同型半胱氨酸对大鼠主动脉血管平滑肌细胞表型转化的影响

目的： 验证同型半胱氨酸（Hcy）是否具有促进大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）去分化的作用。 方法： SD大鼠主动脉VSMCs原代细胞培养鉴定,取4～7代细胞用于实验。VSMCs分为对照组、100 μmol/L Hcy干预组、500 μmol/L Hcy干预组、1 000 μmol/L Hcy干预组共4组。MTT法测各组VSMCs的增殖情况;划痕法和Transwell法检测各组VSMCs的迁移情况;ICC法检测各组VSMCs的细胞形态;Western blot法检测各组VSMCs中SM-actin、SM-MHC、Calponin、骨桥蛋白（OPN）的表达情况。 结果： 相比于对照组,Hcy组VSMCs增殖迁移增加;细胞形态变圆;SM-MCH和Calponin表达减少（ P＜0.01〉;OPN表达增加（ P＜0.01）,Hcy的这一作用与浓度呈正相关。 结论：Hcy可以促进VSMCs去分化,这可能是其促进VSMCs增殖和迁移的机制之一。     

Let-7d通过靶向调控Rhotekin基因抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨let-7d在骨肉瘤组织中的表达,并研究let-7d及其靶基因对人骨肉瘤细胞U2OS增殖、迁移和侵袭的影响。方法 收集2010年至2015年于我科行手术切除的25例骨肉瘤患者的肿瘤组织和癌旁组织（距肿瘤组织边缘>5 cm）,并用qPCR检测let-7d的表达情况。构建稳定过表达let-7d的U2OS细胞,用qPCR验证let-7d过表达情况,以转染pCDH空病毒载体的U2OS细胞作为对照组细胞,并分别采用CCK-8实验、划痕实验和Transwell实验检测过表达let-7d对U2OS细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。通过微RNA靶基因预测软件和双荧光素酶实验明确let-7d的下游靶基因,检测过表达let-7d的U2OS细胞中靶基因的表达水平,并通过小干扰RNA技术研究抑制靶基因表达对U2OS细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果 骨肉瘤组织中let-7d表达水平低于癌旁组织（P<0.01）。与人成骨细胞hFOB1.19相比,U2OS细胞中let-7d表达水平下调（P<0.01）。与对照组相比,过表达let-7d能抑制U2OS细胞的增殖、迁移和侵袭（P均<0.05）。微RNA靶基因预测软件和双荧光素酶实验结果显示,Rhotekin（RTKN）基因是let-7d的直接靶基因,且过表达let-7d导致U2OS细胞中RTKN mRNA表达水平较对照组降低（P<0.01）。干扰RTKN表达能抑制U2OS细胞增殖、迁移和侵袭（P均<0.05）。结论 Let-7d通过靶向调控RTKN抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,可作为骨肉瘤治疗一个新的靶点。     

lncRNA MRAK048635_P1对血管平滑肌细胞miRNA的调控作用

目的 旨在预测VSMC细胞中MRAK048635_P1参与调控的miRNAs并对其靶基因进行系统的生物学分析。方法 利用特异性siRNA敲减来自正常大鼠胸主动脉VSMC中的MRAK048635_P1基因。整体层次聚类分析用于判断各组中差异表达的miRNAs。应用miRanda、PITA和RNAhybrid预测差异表达的miRNAs的靶基因并取其交集作为分析的基因集合,分别进行gene ontology (GO)中的细胞组分 (cellular component, CC)、分子功能 (molecular function, MF)和生物学过程(biological process,BP)分析。最后,对差异表达的miRNAs的靶基因进行kyoto encyclopedia of genes and genomes (KEGG)生物通路富集分析。结果 siRNA介导VSMC细胞MRAK048635_P1下调后,共有12个差异表达的miRNAs,其中上调和下调的miRNAs个数分别为5和7。差异表达的miRNAs的靶基因共5066个。GO富集分析发现其中的302个基因主要富集于VSMC分化 (如G protein-coupled estrogen receptor 1,Gper1),血管内皮迁移的负调控、心血管系统发育、信号受体活性、核染色质和蛋白结合以及免疫应答等。KEGG富集发现这些靶基因显著富集于轴突导向、昼夜节律、N-糖基生物合成、内吞蛋白加工、内质网矿物吸收、鞘脂代谢和核糖体生物合成等相关通路 (P＜0.05)。结论 在VSMC中,MRAK048635_P1可能通过与多种miRNAs相互作用而参与相关靶基因的调控,对于MRAK048635_P1的深入研究有助于揭示VSMC在高血压病中的作用机制。     

