乳腺癌细胞来源的外泌体对乳腺癌BT549细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 研究乳腺癌细胞来源的外泌体对乳腺癌BT549细胞的增殖、侵袭和迁移的影响.方法 使用超速离心的方法对人乳腺癌BT549细胞培养液中的外泌体进行提取和纯化,以通用透射电子显微镜观察外泌体的形态和大小,蛋白免疫印迹实验鉴定外泌体的标志蛋白,以CCK-8实验、细胞划痕实验和Transwell实验检测外泌体对BT549细...     

经血来源间充质干细胞对大鼠薄型子宫内膜的治疗效果

目的探究经血来源间充质干细胞(menstrual blood-derived stem cells,MenSCs)对大鼠薄型子宫内膜的治疗效果。方法将20只无特殊病原体(specific pathogen free,SPF)雌性大鼠随机分为对照组、模型组、MenSCs组和雌激素组。模型组、MenSCs组、雌激素组大鼠采用子宫注射无水乙醇的方法构建薄型子宫大鼠模型,MenSCs组大鼠尾静脉注射MenSCs,雌激素组大鼠尾静脉注射雌激素。于3个动情周期后处死大鼠,取其子宫内膜标本制作切片,比较四组大鼠子宫内膜厚度和角蛋白、波形蛋白、整合素β3的表达情况。结果分离培养的MenSCs表现出明显的间充质干细胞特征,高表达CD44、CD73、CD90、CD105和OCT-4、C-kit、波形蛋白,不表达HLA-DR。成骨、成脂、成软骨分化均为阳性。模型组、MenSCs组、雌激素组大鼠子宫内膜厚度均显著小于对照组(均P <0.001),其中模型组大鼠子宫内膜厚度最小,MenSCs组大鼠子宫内膜厚度显著大于雌激素组(P=0.047)。模型组、MenSCs组、雌激素组大鼠子宫内膜组织角蛋白、波形蛋白、整合素β3表达水平均显著低于对照组(均P <0.05),MenSCs组大鼠上述蛋白表达水平均显著高于模型组和雌激素组(均P <0.05)。结论MenSCs可改善大鼠薄型子宫内膜的容受性和功能,其治疗效果优于雌激素治疗。     

人尿源干细胞外泌体对髓核样尿源干细胞增殖及分化的影响

目的 探究髓核样尿源干细胞(NP-USC)分化程度与分化时间的关系,以及人尿源干细胞外泌体(USC-EXO)对NP-USC增殖及分化的影响。方法 提取、鉴定并共培养髓核细胞(NPC)和尿源干细胞(USC)。根据共培养时间不同将细胞进行分组,A组：共培养7 d后,将NP-USC于无外泌体USC培养基中培养14 d; B组：共培养14 d后,将NP-USC于无外泌体USC培养基中培养7 d; C组：共培养21 d;另设USC组(USC单独培养21 d)和NPC组(NPC单独培养21 d)。使用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及Western blot方法检测5组细胞缺氧诱导因子(HIF-1α)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、Ⅱ型胶原蛋白(COL2)、蛋白多糖(ACAN)mRNA及蛋白质的表达情况。另将上述5组细胞用无外泌体USC培养基培养28 d,于第7、14、21、28天时采用CCK-8法检测细胞增殖情况。结果 RT-qPCR及Western blot方法检测结果显示,USC、A、B、C组中HIF-1α、GLUT1、COL2、ACAN mRNA及蛋白的相对表达量分别依次升高(t=5...     

