血清miR-21-3p表达对脓毒症心肌损伤的早期诊断价值

目的探讨血清miR-21-3p表达对脓毒症心肌病的早期诊断价值。方法96例脓毒症患者按有无心肌损伤分为脓毒症组(59例)和心肌损伤组(37例)。比较两组肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌红蛋白(Myo)、N末端B型脑钠肽前体(NT-proBNP)和miR-21-3p水平。超声心动图测定并比较两组左心室收缩期末内径(LVESD)、左心室舒张期末内径(LVEDD)、左心室射血分数(LVEF)、二尖瓣口舒张早期最大流速(E)与心房收缩期最大流速(A)比值(E/A)、二尖瓣舒张早期血流峰速度(E)与二尖瓣环舒张早期运动峰速度(e′)比值(E/e′)等指标。受试者工作特征(ROC)曲线评估miR-21-3p早期诊断价值。结果入院即刻心肌损伤组miR-21-3p明显高于脓毒症组(P＜0.05)。入院3 h,心肌损伤组cTnI、Myo、miR-21-3p明显高于脓毒症组(P＜0.05);心肌损伤组miR-21-3p与cTnI呈明显正相关。入院3 h,miR-21-3p诊断脓毒症心肌损伤的ROC曲线下面积0.904,灵敏度86.1%,特异度84.7%。入院6 h和12 h,心肌损伤组cTnI、CK-MB、Myo、NT-proBNP和miR-21-3p均明显高于脓毒症组(P＜0.05)。入院12 h,心肌损伤组LVESD、LVEDD、E/e′明显高于脓毒症组(P＜0.05),LVEF、E/A明显低于脓毒症组(P＜0.05),miR-21-3p与LVEF呈明显负相关。结论血清miR-21-3p表达有助于早期诊断脓毒症心肌病。     

荜茇酰胺通过miR-132-3p调控FOXO1参与脓毒症肾损伤研究

目的：探究荜茇酰胺对脓毒症肾损伤的作用及其可能机制。方法：使用盲肠结扎穿刺法(CLP)构建小鼠脓毒症模型。使用苏木素-伊红染色(HE)观察小鼠肾组织形态。使用Luminex LX100系统检测小鼠血清中肾损伤标志物的表达情况。使用酶联免疫反应(ELISA)检测小鼠肾组织中炎症因子水平。使用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测小鼠肾组织细胞凋亡水平。使用脂多糖(LPS)构建脓毒症细胞模型。使用细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测细胞活性。使用流式细胞术检测细胞凋亡水平。使用qRT-PCR检测miR-132-3p表达量。使用蛋白免疫印迹法(WB)检测FOXO1和凋亡相关蛋白的表达情况。使用双荧光素酶实验检测miR-132-3p与FOXO1靶向结合关系。结果：小鼠体内实验中,与假手术组相比,脓毒症模型组小鼠外周血中肾损伤标志物表达上升,肾损伤显著,肾组织中炎症因子表达显著上升,肾组织细胞凋亡水平上升,miR-132-3p表达显著上升,FOXO1蛋白表达下降;与脓毒症模型组比,荜茇酰胺给药组小鼠外周血中肾损伤标志物表达下降,肾损伤有所缓解,肾组织中炎症因子表达显著下降,肾组织细胞凋亡水平下降,miR-132-3p表达显著下降,FOXO1蛋白表达上升。在体外细胞模型中,荜茇酰胺能显著提高LPS刺激下肾小管细胞活性,抑制凋亡水平,并且过表达miR-132-3p会抑制荜茇酰胺对LPS刺激下细胞的影响。通过双荧光素酶实验在体外细胞中证实了miR-132-3p对FOXO1的靶向调控作用,且过表达miR-132-3p时FOXO1表达显著下调,抑制miR-132-3p表达时FOXO1表达显著上调。结论：荜茇酰胺可能通过miR-132-3p调控FOXO1的表达从而缓解脓毒症肾损伤。     