miR-216b-5p对喉癌TU686细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制

目的：探讨miR-216b-5p对喉鳞状细胞癌(LSCC) TU686细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响,分析其在喉癌细胞中的靶基因及其可能的作用机制。方法：TU686细胞分为对照组和miR-216b-5p组,对照组细胞通过慢病毒感染无义序列,miR-216b-5p组细胞通过慢病毒感染过表达miR-216b-5p。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组细胞中miR-216b-5p表达水平,克隆形成实验检测2组细胞克隆形成率,细胞划痕实验检测2组细胞划痕愈合率,Transwell实验检测2组细胞中侵袭细胞数,流式细胞术检测2组细胞凋亡率。通过TargetScan网站预测miR-216b-5p的潜在靶基因,采用RT-qPCR法检测靶基因mRNA表达水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-216b-5p与靶基因间的靶向关系。结果：慢病毒感染后,与对照组比较,miR-216b-5p组细胞中miR-216b-5p表达水平明显升高(P<0.01)。与对照组比较,miR-216b-5p组细胞克隆形成率和划痕愈合率明显降低(P<0.01),侵袭细胞数明显减少(P<0.01...     

沉默FASN基因对肝母细胞瘤HepG2细胞的脂质代谢及增殖、迁移和凋亡的影响

目的 研究FASN基因沉默对肝母细胞瘤HepG2细胞脂质代谢及生物学行为的影响。方法 以脂质体包裹siRNA的方法沉默FASN基因,实验分为Control组、NC-siRNA组和FASN-siRNA组,FASN-siRNA组转染75 nmol/L的FASN-siRNA片段,NC-siRNA组转染等剂量的NC-siRNA片段,Control组只加入等体积的转染试剂。通过实时荧光定量PCR和Western blot法检测FASN基因和蛋白水平的相对表达;通过酶联免疫吸附法检测HepG2细胞甘油三酯水平;通过油红O染色法检测细胞内脂滴数目;利用CCK-8实验检测HepG2细胞增殖活性的改变;通过annexinV-FITC/PI双染色法检测HepG2细胞凋亡情况;采用划痕愈合实验及transwell实验检测HepG2细胞迁移能力的改变。结果 FASN-siRNA组的FASN基因表达、蛋白表达低于NC-siRNA组（P<0.001）。油红O染色显示,FASN-siRNA组细胞内脂滴较NC-siRNA组减少（P<0.001）、甘油三酯水平降低（P< 0.01）;CCK-8实验、annexinV-FITC/PI双染实验及划痕愈合实验结果显示,转染48、72、96 h后,FASN-siRNA组HepG2细胞增殖被显著抑制,FASN-siRNA组细胞总凋亡率与NC-siRNA组相比增加、FASN-siRNA组发生迁移的HepG2细胞数量低于NC-siRNA组（P<0.001）。结论 沉默FASN基因可抑制肝母细胞瘤HepG2细胞的增殖及迁移,并诱导HepG2细胞凋亡,该作用可能与FASN基因抑制后HepG2细胞内脂质合成降低有关。     

缺氧状态下miR-145对兔平滑肌细胞生物学行为的影响

目的:探讨缺氧条件下miR-145对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、迁移及凋亡的影响及可能作用机制。方法:采用组织贴壁方法培养获得兔原代VSMC。用脂质体转染法将miR-145mimics转入VSMC细胞。实验设置为常氧条件下(21%O_2,5%CO_2,74%N2)空白对照组、miR-NC组、miR-145mimic组、miR-145inhibitor组;缺氧条件下(3%O_2,5%CO_2,92%N_2)空白对照组,miR-NC组,miR-145mimic组,miR-145inhibitor组。应用real time PCR检测miR-145在各组细胞表达水平。采用EdU染色检测VSMC增殖能力,Transwell实验检测VSMC细胞迁移能力,流式细胞仪检测细胞凋亡。采用targetScan,miRanda和PicTar靶基因预测软件和DAVID数据库对miR-145进行生物信息学分析,预测可能的靶基因。结果:在常氧与缺氧条件下,与miR-NC组相比,转染miR-145mimic组增殖率和迁移率明显减少,细胞凋亡率增高(P<0.05);转染miR-145inhibitor组增殖率和迁移率明显增加,细胞凋亡率下降(P<0.05)。同时与常氧条件相比,缺氧组增殖率和迁移率明显增加以及细胞凋亡率下降(P<0.05)。生物信息学分析提示miR-145靶基因的通路信号富集主要为促分裂素原活化蛋白激酶1(MAPK1),细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6),钙/钙调素依赖蛋白激酶2D(Ca2+/CAMK2D)信号通路等。结论:缺氧条件下,在VSMC细胞中miR-145低表达、miR-145过表达可以有效的抑制VSMC细胞增殖、迁移及促进该细胞凋亡。     

