血管紧张素Ⅰ抑制血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖

目的探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响。方法采用组织贴块法培养VSMCs,取生长良好的第3～5代细胞用于实验。随机分为对照组、AngⅡ组、Ang-(1-7)组、AngⅡ Ang-(1-7)组、AngⅡ Ang-(1-7) (A-779)组,通过3H胸腺嘧啶(3H-TdR)掺入法测定VSMCs的DNA合成,用结晶染色的方法检测细胞数目,观察VSMCs的增殖情况。结果①与对照组比,AngⅡ(100nmol/L)孵育细胞24h后可明显诱导VSMCs3H-TdR掺入量增加;Ang-(1-7)(1000nmol/L)可减少3H-TdR掺入量。②与AngⅡ组比较,Ang-(1-7)(10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L)呈浓度依赖性的抑制AngⅡ诱导的VSMCs3H-TdR掺入量。加入Ang-(1-7)特异性受体阻断剂A-779后,Ang-(1-7)此作用消失。③结晶染色结果显示,AngⅡ可诱导VSMCs数目明显增加(P<0.05)。Ang-(1-7)可抑制AngⅡ诱导的VSMCs增加,亦呈浓度依赖性(P<0.05)。结论Ang-(1-7)能抑制基础和AngⅡ诱导的VSMCs增殖,通过其特异性受体发挥作用。     

呋喃二氢吡啶二羧酸酯对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:观察呋喃二氢吡啶二羧酸酯（EFDP）对血管紧张素II（AngⅡ）诱导血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响。方法:采用培养的兔VSMC,应用3H-TdR掺入法,观察在AngII促进VSMC增殖过程中,EFDP对VSMC DNA合成的影响及其时间效应。结果:AngII可促进处于静止状态的兔VSMC的DNA合成,36 h时细胞DNA的合成达到高峰。EFDP对AngII诱导的VSMC增殖有显著的抑制作用,并呈现出明显的浓度依赖关系,随着EFDP浓度的升高,VSMC增殖的抑制率也逐渐增加,36 h时,78.40μmol/L的EFDP对VSMC增殖的抑制率为21.37%。结论:EFDP可抑制AngII诱导兔VSMC的增殖,并存在一定的量效依赖关系及时间反应性。     

血管紧张素Ⅱ2型受体转染表达对血管平滑肌细胞增殖及迁移的影响

目的　探讨血管平滑肌细胞 (VSMC)转染表达血管紧张素Ⅱ (AngⅡ ) 2型受体 (AT2 R)对其增殖和迁移的影响。方法　构建带AT2 R基因的重组复制缺陷型腺病毒载体 (AdCMV AT2 R) ,体外转染大鼠主动脉VSMC ,用RT PCR方法检测AT2 RmRNA表达 ,流式细胞仪检测AT2 R表达率 ,用细胞周期、分裂指数、MTT比色法和 5 溴尿苷(BrdU)掺入法检测VSMC增殖。VSMC迁移用改良Boyden‘s趋化小室法检测 ,用激光共聚焦显微镜检测细胞骨架蛋白F actin的表达。结果　构建的AdCMV AT2 R体外转染培养VSMC表达率为 89.5 1%。AT2 R峰值表达时 ,其S期和G2 M期细胞比率从 31.7%降低到 13.9% (P <0 0 5 ) ,MTT吸光度和BrdU掺入量分别降低 6 1.4%和 5 1.6 %(P <0 0 (1)。VSMC的跨膜迁移数降低 6 2 .2 % ,F actin表达明显减少。结论　AT2 R转染表达可显著抑制体外培养VSMC的增殖和迁移 ,这一作用对再狭窄防治是有益的。     

罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖的影响及可能的机制.方法 原代培养大鼠血管平滑肌细胞,取第4～8代细胞进行实验.用终浓度为1 μmol/L血管紧张素Ⅱ诱导6 h,随机分成对照组(含10% FBS的DMEM培养基)、1 μmol/L血管紧张素Ⅱ组、不同浓度罗格列酮(20、30、40及50μmol/L) 干预组,30 μmol/L罗格列酮干预不同时间组 (6、12、18及24 h).分别采用MTT和流式细胞术观察血管平滑肌细胞增殖和增殖周期的变化;逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法测定不同干预条件下血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ2型受体mRNA和蛋白的表达水平.结果 血管紧张素Ⅱ组吸光值明显高于对照组(P<0.01),20、30、40及50μmol/L罗格列酮干预12 h及30μmol/L 罗格列酮干预6、12、18及24 h后,吸光值明显降低(P<0.05或P<0.01);血管紧张素Ⅱ组增殖指数和S期细胞分数明显高于对照组(P<0.01).随着罗格列酮干预浓度的增加或干预时间的延长,增殖指数、S期细胞分数及处于S期分数均明显下降(P<0.05或P<0.01).与血管紧张素Ⅱ组相比,不同浓度(20、30及50μmol/L)罗格列酮干预12 h及同一浓度(30μmol/L)干预不同时间(6、12及24 h)显著升高血管紧张素Ⅱ2型受体mRNA和蛋白的表达(P<0.05或P<0.01).结论 罗格列酮至少部分通过上调血管紧张素Ⅱ2型受体表达,阻止血管平滑肌细胞从G0/G1期向S期、G2/M期转化,从而抑制血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞的增殖、迁移,发挥血管保护作用.     

转染血管紧张素受体Ⅱ(AT_l)反义核苷酸对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 :评价转染 ATl 反义核菩酸 (ATl A)对血管平滑肌细胞(VSMCs)血管紧张 (Ang )受体亚型 m RNA表达、蛋白激酶 C(PKC)、丝裂素活化蛋白激酶 P38(P38MAPK)蛋白表达 ,及蛋白核酸合成的作用。方法 :RT- PCR克隆 ATl c DNA序列 (476 bp) ,将克隆的 ATlc DNA反向插入 Pc DNA3.1 ,构建一完整的含 ATl A的质粒(PATl A) ,测序鉴定。转染培养的大鼠 VSMCs,RT- PCR检测转染 VSMCs AT1 m RNA表达。Ang (1 0 - 7mol/ L)剌激 2 4h后 ,比较转染与非转染的 VSMCs AT1 与 AT2 m RNA表达(RT- PCR)、P38MAPK和 PKC蛋白表达 (免疫印迹 ,westernblot)、蛋白核酸合成 (3H- L eucine及 3H- Thym idine掺入 )。结果 :成功构建 PATl A。RT- PCR显示转染 VSMCs ATlm RNA表达量显著减少 ,与对照 VSMC相比差异显著 (P<0 .0 1 )。Ang (1 0 - 7mol/ L)刺激 2 4h后 ,与非转染 VSMCs相比 ,转染 VSMCs ATl m RNA明显减少 (P<0 .0 1 ) ,AT2m RNA明显增加 (P<0 .0 1 ) ;但两组间 PKC和 P38MAPK蛋白表达 ;3H- L eu及3H- Td R掺入量均无显著性差异 (P>0 .0 5 )。结论 :经 ATl A封闭后 ,能显著抑制 VSMC ATl m RNA表达 ,同时上调 AT2 m RNA。单纯封闭 ATlm RNA并不能有效阻断Ang 介导的 VSMCs蛋白核酸合成及 VSMCs生长相关的信号转导 ,     

血管紧张素Ⅱ对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖和凋亡作用的研究

目的:研究血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)刺激血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和凋亡的作用及其机理。方法:本实验采用培养大鼠胸主动脉VSMC、用细胞计数和流式细胞仪(FCM)进行VSMC增殖和凋亡的检测。结果:(1)不同浓度AngⅡ对VSMC增殖均有显著促进作用、呈剂量依赖关系至10μmol/L时趋于饱和,AngⅡ能促进VSMC从G_0/G_1期进人S期、进行DNA合成,AngⅡ的促增殖作用为一快相作用。(2)Losartan和CGP42112A均能不同程度地取消AngⅡ对VSMC的促增殖作用。(3)100μmol/L AngⅡ能很好地诱导VSMC凋亡的发生、且随时间延长而增加,CGP42112A能阻止凋亡的发生而Losartan则不能。结论:本实验显示AngⅡ能通过ATR-1和ATR-2共同促进VSMC进入合成期、进行增殖反应,同时证实AngⅡ能诱导VSMC发生凋亡,可能主要由ATR-2介导。     

