全反式维甲酸对睾丸卵黄囊瘤细胞VEGF表达的抑制作用

目的研究全反式维甲酸(ATRA)对睾丸卵黄囊瘤细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的抑制作用。方法在体外细胞培养的基础上,采用MTT比色法测定不同浓度ATRA对睾丸卵黄囊瘤细胞增殖影响,半定量RT-PCR方法检测VEGF mRNA的表达水平,Western Blot法检测VEGF蛋白表达水平。结果 ATRA能抑制肿瘤细胞增殖,RT-PCR结果显示实验组卵黄囊瘤细胞的VEGF mRNA表达水平下调,Western Blot显示实验组卵黄囊瘤细胞的VEGF蛋白表达水平降低,且两者下调作用均呈较明显的时间-剂量依赖性。结论全反式维甲酸可以抑制睾丸卵黄囊瘤细胞的增殖,抑制肿瘤增殖机制可能与下调VEGF的表达有关。     

全反式维甲酸对宫颈癌细胞的生物学作用

目的:探讨全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)宫颈癌HeLa细胞增殖与分化的影响及其作用途径。方法:用MTT法检测ATRA作用下HeLa细胞增殖,电镜下观察细胞超微结构,集落形成实验观察集落形成能力,流式细胞术检测细胞周期,半定量RT-PCR检测c-myc mRNA水平变化。结果:ATRA能抑制HeLa细胞增殖,诱导分化,降低c-myc mRNA的水平。结论:ATRA对宫颈癌HeLa细胞的生物学作用是多方面的。     

ATRA在卵巢癌细胞HO8910增殖中的作用

目的:探讨全反式维甲酸在人卵巢癌细胞生长和增殖中的作用机制.方法:选用人卵巢癌细胞株HO8910在体外进行培养,培养时添加不同浓度的全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA),作用24 h、48 h、72 h后,采用MTT比色法测定细胞生长抑制率;采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)进行细胞周期分析;采用RT-PCR法检测维甲酸α受体(retinoic acid receptorα,RARα)mRNA的表达.结果:不同浓度的全反式维甲酸对HO8910细胞生长均起到抑制作用(P＜0.05),并呈浓度和时间依赖关系;能够增加G1期细胞比例,同时降低S、G2/M期细胞比例(P＜0.05),细胞增殖指数PI(P＜0.05)降低;能够上调维甲酸α受体mRNA的表达(P＜0.05),从而抑制卵巢癌细胞增殖.结论:说明全反式维甲酸对卵巢癌细胞HO8910的增殖具有显著的抑制作用,其机制可能是通过上调维甲酸α受体mRNA的表达来实现的.     

全反式维甲酸诱导中脑神经干细胞向多巴胺能神经元分化的作用

目的：观察全反式维甲酸（all-trans retinoic acid,ATRA）体外对大鼠中脑神经干细胞（neural stem cells,NSCs）的诱导分化作用及其可能的分子机制。方法：分离培养孕14～15 d大鼠中脑NSCs,使用1.0μmol/L ATRA诱导1、3、5和7 d,以免疫组织化学染色观察ATRA对NSCs分化为多巴胺能神经元的影响;RT-PCR分析维甲酸（retiadic acid,RA）各受体表达情况。结果：ATRA诱导后多巴胺能神经元特异性酪氨酸羟化酶（TH）染色呈阳性,细胞有多个细长突起,与对照组比较,诱导7 d后多巴胺神经元特异性TH染色阳性细胞率均明显升高（P〈0.01）;各诱导组RA受体βmRNA的表达量均明显升高（P〈0.01）,而且存在时间依赖性。结论：ATRA能显著提高NSCs分化为多巴胺能神经元的比例,同时发现细胞维甲酸A受体（RAR）βmRNA表达增加,RARβ激活可能促进NSCs向多巴胺神经元方向的分化。     