雷公藤甲素通过Wnt/β-catenin通路抑制胶质瘤细胞增殖的机制研究

目的 探究雷公藤甲素（triptolide,TPL）对胶质瘤细胞系（U251细胞）增殖的影响,并探索其潜在分子机制。方法 取胶质瘤细胞分为空白对照组、TPL组及TPL+HLY78(Wnt活化剂)组。除空白对照组不做干预外,TPL组以100 nM TPL处理24 h,TPL+HLY78组以100 nM TPL处理24 h后,10μM HLY78处理30 min。分别采用CCK-8、细胞划痕、Transwell方法分别检测U251细胞增殖、迁移和侵袭能力;Western blot检测上皮-间质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）相关蛋白E-钙粘蛋白（E-cadherin）、N-钙粘蛋白（N-cadherin）表达以及Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达;免疫荧光检测β-连环蛋白（β-catenin）的表达。结果 与空白对照组相比,TPL组细胞增殖、侵袭和迁移能力均显著降低（P<0.01）;E-cadherin蛋白表达显著升高（P<0.01）,N-cadherin蛋白表达显著降低（P<0.01）;细胞周期蛋白D1(Reco...     

DTX2通过Notch2/Akt轴促进结直肠癌细胞的迁移和侵袭

目的 探讨DTX2对结直肠癌（CRC）细胞迁移侵袭的影响及作用机制。方法 利用基因工具干预CRC细胞,分为敲低组（DTX2-shRNA）、敲低空载组（neg-shRNA）、未转染组（con）、过表达空载组（pcDNA）及过表达组（pcDNA-DTX2）,利用qRTPCR及Western blotting法检测转染效率。采用划痕和Transwell侵袭实验检测DTX2基因的表达改变对CRC细胞迁移侵袭能力的影响,并通过Western blotting检测各组中Notch2、NICD、Akt、p-AKT、MMP-2及MMP-9蛋白的表达水平。CRC细胞共转染pcDNA-DTX2和Notch2 siRNA,检测回复实验对CRC细胞迁移侵袭能力的影响。结果 CRC细胞中DTX2 mRNA和蛋白表达量,敲低组中明显降低（P<0.01）,过表达组中明显升高（P<0.01）。划痕和Transwell侵袭实验提示,CRC细胞迁移侵袭能力,DTX2 shRNA显著低于con和neg-shRNA(P<0.01);pcDNA-DTX2显著高于con和pcDNA(P<0.01)。Wes...     

miR-30-5p在食管癌中的表达及对食管癌细胞增殖和迁移的影响

目的：探讨miR-30-5p对食管癌细胞增殖和迁移的影响及分子机制。方法：选取开封市中心医院心胸血管外科和河南省人民医院胸外科2014年6月到2019年6月收集的食管癌和癌旁组织样本各120例,采用荧光定量PCR测定miR-30-5p mRNA表达水平。采用慢病毒建立食管癌细胞系EC109中建立miR-30-5p过表达稳定细胞系（miR-30-5p组）和对照细胞系（miR-control组）。采用EdU染色分析2组细胞的增殖情况;采用Transwell分析2组细胞的迁移情况;采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-30-5p的靶基因;在miR-30-5p组和miR-control组过表达靶基因对细胞增殖和迁移的影响。结果：与癌旁组织比较,食管癌组织中miR-30-5p mRNA表达水平明显上调,差异有统计学意义（P<0.05）。与miR-control组比较,miR-30-5p组细胞增殖能力和细胞迁移能力明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）。生物信息学和双荧光素酶报告基因显示BCL-9是miR-30-5p的靶基因。在miR-control组细胞中过表达BCL-9,可显著提高细胞的增殖和迁移,差异有统计学意义（P<0.05）。而miR-30-5p组细胞过表达BCL-9,细胞增殖和迁移差异无统计学意义（P<0.05）。结论：miR-30-5p在食管癌中呈低表达,可导致靶基因BCL-9表达上调,进而促进食管癌细胞的增殖和迁移。     

