银杏叶提取物对帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元保护作用研究

目的研究银杏叶提取物（GBE）对帕金森病模型小鼠黑质（SN）多巴胺（DA）能神经元的保护作用。方法36只C5,Bk小鼠随机3组,每组12只。其中,帕金森病（PD）模型组的小鼠采用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）腹腔注射（30mg／kg×5d）诱导PD;GBE预处理组的小鼠于注射MPTP前2h腹腔注射GBE（60mg／kg×8d）;正常对照组的小鼠只注射等体积生理氯化钠溶液。应用免疫组织化学染色观察小鼠黑质致密带（SNzc）酪氨酸羟化酶（TH）免疫反应阳性细胞数量的变化,用高效液相色谱法（HPLC-ECD）检测小鼠纹状体（Str）内DA及其代谢物二羟基苯乙酸（DOPAC）和高香草酸（HVA）含量。结果PD模型组小鼠SN内酪氨酸羟化酶（TH）阳性细胞数量、Str内DA及其代谢产物DOPAC和HVA的含量明显减少（P〈0．01）,GBE预处理组小鼠SN内TH阳性细胞数量、Str内DA及其代谢产物DOPAC和HVA的含量明显增多（P〈0.05）,但仍低于正常对照组（P〈0．01）。结论GBE对MPTP致帕金森病小鼠SNDA能神经元具有明显的保护作用。     

环加氧酶-2对帕金森病模型小鼠黑质多巴胺能神经元的影响

目的　观察COX 2对帕金森病小鼠黑质多巴胺能神经元的影响。方法　选用C5 7BL种系环加氧酶 2 (Cyclooxygenase 2 ,COX 2 )缺陷小鼠 ,腹腔注射 1 甲基 4 苯基 1,2 ,3,6 四氢吡啶 (MPTP)制备帕金森病小鼠模型 ,用免疫组织化学方法。结果　行为学及免疫组织化学观察显示 ,野生型帕金森病小鼠的死亡率明显高于COX 2缺陷杂合子帕金森病小鼠 (P <0 0 1) ;野生型帕金森病小鼠黑质致密部酪氨酸羟化酶 (Ty rosineHydroxylase ,TH)免疫反应阳性神经元数目较杂合子帕金森病小鼠明显减少 (P <0 0 1)。结论　COX 2很可能与帕金森病时黑质多巴胺能神经元的损伤有关     

p38MAPK抑制剂对MPTP模型小鼠黑质多巴胺能神经元的保护作用

目的:研究SB239063在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病(PD)模型小鼠中抑制p38丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)活化对多巴胺(DA)能神经元的保护作用。方法:雄性C57BL/6N小鼠随机分为MPTP(30 mg/kg)模型组;SB239063(5 mg/kg)抑制剂组;SB239063(15 mg/kg)抑制剂组;SB239063(25 mg/kg)抑制剂组。抑制剂组于每次注射MPTP前3 h腹腔注射SB239063;对照组注射与模型组和抑制剂组等量生理盐水和DMSO。采用免疫组织化学和免疫蛋白印迹法观察各组小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)和磷酸化p38蛋白激酶(p-p38 protein kinase,p-p38MAPK)之间表达变化的关系。结果:模型组小鼠黒质区p38MAPK显著活化,同时伴有TH阳性神经元明显丢失;SB239063 15 mg/kg与25 mg/kg组均可明显减少TH神经元丢失,而5 mg/kg组无显著影响;免疫荧光双标记结果显示p38MAPK与TH阳性神经元存在共表达。结论:p38MAPK对PD模型小鼠中脑黑质多巴胺能神经元丢失可能有重要调控作用,SB239063对多巴胺神经元具有一定的神经保护作用。     