人脐带间充质干细胞生物学特性及向汗腺样细胞分化研究

目的体外分离、纯化及培养人脐带间充质干细胞(UC-MSCs),观察其生物学特性并研究其定向分化成汗腺样细胞的能力。方法将剔除动静脉的新鲜人脐带组织切成小段,剥离血管后酶解,释放细胞贴壁生长,倒置显微镜观察细胞形态,绘制第3代生长曲线;流式细胞仪测定细胞表面标记(CD105、CD73、CD90、CD34、CD45、CD14和HLA-DR);定向诱导分化后PT-PCR检测汗腺发育基因EDA及EDAR表达。结果原代人脐带间充质干细胞呈现典型的成纤维样形态。体外诱导实验证实,该细胞阳性表达汗腺特异基因。结论人脐带MSCs体外可以分化成汗腺样细胞,为利用人脐带间充质干细胞修复汗腺损伤提供了可靠地理论依据和实验基础。     

母系表达基因3对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响机制研究

目的探究长链非编码RNA母系表达基因3(maternally expressed gene 3,MEG3)对卵巢癌细胞基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达和侵袭、迁移能力的影响。方法荧光定量聚合酶链反应检测卵巢上皮细胞和卵巢癌细胞MEG3表达情况。通过慢病毒转染携带MEG3全长序列的载体和空白载体于SKOV3人卵巢癌细胞中,分别作为实验组细胞和对照组细胞,通过Transwell侵袭实验检测两组细胞的侵袭能力,通过Transwell迁移实验检测两组细胞的迁移能力,通过蛋白质印迹法检测两组细胞MMP-2和MMP-9的表达情况。结果人卵巢癌细胞SKOV3、OVCAR3和A2780中MEG3的表达显著低于人卵巢上皮细胞IOSE80(均P<0.05)。通过慢病毒转染外源性上调SKOV3细胞MEG3的表达,实验组细胞MEG3表达显著高于对照组(P<0.05)。Transwell侵袭实验结果显示实验组穿过基质胶的细胞数显著少于对照组(P<0.05);Transwell迁移实验结果显示实验组迁入下室的细胞数显著少于对照组(P<0.05)。蛋白质印迹法结果显示实验组细胞MMP-2和MMP-9表达水平均显著低于对照组(均P<0.05)。结论 MEG3低表达于人卵巢癌细胞系,并可下调MMP-2和MMP-9的表达,抑制卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力。     

泛素水解酶22对舌鳞癌细胞侵袭与迁移的影响

目的 探究泛素水解酶22(USP-22)对舌鳞癌细胞侵袭与迁移的影响及其调控机制.方法 收集2014年2月—2019年7月入住青岛大学附属医院口腔颌面外科的舌鳞癌患者21例,术中收集患者的肿瘤组织和癌旁组织,利用免疫组织化学染色检测两种组织中USP-22和细胞外信号调控蛋白激酶5(ERK5)蛋白的表达.构建USP-22基因siRNA沉默质粒,根据是否转染质粒,将细胞分为TCA8113细胞对照组(A组)、TCA8113细胞未转染组(B组)、TCA8113细胞转染组(C组)及Tb细胞对照组(D组)、Tb细胞未转染组(E组)、Tb细胞转染组(F组).采用划痕实验和Transwell实验检测各组细胞的侵袭与迁移能力.结果 高分化组和中低分化组舌鳞癌组织中USP-22蛋白和ERK5蛋白的表达量与对照组比较具有显著性差异(F=377.72、211.29,q=22.72～34.13,P<0.05).A～C组、D～F组细胞迁移距离和侵袭能力比较均具有显著性差异(F=12.21～43.22,P<0.05),其中C组细胞迁移距离和侵袭能力明显低于A、B组(q=5.41～11.83,P<0.05),F组细胞迁移距离和侵袭能力明显低于D、E组(q=7.24～7.84,P<0.05).结论 USP-22对舌鳞癌细胞的侵袭和迁移能力具有一定的影响.     