miR-145-5p靶向双特异性磷酸酶6对人子宫内膜癌增殖、迁移、侵袭与凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-145-5p（miR-145-5p）靶向双特异性磷酸酶6（DUSP6）对于人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、迁移、侵袭与凋亡能力的影响。方法 人子宫内膜癌Ishikawa细胞分为A组（未转染组）、B组（mimic NC组）、C组（mimic组）、D组 （inhibitor NC组）、E组（inhibitor组）,采用脂质体（Lipo 2000）细胞转染法转染。利用RT-PCR技术验证miR-145-5p的表达;过表达或抑制表达miR-145-5p对Ishikawa细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡影响将运用MTT、伤口愈合、Transwell及凋亡实验检测;运用生物信息学方法预测miR-145-5p的潜在靶基因;运用RT-PCR及Western Blot技术检测细胞转染后下游靶基因DUSP6mRNA及蛋白的表达水平。结果 转染后48、72、96 h,C组比B组细胞增殖能力下降,E组比D组细胞的增殖能力增强,差异有统计学意义（P<0.05）。转染后24、48 h,C组比B组细胞迁移能力降低,E组比D组细胞迁移能力增强（P<0.05）。转染48 h后,C组比B组侵袭能力下降,E组比D组侵袭能力增强,差异有统计学意义（P<0.05）。转染48 h后,A组、B组、C组、D组、E组凋亡率分别为（0.66±0.05）%、（0.60±0.03）%、（17.74±1.02）%、（0.72±0.04）%、（0.31±0.02）%,差异有统计学意义（P<0.05）。经生物信息学在线软件预测DUSP6是miR-145-5p的潜在靶基因。转染48 h后,DUSP6 mRNA在A组、B组、C组、D组、E组中的相对表达水平分别为1.00±0.09、1.09±0.08、0.47±0.04、1.03±0.05、4.62±0.26,差异有统计学意义（P<0.05）。其蛋白的相对表达量为0.29± 0.03、0.28±0.04、0.16±0.03、0.32±0.05、0.74±0.05,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 miR-145-5p过表达后能够抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移、侵袭并且促进癌细胞凋亡,其机制可能是通过负向调节DUSP6的表达而实现。     

miR-136对胶质瘤U251细胞生物学功能的影响

目的: 初步探讨miR 136对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法: 选取胶质瘤U251细胞系,分别转染miR 136 mimic(模拟物组)和miR 136模拟物阴性对照(对照组),采用qRT PCR法检测转染效率,观察2组细胞miR 136表达差异;显微镜下观察转染24 h后细胞密度,并拍照记录;CCK 8法检测转染后细胞增殖活性;Transwell和划痕实验分别检测转染后细胞侵袭及迁移能力;检索miRnada生物信息学数据库,预测并分析miR 136下游靶基因;qRT PCR和蛋白质印迹法分别检测细胞中FZD4 mRNA和FZD4蛋白的表达。结果： 与对照组相比,模拟物组细胞miR 136表达水平明显升高(P<0.05);转染24 h之后,模拟物组细胞密度低于对照组;CCK 8检测显示模拟物组细胞增殖活性较对照组明显降低(P<0.05);Transwell和划痕实验显示模拟物组细胞侵袭和迁移能力较对照组降低;miRnada数据库分析显示FZD4是miR 136的下游靶基因;与对照组相比,模拟物组FZD4 mRNA和FZD4蛋白表达水平均明显降低(P均<0.05)。 结论： miR 136可能通过靶向调控FZD4基因的表达抑制胶质瘤U251细胞的增殖、侵袭和转移。     

