糖链加工酶抑制剂地衣霉素和Swainsonine对运铁蛋白受体再循环的影响

作者应用两种糖链加工酶抑制剂,即抑制糖蛋白N-糖链合成的地衣霉素及使糖蛋白N-糖链变为高甘露糖型和杂合型的Swainsonine,来研究SMMC-7721人肝癌细胞表面运铁蛋白受体(TR)N-糖链结构的改变对受体再循环过程的影响。实验结果表明,1μg/ml的地衣霉素处理细胞后,细胞生长、蛋白质合成、DNA合成及细胞膜糖蛋白N-糖链的合成均受到不同程度的抑制,但对TR的再循环并无明显影响。2μg/ml的Swainsonine处理细胞后,对细胞生长、蛋白质合成、DNA合成均无明显影响,它使细胞膜糖蛋白N-糖链中甘露糖的掺入增加,并可加快TR再循环过程。     

6A8α-甘露糖苷酶的基因克隆、表达与功能研究

糖蛋白中的糖链在细胞-细胞、细胞-基质及细胞-分子间信息交通起重要作用.糖链可以N-连接方式(连接于蛋白质中由天冬酰氨酸、除脯氨酸外的任意氨基酸、丝氨酸/苏氨酸组成的序列子中的天冬酰胺)或O-连接方式(连接于蛋白质中的丝氨酸或苏氨酸)与蛋白质相连.N-连接与O-连接均需要一系列酶的催化.这些酶的识别与特性研究有助于对蛋白质糖基化机制与糖链功能的了解.     

6A8α-甘露糖甘酶的基因克隆、表达与功能研究

糖蛋白中的糖链在细胞-细胞、细胞-基质及细胞-分子间信息交通起重要作用。糖链可以N-连接方式(连接于蛋白质中由天冬酰氨酸、除脯氨酸外的任意氨基酸、丝氨酸/苏氨酸组成的序列子中的天冬酰胺)或O-连接方式(连接于蛋白质中的丝氨酸或苏氨酸)与蛋白质相连。N-连接与O-连接均需要一系列酶的催化。这些酶的识别与特性研究有助     

肿瘤异常糖链糖蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨分析肿瘤异常糖链糖蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法选择在2018年5月到2019年1月我院收治的49例经过病理学诊断为乳腺癌的女性患者和49例健康女性一起作为研究对象,将乳腺癌患者作为观察组,健康人群作为对照组,观察对比两组人群的肿瘤异常糖链糖蛋白(TAP)的阳性率,同时分析观察组中PR阳性和PR阴性患者的肿瘤异常糖链糖蛋白阳性率。结果观察组患者中的肿瘤异常糖链糖蛋白阳性率要高于对照组,PR阴性患者的肿瘤异常糖链糖蛋白阳性率要高于PR阳性患者的肿瘤异常糖链糖蛋白阳性,对比结果差异明显(P0.05),具有统计学意义。结论肿瘤异常糖链糖蛋白检查对于乳腺癌的诊断有一定的临床意义,可以为乳腺癌的临床诊断提供一些参考。     

糖蛋白糖链结构的研究及临床应用

糖蛋白糖链结构的研究及临床应用兰医一院李晓玲，李定国糖蛋白是机体重要的组成成份，具有复杂的生理功能。凡糖蛋白中糖链的Ｎ一乙酰氨基半乳糖（ＧａｌＮＡｃ）与肽链中丝氨酸或苏氨酸残基的羟基形成α一糖苷键而连接者称为０—连接型糖链。而糖链的Ｎ一乙酰氨基葡萄糖...     