吲哚-2,3-二酮对SH-SY5Y细胞增殖与迁移的影响及其机制

目的 研究吲哚-2,3-二酮(ISA)对SH-SY5Y细胞增殖与迁移的影响及其机制。方法 采用CCK-8实验检测ISA对SH-SY5Y细胞活力的影响,并计算其半致死浓度(IC₅₀值)作为后续实验中浓度设定的参考值。以IC₅₀值为依据,向SH-SY5Y细胞中分别加入总浓度为0、50、100、200μmol/L的ISA(A、B、C、D组),采用平板克隆实验、划痕实验、细胞凋亡率检测及PI染色流式细胞仪(FCM)分析实验检测ISA对各组SH-SY5Y细胞增殖、迁移、凋亡及细胞周期的影响。采用Western blot实验检测各组SH-SY5Y细胞中Bax、Bcl2等蛋白的相对表达量。结果 CCK-8实验结果显示,随着ISA浓度的增加,SH-SY5Y细胞活力明显下降(F=1 632.62,P<0.05);平板克隆结果显示,随着ISA药物浓度的增加,细胞的集落形成能力被抑制(F=1 038.21,P<0.05);划痕实验结果显示,细胞的迁移能力随着ISA浓度的增加而明显下降(F=147.86,P<0.05);流式细胞仪检测结果显示,随着...     

吉西他滨对人食管癌Eca-109细胞的增殖、细胞周期、细胞凋亡及STAT3蛋白的影响

目的探讨吉西他滨对人食管癌Eca-109细胞的增殖、细胞周期、细胞凋亡及STAT3蛋白表达的影响。方法 MTT法测定吉西他滨对人食管癌Eca-109细胞的增殖抑制作用,PI单染流式细胞术检测人食管癌Eca-109细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测人食管癌Eca-109细胞的凋亡情况,蛋白质印迹法检测STAT3蛋白的表达情况。结果不同浓度吉西他滨对人食管癌Eca-109细胞的抑制率均明显高于正常对照组(P<0.05),且随着药物浓度的增加,抑制率越高;吉西他滨0.20 mg/L组、0.40 mg/L组及0.80 mg/L组G0/G1期人食管癌Eca-109细胞百分数逐渐下降(P<0.05),G2/M期细胞百分数无变化(P>0.05),而S期细胞百分数逐渐增加(P<0.05)。吉西他滨0.20 mg/L组、0.40 mg/L组、0.80 mg/L组细胞凋亡率均明显高于正常对照组(P<0.05),且上述三组的STAT3蛋白表达均低于正常对照组(P<0.05),呈剂量依赖性。结论吉西他滨对人食管癌Eca-109细胞具有增殖抑制作用,阻滞细胞于S期,明显促进细胞凋亡,下调STAT3蛋白的表达。     

shRNA敲低ILK后对人脑胶质瘤细胞U251增殖、迁移及侵袭的影响

目的:观察应用sh RNA敲低人脑胶质瘤U251细胞系ILK基因表达后,对其在增殖、迁移、侵袭的影响。方法:将特异性的sh RNA表达载体质粒ILK-PGFP-V-RS转染人脑胶质瘤细胞系U251(U251-ILK),同时构建空质粒组(U251-NC)稳定转染细胞株。运用RT-PCR及蛋白质免疫印迹(Western blot)测定各组细胞株的ILK、cyclin D1、E-cadherin、Snail m RNA及其蛋白表达水平,应用Transwell及预铺Matrigel的小室检测转染后相应细胞株的迁移和侵袭能力,同时使用CCK8法检测细胞株增殖能力。结果:顺利构建成具有稳定敲低ILK表达水平的U251-si细胞株。U251-si细胞已证实ILK无论在m RNA水平还是其蛋白质水平均较U251组、U251-N显著降低(P0.05)。结论:应用sh RNA敲低胶质瘤细胞系U251中ILK基因后,抑制了胶质瘤细胞的增殖迁移及侵袭能力,为临床治疗提供新的作用靶点。     

沉默CD44表达对鼻咽癌细胞周期及凋亡的影响

目的：探讨CD44基因沉默对鼻咽癌细胞周期及凋亡的影响。方法：设计及合成CD44 siRNA,转染人鼻咽癌SUNE-1 5-8F细胞,Real-time qPCR及Western blot评价转染效果,流式细胞仪分析各组细胞周期和凋亡情况。结果：CD44 siRNA显著下调了人鼻咽癌SUNE-1 5-8F细胞中CD44 mRNA与蛋白表达(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示siRNA组细胞中G0/G1期细胞比例明显升高,S期细胞比例显著下降,细胞凋亡率明显增加(均P<0.05)。结论：CD44 siRNA干扰载体可高效抑制鼻咽癌SUNE-1 5-8F细胞CD44的表达,诱导细胞阻滞在G0/G1期,促进细胞凋亡。     