miR-145-5p对脓毒症小鼠心肌损伤的保护作用及其机制

目的 探讨miR-145-5p对脓毒症小鼠心肌损伤的保护作用及其机制。方法 80只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术+尾静脉注射agomir-NC组(sham+ago-NC)、假手术+尾静脉注射agomir-miR-145-5p组(sham+ago-miR)、脓毒症+尾静脉注射agomir-NC组(CLP+ago-NC)和脓毒症+尾静脉注射agomir-miR-145-5p组(CLP+ago-miR),每组20只。采用盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症模型。绘制小鼠生存曲线，ELISA法检测血清心肌损伤标志物肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)和肌钙蛋白I(cTnI)水平以及促炎细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达，HE染色观察心肌组织微观结构，超声仪检测心脏收缩功能(LVEF、LVFS),免疫荧光染色检测CD68、Ly6G、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)和凋亡相关斑点样蛋白(ASC)表达情况，碘化丙啶染色评估心肌细胞焦亡，qRT-PCR检测miR-145-5p表达，Western blot检测NLRP3、AS...     

长链非编码RNA SNHG20通过miRNA-140-5p调控TLR4-NF-κB轴影响脓毒症心肌损伤

目的:研究长链非编码RNA SNHG20在调控脓毒症介导的心肌损伤中的作用和机制.方法:采用脂多糖(LPS)构建体外脓毒症心肌损伤模型.采用qRT-PCR检测LPS介导的H9C2心肌细胞中SNHG20、miR-140-5p、TLR4以及炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)的表达,Western Blot检测心肌...     

miR-519d-3p通过调控TLR4/NF-κB通路促进脂多糖诱导的肺上皮细胞凋亡

目的 探讨miR-519d-3p对脂多糖LPS诱导的肺上皮细胞A549细胞凋亡的影响,并研究其具体作用机制。方法 LPS处理A549细胞构建急性肺损伤体外细胞模型,细胞内转染miR-519d-3p拮抗剂或miR-519d-3p激动剂构建miR-519d-3p下调或者上调的细胞模型。NF-κB抑制剂 Bay 11-7082预处理用来抑制细胞内NF-κB通路活性。qRT-PCR检测A549细胞内miR-519d-3p水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法检测凋亡相关蛋白和TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达,细胞免疫荧光检测 NF-κB p65蛋白细胞核移位情况。结果 LPS处理A549细胞后,细胞内miR-519d-3p水平上升,并呈浓度依赖性;上调miR-519d-3p能够促进A549细胞凋亡,而下调则降低细胞凋亡;进一步分子机制研究表明miR-519d-3p通过影响TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达及其磷酸化,诱导NF-κB蛋白细胞核移位而影响细胞凋亡;NF-κB抑制剂可缓解miR-519d-3p上调引起的细胞凋亡。结论 miR-519d-3p通过调控TLR4/NF-κB通路影响LPS诱导的肺上皮细胞凋亡。     

低剂量艾司氯胺酮通过TLR4/MyD88/NF-κB通路减轻肢体缺血再灌注损伤

目的 探讨Toll样受体4（Toll-like receptor 4，TLR4）/髓样分化初级反应基因88（myeloid differentiation primary response gene 88，MyD88）/核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）通路在低剂量艾司氯胺酮预处理的肢体缺血再灌注损伤中的作用。方法 将28只大鼠分为对照组、模型组、实验1组（艾司氯胺酮，5mg/kg）、实验2组（艾司氯胺酮，10mg/kg），每组各7只。实验组大鼠腹腔注射艾司氯胺酮，其余两组同样方法给予生理盐水，造模成功后取血清测定白细胞介素（interleukin，IL）-6、IL-1和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）含量；取骨骼肌测定湿/干重比值，测定TLR4、MyD88基因表达水平和NF-κB蛋白含量，病理切片观察骨骼肌改变。结果 与对照组相比，模型组湿/干重比值、IL-6、IL-1、TNF-α、TLR4 mRNA、MyD88 mRNA及NF-κB蛋白均显著升高（P<0.05）；与模型组相比，实验1组和实验2组的上述各项指标均显著降低（P<0.05）；而实验1组和实验2组的上述各项指标比较差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 艾司氯胺酮可通过TLR4/MyD88/NF-κB通路降低相关炎症因子表达，从而减轻肢体缺血再灌注损伤，且低剂量的艾司氯胺酮即可起到抗炎保护作用。     