G-CSF对帕金森病小鼠运动能力和黑质纹状体神经元的影响

目的:探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致小鼠帕金森病(PD)模型中脑黑质致密部(SNpc)及纹状体(STR)多巴胺(DA)能神经元的影响。方法:正常健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、MPTP组及MPTP+G-CSF组,采用腹腔注射MPTP法制作小鼠PD模型,MPTP+G-CSF组于最后一次MPTP注射后再腹腔注射G-CSF。爬杆实验观察小鼠的行为学改变;尼氏染色技术观察各组小鼠黑质致密部神经元数量及形态学变化;免疫组织化学法检测酪氨酸羟化酶(TH)在各组小鼠中脑黑质致密部及纹状体的表达; Western Blot法检测各组小鼠中脑TH蛋白的表达量。结果:与对照组相比,MPTP组小鼠较对照组爬杆用时显著延长(P 0. 05),尼氏染色显示黑质致密部神经元数量显著减少(P 0. 05),黑质致密部、纹状体TH表达量显著减少(P 0. 05); MPTP+G-CSF组较MPTP组爬杆用时显著缩短(P 0. 05),神经元丢失减少(P 0. 05),神经元形态较完整;与MPTP组比较,MPTP+G-CSF组黑质致密部、纹状体TH表达水平显著增高(P 0. 05)。结论:G-CSF能够改善PD小鼠运动功能,减少黑质致密部多巴胺能神经元丢失,增加TH表达水平。     

Nrf3基因在帕金森病猴模型黑质中表达的研究

本研究目的在于采用 m RNA差异显示技术及改进的硝酸银核酸染色技术 ,寻找 1-甲基 -4 -苯基 -1,2 ,3,6 -四氢吡啶诱导侧与对照侧中脑黑质细胞之间的差异表达基因。用 1-甲基 -4 -苯基 -1,2 ,3,6 -四氢吡啶诱发单侧帕金森病猴模型后 ,将两侧黑质m RNA用 3’端三个锚定引物与 30种随机引物进行逆转录 -聚合酶链反应 ,经聚丙烯酰胺凝胶电泳及硝酸银染色后显示扩增产物条带。结果 :对获得的差异表达基因片段的序列分析、同源性比较及功能分析证明 ,差异基因中的一个 (14 9bp)为 Nrf3基因片段。此结果提示 :Nrf3可能参与小胶质细胞的生长 ,促进对变性神经元的吞噬作用 ,可为从分子水平了解人类帕金森病的发生机理提供依据     

慢性帕金森病模型小鼠的行为学表现和多巴胺能神经细胞及转运体的数量变化

目的:研究慢性帕金森病模型小鼠行为学、黑质致密部多巴胺神经细胞和纹状体多巴胺转运体(DAT)的变化。方法:利用MPTP和二丙苯磺胺联合注射小鼠5周(每周2次,共10次)制作帕金森病小鼠慢性模型,通过转棒法检测小鼠行为学表现,免疫组织化学方法测定黑质内多巴胺能神经细胞的变化,放射自显影技术测定纹状体内DAT的密度。结果:帕金森病小鼠在转棒试验中行为发生明显改变,模型组行为学得分明显低于对照组(895±238 vs 1202±252,P0.001),酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数也明显低于对照组(10.4±6.5 vs22.4±8.0,P0.001)。模型组动物纹状体DAT放射自显影灰度值明显低于对照组(0.2123±0.0316 vs 0.3034±0.0588,P0.001)。线性回归表明,模型组小鼠黑质致密部TH阳性细胞数及纹状体内DAT密度与对应行为学得分呈明显正相关(r=0.6354,P0.01)。结论:MPTP和二丙苯磺胺所致的帕金森病小鼠,在行为学、纹状体DAT密度和黑质致密部多巴胺神经细胞量上均有明显改变,提示这种小鼠模型可用于研究帕金森病的发病过程和药物治疗。     