密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性

目的通过密度梯度离心法结合全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化骨髓间充质干细胞。方法采用密度梯度离心法结合全骨髓贴壁法,对大鼠骨髓间充质干细胞进行体外分离后传代培养,倒置相差显微镜下观察形态变化,流式细胞仪检测细胞标记物表达。结果 P3代大鼠BMSCs细胞培养5天,CD29、CD90、CD34阳性率分别为94.27%、91.16%、1.72%。结论密度梯度离心法结合全骨髓贴壁法成功分离培养了高纯度、高活性、生物学形态和特征稳定的骨髓间充质干细胞。     

新型Hsp90/HDAC双靶点抑制剂对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭和迁移的影响及其机制

目的 研究新型热休克蛋白90(Hsp90)/组蛋白去乙酰化酶(HDAC)双靶点抑制剂FXX-W-12-4对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其机制。方法 采用CCK-8实验检测FXX-W-12-4对MDA-MB-231细胞活力的影响,并计算其半致死浓度(IC₅₀)作为后续实验中浓度设定的参考值。以IC₅₀值为依据,在MDA-MB-231细胞中分别加入终浓度为0、100、200、300 nmol/L的FXX-W-12-4(分别设为A、B、C、D组),采用划痕实验、Transwell实验分别检测FXX-W-12-4对各组MDA-MB-231细胞侵袭以及迁移能力的影响。采用Western Blot实验检测各组MDA-MB-231细胞中ac-H3、Hsp70等蛋白的相对表达量。结果 CCK-8实验结果显示,随着FXX-W-12-4浓度的升高,MDA-MB-231细胞活力逐渐下降(F=2 663.00,P<0.05)。划痕实验结果显示,与A组相比,B～D组MDA-MB-231细胞在第12、24、48小时时迁移能力均明显降低...     

急性白血病与免疫干细胞表型的疗效相关性及预后分析

目的研究不同免疫干细胞表型的急性白血病患者的治疗效果及预后情况。方法将本院2010年1月至2013年12月收治的78例急性白血病患者作为研究对象,检测其免疫干细胞表型,并记录治疗情况。结果急性白血病免疫干细胞表型CD34+的患者比例最高(71.39%),其次为CD33+、CD64+患者;免疫干细胞CD33、CD64、CD34、CD19呈阳性的患者治愈率均低于其表型呈阴性的患者,差异具有显著性(t=11.1682,9.5098,10.6997,7.2341;P=0.0008,0.0020,0.0011,0.0072);免疫干细胞表型CD34+CD19+患者的治愈率高于CD34+CD19-的患者;而CD34+CD64+患者的治愈率低于CD34+CD64-的患者,差异具有显著性(t=6.9115,6.3096;P=0.0086,0.0120)。结论不同免疫干细胞表型的急性白血病患者的治愈率不同,免疫干细胞表型与急性白血病患者的治疗效果、预后密切相关。     

Sirt1对高糖诱导的足细胞外泌体释放的影响

目的 探讨烟酰胺腺嘌呤二核苷酸依赖的去乙酰化酶1(Sirt1)对高糖诱导的足细胞外泌体释放的影响。方法 将永生化小鼠足细胞MPC5分为正常糖组(5.5 mmol/L葡萄糖,A组)、高渗组(5.5 mmol/L葡萄糖+24.5 mmol/L甘露醇,B组)、高糖组(30.0 mmol/L葡萄糖,C组)、高糖+Sirt1过表达慢病毒转染组(Sirt1过表达慢病毒转染+30.0 mmol/L葡萄糖,D组)、高糖+阴性慢病毒转染组(阴性慢病毒转染+30.0 mmol/L葡萄糖,E组)、高糖+外泌体分泌抑制剂组(GW4869+30.0 mmol/L葡萄糖,F组)6组。采用免疫印迹法检测各组细胞Sirt1、足细胞裂孔膜蛋白(Nephrin、Podocin)及CD63、CD81、Alix的表达水平,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测D、E组细胞Sirt1 mRNA表达水平,使用透射电子显微镜观察足细胞外泌体形态,采用纳米粒子跟踪分析技术检测外泌体的粒径和浓度。结果 RT-qPCR结果显示,D组足细胞Sirt1 mRNA相对表达量显著高于E组(t=14.580,P<0.01)。纳米粒子跟...     