前列腺癌中微小RNA-362-3p的表达及意义

为探索前列腺癌中微小RNA-362-3p(miR-362-3p)与转移的关系,以前列腺癌组织作为观察组,前列腺增生组织作为对照组,每组67例。采用实时荧光定量PCR法检测miR-362-3p的表达,免疫组化法检测上皮型粘附素(E-cadherin)和基质金属蛋白酶-11(MMP-11)的表达,Western Blot法检测基质金属蛋白酶-14(MMP-14)的表达。结果显示:miR-362-3p在前列腺癌组织中低表达。miR-362-3p在前列腺癌患者的脉管癌栓、Gleason分级、转移和不同TNM分期的表达存在显著差别。miR-362-3p与前列腺癌患者的生存时间显著相关,miR-362-3p分别与MMP-11、MMP-14具有显著负相关性,但与E-cadherin具有显著正相关性。结果表明,miR-362-3p可能通过调节细胞粘附和细胞外基质参与前列腺癌转移,可能作为患者的预后标志物。     

硫化氢通过抑制ROS介导的内质网应激改善脓毒症心肌损伤的研究

  目的  探讨硫化氢（H₂S）对脓毒症心肌损伤中活性氧（ROS）介导的内质网应激的影响。  方法  采用盲肠结扎穿刺术（CLP）诱导SD大鼠脓毒症模型,将大鼠随机分成假手术（sham）组、脓毒症（CLP）组、脓毒症+硫氢化钠（NaHS）（CLP+NaHS）组。超声心动图观察各组大鼠左心室功能,检测大鼠血浆H₂S的水平;通过乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）水平检测以及ROS染色评估大鼠心肌氧化应激水平;HE染色观察大鼠心肌组织形态变化,透射电子显微镜观察心肌细胞线粒体超微结构;Western blot检测细胞内源性硫化氢合成酶半胱硫氨酸-γ-裂解酶（CSE）、3-巯基丙酮酸硫转移酶（3-MST）表达变化,内质网应激标志性蛋白:磷酸化（p）-激酶蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）、p-细胞翻译启始因子2α（eIF2α）、p-肌醇需要酶1α（IRE1α）、活化转录因子（ATF）4和C/EBP同源蛋白（CHOP）的表达变化;TUNEL染色观察大鼠心肌细胞凋亡变化。   结果  脓毒症大鼠左室射血分数（LVEF）、左心室缩短分数（LVFS）降低（P<0.05）,血浆H₂S降低（P<0.05）,血浆H₂S与LVEF和LVFS呈线性相关（r2=0.62、r2=0.64,P均<0.05）。脓毒症组大鼠ROS水平明显增强,LDH水平增高（P<0.05）,MDA表达增强（P<0.05）,GSH表达下降（P<0.05）;在HE染色中可见炎性细胞浸润,心肌细胞水肿,透射电子显微镜可观察到线粒体明显损伤,可见线粒体水肿,嵴结构溶解等情况;Western blot结果显示,CSE、3-MST表达水平有所下降（P<0.05）,内质网应激标志性蛋白p-PERK、p-eIF2α、IRE1α、ATF4和CHOP蛋白表达水平升高（P<0.05）;TUNEL染色结果显示心肌细胞凋亡水平明显增加（P<0.05）。NaHS处理后,LVEF和LVFS升高（P<0.05）,血浆H₂S升高（P<0.05）。心肌氧化应激水平降低,HE与透射电镜显示心肌形态学有改善,线粒体损伤减轻,CSE、3-MST水平升高（P<0.05）,p-PERK、p-eIF2α、IRE1α、CHOP蛋白表达下降（P<0.05）,心肌细胞凋亡水平有所下降（P<0.05）。  结论  H₂S通过抑制ROS介导的内质网应激,减少脓毒症心肌细胞凋亡,从而改善脓毒症心肌功能障碍。     