活血益气方对miR-484过表达脐静脉内皮细胞增殖、迁移和成管能力的影响

目的：探讨活血益气方通过调节miR-484靶向VEGF调节血管新生的可能分子机制。方法：制备miR-484过表达HUVEC细胞模型，采用活血益气方药物冻干粉干预，CCK-8法、细胞划痕实验、Matrigel体外三维成形实验分别检测活血益气方对HUVEC增殖、迁移和管状成形能力的影响，实时荧光定量PCR法检测活血益气方对VEGFA mRNA表达的影响。结果：与对照组相比，miR-484过表达模型组细胞增殖能力减弱（P<0.01），迁移面积减少（P<0.05），参与成管的长度、分支数、节点数减少，成管能力显著下降（P<0.01）,VEGFA mRNA表达水平下调（P<0.05）；与模型组相比，活血益气方药物组细胞增殖能力增强（P<0.01），迁移面积增加（P<0.05），参与成管的长度、分支数、节点数增多，成管能力提升（P<0.05）,VEGFA mRNA表达水平上调（P<0.05）。结论：miR-484抑制VEGFA mRNA的表达和HUVEC的增殖、迁移和成管，活血益气方对该过程有一定的负向调控作用，这可能是活血益气方促进血管新生的新的作...     

在舌鳞癌中的表达及对舌鳞癌细胞增殖及迁移的影响

探讨成纤维生长因子3（FGF3）在舌癌中的表达水平及对舌鳞状细胞癌SCC-9细胞增殖及迁移的影响。方法 收集2015年1月～2020年1月新疆医科大学第一附属医院明确诊断的40例舌鳞状细胞癌组织及对应癌旁组织。将舌磷癌细胞株SCC-9细胞分为空白组（正常培养72 h)、FGF3干预组（加入100ng/mL FGF3进行干预后培养72 h)、FGFR抑制剂干预组（加入100ng/mL FGFR抑制剂后进行干预后培养72 h)。采用免疫组化检测舌鳞状细胞癌及癌旁组织FGF3的表达;采用划痕实验、CCK-8实验检测空白组、FGF3干预组、FGFR抑制剂干预组对舌鳞癌细胞迁移及增殖的影响。结果 在40例舌鳞癌及对应癌旁组织中,FGF3高表达分别为90%及12.5%,两者具有显著的统计学差异（P＜0.01）;划痕实验组中,24 h时,空白组、FGF3干预组、FGFR抑制剂干预组划痕面积百分比分别为：(13.106±0.907)%、(7.515±0.733)%、(21.099±1.113)%;与空白组比较,FGF3干预组及FGFR抑制剂干预组划痕面积百分比差异均有统计学意义（P＜0.05）。CCK-8实验的结果显示空白组、FGF3干预组、FGFR抑制剂干预组细胞的存活率为（100.000±4.026）%、（136.330±9.779）%、（83.199±4.954）%,与空白组比较,FGF3干预组及FGFR抑制剂干预组细胞的存活率差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 FGF3在舌鳞癌中高表达,促进舌鳞癌细胞系SCC-9细胞的增殖及迁移。     

黄芪甲苷对成纤维细胞的毒性研究

目的探索黄芪甲苷（astragaloside-Ⅳ, AS-Ⅳ）对小鼠成纤维细胞L929的毒性及影响机制, 为AS-Ⅳ在皮肤创伤治疗中的应用提供实验依据。方法体外培养L929细胞, 在倒置显微镜下观察各组细胞形态, 采用CCK8检测细胞增殖, Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡, Western blotting检测细胞内cleaved Caspase-3和γ-H2AX蛋白表达, 细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果与Control组相比, 30、60、120 μmol/L的AS-Ⅳ处理L929细胞12 h、24 h, 随给药浓度及给药时间增加, 圆形细胞逐渐增多, 悬浮细胞增多, 死亡细胞逐渐增多。30、60、90、120 μmol/L AS-Ⅳ处理L929细胞12 h和24 h, 其OD值均低于Control组（P < 0.05~P < 0.01）; 在同一处理时间, 随着给药浓度增加, 其OD值逐渐降低（P < 0.05~P < 0.01）; 同一浓度AS-IV处理L929细胞12 h和24 h, 其OD值均低于处理6 h（P < 0.05~P < 0.01）。30、60、120 μmol/L AS-Ⅳ干预L929细胞24 h, 细胞凋亡率均高于Control组（P < 0.05~P < 0.01）。与Control组相比, 60 μmol/L AS-Ⅳ干预L929细胞6 h、12 h、24 h均能升高细胞内cleaved Caspase-3及γ-H2AX蛋白表达（P < 0.05~P < 0.01）; 与Control组相比, 30、60、120 μmol/L AS-Ⅳ处理L929细胞12 h均能升高细胞内γ-H2AX和cleaved Caspase-3蛋白表达（P < 0.05~P < 0.01）。与Control组相比, 30、60、120 μmol/L AS-Ⅳ干预L929细胞12 h及24 h, 相对迁移率均下降（P < 0.05~P < 0.01）。结论AS-Ⅳ浓度大于30 μmol/L时能抑制L929细胞增殖、迁移, 诱导其凋亡。     