全反式维甲酸诱导K562细胞分化过程中线粒体铁蛋白表达的研究

目的 研究K562白血病细胞在全反式维甲酸(ATRA)诱导分化过程中线粒体铁蛋白(MtF)、运铁蛋白受体1(TfR1)和铁蛋白(Fn)mRNA表达水平的变化情况,探讨MtF在白血病细胞增殖和铁代谢方面的作用.方法 K562细胞加入ATRA(终浓度1 μmol/L)中诱导培养,分别于第1、3、5 d收集细胞,分别进行:①瑞士染色观察各时间点的细胞形态;流式细胞学检测细胞表面分化抗原CD13的表达;②Trizol法提取各时间点细胞的RNA,通过半定量RT-PCR方法 检测各时点MtF、TfR1和Fn基因的表达水平.同时设未用ATRA诱导培养的K562细胞为对照组.结果 1 μmol/L的ATRA可诱导K562细胞向粒系细胞分化,诱导培养第5 d,细胞表面CD13的表达水平增加,诱导分化率为21.2%,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).诱导分化前K562细胞即有MtF mRNA表达,但随细胞诱导时间的延长,MtF和TfR1 mRNA表达呈下降趋势,诱导分化第5 d的表达水平分别为诱导分化前的86.5%和79.2%;而Fn mRNA的表达呈上调趋势,诱导分化第5 d表达水平为诱导分化前的1.21倍.结论 ATRA诱导K562细胞向粒系细胞分化过程中,MtF和TfR1 mRNA表达下调,而Fn mRNA表达上调,这种协调变化有助于降低细胞通过TfR1介导的铁摄取,从而抑制或影响细胞增殖潜能.     

维甲酸受体β功能及其与肿瘤的相关性

维甲酸受体（retinoid acid receptors,RARs）是存在于多种组织细胞核内的一类受体蛋白质,它不仅参与细胞的分化和生长发育,而且与维甲酸（retinoic acid,RA）诱导肿瘤细胞的分化功能密切相关。维甲酸受体β（retinoid acid receptorβ,RAR-β）作为维甲酸中可诱导的主要亚型,已成为近年来学者们研究的热点。研究发现,大部分肿瘤细胞都存在维甲酸受体表达和（或）功能的改变,其中RAR-β基因的丢失或表达异常与癌发生关系密切。本文就维甲酸受体β（β,RAR-β）亚型的功能、分子机制及其在肿瘤治疗中的应用进行综述。     

全反式维甲酸对C6胶质瘤细胞增殖分化的影响

目的:研究全反式维甲酸对C6胶质瘤细胞增殖和分化的影响.方法:用5 mg/L全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)诱导C6胶质瘤细胞,通过3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)实验绘制细胞生长曲线以考察ATRA对细胞增殖的抑制作用;通过流式细胞仪、光镜、透射电镜和免疫组织化学染色鉴定细胞的分化状况.结果:C6胶质瘤细胞经全反式维甲酸诱导后,细胞增殖受到明显抑制,并且密度明显减少(P<0.01).细胞周期受阻,G0/G1期延长,S期细胞比例明显减少(P<0.01).光镜观察到诱导前的C6胶质瘤细胞呈正常的成纤维细胞形态,而诱导后的C6胶质瘤细胞变细长,中间呈圆形或卵圆形,两端形成长尖突起.流式细胞仪的凋亡率检测显示,未见明显的凋亡;透射电镜观察显示,细胞有早期凋亡改变,且胞浆内空泡增多,线粒体和内质网丰富,细胞结构基本趋向正常.C6胶质纤维酸性蛋白表达明显增强.结论:全反式维甲酸能抑制胶质瘤细胞的增殖,并能诱导C6细胞分化.     

