制.方法利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、Northern杂交和Western印迹等分子生物学方法,观察了凝血酶对体外培养的人肾小球系膜细胞表达TIMP-1、-2的诱导作用.结果在无血清RPMI 1640培养12 h后,RT-PCR、Northem和Western分析显示,系膜细胞可表达基础水平的TIMP-1、-2 mRNA及其蛋白质;凝血酶(0.5、1.5、4.5 HIU/ml)可浓度依赖性地上调系膜细胞TIMP-1、-2 mRNA的表达水平,Western印迹分析证明凝血酶还可以上调系膜细胞表达TIMP-1、-2蛋白水平;凝血酶的上述作用可被其特异性抑制物一水蛭素部分性阻断.结论正常人肾小球系膜细胞在基础状态下可以表达TIMP-1、-2,我们首次证实凝血酶在基因转录和蛋白质翻译水平促进系膜细胞表达TIMP-2,从而参与病理状态下肾小球内细胞外基质的异常代谢过程.     

细胞间粘附分子-1在着床前小鼠胚胎培养液中的表达

为探讨细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）在着床中的作用和调节,本研究采用昆明种小鼠,获取孕第一天的单细胞胚胎,分别在Ｍ１６培养液和含０．１ｎｇ／ｍｌ浓度白血病抑制因子（ＬＩＦ）的Ｍ１６培养液中培养１２０小时,每２４小时更换培养液,然后,用免疫印迹法测定胚胎培养液中的ＩＣＡＭ－１在蛋白水平的表达。结果：（１）５天的培养液中均有ＩＣＡＭ－１的表达。第一天培养液中的ＩＣＡＭ－１水平稍高,第二天最低,以后逐渐升高,到第五天达最高峰。（２）ＬＩＦ可显著提高胚胎ＩＣＡＭ－１的表达水平。结果表明：小鼠孕早期胚胎可以表达ＩＣＡＭ－１,其表达水平在胚泡期最高。ＩＣＡＭ－１的表达可能与着床过程胚泡的粘附有关。细胞因子ＬＩＦ可促进ＩＣＡＭ－１的表达。     

白细胞介素10抑制核因子кB介导的肾小管上皮细胞表达细胞间黏附分子1

目的研究白细胞介素１０（ＩＬ－１０）对人近端肾小管上皮细胞（ＨＫ－２细胞）在促炎症因子肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）作用下表达细胞间黏附分子１（ＩＣＡＭ－ｌ）及其相关核转录途径的影响。方法 用ＨＫ－２细胞作靶细胞，用细胞酶联免疫吸附法（ＥＩＪＳＡ）和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交观察ＩＣＡＭ－１的蛋白和基因的表达，以电泳迁移率变动法测定转录因子核因子ｋＢ （ＮＦｋＢ）和激活蛋白 Ｉ（ＡＰ－１）的活性。结果ＴＮＦα呈剂量依赖地诱导ＨＫ－２细胞ＮＦｋＢ的活化及ＩＣＡＭ－１的基因和蛋白表达，这些作用可以被ＮＦｋＢ的抑制剂对甲苯磺－Ｌ－苯丙氨酸氯甲基甲酮（ＴＰＣＫ）所抑制，但ＴＮＦα对ＨＫ－２细胞的ＡＰ－１活性无影响。 ＩＬ－１０（１～ ２０ｎｇ／ｍｌ）可抑制 ＴＮＦα诱导的 ＨＫ－２细胞 ＩＣＡＭ－ｌ基因和蛋白表达及 ＮＦｋＢ的活化。结论ＴＮＦα诱导人肾小管上皮细胞ＨＫ－２的ＮＦｋＢ活化，进而促进ＩＣＡＭ－ｌ基因和蛋白表达，ＩＬ－１０可抑制ＴＮＦα诱导的上述炎症效应。     

组织因子,凝血酶受体与血栓调节蛋白在胰腺癌细胞中 …

目的 研究组织因子（ＴＦ）、凝血酶受体（ＴＲ）和血栓调节蛋白（ＴＭ）在胰腺癌细胞中的表达。方法 采用细胞培养、免疫细胞化学和Ｎｉｒｔｈｅｒｎ印迹分析方法。结果 每个抗原都在细胞膜及（或）细胞浆中有特征性的免疫反应,ＴＦ和ＴＲ主要在细胞浆,ＴＭ在细胞膜。ＴＲ表达越多,ＴＭ表达越少。ＴＲ ｍＲＮＡ在野生型胰腺癌细胞株中表达,凝血酶和水蛭素均降低ＴＲｍＲＮＡ的表达量。凝血酶可致人胰腺癌细胞株ＭｉａＰａＣ     

血管细胞粘附分子在人类狼疮肾炎和新月体肾炎中的表达

利用间接免疫荧光和膜免疫印迹方法，观察了血管细胞粘附分子（ＶＣＡＭ－１）在人类狼疮肾炎和新月体肾炎患者肾组织及血清中的表达。结果表明：狼疮肾炎（Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ型）和新月体肾炎患者沿肾小球毛细血管壁可见ＶＣＡＭ－１特异性荧光；肾小球系膜区ＶＣＡＭ－１表达呈现增强的趋势；与轻度系膜增生性肾炎比较，狼疮肾炎（Ⅳ、Ⅱ型）患者血清中ＶＣＡＭ－１水平显著增加（Ｐ＜０．０１）。提示ＶＣＡＭ－１在狼疮肾炎和新月体肾炎的发生发展中可能具有重要作用。     