绝经后骨质疏松患者骨组织中miR-124-3p、miR-328-3p、miR-338-3p的表达

目的：探讨绝经后骨质疏松患者骨组织中miR-124-3p、miR-328-3p、miR-338-3p表达。方法：选取30例绝经后骨质疏松妇女(PMOP组)和30例非骨质疏松的绝经后妇女(对照组),髂前上棘穿刺取骨组织300mg,研磨、匀浆,通过RT-qPCR方法分析检测两组miR-124-3p、miR-328-3p、miR-338-3p的表达水平。结果：miR-338-3p在PMOP组骨组织中的表达水平升高;miR-124-3p、miR-328-3p在PMOP组骨组织中的表达水平降低。结论：miR-124-3p、miR-328-3p、miR-338-3p可调节成骨、破骨引起PMOP,可通过调控其表达干预PMOP的发生和治疗。     

外源性IL-4通过抑制NF-κB信号通路减轻急性脓毒症肺损伤的研究

目的 通过构建脓毒症肺损伤体内及体外模型,探讨外源性白细胞介素-4（IL-4）可否减轻脓毒症急性肺损伤及其可能的调节机制。方法 细胞实验：体外培养小鼠肺泡巨噬细胞MH-S,选用终浓度为1.0μg/mL的脂多糖（LPS）刺激2 h后,加入不同浓度的IL-4作用24 h, CCK-8法检测细胞活力;活性氧（ROS）测定试剂盒检测ROS的含量,Elish法检测IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平,Western blot法检测NF-κB p65蛋白表达水平。小鼠实验：选用C57BL/6小鼠,随机分为空白对照组（生理盐水）、模型组（LPS）及实验组（LPS造模30 min后气管滴注IL-4）,12 h后,将3组小鼠经异氟醚诱导后处死收集血清和组织样本。使用H&E染色法观察肺损伤,采用qRT-PCR和ELISA法检测相关基因的表达,流式细胞术检测巨噬细胞的极化情况。结果 外源性IL-4可明显改善肺损伤。体外实验表明,外源性IL-4在24 h内对MH-S细胞的活力几乎无影响;外源性IL-4能够降低MH-S细胞中TNF-α、IL-6、IL-1β水平,下调NF-κB p65蛋白表达量以及减...     

miR-9-5p通过SIRT1/NF-κB通路促进胰腺癌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨miR-9-5p通过调控SIRT1及NF-κB表达对胰腺癌细胞(PANC-1)凋亡相关基因Caspase-3表达的影响。方法 使用miR-9-5p mimic慢病毒转染人胰腺癌PANC-1细胞建立稳转株(mimic组),空载体转染作为阴性对照组(NC组),以未处理的PANC-1细胞作为空白对照组(空白组)。采用qRT-PCR检测PANC-1细胞中miR-9-5p、SIRT1及Caspase-3 mRNA的表达水平；Western Blot检测SIRT1、NF-κB通路相关蛋白及Caspase-3蛋白表达量；ELISA检测细胞裂解液中SIRT1及Caspase-3蛋白表达；双荧光素酶报告基因实验明确miR-9-5p和SIRT1的靶向关系；Pearson相关分析确定miR-9-5p、SIRT1及Caspase-3 mRNA表达的相互关系。结果 mimic组miR-9-5p mRNA表达较对照组明显升高，结果有统计学意义，提示转染成功。与空白组及NC组相比，mimic组SIRT1 mRNA及蛋白表达水平下调(P<0.01),p-NF-κB p65与NF-κB p65上调(P&...     

过表达微RNA-590-3p对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制

目的 探讨微RNA-590-3p(miR-590-3p)过表达对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的保护作用及其机制.方法 将24只Sprague Dawley大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、阴性对照(NC)组和agomir-miR-590-3p组,每组6只.模型组、NC组和agomir-miR-590-3p组...     