全反式维甲酸体外诱导神经母细胞瘤细胞分化的实验研究

目的体外观察全反式维甲酸(all trans retinoic acid,ATRA)对神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞系SH-SY5Y(SY5Y)细胞生长及分化的影响及其可能的分子机制。方法用RT-PCR方法检测ATRA作用前后SY5Y细胞TrKA mRNA表达情况;采用台盼蓝拒染法检测ATRA对SY5Y细胞的体外抗增殖作用;用倒置相差显微镜观察细胞形态变化。结果ATRA作用7d后SY5Y细胞TrKA mRNA表达增高;ATRA对SY5Y细胞有抗增殖作用和诱导细胞分化作用,并呈一定时间和剂量依赖关系。结论ATRA对SY5Y细胞有生长抑制及诱导分化作用,该作用与上调SY5Y细胞TrKA mRNA表达水平有关。     

全反式维甲酸对肝癌HepG2细胞chemerin基因表达的调控

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对chemerin基因表达的调控并初探其调控机制。方法:培养HepG2细胞,加入全反式维甲酸,观察其对chemerin表达的影响。采用实时PCR检测chemerin在mRNA水平的表达变化;蛋白质印迹法检测chemerin在蛋白水平的表达变化。通过构建含不同长度chemerin启动子区域的报告质粒,用检测荧光素酶活性的方法,研究ATRA与维甲酸受体(RAR)β结合对chemerin启动子区域的影响。结果:ATRA可呈量效关系诱导HepG2细胞chemerin的mRNA及蛋白水平的表达升高,在10μmol/L时作用最强(P<0.05);呈时效关系诱导HepG2细胞chemerin的蛋白水平表达升高,在作用36 h时诱导作用最强(P<0.05);去除chemerin启动子-258bp/+121bp区后,ATRA对chemerin启动子的转录激活作用骤然下降,提示ATRA-RARβ与chemerin启动子的-258bp/-90bp区域结合。结论:ATRA可上调HepG2细胞chemerin的表达,RARβ介导ATRA对chemerin启动子区的转录激活作用。     

全反式维甲酸对SHI-1细胞株糖基转移酶表达的影响

目的：探讨全反式维甲酸对SHI-1细胞株中糖基转移酶表达的影响。方法：采用半定量RT-PCR和RealTime PCR方法,比较在不同浓度ATRA作用下,SHI-1细胞中不同糖基转移酶家族（多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族、133N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶家族和O-连接N-乙酰氨基葡萄糖转移酶家族）的表达情况。结果：在SHI-1细胞株中ppGalNAcT1、T2、T3、T4,133GnT1、β3GnT5,O-GnT有不同程度的表达,加入全反式维甲酸后133GnT5表达量下降,PP-GalNAcT2、T4、β3GnT1、O-GnT表达量升高。结论：加入诱导分化剂全反式维甲酸后,SHI-1细胞中的糖基化作用升高。     

全反式维甲酸诱导对乳腺癌细胞放射敏感性影响的研究

目的 探讨不同浓度全反式维甲酸(all-trans-retinoicacid,ATRA)分化诱导对乳腺癌细胞的放射敏感性影响.方法 MTT法检测细胞体外增殖能力,电镜形态学的观察,流式细胞仪进行细胞周期分析.结果 全反式维甲酸分化诱导乳腺癌A431细胞株,细胞增殖能力下降,凋亡增加,更多的细胞被阻止于G1/G0期,放射敏感性增强.结论 全反式维甲酸分化诱导能增强乳腺癌A431细胞株放射治疗敏感性,并与浓度成量效关系.     

维甲酸调变早幼粒白血病细胞株NB4中G-CSF及其受体表达

目的进一步研究G-CSF在维甲酸致高白细胞症中的作用.方法用RT-PCR、Northemblotting方法检测NB4细胞经全反式维甲酸(ATRA)作用后G-CSF mRNA表达的变化,同时用ELISA方法检测细胞培养上清液中G-CSF蛋白水平的变化;采用流式细胞技术检测NB4细胞经ATRA作用后G-CSF受体蛋白表达的变化.结果ATRA可从基因水平上调NB4细胞中G-CSF表达,并可增加NB4细胞表面G-CSF受体的表达,G-CSF受体表达增加出现的时间虽然稍晚于G-CSF表达增加出现的时间,但仍然在较早期阶段,此时,细胞形态学和NBT实验均证实NB4细胞处于部分分化阶段.结论在ATRA治疗APL过程中,G-CSF及其受体表达增加可能协同参与了高白细胞症的发生.     

