基于重组优势多表位抗原的梅毒间接酶联免疫吸附试验与梅毒螺旋体血凝试验和甲苯胺红不加热血清试验检测梅毒螺旋体抗体的比较研究

目的 建立操作简便、特异性好、敏感性高的血清梅毒抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)。方法 通过计算机分析选择梅毒螺旋体优势抗原表位,构建了梅毒螺旋体多表位优势嵌合抗原(rTpN15-TpN17-TpN42-TpN47)表达载体,转化宿主菌HB101进行表达,纯化获得高纯度融合抗原。在此基础上,以纯化抗原包被酶联板,建立检测血清中梅毒抗体的间接ELISA法。利用该方法与梅毒螺旋体血凝试验(TPHA)和甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)同时检测了126例梅毒可疑血清样本,对检测结果进行了比较研究。结果 梅毒螺旋体多表位优势嵌合抗原(rTpN15-TpN17-TpN42-TpN47)在大肠杆菌中获得了高效表达,并成功建立了检测血清中梅毒抗体的间接ELISA法及试剂。对126例梅毒可疑血清样本的检测结果,ELISA、TRUST、TPHA的检出阳性率分别为75.40％(95/126)、72.22％(91/126)、70.63％(89/126),其中TRUST有29例,TPHA有6例为可疑阳性。TPHA检测的6例可疑阳性中,有5例ELISA、TRUST均为阳性;而TRUST测出的29例可疑样品中,仅7例ELISA、TPHA阳性。结论 多表位嵌合抗原ELISA试剂在特异性、敏感性与TPHA法相近,但明显优于TRUST法。     

梅毒螺旋体优势表位抗原嵌合表达构建双抗原夹心法的研究

目的用基因工程方法表达嵌合的梅毒螺旋体优势表位抗原,建立检测血清梅毒抗体的双抗原夹心酶联免疫方法(double antigen sandwich enzyme-linked immunosorbent assay,DAS-EIA)。方法通过计算机软件分析选择梅毒螺旋体优势抗原表位,用聚合酶链式反应(PCR)扩增优势表位基因,构建了梅毒螺旋体多优势表位嵌合抗原(rTpN15-TpN17-TpN47)表达载体,转化宿主菌BL21(DE3)进行表达,亲和层析柱法纯化获得高纯度融合抗原,并用其建立检测梅毒抗体的DAS-EIA。结果表达的优势表位嵌合抗原具有很好的抗原性。用其建立的嵌合抗原DAS-EIA检测确诊的50份阳性和30份阴性血,阳性检出率和阴性检出率都是100%。结论嵌合抗原DAS-EIA法具有比间接EIA和重组单抗原DAS-EIA更高的灵敏度和检出正确率,其检测水平已经达到国外TPHA的水平。该方法的建立为临床检测梅毒开辟了新的方法。     

螺旋体传染病

梅毒螺旋体多表位抗原的改构及在双抗原夹心检测梅毒抗体中的应用——张贺秋等(北京军事医学科学院基础医学研究所100850)《中国医学检验杂志》2004，5(6)：549-551[研制用于包被和标记重组梅毒螺旋体表位抗原，建立双抗原夹心酶联免疫检测梅毒抗体。方法：利用计算机Godlkey软件分析梅毒螺旋体基因，确立优势抗原表位(rTpN17-TpN15-TpN42-Tp-N47)，并分别克隆表达四个抗原，然后将四个抗原串联成一个嵌合表达蛋白用于包被，在此抗原的末端连接4个赖氨酸，作为辣根过氧化物酶标记用梅毒抗原，建立双抗原夹心检测梅毒抗体。     

四种梅毒螺旋体检测方法的应用分析

应用酶联免疫吸附试验(ELISA)、梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)分别检测血清中的梅毒螺旋体抗体,荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测局部分泌物或渗出物中梅毒DNA.结果 :TRUST、TP-ELISA、TPHA、FQ-PCR法灵敏度分别为84.3%、96.1%、94.1%、97.1%,特异性分别为93.5%、98%、100%、100%.TRUST在一、三期梅毒的阳性率最低(66.7%和50%);FQ-PCR在一期梅毒阳性率最高.提示TP-ELISA可作为输血和手术前检测的一种理想筛查方法;TPHA可作为梅毒确诊方法;TRUST可应用于梅毒治疗疗效监测;早期梅毒的诊断首选FQ-PCR.     