血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞生物学行为的多重影响

目的　探讨血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖、迁移和凋亡等生物学行为多重影响的机制。方法　用腺病毒介导基因转染方法使VSMC表达AngⅡ 2型受体 (AT2R)并检测不同时相点AT2R表达率 ;对比AT2R表达前后AngⅡ 1型受体 (AT1R)表达量的变化以及对AngⅡ刺激的反应 ;通过 5 溴尿苷 (BrdU)参入法、改良Boyden′s趋化小室及流式细胞仪分别检测VSMC增殖、迁移及凋亡等生物学行为所受的影响。结果　VSMC的AT2R转染最高表达率在转染后 4 8h(89 5 1% ) ,AT1R最高表达率为 77 94 %。AT2R峰值表达时 ,转染组VSMC的BrdU参入量降低 5 1 6 %(P <0 0 1) ,细胞跨膜迁移数减少 6 2 2 % (P <0 0 5 ) ,细胞凋亡率由 7 6 %± 1 6 %显著地增加至32 1%± 5 5 % (P <0 0 1)。而未转染组以AT1R表达为主 ,AngⅡ作用明显具有促进VSMC增殖、迁移和抑制其凋亡的作用。结论　VSMC转染表达AT2R后 ,可显著地抑制AngⅡ通过AT1R所介导的促进VSMC增殖、迁移以及减少其凋亡的生物学作用。     

转染血管紧张素Ⅱ受体(AT1)反义核苷酸对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:评价转染AT1反义核菩酸(AT1A)对血管平滑肌细胞(VSMCs)血管紧张Ⅱ(AngⅡ)受体亚型mRNA表达、蛋白激酶C(PKC)、丝裂素活化蛋白激酶p38(P38MAPK)蛋白表达,及蛋白核酸合成的作用.方法:RT-PCR克隆AT1 cDNA序列(476bp),将克隆的AT1cDNA反向插入PcDNA3.1,构建一完整的含AT1A的质粒(PAT1A),测序鉴定.转染培养的大鼠VSMCs,RT-PCR检测转染VSMCs AT1mRNA表达.AngⅡ(10-7mol/L)刺激24 h后,比较转染与非转染的VSMCs AT1与AT2 mRNA表达(RT-PCR)、P38MAPK和PKC蛋白表达(免疫印迹,western blot)、蛋白核酸合成(3H-Leucine及3H-Thymidine掺入).结果:成功构建PAT1A.RT-PCR显示转染VSMCs AT1 mRNA表达量显著减少,与对照VSMC相比差异显著(P＜0.01).AngⅡ(10-7mol/L)刺激24 h后,与非转染VSMCs相比,转染VSMCs AT1 mRNA明显减少(P＜0.01),AT2 mRNA明显增加(P＜0.01);但两组间PKC和P38MAPK蛋白表达;3H-Leu及3H-TdR掺入量均无显著性差异(P＞0.05).结论:经AT1A封闭后,能显著抑制VSMC AT1mRNA表达,同时上调AT2 mRNA.单纯封闭AT1 mRNA并不能有效阻断AngⅡ介导的VSMCs蛋白核酸合成及VSMCs生长相关的信号转导,其他信号通路可能有代偿作用.     