维甲酸对宫颈癌耐药细胞株分化及凋亡影响的研究

目的研究全方式维甲酸（ATRA）对宫颈癌耐药细胞株HeLa/MMC诱导分化及凋亡的影响。方法采用MTT法检测HeLa/MMC细胞生长速度;集落形成实验观察ATRA对HeLa/MMC细胞集落形成能力的影响;在透射电镜下观察ATRA对HeLa/MMC超微结构的影响;TUNEL法检测HeLa/MMC细胞实验组与对照组细胞凋亡率;半定量RT-PCR检测凋亡相关基因bax的表达。结果通过实验观察到ATRA联合MMC能明显抑制HeLa/MMC细胞的增殖;ATRA作用后的HeLa/MMC细胞出现成熟细胞的特征、细胞集落形成能力降低;ATRA能促进细胞凋亡,上调HeLa/MMC细胞bax基因的表达。结论表明ATRA能有效的诱导宫颈癌耐药细胞株HeLa/MMC分化,并促进其凋亡。诱导凋亡相关基因bax基因的表达上调是ATRA作用的分子机制之一。     

维甲酸对宫颈癌细胞化疗增敏作用的实验研究

目的研究全反式维甲酸（ATRA）对宫颈癌耐丝裂霉素细胞HeLa/MMC增殖及药物敏感性的影响,并探讨其机制。方法观察ATRA作用下细胞HeLa/MMC增殖,MTT法观察ATRA对HeLa/MMC药物敏感性的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率,半定量RT-PCR检测凋亡相关基因bax的表达。结果 ATRA对HeLa/MMC增殖有抑制作用;ATRA能提高MMC对HeLa/MMC细胞的杀伤作用,ATRA能促进细胞凋亡,上调HeLa/MMC细胞bax基因的表达。结论表明ATRA的化疗增敏作用与促进HeLa/MMC细胞凋亡,上调HeLa/MMC细胞bax基因的表达有关。     

维甲酸对甲状腺鳞癌细胞株SW579细胞增殖的影响

目的 观察全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)对甲状腺鳞癌细胞株SW579诱导分化作用中细胞增殖的影响.方法 以终浓度为10-7、5×10-7、10-6、5×10-6、10-5 mol/L的全反式维甲酸作用SW579细胞株,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;采用MTT比色法测定细胞存活率;流式细胞仪检测细胞周期.结果 全反式维甲酸能使细胞趋向良性分化,抑制了肿瘤细胞增殖,使细胞滞留在S期.结论 全反式维甲酸对甲状腺鳞癌细胞株SW579有剂量依赖性的增殖抑制作用,并且在低浓度时(10-7、5×10-7、10-6 mol/L)可能对细胞具有诱导分化作用.     