白杨素通过下调p38-MAPK磷酸化减轻脓毒症大鼠心肌损伤

目的 探讨白杨素对脓毒症模型大鼠心肌损伤的作用机制.方法 清洁级SD大鼠100只,按随机字母表法分成对照组、模型组、地塞米松组(0.27mg/kg)、白杨素低、高剂量组(20、40mg/kg),每组20只.模型组、地塞米松组、白杨素低、高剂量组建立脓毒症模型;建模成功后,地塞米松组、白杨素低、高剂量组给予相应药物灌胃,...     

过表达miR-199-3p/5p诱导胰腺癌细胞BxPC-3、Panc-1铁死亡的作用机制

目的探讨过表达miR-199-3p/5p诱导胰腺癌细胞BxPC-3和Panc-1铁死亡的作用机制。 方法瞬时转染miR-199-3p/5p模拟物和抑制物至BxPC-3、Panc-1细胞中。qRT-PCR检测细胞中miR-199-3p/5p表达水平；Western blotting检测SCL7A11、BTRC、TFRC蛋白水平。谷胱甘肽(GSH)、Fe2＋、脂质过氧化物(LPO)试剂盒检测细胞GSH、Fe2＋、LPO水平。免疫共沉淀检测BTRC、TFRC泛素化水平。双荧光素酶报告实验检测miR-199与靶基因的相互作用。 结果转染miR-199-3p/5p模拟物后,胰腺癌BxPC-3、Panc-1细胞株中miR-199-3p/5p、TFRC蛋白水平显著上调；SLC7A11、BTRC蛋白水平显著降低；LPO、Fe2＋含量升高,GSH含量降低。过表达BTRC能够显著降低TFRC蛋白水平。miR-199-3p靶向结合SLC7A11,miR-199-5p靶向结合BTRC。 结论过表达miR-199-3p/5p诱导胰腺癌细胞BxPC-3和PANC-1铁死亡,可能与靶向抑制BTRC、SLC7A11促进LPO累积有关。     

MiR-132-3p调控FZD4/Wnt/β-catenin通路抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和侵袭

目的 探究miR-132-3p对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLSs)增值和侵袭的影响及调控机制。方法 运用qRT-PCR分析miR-132-3p和卷曲类蛋白受体4 (FZD4) RNA表达。将miR-132-3p模拟物、模拟物阴性对照、pcDNA3.1 (+)载体以及FZD4过表达载体转染RA-FLSs后分析细胞活力、增殖、侵袭以及Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达。再运用双荧光素酶报告实验鉴定miR-132-3p和FZD4关系。结果 miR-132-3p在类风湿关节炎患者滑膜组织中的表达低于在正常滑膜组织中的表达，且在RA-FLSs中的表达低于在正常纤维样滑膜细胞中的表达，差异均有统计学意义(P<0.05);miR-132-3p模拟物转染后能抑制WT-FZD4 3’UTR组的荧光素酶活性，差异有统计学意义(P<0.05)，但miR-132-3p模拟物对WT-FZD4 3’UTR组的荧光素酶活性无影响，差异无统计学意义(P>0.05);miR-132-3p转染组的RA-FLSs活力、EdU阳性细胞数、侵袭细胞数和β-catenin、c-Myc和Cyc...     