缺血再灌注对大鼠肺细胞间粘附分子-1表达的影响

目的 观察缺血再灌注（Ｉ／Ｒ）对肺组织细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）表达的影响，分析ＩＣＡＭ－１表达与肺内中性粒细胞浸润的关系。方法 Ｗｉｓｔａｒ大鼠单肺原位热缺血再灌注损伤模型分７组，左肺缺血９０ｍｉｎ，再灌注时间分别为０、１、２、４、８、１６、２４ｈ。逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法检测肺组织ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ及蛋白表达，测定各组肺组织髓过氧化物酶活性     

氧化低密度脂蛋白刺激人肾小球系膜细胞产生单核细胞趋化蛋白-1由核因子-κB活化调控

目的 研究核因子ＫＢ（ＮＦ－ＫＢ）在氧化低密度脂蛋白（Ｏｘ- ＬＤＬ）诱导的体外培养的人肾小球系膜细胞表达单核／巨噬细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）中的作用。方法 采用凝胶迁移率变动分析检测ＮＦ－ＫＢ的ＤＮＡ结合活性变化，以免疫组织化学观测细胞内ｐ６５的核转位，用细胞ＥＬＩＳＡ法检测细胞内 ＭＣＰ－１及ＩＫＢα蛋白含量变化。结果 不同浓度（１０、２５、５０、１００μｇ／ｍｌ）Ｏｘ－ＬＤＬ刺激肾小球系膜细胞均可引起细胞ＮＦ-ＫＢ的ＤＮＡ结合活性增强、ＩＫＢα蛋白表达下降以及ＭＣＰ－１蛋白表达增强，以５０μｇ／ｍｌ刺激１ｈ ＮＦ－ＫＢ活化及ＩＫＢα表达减弱最明显，作用２４ｈＭＣＰ-１表达水平最高。ＮＦ－ＫＢ俯活化的同时伴有ｐ６５核转位。上述效应可被ＮＦ－ＫＢ特异性抑制剂吡咯二硫氨基甲酸酯（ＰＤＴＣ）所抑制。结论Ｏｘ－ＬＤＬ刺激人肾小球系膜细胞产生ＭＣＰ－１是由ＮＦ－ＫＢ调控，ＮＦ－ＫＢ参与了脂质肾损害的发病过程。     

低氧诱导的大鼠系膜细胞增殖及基质mRNA表达的研究

目的观察慢性低氧诱导的系膜细胞增殖，细胞外基质ｍＲＮＡ表达及蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）在低氧介导系膜细胞增殖中的作用。方法采用体外大鼠系膜细胞培养，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析及放射核素测定法。结果与正常氧（１８％Ｏ２）比较，低氧（３％Ｏ２）培养系膜细胞３Ｈ－胸腺嘧啶掺入率显著增高（３．３±０．３×１０３ｍｉｎ－１／瓶对１．７±０．２×１０３ｍｉｎ－１／瓶，Ｐ＜０．０１）。细胞计数在培养２８小时无显著差异，但培养７２小时，低氧比正常氧培养增加３３％（Ｐ＜０．０１）。低氧培养系膜细胞表达Ⅳ型前胶原（ＰＣｏｌⅣ）、纤维连接蛋白（Ｆｎ）、层粘连蛋白（Ｌａ）ｍＲＮＡ显著增高。测定低氧培养系膜细胞ＰＫＣ活力呈双峰型增高，加入ＰＫＣ抑制剂Ｈ７可抑制低氧诱导的系膜细胞增殖。结论慢性低氧可诱导系膜细胞增殖和细胞外基质产生增多，ＰＫＣ激活起着重要的介导作用     

OX-LDL诱导活化的巨噬细胞对肾小球系膜细胞TGF-β与Fn基因表达的影响及水蛭素的干预作用

目的：研究氧化低密度脂蛋白（OX—LDL）诱导活化的巨噬细胞对肾小球系膜细胞转化生长因子（TGF-β）、纤连蛋白（Fn）基因表达的影响以及水蛭素的干预作用，探讨炎症状态下肾硬化发生的病理机制和水蛭素的有效作用。方法：体外培养大鼠肾小球系膜细胞，将OX—LDL诱导活化的大鼠腹腔巨噬细胞转入细胞培养小室，或采集其条件培养基与肾小球系膜细胞共培养；水蛭素干预组在分层共培养系统的培养有系膜细胞的下层培养液中加入水蛭素。浓度分别为2.5U／ml、5．0U／ml、10U/ml。逆转录-聚合酶链扩增反应（RT—PCR）检测肾小球系膜细胞TGF-β、Fn的基因表达。结果：OX—LDL刺激后，大鼠腹腔巨噬细胞上清液中IL-1浓度明显升高；无论是活化的巨噬细胞还是其奈件培养基均能上调TGF-β和Fn mRNA的表达，但以分层共培养作用最为显著；水蛭素在一定浓度下可显著下调T（再一p和Fn的基因表达。结论：（1）在分层共培养条件下，OX—LDL诱导活化的巨噬细胞与系膜细胞处于一个整体系统中，巨噬细胞不仅可通过分泌细胞因子等病理产物，而且两种细胞还可能通过相互作用增强对系膜细胞增殖和TGF-β和Fn分泌等的促进作用。（2）水蛭素可能通过抑制病理条件下硬化因子和细胞外基质的基因表达起到干预肾硬化的作用。