下调claudin-1对胆囊癌细胞SGC996生物学行为的影响

目的探讨下调claudin-1对胆囊癌细胞生物学行为的影响。方法通过慢病毒LV-CLDN1-RNAi感染下调claudin-1在胆囊癌细胞SGC996中的表达。检测细胞增值、细胞周期、细胞凋亡、细胞侵袭和凋亡相关基因Bax及Bcl-2蛋白表达水平,分析下调claudin-1在胆囊癌细胞中的表达后对其增殖、凋亡及侵袭等生物学行为的影响。结果感染LV-CLDN1-RNAi后SGC996增殖无明显变化,被阻滞的G1期细胞明显增多(P=0.003 7),S期细胞明显减少(P=0.0021),细胞凋亡比例增加(P 0.021 1)。下调claudin-1表达能抑制胆囊癌细胞侵袭;促凋亡基因Bax的蛋白表达增加,抑制凋亡基因Bcl-2的蛋白表达降低。结论下调claudin-1表达能有效促进胆囊癌细胞的凋亡,抑制其侵袭,提示claudin-1在胆囊癌的复发和转移中可能会发挥作用。     

HNRNPU通过调控衰老相关基因CDK2表达促进胃癌的进展

目的:探讨RNA结合蛋白核不均一核糖核蛋白U(HNRNPU)在胃癌发生发展中的作用及机制.方法:在胃癌细胞MGC-803中过表达或者敲低HNRNPU,并获得稳定表达的细胞株.通过MTT、软琼脂克隆形成、基质胶侵袭等体外细胞功能实验,研究HNRNPU对胃癌增殖和侵袭的影响.综合分析GEO、ENCORI、KOBAS、CSGene等公用数据库,寻找胃癌中HNRNPU可能调控的靶基因,并在胃癌细胞系中,利用实时定量PCR、Western Blot进行验证.结果:过表达HNRNPU可以促进MGC-803的增殖和侵袭.通过对公用数据库的深入挖掘以及实验验证发现,在胃癌中HNRNPU可上调衰老相关基因细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)的表达.结论:HNRNPU通过正向调控衰老相关基因CDK2表达,促进胃癌细胞的增殖和侵袭.     

长链非编码RNA ZFAS1在非小细胞肺癌中的表达

目的检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer. NSCLC患者癌组织中锌指结构反义转录本1 (zine finger antisense 1, ZFAS1)表达水平,探讨ZFAS1在NSCLC进展中的生物学作用。旨在探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在非小细胞肺癌组织中的表达水平。方法通过RNA提取及聚合酶链定量反应,质粒构建及细胞转染,细胞生长曲线和克隆形成和Western blot检测RACI蛋白表达等程序,研究60例非小细胞肺癌组织及癌旁肺组织中ZFASl的表达水平。结果锌指结构反义转录本1 (zine finger antisense 1, ZFAS1)基因敲减后,A549细胞增殖能力明显减弱(P 0.01);A549细胞周期G期比例升高,S期比例下降(P 0.01);A549细胞凋亡比例明显增加(P 0.01);A549细胞迁移和侵袭能力明显下降(P均0.01);A549细胞中Cyclin DI、Bcl2、N-cadherin、ZEBI、Slug和Twist基因表达水平均降低(P均0.05)。结论 ZFAS1在NSCLC患者癌组织中呈高表达。ZFAS1基因敲减诱导细胞周期阻滞、凋亡和抑制上皮-间质转变(epithelialmesenchymal transition, EMT),减弱NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭能力。与癌旁肺组织相比较之下,ZFASl在非小细胞肺癌组织中的表达出现了明显的下调。且其表达水平与60位患者的病例有显著的相关性,包括患者肿瘤的大小、分化程度、淋巴转移与远端转移等。     