microRNA启动子区甲基化调控对人肺癌细胞A549增殖、迁移、侵袭的影响

目的研究microRNA启动子区甲基化水平的变化对几种microRNAs（miRNA34a、miRNA34b、miRNA148a、miRNA203a）表达的影响,并进一步研究该甲基化调控对人肺癌细胞A549增殖、迁移以及侵袭能力的影响。方法不同浓度的去甲基化药物5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR) 处理人肺癌细胞A549,分别作用24 h、48 h、72 h,采用CCK8法检测细胞增殖情况,计算增殖抑制率。20 μmol/L 5-Aza-CdR处理A549细胞72 h,通过甲基化特异性PCR(MSP)检测A549细胞相关miRNAs启动子甲基化水平的变化;实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测A549细胞相关miRNAs表达水平的变化。20 μmol/L 5-Aza-CdR处理A549细胞0 h、24 h、48 h,采用划痕实验检测细胞迁移能力（计算细胞在24 h和48 h的划痕愈合率）;作用48 h,采用Transwell检测细胞侵袭能力。结果CCK8结果显示,随着5-Aza-CdR的处理浓度升高、时间延长,A549细胞的增殖抑制率逐渐增加。经5-Aza-CdR去甲基化处理后,MSP结果表明,实验组相对于对照组甲基化引物扩增条带减弱,而非甲基化引物扩增条带增强;Real-time PCR结果显示,相关miRNAs表达水平升高（P<0.05）。由划痕实验和Transwell检测结果揭示,经5-Aza-CdR处理后,A549细胞的生长愈合能力降低（P<0.05）,并且侵袭到Transwell小室滤膜下表面的细胞数亦减少（P<0.05）。结论人肺癌细胞A549经5-Aza-CdR去甲基化处理后,miRNAs表达水平升高,进一步抑制肺癌细胞的增殖、迁移以及侵袭能力。     

桃红四物汤对血管平滑肌细胞FAK/P38MAPK信号表达的影响

目的:研究桃红四物汤药物成分对血管平滑肌细胞(VSMC)FAK/P38MAPK信号表达的影响,并探讨其在抑制VSMC的迁移及增殖中的相关机理。方法:制备桃红四物汤含药血清,体外分离培养大鼠颈总动脉VSMC,将VSMC分为正常对照组(A组,正常大鼠血清培养)与干预组(B组,桃红四物汤含药血清干预)分别进行处理,采用免疫细胞化学方法检测各组FAK的表达情况,采用Western blot法检测各组不同时间及不同浓度含药血清干预下P38MAPK表达的变化。结果:大鼠VSMC在含药血清干预后,FAK及P38MAPK的表达均降低(P<0.01),P38MAPK的表达随含药血清干预时间的延长及作用浓度的增加而降低(P<0.01)。结论:桃红四物汤药物成分对FAK/P38MAPK信号的表达产生负性影响,此影响可能参与了对VSMC的迁移及增殖的抑制作用。     