促成核泡相糖蛋白的分离、纯化及理化性质研究

目的提纯胆汁泡相糖蛋白并研究其理化性质。方法应用超速离心法结合高效液相层析(HPLC)分离纯化胆汁泡相糖蛋白,体外观察成核活性,并检测泡相糖蛋白的相对分子质量和化学组成。结果胆汁泡相糖蛋白Mr约为33500,具有较强的促成核功能,成核活性达0．31。泡相糖蛋白由多肽和寡糖组成,糖-肽键为N-连接方式,其中多肽Mr约为21000,含153个氨基酸,包括97个极性氨基酸和56个非极性氨基酸。糖链约占总蛋白含量的37．3％,为核心岩藻糖丰富的多天线复杂型聚糖。肽链N-末端氨基酸序列为H2N-天冬-天冬酰胺-丝-谷氨酰胺-组-精-酪-缬-苯丙-异亮氨酸。结论胆汁泡相糖蛋白是一种新的促成核活性因子,在胆固醇性结石的早期发生阶段可能起重要作用。     

衣霉素逆转CD147介导的结肠癌细胞株SW620/5-FU耐药性的实验研究

目的:探讨衣霉素对结肠癌5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药细胞株(SW620/5-FU)耐药性的逆转作用及机制。方法:采用药物浓度梯度递增法诱导建立结肠癌耐药细胞株SW620/5-FU;MTT法检测细胞药物敏感性变化;流式细胞术和Lection blot检测N-糖链结构差异;Western blot检测糖蛋白CD147 N-糖基化水平。进一步采用衣霉素作用于SW620/5-FU,观察细胞耐药性状的改变。结果:成功建立结肠癌耐药细胞株SW620/5-FU,其细胞表面N-糖链合成增加,高糖基化CD147表达上升;衣霉素可阻断SW620/5-FU细胞中CD147 N-糖链合成,实现其5-FU耐药性的逆转。结论:衣霉素通过抑制N-糖链合成从而逆转CD147介导的结肠癌细胞株SW620/5-FU的耐药性。     

异常糖链糖蛋白在肿瘤发生发展中的作用及检测进展

异常糖链糖蛋白是蛋白质糖基化异常——糖蛋白糖链结构或糖基转移酶活性的变化而形成的,蛋白质翻译后加工修饰异常与疾病发生、发展存在密切关系,而在多种多样的蛋白质翻译后加工中,糖基化修饰是最普遍的一种,糖基化生物合成状态比蛋白质的改变能更有效地提示疾病状态。因此,异常糖链糖蛋白检测使肿瘤在发生早期即可作出诊断,并为疾病进展的动态监测提供可能。     

基于质谱的N-糖蛋白分析进展

N-连接糖基化是蛋白质上常见的翻译后修饰，在修饰位点上具有跟其他小分子修饰（如甲基化、乙酰化、磷酸化）同样的宏观不均一性，也就是蛋白质氨基酸序列上具有多个潜在的修饰位点。但相对于小分子修饰单一的结构，N-糖基化修饰具有来自不同单糖组成，序列结构、链接结构、异头异构，立体构象等多个结构维度的数以万计的结构。这使得N-糖基化在修饰位点上具有额外的微观不均一性，也就是说同一个N-糖基化位点可以以一定的化学计量比修饰不同的糖链。N-糖基化修饰以位点和结构特异的方式调控N-糖蛋白的结构和功能，疾病条件下差异表达的N-糖基化需通过位点和结构特异的定量分析来表征。本文主要介绍最新发展水平的基于质谱的位点和结构特异定量N-糖蛋白质组学及在生物医学中的应用。     

N-亚硝基胆汁酸结合物对鼠伤寒沙门氏菌和人类成淋巴细胞二倍体的致突变性

许多N-亚硝基化合物对器官有特异的致癌性。N-亚硝酰胺及其有关化合物与胃肿瘤有关。N-甲基-N-亚硝基乙酰胺是大鼠前胃致癌元,N-甲基N-亚硝基脲和N-甲基N-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)可在大鼠胃的几个位置诱发肿瘤。 最近我们合成两个有特征性的亚硝酰胺,即N-亚硝基牛磺胆酸(NOTC)和N-亚硝基甘氨胆酸     

α-L-岩藻糖苷酶的研究进展及临床应用

α-L-岩藻糖苷酶(AFU)是一种溶酶体酸性水解酶,分类名为α-L-岩藻糖苷岩藻糖水解酶(EC3.2.1.51),参与含α-L-岩藻糖的糖脂、糖蛋白、糖苷等糖复合物的水解。AFU广泛分布于人体细胞及体液中,其中以肝肾组织含量较高。AFU在血清或组织中活性的改变与肿瘤的发生具有显著相关性,是肝细胞癌、胰腺癌、结直肠癌等肿瘤的诊断、疗效和预后的重要监测指标。     