全反式维甲酸诱导HL60细胞分化前后蛋白表达差异分析

目的:建立全反式维甲酸(All trans-retinoic acid,ATRA)诱导HL60细胞向粒系分化的模型,研究采用改良双向电泳条件对分化前后的细胞全蛋白进行分离分析,寻找差异表达蛋白.方法:采用全反式维甲酸对HL60细胞进行诱导分化.通过MTT、流式细胞技术分析细胞增殖情况和CD11b细胞表面分化抗原的表达,选择最适的药物浓度和诱导时间;再通过细胞化学染色对分化结果进行验证,构建分化模型.采用改良双向电泳分离技术对细胞全蛋白进行分离,运用PDQuest软件分析HL60细胞分化前后蛋白表达差异,并用基质辅助激光解吸-飞行时间质谱(MALDI-TOF)对差异蛋白点进行分析.结果:ATRA明显抑制HL60细胞增殖,并随药物浓度的增加,抑制效果也越显著;2 μmol/L的ATRA连续作用HL60细胞5 d即有90%以上的细胞有粒系分化标志抗原CD11b的表达.细胞化学染色结果亦表明诱导后的HL60细胞向粒系分化.将分化前后的HL60细胞全蛋白经过改良双向电泳技术分离,PDQuest软件比对,MAIDI-TOF分析,发现有25个蛋白点仅在未分化凝胶谱中找到,有15个蛋白点仅在分化细胞蛋白表达谱中找到.其中有的是癌基因表达蛋白,有的是抑癌基因表达蛋白,还有的则参与凋亡过程等.结论:在选定的药物浓度和作用时间下,ATRA可以诱导HL60细胞向粒系分化.改良双向电泳技术对药物作用前后细胞蛋白的分离,可发现不同于传统双向电泳分离所得的蛋白结果.     

全反式维甲酸诱导NB4细胞分化过程中泛素-蛋白酶体系统的表达变化

目的筛选在全反式维甲酸(ATRA)诱导NB4细胞分化过程中,参与早幼粒细胞白血病-维甲酸α受体(PML-RARα)融合蛋白降解的泛素-蛋白酶体系统相关基因。方法采用基因芯片技术检测泛素-蛋白酶体系统相关基因在ATRA诱导NB4细胞分化过程中的表达情况,并运用实时荧光定量RT-PCR和Western Blot方法在基因和蛋白水平对基因芯片部分结果进行验证,同时对这些基因在ATRA诱导急性早幼粒细胞性白血病(APL)初诊患者原代细胞分化时的表达情况进行检测。结果在ATRA诱导NB4细胞向粒系分化的过程中,发现许多泛素-蛋白酶体系统相关的基因主要在ATRA作用12h后表达上调,其中PSMB8和PSMB9这两个基因的芯片结果通过实时荧光定量RT-PCR和Western Blot得到验证。同时在ATRA作用于APL初诊患者原代细胞后,这些基因的变化情况也与作用于NB4细胞相似。结论在ATRA诱导APL细胞分化过程中筛选出一些受ATRA调控的参与PML-RARα融合蛋白降解的泛素-蛋白酶体系统分子。     

维甲酸对宫颈癌细胞耐药株增殖及药物敏感性的影响

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对宫颈癌耐药株HeLa/MMC的增殖及药物敏感性的影响及其作用的分子机制。方法:观察ATRA作用下HeLa/MMC细胞的增殖,MTT法观察ATRA对HeLa/MMC药物敏感性的影响,半定量RT-PCR检测mdr1基因的表达情况。结果:①ATRA对HeLa/MMC细胞的增殖有抑制作用,这一作用为非细胞毒抑制作用。②ATRA能提高MMC对HeLa/MMC细胞的杀伤作用,并呈剂量依赖性。③半定量RT-PCR结果显示,ATRA上调了HeLa/MMC细胞mdr1基因的表达。结论:表明ATRA能抑制HeLa/MMC的增殖,提高HeLa/MMC对MMC的敏感性,但这种作用与mdr1基因表达无关。     

全反式维甲酸对人胰腺癌细胞生长及Survivin基因表达的影响

目的:观察全反式维甲酸(ATRA)对人胰腺癌细胞株PC-3生长的抑制作用以及细胞株PC-3 Survivin基因表达的变化。方法:应用MTT比色法检测细胞增殖抑制率,RT-PCR法测定Survivin基因表达,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:经过ATRA作用后,PC-3细胞增殖受到抑制,呈时间和剂量依赖性。凋亡比例明显增加,Survivin mRNA的表达随着作用时间的延长而呈逐渐下降趋势。结论:ATRA对人胰腺癌细胞株PC-3的生长有抑制作用,同时可诱导其凋亡,提示其可能与Survivin基因表达下调有关。