阿司匹林对血管紧张素Ⅱ诱导平滑肌细胞增殖的影响及其机制

目的:观察阿司匹林对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐动脉平滑肌细胞增殖的影响及其机制。方法:采用组织贴块法培养人脐动脉平滑肌细胞,选3-9代细胞用于实验。①阿司匹林细胞毒性检测:实验分对照组和阿司匹林5 mmol/L组。两组培养24 h后,取上清液,用乳酸脱氢酶活性测定法,观察阿司匹林加入对细胞有无毒性。②阿司匹林抗增殖效果:实验分5组,对照组、AngⅡ组、AngⅡ+阿司匹林0.5 mmol/L组、AngⅡ+阿司匹林1 mmol/L组和AngⅡ+阿司匹林2 mmol/L组。以上各组分别培养1 d、3 d、5 d后,采用四唑盐比色法测各孔的吸光值。③NO含量检测:实验分4组,对照组、阿司匹林2 mmol/L组、AngⅡ组和AngⅡ+阿司匹林2 mmol/L组。以上各组分别培养24 h后,收集细胞培养上清液按试剂盒说明书检测NO含量。④细胞周期检测:实验分3组,对照组、AngⅡ组和AngⅡ+阿司匹林2 mmol/L组。以上各组分别培养24 h后,收集细胞,用流式细胞仪检测细胞周期。结果:①与对照组比较,阿司匹林5 mmol/L组细胞上清液中乳酸脱氢酶活性无明显升高(P>0.05)。②阿司匹林(0.5、1、2 mmol/L)呈剂量依赖性地抑制脐动脉平滑肌细胞的增殖,抑制的最大效果在本实验内显示为2 mmol/L浓度的阿司匹林在培养第5天时,与AngⅡ组比较有极显著性差异(0.27±0.01 vs 0.74±0.03,P<0.01)。③AngⅡ刺激脐动脉平滑肌细胞24 h后,可降低细胞培养上清液中NO的含量,与对照组比较有显著差异[(54.08±5.69)μmol/L vs (70.27±3.99)μmol/L,P<0.05];而加入阿司匹林2 mmol/L干预后,可升高上清液中NO的含量,与AngⅡ组比较有极显著差异[(63.31±5.41)μmol/L vs(54.08±5.69)μmol/L,P<0.01]。④与AngⅡ组比较,阿司匹林(2 mmol/L)可使细胞静止期/DNA合成前期(G0/G1期)的脐动脉平滑肌细胞所占比例显著升高[(62.05±1.55)%vs(48.72±2.31)%,P<0.05],而DNA合成期(S期)细胞所占比例显著降低[(24.77±2.82)%vs(35.77±2.13)%,[<0.05]。结论:阿司匹林能呈剂量依赖性地抑制AngⅡ诱导的脐动脉平滑肌细胞的增殖,抑制细胞在G0/G1期,促进脐动脉平滑肌细胞NO的产生。     

内皮祖细胞条件培养液对血管紧张素Ⅱ所致血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的 研究内皮祖细胞条件培养液对血管紧张素Ⅱ所致血管平滑肌细胞增殖的影响及机制。方法 从人脐带血分离、培养、诱导内皮祖细胞分化并鉴定,分别制备早期内皮祖细胞条件培养液、晚期内皮祖细胞条件培养液以及人脐静脉内皮细胞条件培养液,采用BrdU标记法、蛋白定量、MTT以及流式细胞术分析早期内皮祖细胞条件培养液、晚期内皮祖细胞条件培养液以及人脐静脉内皮细胞条件培养液对血管紧张素Ⅱ所致血管平滑肌细胞DNA合成能力、细胞总蛋白含量、细胞存活率以及细胞周期进程的影响;进一步采用Western blot观察早期内皮祖细胞条件培养液对血管紧张素Ⅱ所致血管平滑肌细胞MAPK （p38、JNK、ERK活化）信号通路以及原癌基因c-myc、c-fos表达的影响。结果 血管紧张素Ⅱ（10^-6 mmol/L）诱导血管平滑肌细胞增殖48 h后,血管平滑肌细胞DNA合成能力、细胞总蛋白含量、细胞存活率均较对照组明显增加,细胞周期中S期细胞所占百分率较对照组显著增加,G₁期细胞所占百分率均相应较对照组减少;p38、JNK、ERK活化以及c-myc、c-fos的表达均较对照组显著增加;而早期内皮祖细胞条件培养液、晚期内皮祖细胞条件培养液以及人脐静脉内皮细胞条件培养液处理后能够显著抑制血管紧张素Ⅱ所致血管平滑肌细胞DNA合成能力、细胞总蛋白含量、细胞存活率的增加以及阻滞血管平滑肌细胞从G₁期向S期的转化;同样早期内皮祖细胞条件培养液也抑制了血管紧张素Ⅱ所致p38、JNK、ERK的活化以及c-myc、c-fos的表达,其中均以早期内皮祖细胞条件培养液的抑制效果最明显。结论 内皮祖细胞能够抑制血管紧张素Ⅱ所致血管平滑肌细胞增殖,其机制可能与其抑制MAPK信号转导通路的活化以及原癌基因c-myc、c-fos的表达有关。     