拟糖蛋白——肝炎治疗药物引导蛋白的合成

半乳糖基修饰的清蛋白可作为肝炎药物的引导蛋白,将药物浓集到肝实质细胞上。我们通过改进的方法制备2-亚氨基-2-甲氧基-乙基1-硫-半乳糖苷,并将此活性半孔糖衍生物连接到清蛋白上。所合成的糖蛋白经气相色谱测定,每分子蛋白上连接44个半乳糖基。     

肺癌血型物质A.B.H抗原免疫组织化学研究癌糖链抗原研究之一

作者采用免疫组织化学方法,对肺癌组织中的血型物质 A、B、H 抗原进行检查,结果表明绝大多数肺癌组织血型物质减少或消失。在 B 型和 O 型患者癌组织中可以出现反常 A 抗原(incompatible A antigen)。上述变化的机理可能是:(1)糖链合成不全,前驱物质的蓄积;(2)新的糖链合成。在癌变过程中,细胞膜上糖脂质、糖蛋白的糖链发生很大的变化,运一免疫学去分化的重要标志,可作为一个新的肿瘤标记应用于癌研究。     

肺癌血型物质A、B、H抗原免疫组织化学研究——肺癌分子病理学研究之三

采用免疫组织化学方法,对肺癌组织中的血型物质A.B.H抗原进行检查,其结果表明:绝大多数的肺癌组织血型物质减少或消失。在B型和O型患者癌组织中可以出现反常A抗原(incompatible Aantigen)。上述变化的机理可能是:(1)糖链合成不全,前驱物质的蓄积;(2)新的糖链合成。细胞在癌变过程中,细胞膜上糖脂质、糖蛋白的糖链发生很大的变化,这一免疫学去分化的重要标志,可作为一个新的肿瘤标记应用于癌研究。     

慢性胃炎脾虚证患者唾液糖蛋白N-聚糖结构特点

【目的】分析慢性胃炎脾虚证患者酸刺激后总唾液糖蛋白及唾液淀粉酶N-聚糖结构特点,探讨其与淀粉酶活性及脾功能低下的关系。【方法】采用碘分光光度法,分析47例慢性胃炎脾虚证患者、15例慢性胃炎脾胃湿热证患者及12例健康志愿者酸刺激前后唾液淀粉酶活性;通过ConA亲和层析,分离27例慢性胃炎脾虚证患者、14例慢性胃炎脾胃湿热证患者及5例健康志愿者酸刺激后总唾液糖蛋白,分析总糖蛋白及唾液淀粉酶N-聚糖结构特点;通过ConA亲和—反相二维层析,分离13例慢性胃炎脾虚证患者、6例慢性胃炎脾胃湿热证患者及5例健康志愿者酸刺激后总唾液糖蛋白,分析带有不同N-聚糖的总唾液糖蛋白的组成和分布。【结果】酸刺激后,脾虚证组患者的唾液淀粉酶活性呈显著性下降(与酸刺激前比较,P<0.05),其唾液淀粉酶活性下降率为70%,高于脾胃湿热证组的47%和正常组的8%。此外,脾虚证组患者酸刺激后总唾液糖蛋白及唾液淀粉酶中的ConA强结合组分总峰面积所占比例显著增加,ConA未结合及弱结合组分显著减少,与脾胃湿热证组及正常组比差异有显著性(P<0.05或P<0.01);并发现总唾液糖蛋白中,减少的ConA未结合组分有10~20种不等,减少的ConA弱结合组分有8~17种不等,增加的ConA强结合组分有10~19种不等,其组成和分布显著不同于脾胃湿热证组和正常组。【结论】慢性胃炎脾虚证患者总唾液糖蛋白及唾液淀粉酶N-聚糖结构发生了显著变化,主要表现为ConA强结合组分所占比例显著增加,而ConA未结合及ConA弱结合组分所占比例显著减少,其特征亦以高甘露糖型和杂合型糖链为主,2、3、4天线复杂型糖链为次;而不同糖链类型的糖蛋白组成和分布亦与脾胃湿热证组和正常组显著不同,表明脾虚证患者总唾液糖蛋白及唾液淀粉酶N-糖基化均不完全,这可能与脾虚证患者酸刺激后唾液淀粉酶活性低下及脾功能低下有关。     