反义寡核苷酸阻断多巴胺转运体表达的大鼠对MPTP反应性的改变

目的 了解反义寡核苷酸阻断大鼠黑质多巴胺神经元多巴胺转运载体表达的效果,观察阻断后大鼠对神经毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)反应性的改变.方法 在立体定向仪下埋管至SD大鼠黑质致密部,4组大鼠分别接受反义寡核苷酸、正义寡核苷酸、错义寡核苷酸及生理盐水注射5d,之后接受MFTP注射,进行行为学、病理免疫组化染色观察多巴胺转运载体表达及多巴胺神经元凋亡.结果 大鼠黑质多巴胺转运载体表达(阳性单位,PU)反义寡核苷酸组(PU=6.65±1.67)较生理盐水对照组(PU=12.41±2.46)、正义寡核苷酸组(PU=11.45±1.17)及错义寡核苷酸组(PU=10.35±2.89)明显降低(免疫组化染色面积减少及强度降低)(P＜0.01);阿扑吗啡诱导的大鼠旋转反义寡核苷酸组较其余3组慢(P＜0.05);其余3组间差异无统计学意义(P＞0.05).反义寡核苷酸组黑质200×视野凋亡细胞个数(21.4±5.6)较其他3组(生理盐水组61.6±19.7,正义寡核苷酸组56.5±16.3,错义寡核苷酸组52.2±12.5)明显减少(P＜0.01).结论 反义寡核苷酸能有效阻断大鼠黑质多巴胺转运载体表达,阻断后大鼠对MPTP毒素反应性减弱.     

JNK信号通路对亚急性帕金森病MPTP模型小鼠黑质iNOS表达的影响

目的:研究JNK在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致小鼠帕金森病(PD)模型中对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的调控作用,探讨PD黑质多巴胺(DA)能神经元变性失活的可能机制.方法:采用神经毒素MPTP制备亚急性PD小鼠模型,健康雄性C57BL/6N小鼠随机分为模型组、JNK抑制剂组和对照组,采用行为学观察、免疫组织化学和免疫印迹法,观察模型小鼠行为学变化及中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)、 iNOS和磷酸化c-Jun(p-c-Jun)的表达变化;观察给予JNK通路特异性抑制剂SP600125对上述变化的影响.结果:与对照组相比,模型小鼠出现典型PD样症状.中脑黑质区TH阳性神经元下降约65%,中脑黑质TH表达水平显著降低约75%;黑质区iNOS和p-c-Jun阳性细胞明显增加,且p-c-Jun特异性表达于细胞核,中脑黑质iNOS与p-c-Jun表达水平明显升高.经SP600125处理后,模型小鼠PD样症状减轻,与对照组比较,TH阳性细胞数和TH表达水平仅下降约15%和25%,与模型组比较,黑质区iNOS与p-c-Jun阳性细胞减少,且p-c-Jun仅表达于胞质,中脑黑质iNOS与p-c-Jun表达水平明显下降.结论:JNK通路在MPTP诱导的亚急性PD小鼠黑质iNOS表达中可能起重要的调控作用;JNK通路特异性抑制剂SP600125可能对帕金森病小鼠具有一定的神经保护作用.     

MPTP诱导的帕金森病模型小鼠味觉偏好变化

目的:探讨1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)对帕金森病(PD)模型小鼠味觉的影响。方法:将雄性C57BL/6J小鼠分成对照组(control)和MPTP组,通过转棒、爬杆、嗅觉和悬尾实验检测小鼠行为,组织免疫荧光染色检测小鼠黑质致密部(SNpc)多巴胺(DA)能神经元。采用双瓶偏好实验检测小鼠对蔗糖、糖精、氯化钠及奎宁溶液的偏好率。利用real time RT-PCR检测小鼠舌上皮TAS1R1、TAS1R2和TAS1R3的mRNA表达的变化。结果:与control组相比,MPTP组小鼠转棒时间显著性降低,爬杆时间、找到隐藏食物的时间以及悬尾实验中静止时间均显著增加,免疫荧光结果显示MPTP处理可显著减少SNpc的DA能神经元数量。通过双瓶偏好实验发现MPTP可诱导小鼠对蔗糖、糖精、氯化钠的偏好率增加;但对苦味剂奎宁的偏好率没有影响。qRT-PCR分析发现MPTP抑制了小鼠舌上皮味觉受体TAS1R1和TAS1R2 mRNA的表达,而对TAS1R3 mRNA的表达没有影响。结论:MPTP诱导的PD模型小鼠对蔗糖、糖精、氯化钠的饮用偏好率增加,而对奎宁的偏好率没有影响,...     