NF-κB和Jak-STAT信号途径参与血管紧张素Ⅱ介导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖效应

目的进一步探讨JakSTAT信号途径在血管紧张素Ⅱ介导的主动脉平滑肌细胞增殖效应的作用。方法培养大鼠主动脉平滑肌细胞并行免疫组织化学鉴定,用血管紧张素Ⅱ以不同时间梯度刺激传代培养的大鼠主动脉平滑肌细胞,采用BrdU法测定细胞增殖,裂解细胞后提取细胞总蛋白,分别经免疫共沉淀、Western印迹和细胞免疫荧光化学等方法分析胞内NFκB和Jak/STAT信号分子激活及表达的情况,行不同组间并与阴性对照组做对比。结果在6～30h的平滑肌细胞增殖实验中,6、12h时间段增值最明显;其中12h时AngⅡ组490nm处吸光度值(0.590±0.029)显著高于AG490 AngⅡ组(0.381±0.019),PDTC AngⅡ组(0.481±0.024),氯沙坦 AngⅡ组(0.519±0.026)和SerumFree组(0.30±0.02),P<0.01。Western印迹显示AngⅡ组中NFκB及磷酸化的Jak2、STAT1分别在5、15、60min表达明显达高峰;免疫荧光则表明NFκB及STAT1分子随时间梯度可逆的由胞浆转至胞核,在AngⅡ刺激15min组中STAT1表达水平比对照组(P<0.01)及刺激60min高(P<0.05)。结论AngⅡ能导致VSMC增殖,同时NFκB和磷酸化的Jak2,STAT1表达增加并随刺激时间梯度改变。因此可说明在NFκB和Jak/STAT信号通路激活参与了血管紧张素Ⅱ导致的主动脉平滑肌细胞增殖作用。     

血管紧张素Ⅱ促高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖机制的研究

本工作以培养的正常血压WKY大鼠主动脉平滑肌细胞(ASMC)为对照,探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对培养的SHR ASMC促增殖的机制.结果表明:AngⅡ(10~(-9)～10~(-6)mol/L)对SHR和WKY大鼠的ASMC均有促增殖作用且随剂量增加其作用加强,但对SHR ASMC的促增殖效应明显高于WKY大鼠.应用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)单克隆抗体(A-bFGF)和反义bFGF mR-NA均可明显抑制AngⅡ促SHR ASMC的增殖效应.此外,基础状态下及AngⅡ(10~(-6)mol/L)刺激8h后,SHR ASMC的bFGF基因表达均明显高于WKY大鼠.提示,AngⅡ的促细胞增殖作用部分是通过先诱发bFGF的产生而引起.     

NF-κB和Jak-STAT信号途径参与血管紧张素Ⅱ介导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖效应

目的进一步探讨Jak-STAT信号途径在血管紧张素Ⅱ介导的主动脉平滑肌细胞增殖效应的作用.方法培养大鼠主动脉平滑肌细胞并行免疫组织化学鉴定,用血管紧张素Ⅱ以不同时间梯度刺激传代培养的大鼠主动脉平滑肌细胞,采用BrdU法测定细胞增殖,裂解细胞后提取细胞总蛋白,分别经免疫共沉淀、Western印迹和细胞免疫荧光化学等方法分析胞内NF-κB和Jak/STAT信号分子激活及表达的情况,行不同组间并与阴性对照组做对比.结果在6～30 h的平滑肌细胞增殖实验中,6、12 h时间段增值最明显;其中12 h时AngⅡ组490 nm处吸光度值(0.590±0.029)显著高于AG490 AngⅡ组(0.381±0.019),PDTC AngⅡ组(0.481±0.024),氯沙坦 AngⅡ组(0.519±0.026)和Serum Free组(0.30±0.02),P＜0.01.Western印迹显示AngⅡ组中NF-κB及磷酸化的Jak2、STAT1分别在5、15、60 min表达明显达高峰;免疫荧光则表明NF-κB及STAT1分子随时间梯度可逆的由胞浆转至胞核,在AngⅡ刺激15 min组中STAT1表达水平比对照组(P＜0.01)及刺激60 min高(P＜0.05).结论AngⅡ能导致VSMC增殖,同时NF-κB和磷酸化的Jak2,STAT1表达增加并随刺激时间梯度改变.因此可说明在NF-κB和Jak/STAT信号通路激活参与了血管紧张素Ⅱ导致的主动脉平滑肌细胞增殖作用.     