糖蛋白抗肿瘤研究进展

糖蛋白是由一个或多个寡糖链通过不同连接方式与蛋白质部分的多肽骨架共价相连而成.在生物体内的糖蛋白种类繁多,广泛存在于动物、植物和某些微生物中,在生物体内它以不同形式存在而发挥作用,是细胞膜、细胞间基质、血浆、粘液、激素等的重要构成成分.糖蛋白中糖链维持蛋白质结构稳定,抵抗蛋白酶水解,参与多肽链在内质网的折叠启动及防止抗体的识别.糖蛋白具有调解和开关激素功能、胞内转运功能,还具有保护与促进物质吸收、参与血液凝固、参与细胞识别等功能.近年的研究表明从动物和植物中提取的糖蛋白具有增强免疫调节、抑制肿瘤、降低血糖、血脂、抗氧化、防衰老等显著的药用功效和保健功能[1].     

N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅴ在恶性肿瘤中的作用

细胞膜表面的糖链在细胞识别中具有介导作用,糖链参与了细胞间相互识别、粘着、信息交换的过程。细胞的恶性转化常伴有细胞膜N-糖链的改变,其中主要包括唾液酸和β1,6分支结构含量的增多,众多研究已经证实N-乙酰氨基     

唾液酸与心肌细胞的Ca^2＋转运

糖蛋白和糖指作为细胞膜表面组分,参与许多重要的生理过程。构成糖蛋白和糖脂分子的单糖有十一、二种,其中以唾液酸(Sialic Acid简称SA)尤为重要,它总是连接于糖链的非还原末端,参与细胞表面许多生物现象,如与细胞分化、恶性细胞的迁移、细胞的识别、粘着及接触抑制有关,并参与血小板粘附和聚集,神经递质的释放、肿瘤抗原的改变等过程。SA可作为膜受体的组成成分,在调节心肌细胞兴奋收缩偶联中起重要作用。而这些生理和病理反应的发生均依赖于Ca~(2 )或Ca~(2 )依赖性蛋白酶的调节。因此SA与心肌细胞Ca~(2 )转运的关系已引起人们越来越多的关注。本文谨就SA与心肌细胞Ca~(2 )转运的关系作一扼要综述。     

一种新的肝癌糖蛋白抗原HCA_2的纯化与分析

应用单抗(McAb)亲和层析技术,从原发性肝癌(HCC)组织中分离出高纯度新的肝癌相关抗原。ELISA和免疫酶斑点试验表明抗原活性保持良好,纯化倍数达580倍;SDS—PAGE、Western Blotting、PAGE、糖蛋白染色证实该抗原的蛋白组份为94KD和58KD两亚基组成的糖蛋白;抗原酶解、高碘酸钠氧化及ConA亲和吸附试验表明抗原决定簇由糖链构成;糖链含α—甘露糖基;放射免疫试验证实纯化抗原与AFP、CEA无关。其免疫生化特性及免疫组化特征与已知的肿瘤抗原均不相同。     

唾液酸与癌症

唾液酸是指当神经氨酸的氨基被乙醛基或羟乙酰基取代后所产生的衍生物。唾液酸位于糖蛋白或糖脂的末端,本身带负电荷,它对细胞的转运功能、细胞间的排斥反应和细胞膜上糖蛋白的合成有一定作用。在肿瘤细胞的细胞膜上其糖链唾液酸化增强,使肿瘤细胞的细胞膜上糖链混乱,并促进肿瘤细胞的转移、浸润,降低宿主对肿瘤细胞的免疫杀伤作用。唾液酸作为一种高灵敏的肿瘤标志物有大量文献报道,尽管它的特异性不高(如在炎症中其水平也增高),但唾液酸对于癌症的诊断、鉴别诊断、病情监测仍有较大临床应用价值、在血清或血浆中,有多种方法可有效测量唾液酸含量。