lncRNA MIR34AHG通过miR-296-5p/SRCIN1轴影响喉癌细胞的恶性生物学行为

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA) MIR34AHG通过miR-296-5p/SRCIN1轴对喉癌细胞增殖和迁移的作用。方法 qPCR检测MIR34AHG在喉癌细胞系(TU686、Hep-2、TU177、AMC-NH-8、TU212)以及支气管上皮细胞系(16HBE)中的表达。选取MIR34AHG表达最低细胞系,分别构建MIR34AHG过表达细胞系(MIR34AHG组)和对照细胞系(对照组)。MTT法、细胞划痕实验分别检测上调MIR34AHG对细胞增殖和迁移的影响。生物信息学工具预测MIR34AHG的靶基因,双荧光素酶报告基因实验检测MIR34AHG与靶基因之间的相互作用。qPCR和Western blot法检测上调MIR34AHG对相关基因和蛋白表达的影响。结果 与16HBE细胞比较,喉癌细胞系中MIR34AHG呈低表达(P<0.01),且以TU686细胞中表达最低(P<0.01)。与对照组比较,MIR34AHG过表达抑制TU686细胞的增殖和迁移(P<0.05)。MIR34AHG和miR-296-5p之间存在靶向关系(P<0.01),miR-296-5p的靶基因可能是SRCIN1。与对照组比较,MIR34AHG过表达抑制miR-296-5p表达(P<0.01),促进SRCIN1基因的表达(P<0.01)。结论 MIR34AHG可能通过下调miR-296-5p的表达、上调SRCIN1的表达从而抑制喉癌细胞的增殖和迁移。     

miR-107靶向肿瘤蛋白D52抑制前列腺癌细胞的增殖和侵袭

目的研究microRNA-107(miR-107)对前列腺癌细胞生物学功能的影响和潜在的作用机制。方法采用瞬时转染、细胞克隆、细胞划痕、侵袭实验检测miR-107组与对照组(miR-NC组)对前列腺癌细胞生物学功能的影响。此外，通过靶基因预测软件TargetscanHuman7.2筛选出肿瘤蛋白D52(TPD52)作为miR-107的潜在下游靶基因并采用双荧光素酶报告基因实验进行了特异性结合的验证。同时，进一步通过蛋白免疫印迹和免疫荧光实验进行靶基因的表达检测。结果miR-107组的细胞划痕愈合率、侵袭率、增殖率均低于miR-NC组(P < 0.01)。miR-107组对靶基因TPD52表达量小于miR-NC组(P < 0.01)。结论miR-107通过靶向TPD52抑制前列腺癌的增殖和侵袭。     

风心病合并房颤患者心肌microRNA表达谱分析与靶基因预测

目的 研究风心病合并房颤患者心肌microRNAs的表达差异,预测其靶基因并分析其可能的生物学功能.方法 经知情同意,整群采集2013年1—12月收治的14例住院风心病房颤患者和8例风心病无房颤患者右心耳组织;提取总RNA进行miRNAs芯片杂交检测,应用RMA和FC法筛选差异表达的miRNAs,并用RT-PCR进行验证;运用生物信息学软件预测靶基因并分析其生物学功能.结果 与风心病无房颤组相比,风心病合并房颤组有22个miRNAs表达有差异,其中6个miRNAs表达上调,16个miRNAs表达下调;验证结果表明与风心病无房颤组比较,miR-661、miR-520d-5p和miR-145-5p表达显著下调(P<0.01);经GO和KEGG数据分析,差异miRNA靶基因的一部分亦与心肌纤维化相关.结论 该研究获得与房颤相关的差异miRNAs,可能是房颤新的生物标志物和潜在治疗靶点.     

胆固醇致内皮细胞损伤对平滑肌细胞增殖和迁移的促进作用

目的观察胆固醇损伤人血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)后能否影响血管平滑肌(vascular smooth muscle,VSMC)的增殖与迁移。方法用12.5、25.0、50.0 mg/L 3个浓度的胆固醇作用体外培养的HUVEC 24 h后,再用培养内皮细胞的培养基继续培养VSMC 24 h,CCK-8、划痕实验检测VSMC增殖与迁移;用12.5、25.0、50.0 mg/L的胆固醇作用共培养的HUVEC、VSMC 24 h,用Transwell检测VSMC迁移。结果 25.0、50.0 mg/L胆固醇作用HUVEC后的培养基与对照组相比(1.37±0.01),明显促进VSMC增殖(1.53±0.06)、(1.54±0.10)(P<0.05);12.5、25.0、50.0 mg/L胆固醇作用HUVEC后的培养基与对照组相比(33.24±0.43)均能促进VSMC细胞迁移[(269.10±3.78)、(272.79±4.69)、(458.69±4.78),P<0.01]。胆固醇作用共培养的HUVEC、VSMC 24 h后,促进VSMC迁移[(175.00±4.63)、(182.00±4.13)、(207.00±5.59)],与对照组相比(101.00±2.33)差异明显(P<0.01)。结论胆固醇诱导HUVEC损伤后能够促进VSMC增殖与迁移。