氯沙坦和硝苯地平对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 :观察血管紧张素 (Ang )对培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的作用及 AT1受体拮抗剂氯沙坦和钙通道阻滞剂硝苯地平对增殖的影响。方法 :幼龄 Wistar大鼠 (4周龄 ) 12只 ,分成对照组、Ang 组、氯沙坦加 Ang 组及硝苯地平加 Ang 组 ,采用组织块贴壁法培养胸主动脉平滑肌细胞 ,分别测定 3H-胸腺嘧啶 (3H- Td R)、3H-亮氨酸 (3H- L eu)的掺入量和细胞周期中各期细胞构成比。结果 :Ang (0 .1μmol/ L)作用 2 4h能使 VSMC的 3H- Td R与 3H- L eu的掺入量比对照组 (1%胎牛血清 )增多 ,且 S期和 G2 / M期细胞增多 ,细胞增殖指数增大。与 Ang 组相比 ,Ang 加氯沙坦 (10 μm ol/ L)组和 Ang 加硝苯地平 (10 μmol/ L)组 ,3H-Td R、3H- L eu的掺入量减少 ,S期细胞构成比和细胞增殖指数减少。结论 :Ang 对 VSMC有促增殖作用 ,能被氯沙坦与硝苯地平所拮抗     

三七皂苷R1对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖、迁移的影响

目的 研究三七皂苷R1(NR1)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的小鼠主动脉血管平滑肌(MOVAS)细胞增殖、迁移的影响.?方法 将MOVAS细胞分为Control组、NR1组、AngⅡ组、AngⅡ+NR1组.采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测MOVAS细胞的增殖活性,采用Transwell小室和划痕愈合实验检测M...     

血管紧张素Ⅱ促血管平滑肌细胞增殖和细胞外基质降解作用的研究

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管平滑肌细胞(VSMCs)基质金属蛋白酶2(MMP2)活性的影响及其与细胞增殖的关系。方法体外培养大鼠主动脉VSMCs,用AngⅡ进行刺激,采用明胶酶图法检测MMP2的活性。结果经AngⅡ处理12、24、48h后,VSMCs的MMP2活性分别为未处理组的237、196、158倍(P<005)。但AngⅡ对VSMCs增殖的促进作用在刺激3h时较明显(P<005)。结论AngⅡ提高VSMCs的MMP2活性晚于促进VSMCs增殖作用,显示AngⅡ这两种作用具有时相差异。     

血管紧张素Ⅱ2型受体转染表达对血管平滑肌细胞增殖及迁移的影响

目的探讨血管平滑肌细胞（VSMC）转染表达血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）2型受体（AT2R）对其增殖和迁移的影响。方法构建带AT2R基因的重组复制缺陷型腺病毒载体（AdCMV-AT2R）,体外转染大鼠主动脉VSMC,用RT-PCR方法检测AT2RmRNA表达,流式细胞仪检测AT2R表达率,用细胞周期、分裂指数、MTT比色法和5-溴尿苷（BrdU）掺入法检测VSMC增殖。VSMC迁移用改良Boyden`s趋化小室法检测,用激光共聚焦显微镜检测细胞骨架蛋白F-actin的表达。结果构建的AdCMV-AT2R体外转染培养VSMC表达率为89.51%。AT2R峰值表达时,其S期和G2-M期细胞比率从31.7%降低到13.9%（P<0.05）,MTT吸光度和BrdU掺入量分别降低61.4%和51.6%(P<0.0(1)。VSMC的跨膜迁移数降低62.2%,F-actin表达明显减少。结论AT2R转染表达可显著抑制体外培养VSMC的增殖和迁移,这一作用对再狭窄防治是有益的。     