梅毒螺旋体重组抗原TmpA的表达及其在梅毒诊断中的应用

目的：用基因工程方法表达梅毒螺旋体的TmpA重组抗原,建立检测梅毒螺旋体抗体酶联免疫试验（EIA）。方法：用聚合酶链反应（PCR）扩增梅毒螺旋体TmpA基因,克隆到原核表达载体pQE-30中表达,用亲和层析柱法纯化该重组抗原,并用其建立检测梅毒螺旋体抗体的EIA。结果：表达的重组抗原相对分子质量构为39000,具有良好的抗原性。用其建立的EIA检测10份阳性参比血清,均为阳性,灵敏度为100%;检测20份阴性参比血清,均为阴性,特异性为100%。检测12份I期梅毒（早期感染）和24份Ⅱ期和晚期梅毒患者血清,阳性率分别为91.67%（11/12）和100%（24/24）。结论：用该重组抗原建立的EIA可检出97.2%（35/36）以上梅毒患者,仅2.8%（1/36）漏检。为进一步提高该试剂的灵敏度,可能需增加梅毒螺旋体的其它重组抗原。     

应用全自动微孔板法改进TRUST试验检测梅毒抗体

目的:用全自动微孔法代替传统方法检测梅毒抗体,并对改进法进行对比分析和评价.方法:用全自动酶免分析仪法与传统甲苯胺红卡片试验(TRUST)法对比检测了75例梅毒患者和1 061份献血员的血清,不符合者用螺旋体血球凝集试验(TPHA)法验证.对18 000份献血员标本用改进的方法检测,并与传统方法对比,用TPHA法验证.结果:改进方法与传统方法相比,75例梅毒患者血清均呈阳性结果,但改进方法比传统法的凝集颗粒大而均匀,更易判读.在1 061份献血员血清中,用改进的方法检出2份阳性血清,并经TPHA证实,用传统方法则判为可疑血清.用改进方法在18 000份献血员的血清中的7份标本呈阳性,TPHA方法亦为阳性,而传统方法3例呈阳性;2例可疑,2例阴性.结论:改进的全自动微孔板法比传统方法具有敏感性高、特异性好、自动化程度高、易于标准化等优点,适合献血员筛查和临床大批量梅毒患者标本的检验.     

甲苯胺红不加热血清试验和胶体金法联合检测梅毒螺旋体的临床应用

目的：探讨甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）和胶体金法（SYP）联合检测在梅毒筛查和诊断方面的应用价值。方法：用TRUST法检测梅毒非特异性抗体，胶体金法、梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）检测梅毒特异性抗体。结果：TRUST对2期梅毒的阳性率较高，为100％，而对1、3期梅毒的阳性率较低，平均为83．96％，胶体金法对各期梅毒的检出率均较高，平均为99．06％，与TPPA差异无统计学意义。结论：胶体金法其特异性和灵敏度与TPPA相比差异无统计学意义，但比TPPA更方便快捷。根据胶体金和TRUST的实验结果，结合症状和病史可初步对梅毒进行诊断分期。     

384例性病门诊就诊者荧光梅毒螺旋体抗体吸附试验结果分析

目的对384例荧光梅毒螺旋体抗体吸附试验（FTA_ABs）检测结果进行分析,更好地为临床提供梅毒诊断的依据。方法对2012年确诊梅毒并经FTA—ABS检测为阳性的384例患者的血清,同时用梅毒螺旋体明胶颗粒凝集法（TPPA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）进行复核检测,并对其中的40例患者进行脑脊液FTAABS检测。结果384例FTAABS检测确诊的阳性病例中,梅毒抗体IgG、IgM同时阳性的59例（占15．4％）,抗体IgG阳性IgM阴性的325例（占84．6％）。40例脑脊液中抗体IgG阳性的12例,未见抗体IgM阳性。梅毒合并感染HIV的患者有29例（占7．6％）,其中RPR滴度〉1：8有21例（72．4％）。单纯梅毒感染的355例（92．4％）,其中RPR滴度〉1：8有97例（27．3%）。结论FTAABS试验敏感性和特异性高,值得在临床中推广。     

ELISA和TRUST检测梅毒螺旋体方法比较分析

目的 比较ELISA(酶联免疫吸附试验)、TRUST(甲苯胺红不加热血清试验)法诊断梅毒螺旋体感染的方法学差异.方法 用目前国内最常用的诊断梅毒螺旋体感染的TRUST试剂及ELISA试剂检测722例标本,同时与TPPA(梅毒螺旋体明胶凝集试验)的检测结果进行比较,从而得到各试验的假阴性率和假阳性率.结果 对722份样本的检测中,ELISA和TPPA的阳性符合率为98.26％,假阴性率和假阳性率分别为0.46％和1.91％,2种方法差异无统计学意义(P ＞0.05); TRUST和TPPA的阳性符合率为84.39％,假阴性率和假阳性率分别为21.08％和5.10％;ELISA和TURST检出率差异有统计学意义(P＜0.01).结论 ELISA测定梅毒螺旋体的方法在日常大量标本检验时优于TRUST.     