低剂量MPTP致雌鼠黑质听觉P50诱发电位动态变化的实验研究

目的:功能学角度了解低剂量MPTP对雌鼠黑质听觉P50诱发电位的动态影响及帕金森病动物模型旋转行为的出现与黑质听觉P50诱发电位的关系。方法:45只大鼠随机分为三组:(1)正常对照组;(2)MPTP致帕金森病模型组;(3)生理盐水对照组。动态监测术后第7至14天MPTP型帕金森病动物模型黑质听觉P50诱发电位。结果:MPTP组的P50T/C值在第11~14天均较正常组及生理盐水溶剂对照组(I NT-Saline组)降低,且有统计学意义(P<0.01)。结论:低剂量MPTP可渐进性引起正常雌鼠黑质听觉P50诱发电位降低,且在帕金森病动物模型黑质听觉P50诱发电位降低的同时出现旋转行为。     

Three-Dimensional Electron Microscopy Reconstruction of Degenerative Dopaminergic Neurons Surrounded by Activated Microglia in Substantia Nigra

There is an urgent need to investigate the reason for the pathogenic mechanism of intractable central neurological diseases such as Parkinson’s disease. It has been reported that the activation of microglial cells is involved in the pathology of these diseases. However, due to technical difficulties, the relationship between degenerative neurons and activated microglial cells remains unclear. Therefore, we tried the improved analysis technique to clarify the spatial relationship between these cell types. We were able to establish an analysis technique that consists of a three-dimensional reconstruction method using serial immunoelectron micrographs after having identified both degenerative neurons and activated microglial cells under optical microscope. Using this technique, we have relatively easily been able to clarify the spatial relationship between degenerative neurons and activated microglial cells. Furthermore, using this technique it is possible to determine the neuronal degeneration process in detail, because it is able to identify structures implicated in degeneration, such as accumulation of lipofuscin in degenerated neuronal somata and phagocytotic structures of microglial cells. In future, this technical approach may be applied to elucidate the relationship between degenerative neurons and activated glial cells in human diseases.     

Neurosteroid Biosynthetic Pathway Changes in Substantia Nigra and Caudate Nucleus in Parkinson's Disease

There is emerging evidence from animal studies for a neuroprotective role of sex steroids in neurodegenerative diseases, but studies in human brain are lacking. We have carried out an extensive study of the neurosteroid biosynthetic pathways in substantia nigra (SN), caudate nucleus (CN) and putamen (PU) of 7 Parkinson''s disease (PD) patients and 7 matched controls. The mRNA levels of 37 genes including neurosteroid biosynthetic enzymes, hormone receptors and the neurosteroid‐modulated γ‐amino‐butyric acid ‐A (GABA‐A) receptor subunits were analyzed by quantitative PCR (qPCR). In the SN, we found downregulation of 5α‐reductase type 1 (5α‐R1), sulfotransferase 2B1 (SULT2B1) and some GABA‐A receptor subunits (α4, β1) while in the CN, upregulation of 3α‐hydroxysteroid dehydrogenase type 3 (3α‐HSD3) and α4 GABA‐A receptor subunit (22‐fold) was observed. No significant differences were found in the PU. These data imply an involvement of pregnane steroids and changes in GABAergic neurotransmission in the neurodegenerative process and suggest that neurosteroids may deserve further investigation as potential therapeutic agents in PD.     

多聚ADP-核糖聚合酶抑制剂对帕金森病小鼠相关脑区病理变化的影响

目的研究帕金森病(Park inson’s d isease,PD)小鼠黑质和纹状体多巴胺(dopam inergic,DA)能神经元数量和超微结构的变化及多聚ADP-核糖聚合酶(poly(ADP-ribose)polym erase,PARP)抑制剂PJ34的干预作用。方法采用1-甲基-4-苯-1,2,3,6-四氢吡啶(1-m ethyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyrid ine,MPTP)制备PD小鼠模型,并用PJ34进行干预,2h、24h、72h进行酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)免疫组化染色观察DA能神经元数量,透射电镜观察超微结构改变。结果与正常对照小鼠比较,PD小鼠黑质TH阳性神经元进行性减少,核膜皱缩,染色质凝聚成块并有边聚现象;纹状体TH阳性神经纤维稀疏,突触数量减少。与PD小鼠比较,PJ34干预组黑质TH阳性神经元明显增多,纹状体TH阳性神经纤维密度增加(P<0.01),细胞形态比模型组明显改善。结论PARP的活性改变在PD的发病过程中发挥重要作用,PARP抑制剂对DA能神经元有保护作用。     