树突状细胞疫苗的免疫学效应实验研究

目的探讨树突状细胞疫苗的免疫学效应和抑瘤机制。方法制备负载MB 49细胞粗提全抗原的DC疫苗;建立小鼠MB 49膀胱癌皮下移植瘤模型。造模后第7 d、14 d,疫苗组小鼠于右前腋皮下注射疫苗,PBS对照组相应注射PBS,正常组正常饲养。造模第21 d,流式细胞术检测小鼠脾CD 4+、CD 4+CD 69+T细胞数;取分离后的T细胞培养48 h,取上清,ELISA法检测IFN-γ水平。应用免疫组化方法检测瘤组织内CD 4+、CD 8+细胞数。结果小鼠脾CD 4+、CD4+CD 69+细胞数,DC疫苗组高于PBS对照组和正常组,P0.01,差异具有统计学意义。(其中1组P0.05)。T细胞培养上清IFN-γ水平,DC疫苗组高于PBS对照组和正常组,P0.01,差异具有统计学意义。瘤组织内CD 4+、CD 8+T细胞数,DC疫苗组高于PBS对照组,P0.01,差异具有统计学意义。结论 DC 2.4疫苗刺激T细胞活化和增殖,使脾内CD 4+、CD 4+CD 69+细胞数增加,IFN-γ分泌增多,同时趋化迁移至瘤组织的CD 4+、CD 8+T细胞数增多,使模型小鼠自身杀伤清除肿瘤细胞能力增强,从而抑制了模型小鼠肿瘤的生长。     

Ndfip1蛋白对神经细胞凋亡的保护作用探讨

目的探讨神经细胞损伤后高表达的Ndfip1蛋白对神经细胞凋亡的抑制作用及其可能机制。方法以SN-MC-1细胞(过表达Ndfip1的神经母细胞瘤细胞)及SH-SY5Y细胞作为研究对象,分别经过细胞培养及奥沙利铂作用后,通过MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 MTT法检测细胞增殖发现奥沙利铂对SH-SY5Y细胞、SN-MC-1细胞的增殖具有抑制效应,且具有剂量和时间依赖性;流式细胞仪检测细胞凋亡实验发现高表达Ndfip1的SH-SY5Y(SN-MC-1)细胞凋亡率有所下降。结论奥沙利铂能够抑制神经细胞增殖,其增殖抑制效应可能是通过诱导细胞凋亡而实现,SN-MC-1细胞过表达的Ndfip1可能与NEDD4家族蛋白结合,通过泛素化清除错误折叠的蛋白,通过抗凋亡作用来保护神经细胞。     

淫羊藿苷对缺糖缺氧条件下间充质干细胞活性及旁分泌功能的影响

目的:研究淫羊藿苷对缺糖缺氧(OGD)环境下移植的间充质干细胞(MSCs)活性和促血管生成相关细胞因子、microRNA等旁分泌功能的影响。方法:MTT法检测OGD时间、淫羊藿苷浓度对MSCs增殖活性的影响,流式细胞仪分析细胞凋亡水平,Hoechst 33342染色观察凋亡细胞形态;ELISA评估VEGF、bFGF的细胞分泌水平;实时荧光定量PCR测定MSCs及外泌体中5种促血管生成相关microRNA的表达水平。结果:高、低浓度的淫羊藿苷对OGD处理6h的MSCs表现出明显的促细胞增殖活性(P<0.05),淫羊藿苷孵育显著抑制OGD诱导的MSCs早、晚期凋亡,增加细胞上清中VEGF、bFGF的分泌水平。除了miR_103_3p,淫羊藿苷显著上调mi R_126a_5p、miR_210_3p、miR_378a_5p和miR_322_5p在MSCs的表达(P<0.05),外泌体中的表达水平低于细胞内。结论:淫羊藿苷可显著提高OGD条件下M SCs的增殖活性和旁分泌功能。