应用TP-lgM-WB法诊断早期先天梅毒

目的 研究新生儿中胎传梅毒感染的血清梅毒螺旋体蛋白印迹试验（TP-IgM-WB）水平，探讨其临床意义。方法 对58例梅毒孕妇所产60例（2例双胞胎）新生儿血清，应用梅毒螺旋体蛋白印迹试验（TP-IgM-WB）检测，并与TRUST、明胶颗粒凝集试验（TPPA）方法平行测定。结果 60例新生儿TP-IgM-WB法检出阳性27例，占45％（27／60），TRUST和TTPA阳性各59例。结论 确诊27例新生儿为早期先天梅毒婴儿，为临床提供了明确的诊治依据，对防治梅毒有重要意义。     

梅毒血清学检测的适宜方法探讨

目的探讨梅毒甲苯胺红不加热血清反应素试验（TRUST）和梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）在梅毒检测中的应用价值，建立实验室梅毒检测和报告系统。方法用TRUST作为被检测标本的梅毒筛查试验，对筛查阳性标本进一步作TPPA确认试验。对TRUST阴性的高危人群，作TPPA复检。结果8637份被检血清，TRUST阳性者428例，阳性率为4．96％（428／8637）。对TRUST检出的428例阳性标本，TPPA确证阳性325例，阳性符合率为75．93％（325／428）。共有22例TRUST阴性的高危人群，进行了TPPA复检，结果均为阴性。结论TRUST筛查存在一定的假阳性，可用TRUST进行梅毒筛查，对筛查阳性标本进一步作TPPA确认试验。对TRUST阴性的高危人群，应进一步作TPPA复检，两试验均阴性者，告知其可四周后复查，以减少梅毒的误诊和漏诊。     

ELISA法检测梅毒螺旋体的临床应用评价

长期以来临床实验室诊断梅毒螺旋体感染的血清实验主要分为两大类 ,一类为非梅毒螺旋体试验 ,代表实验有不加热血清反应素试验 (USR )、甲苯胺红不加热试验(TRUST)和快速血浆反应素试验 (RPR)等。另一类为梅毒螺旋体血清试验 ,如TPHA和TPPA等。在临床应用中前一类试验主要用于梅毒感染的初筛和疗效观察 ,后一类用于梅毒感染的确认[1] 。由于非梅毒螺旋体试验检测的抗体不是梅毒特异性抗体 ,一些其他疾病如结核、自身免疫性疾病、猩红热等也可出现阳性反应 ,加之其灵敏度和特异性也只在 70 %～ 80 % [2 ] ,故认为USR、TRUST和RPR…     

螺旋体传染病

基于重组优势多表位抗原的梅毒间接酶联免疫吸附试验与梅毒螺旋体血凝试验和甲苯胺红不加热血清试验检测梅毒螺旋体抗体的比较研究——张贺秋等(北京中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所100850)；《中国性病艾滋病防治&;gt;，2002，8(5)：266—268[目的：建立操     

两种检测梅毒螺旋体抗体方法的比较

近年来 ,我院以酶联免疫吸附试验 (EL ISA)法及甲苯胺红卡片试验 (TRU ST)分别检测了 34例临床梅毒患者、6例质控梅毒阳性及 6 10 9例术前验血患者血清 ,旨在比较二者梅毒螺旋体的敏感性及特异性 ,现将结果报告如下。一般资料 :检测血清共包括三种 :38份血清为我院 1998～2 0 0 3年 6 10 9例患者输血前检查梅毒螺旋体抗体的阳性标本 ,均经两种以上检测方法验证 ;34份为临床确诊梅毒患者的阳性标本 ;6份为临检部提供的质控阳性血清。方法 :TRUST采用甲苯胺红不加热血清凝集法 ;EL ISA法在包被抗原的微孔中加入 5 0 μl待测血清和 5 0…     

3种梅毒检测方法的比较

目的：对3种梅毒检测方法进行对比分析，选择合适的方法进行献血者的筛查。方法：用非特异性的甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）、酶联免疫吸附试验（ELISA）方法对献血者进行梅毒筛检，阳性标本用梅毒确证试验（TPPA）法进行确证。结果：TRUST法灵敏度为60％（42／70），假阳性率6．67％（3／45），漏检率40％（28／70）；ELISA法灵敏度为98．57％（69／70），假阳性率2．82％（2／71），漏检率为1．43％（1／70）。结论：ELISA法具有较高的灵敏度和特异性，漏检率较低，非常适合用于献血者的梅毒筛查。     