益精养血方对帕金森病大鼠多巴胺能神经元Caspase-3表达的影响

目的研究益精养血方对帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠多巴胺能神经元Caspase-3表达的影响。方法将微量6-羟多巴胺(6-OHDA)立体定向注射于SD大鼠中脑右侧黑质以建立大鼠帕金森病模型,将造模成功的实验动物随机分为模型组、实验(中药)组,每组6只;另纳入6只正常大鼠为正常组。正常组和模型组大鼠生理盐水灌胃,实验组大鼠益精养血方灌胃,各30天。灌胃结束两周后进行行为学检测,免疫组织化学方法观测黑质酪氨酸羟化酶(TH)、Caspase-3的表达。结果实验组大鼠的旋转圈数比治疗前明显减少(P<0.05),实验组损毁侧与健侧黑质TH阳性细胞数量百分比较模型组显著提高(P<0.05),实验组损毁侧黑质Caspase-3表达的OD值比模型组显著降低(P<0.05)。结论益精养血方可使帕金森病大鼠多巴胺能神经元Caspase-3的表达降低,明显抑制神经细胞凋亡。     

DJ-1基因及其与帕金森病关系的研究进展

帕金森病是目前世界上最常见的神经系统退行性病变之一,DJ-1基因是一个与帕金森病相关的基因,其致病机制还不完全清楚.很多研究人员对DJ-1蛋白的功能进行了研究,目前已经发现DJ-1蛋白具有抗氧化、调节转录、参与能量代谢、抑制细胞凋亡等作用,本文总结了DJ-1基因的结构、突变形式、生物学作用及其与帕金森病发生的关系,以及DJ-1基因与其他导致帕金森病的基因之间的相互作用.对研究和了解帕金森病及其基因治疗具有重要意义.     

大鼠帕金森综合征模型脑的黑质、尾状核及中缝核的超微结构变化

目的　观察大鼠帕金森综合症模型脑的黑质、尾状核及中缝核神经元超微结构变化。方法　应用透射电镜。结果　上述核团神经元的超微结构均发生病理性改变 :神经细胞核膜皱缩 ,核膜凹凸不整 ,并有局部断裂 ;线粒体变性 ,基质浓度降低及空泡化 ;粗面内质网和高尔基复合体囊腔扩张变性 ;大量初级溶酶体及脂褐素集聚 ;出现了髓样体和多泡体等变性结构。结论　黑质、尾状核及中缝核神经元超微结构的病理性变化从而导致纹状体 黑质 纹状体锥体外路系环路功能障碍 ,是引发帕金森氏综合症的结构基础。     

Low-Frequency MEG Activity and MRI Evaluation in Parkinson's Disease

Summary: Background: Low - frequency activity has been reported in Parkinson disease (PD). We investigated the magnetoencephalographic (MEG) recordings from PD patients and healthy volunteers in the frequency domain. Methods: The MEG recordings were carried out in a magnetically shielded room with a whole-head 122-channel gradiometer. Nine patients suffering from PD and 9 age and gender matched healthy subjects were included in the study. MRI with T1-w and T2-w images, was available in patients' records. Results: Frequency analysis may be usefully combined in the analysis of data sets, which contain oscillatory components. Prominent low frequencies can be seen in the spectrum obtained from the PD patients whereas in the control group the frequency range was 6Hz in the majority of channels. MRI did not disclose specific findings in any case. Conclusions: It is suggested that the MEG could be a complementary method in the diagnostic evaluation of PD using spatial distribution of the raw data in the frequency domain.