SIRT3缺陷对脓毒症心肌损伤的影响及作用机制

目的 探讨SIRT3缺陷对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的脓毒症心肌损伤的影响及作用机制。方法 通过对SIRT3基因敲除(SIRT3-/-)小鼠及野生型(wild type, WT)小鼠进行LPS(10mg/kg)腹腔注射24h制备脓毒症心肌损伤模型,等体积0.9%氯化钠溶液(normal saline, NS)腹腔注射作为对照,设立WT-NS组、WT-LPS组、SIRT3-/--LPS组、SIRT3-/--NS组。通过对人心脏微血管内皮细胞进行LPS(10μg/ml)刺激24h制备细胞损伤模型。正常培养作为对照,使用SIRT3过表达慢病毒及阴性对照病毒进行细胞转染,设立对照组、LPS组、LPS+SIRT3过表达组、阴性对照病毒组。采用心脏超声检测各组小鼠收缩末期及舒张末期左心室后壁厚度、左心室舒张末期容积。天狼星红染色检测各组心脏组织的胶原蛋白含量。免疫荧光法观察各组心脏微血管中内皮-间充质转化(endothelial-to-mesenchymal transition, EndMT)标志蛋白:血小板-内皮细胞黏附分子(platelet-endothelial cell adhesion molecule, CD31)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)的表达情况。采用Western blot法检测CD31、α-SMA、SIRT3蛋白和自噬相关蛋白LC3、p62的表达情况。结果 心脏超声发现,SIRT3-/--LPS组左心室舒张末期容积、收缩末期及舒张末期左心室后壁厚度均增加(P<0.001)。天狼星红染色结果表明,SIRT3缺陷可显著提升LPS诱导的脓毒症小鼠心脏组织的胶原蛋白含量(P<0.001)。LPS可诱导小鼠心脏微血管内皮细胞发生EndMT,而SIRT3缺陷会加重这一变化(P<0.05)。LPS可诱导小鼠心脏组织自噬水平应激性升高,而SIRT3缺陷会降低自噬水平(P<0.05)。体外实验同样证实了LPS诱导人心脏微血管内皮细胞自噬应激性增强(P<0.001),此时SIRT3蛋白表达下降伴随着EndMT的发生(P<0.05),而SIRT3过表达明显减轻了EndMT的程度(P<0.001),自噬水平进一步增加(P<0.05)。结论 SIRT3缺陷能加重LPS诱导的脓毒症小鼠心脏舒张功能障碍及纤维化程度,其机制可能与其降低心脏组织自噬水平,促进心脏微血管内皮细胞发生EndMT有关。     

沙库巴曲缬沙坦通过调控心力衰竭大鼠TGF-β1/Smad3和NF-κB信号通路抑制心肌损伤

目的 研究沙库巴曲缬沙坦对心力衰竭大鼠心肌损伤和心脏重构的影响,并探讨其对TGF-β1/Smad3和NF-κB信号通路的调控作用.方法 通过结扎大鼠左前降支冠状动脉(LAD)诱发心力衰竭动物模型.建模后每天用10 mg/kg的沙库巴曲缬沙坦治疗大鼠(沙库巴曲缬沙坦组,n=15).假手术组(n=15)和模型组(n=15)...     

肺癌患者血浆miR-197-3p和miR-361-3p表达的诊断评价

目的:评价血浆miR-197-3p和miR-361-3p用于肺癌诊断的价值。方法:采用实时定量PCR法检测57例肺癌患者和53例良性肺病患者血浆中miR-197-3p和miR-361-3p的表达水平。建立这两个血浆miRs的受试者工作特征(ROC)曲线评价其诊断肺癌的效果,并与血清癌胚抗原和细胞角蛋白19(Cyfra21-1)诊断效果进行比较。结果:miR-197-3p和miR-361-3p在肺癌患者血浆中的表达水平明显高于良性肺病患者(均P<0.001)。两指标诊断肺癌的ROC曲线下面积分别为0.908和0.869(均P<0.001)。血浆miR-197-3p表达与肺癌的病理组织学类型显著相关(P=0.011);而血浆miR-361-3p表达与肺癌的分化程度及临床分期相关(P=0.005和P=0.015)。血浆miR-197-3p和miR-361-3p测定诊断肺癌的敏感性(78.9%和71.9%)和准确性(81.8%和80%)高于血清癌胚抗原(42.6%和60%)和Cyfra21-1(25%和58.9%),两种miR的联合检测可较大程度提高诊断的敏感性(89.5%)和准确性(85.5%),但特异性略有下降。结论:血浆miR-197-3p和miR-361-3p可作为诊断肺癌的肿瘤标志物,诊断效果优于血清癌胚抗原和Cyfra21-1。