三种梅毒螺旋体抗体检测方法的应用分析

目的 探讨梅毒螺旋体抗体磁微粒化学发光法（ ＣＭＩＡ）、梅毒螺旋体抗体明胶颗粒凝集试验 （ＴＰＰＡ）和梅毒甲苯胺红血清不加热血清试验（ＴＲＵＳＴ）在住院和门诊人群血清样本进行梅毒诊断中的临床 应用,旨在优化梅毒检测流程,协助临床诊断与治疗。 方法 用 ＣＭＩＡ 对血清中梅毒螺旋体抗体进行初筛, 初筛阳性者均用 ＴＰＰＡ 进行确认,ＴＰＰＡ 确认为阳性的标本加做 ＴＲＵＳＴ,ＴＲＵＳＴ 为阳性的标本进一步检测其 滴度。 结果 ９ ４８０ 例标本中,ＣＭＩＡ 阳性 ２１４ 例,ＴＰＰＡ 确认阳性 １９４ 例,ＴＲＵＳＴ 阳性 ４６ 例。 ＣＭＩＡ 阳性结果 的 Ｓ ／ＣＯ 值 ＜ ５ 的阳性标本确认率仅为 ５０％ , ＣＭＩＡ 阳性结果的 Ｓ ／ＣＯ 值 ＞ ９ 的 标 本, ＴＰＰＡ 确 认 率 为 ９８ ３％ 。 ＣＭＩＡ 阳性结果的 Ｓ ／ＣＯ 值越大,ＴＰＰＡ 的阳性符合率也相应增加。 结论 ＣＭＩＡ 检测梅毒抗体反应 阳性结果 Ｓ ／ＣＯ 与 ＴＰＰＡ 的阳性符合率呈正相关。 ＣＭＩＡ 适合大批量初筛,其阳性结果用 ＴＰＰＡ 确认,ＴＰＰＡ 确认为阳性者,再进一步做 ＴＲＵＳＴ,以提高检验结果的准确性,实行孕期干预,实现母婴传播阻断。     

三种方法检验梅毒血清抗体比较

梅毒的临床可见症状仅见于一期显发阶段、二期显发阶段和晚期,非显发阶段不仅无可见症状,患者也无自觉症状,临床诊断梅毒常需要血清学检验的结果来支持,有时甚至完全依赖血清学检验的结果。梅毒螺旋体感染的血清学检验方法,分为非特异性与特异性两类,非特异性检验方法以牛心磷脂为抗原,至今仍在广泛应用的有快速血浆反应素试验（RPR）和甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）,随着梅毒螺旋体基因工程特异性抗原的问世,梅毒螺旋体感染的特异性检验方法相继出现,本文报告ELISA与RPR、TRUST检测梅毒血清抗体的比较结果。     

6种非梅毒螺旋体抗原血清学试验试剂对梅毒患者随访的影响

目的探讨几种非梅毒螺旋体抗原血清学试验试剂对梅毒患者随访的影响。方法按照非梅毒螺旋体抗原血清学定量试验稀释样本的原则,充分稀释11份梅毒患者血清,每份连续稀释成12个浓度,用1种梅毒快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)和5种梅毒甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)试剂检测稀释好的血清,观察不同试剂对样本的反应性。结果 6种试剂对同一份样本的检测能力不尽相同,RPR试剂与5种TRUST试剂的检测结果基本不相同,两者无可比性。TRUST试剂之间只有2种试剂的结果相似,其他的差异较大,甚至同一份样本的最高滴度是最低滴度的16倍。对所有样本来说,某些试剂检测的滴度有总体偏低或偏高的趋势。结论不同方法或不同厂家的同一方法对梅毒患者个体的治疗随访有影响,相互间检测结果不能互认,因此临床实验室在梅毒的诊断、治疗和随访中,要注意使用相同的非梅毒螺旋体抗原血清学试验试剂。     

梅毒螺旋体不同血清学检测方法对比分析与评价

<正>梅毒是由梅毒螺旋体苍白亚种感染所致的一种全身性的慢性传染病,主要通过性接触传播。梅毒临床表现复杂多样并可累及全身多个器官,严重危害人群健康。梅毒感染后,机体可产生非特异性和特异性抗体,针对这两种抗体的梅毒螺旋体血清学检测具有重要诊断价值。本研究对目前临床常用的梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)及酶联免疫吸附试验(ELISA)3种不同血     

无偿献血者血清梅毒抗体的检测

使用TRUST及ELISA方法检测济宁市中心血站无偿献血者血清60012份，结果梅毒抗体阳性22份，阳性率0.037％。有不洁性生活史者、旅游、餐饮服务业者、无业者及企事业员工为梅毒感染的高危人群。