血管紧张素II促高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖机制的研究

本工作以培养的正常血压ＷＫＹ大鼠主动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）为对照，探讨血管紧张素ＩＩ（ＡｎｇＩＩ）对培养的ＳＨＲ ＡＳＭＣ促增殖的机制。结果表明：ＡｎｇＩＩ（１０＾－９￣１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ）对ＳＨＲ和ＷＫＹ大鼠的ＡＳＭＣ均有促增殖作用且随剂量增加其作用加强，但对ＳＨＲ ＡＳＭＣ的促增殖效应明显高于ＷＫＹ大鼠。应用碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）单克隆抗体（Ａ－ｂＦＧＦ）和反义ｂＦＧＦｍＲ－Ｎ     

骨桥蛋白参与血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞迁移

目的检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对骨桥蛋白(OPN)表达的影响及其涉及的信号传导途径,并探讨OPN在AngⅡ诱导中膜平滑肌细胞(VSMCs)迁移中的作用.方法采用贴壁法培养SD大鼠胸主动脉的VSMCs.以免疫印迹(Western blot)法检测OPN表达.运用Transwell观察反义OPN在AngⅡ诱导的VSMCs迁移中的作用.结果 (1)体外培养的大鼠VSMCs在基础状态下表达一定水平的OPN蛋白,经10-7mol/L AngⅡ诱导24 h后,OPN蛋白水平与对照组相比增加1.3倍(P＜0.05);(2)预先给予AngⅡ1型(AT1)受体拮抗剂氯沙坦(losartan)、胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂PD98059和P38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB202190后,AngⅡ诱导的OPN的表达分别下降44.2%、23.6%及72.5%(P＜0.05),而其2型(AT2)受体拮抗剂PD123319对OPN的表达没有影响.(3)反义OPN可以明显抑制AngⅡ诱导的VSMCs迁移(每个视野平均迁移细胞数目26.34±5.47 vs 50.23±6.12,P＜0.05),而OPN正义、错配义组无此变化.结论 (1)AngⅡ上调VSMCs中OPN的表达;(2)AT1受体、ERK和P38MAPK信号系统参与AngⅡ诱导的OPN表达.(3)OPN参与AngⅡ诱导的VSMCs迁移.     

萘哌地尔衍生物YMⅢ对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的 研究萘哌地尔衍生物YMⅢ对血管紧张素Ⅱ诱导Wistar大鼠和自发性高血压大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用及机制.方法 将Wistar大鼠和自发性高血压大鼠胸主动脉平滑肌细胞进行体外培养,采用四甲基偶氮唑盐比色法检测YMⅢ对胸主动脉平滑肌细胞和血管紧张素Ⅱ诱导胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响;用实时逆转录聚合酶链反应技术检测血管紧张素原、c-myc mRNA表达.结果 未经血管紧张素Ⅱ处理的胸主动脉平滑肌细胞.0.1 μmol/L YMⅢ能抑制Wistar大鼠和自发性高血压大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖;YMⅢ(0.01、0.05、0.1 μmol/L)能呈浓度依赖性抑制血管紧张素Ⅱ所致Wistar大鼠和自发性高血压大鼠胸主动脉平滑肌细胞的增殖;YMⅢ(0.05～0.1 μmol/L)作用能使血管紧张素Ⅱ所致Wistar大鼠血管紧张素原、c-myc mRNA表达水平下调,而各浓度YMⅢ均能下调血管紧张素Ⅱ所致自发性高血压大鼠胸主动脉平滑肌细胞的血管紧张素原、c-myc mRNA表达.结论 YMⅢ明显抑制血管紧张素Ⅱ诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞的增殖,且抑制增殖作用在自发性高血压大鼠比在Wistar大鼠明显,其作用机制可能与下调血管紧张素原、c-myc mRNA的表达有关.