穿琥宁抑制H3N2病毒诱导细胞凋亡的研究

目的 探讨穿琥宁抑制甲3型（H3N2）流感病毒诱导细胞凋亡的研究。方法 采用细胞形态学变化、计算凋亡细胞的百分率和流式细胞仪测定等方法。结果 （1）在光镜下观察了流感病毒感染的狗肾传代细胞（MDCK），感染的MDCK细胞可见细胞凋亡特有的形态学变化。如：可见广泛的染色质凝集成数个紧密的块状、胞浆浓缩及胞浆内大量空泡形态等。（2）病毒感染组MDCK细胞凋亡的百分率显著高于其它对照组（P＜0．001）。（3）药物病毒组、药物对照组和细胞对照组比较无显著性差异（P＞0．05）。（4）抗流感病毒药效琥宁（中草药）能明显抑制甲3型流感病毒诱导的细胞凋亡（P＜0．001）。（5）病毒感染组的MDCK细胞“亚G1峰”明显高于其它对照组。结论 本研究说明甲型流感病毒能诱导细胞凋亡，而抗流感病毒中草药穿琥宁能抑制其诱导的细胞凋亡。     

鱼腥草抗甲Ⅰ型流感病毒诱导细胞程序化死亡的初步研究

目 的探讨鱼腥草阻断甲Ⅰ型流感病毒诱导MDCK（Madin—Darby canine kidney MDCK）细胞程序化死亡（凋亡）的效果。方法 采用姬姆萨染色光镜下观察细胞形态变化,annexinV／PI染色流式细胞技术测定。结果 1病毒感染组MDCK细胞凋亡百分率显著高于其它组（P〈0．01）;2 试验组分别与药物对照和细胞对照组比较无差异（P〈0．05）。结论 该研究提示甲Ⅰ型流感病毒可诱导MDCK细胞凋亡,而鱼腥草能阻断甲Ⅰ型流感病毒诱导MDCK细胞凋亡。     

穿琥宁抑制流感病毒诱导狗肾传代细胞凋亡

目的 :探讨穿琥宁对流感病毒诱导狗肾传代细胞 (MDCK)的影响。方法 :采用观察细胞形态学改变 ,计算细胞凋亡的百分数及流式细胞仪 (FCM )测定法。结果 :病毒感染组细胞在光镜下可见细胞核产生凋亡的形态变化 ,细胞凋亡百分率 (凋亡指数AI)高于正常细胞 (P <0 .0 1) ,且A/南昌 / 692 / 97(H1 N1 )高于B/南昌 / 495 / 97毒株 (P <0 .0 1) ,说明流感病毒可诱导细胞凋亡 ,而H1 N1 型株比B型株强 ;H1 N1 型和B型流感病毒感染细胞组的AI明显高于穿琥宁与流感病毒同时作用的细胞组(P <0 .0 1)。结论 :穿琥宁可抵抗流感病毒诱导细胞凋亡 ,其抑制效率类似利巴韦林。     

病毒唑体外抗副流感病毒(Ⅲ型)作用的实验研究

目的:观察病毒唑体外对副流感病毒( 型)的抑制作用。方法:采用细胞病变抑制实验,观察病毒唑在Hela细胞中对副流感病毒( 型)的抑制作用。结果:病毒唑半数中毒浓度(TC50 )为1783.86μg/ m l;抗副流感病毒( 型)的半数有效浓度(EC50 )为11.5 3μg/ ml,治疗指数(TI)为15 4 .71;病毒唑对副流感病毒( 型)的抑制作用存在明显的量效反应关系(P<0 .0 1) ;在感染病毒后0～2 4 h,每隔2小时加一次药,病毒唑的5 0、2 5、12 .5、6 .2 5 μg/ ml组对副流感病毒( 型)均有抑制作用(P<0 .0 1) ;病毒唑对副流感病毒( 型)有预防和中和作用(P <0 .0 1)。结论:病毒唑在Hela细胞中对副流感病毒( 型)有明显的抑制作用,其作用机制是多途径的。     

科罗索酸上调Bax表达诱导宫颈癌细胞凋亡

目的探讨科罗索酸对宫颈癌细胞Hela的凋亡诱导作用。方法不同浓度(10～50μmol·L~(-1))科罗索酸处理宫颈癌Hela细胞,MTT法检测细胞活性,SPSS12.0统计软件包计算半数抑制浓度(IC_(50)),流式细胞术检测细胞凋亡,荧光检测法检测凋亡酶caspase-3活性,western blot检测细胞蛋白Bax、Bcl-2表达。结果科罗索酸抑制宫颈癌Hela细胞活性随药物浓度及时间的增加而增高,24、48及72 h的IC_(50)分别为45、34、28μmol·L~(-1)。科罗索酸诱导Hela细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.01),凋亡酶活性也明显高于对照组(P<0.01),科罗索酸可上调Bax而不影响Bcl-2的表达。结论科罗索酸可抑制宫颈癌Hela细胞活性,诱导细胞凋亡,其机制可能与上调Bax蛋白表达有关。     

苦豆碱对宫颈癌Hela细胞的增殖、凋亡的影响

摘要：目的:考察苦豆碱（ALO）对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法:体外培养人宫颈癌Hela细胞,采用CCK-8法检测ALO对Hela细胞增殖的影响,实验设置对照组（不作给药处理）以及ALO浓度分别为80,90,100,110,120,130μg·ml-1的实验组,给药时间设置为24 h和48 h。采用流式细胞术检测ALO对Hela细胞凋亡的影响,根据CCK-8结果,设置实验分组为:对照组、ALO低(90μg·ml-1)、中(110μg·ml-1)、高(130μg·ml-1)浓度组; Western blot法测定ALO对Hela细胞中凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）和周期蛋白G1/S-特异性周期蛋白-D1（Cyclin D1）相对表达量的影响,实验分组同流式细胞术。结果:与对照组相比,ALO各浓度组细胞在培养24和48 h后,增殖抑制率显著升高（P<0.05或P<0.01）,各实验组细胞凋亡均明显增多（P<0.05或P<0.01）,各实验组ALO作用于Hela细胞48 h后,均能够显著增加凋亡蛋白caspase-3的表达（P<0.01）,下调细胞周期蛋白表达量（P<0.01）,各指标变化呈剂量和时间依赖性。结论:ALO能够明显抑制宫颈癌Hela细胞的增殖,同时抑制周期蛋白表达,进一步抑制细胞增殖。并促进其凋亡蛋白的表达,进而促进凋亡。     

白藜芦醇诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡及其机制

目的探讨白藜芦醇诱导人宫颈癌Hela细胞的凋亡作用及其分子机制。方法应用不同浓度的白藜芦醇作用于人宫颈癌Hela细胞,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测药物对细胞的增殖抑制率;流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡、细胞周期分布：免疫组化法检测Survivin及Caspase-3的表达。结果白藜芦醇能明显抑制Hela细胞的增殖,并呈剂量和时间依赖性。经白藜芦醇处理Hela细胞后,FCM分析发现各实验组S期细胞比例增高,G2／M期细胞比例减少,凋亡率明显高于对照组,并呈剂量依赖性（P〈0．01）;各实验组Heal细胞Survivin的表达均低于对照组,而Caspase-3的表达均高于对照组（P〈0．01）。结论白藜芦醇能明显抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,诱导其凋亡,其机制可能与抑制Survivin的表达、上调Caspase-3的表达有关。     

金龙胆草总皂苷诱导Hela细胞和SPC-A1细胞凋亡的研究

目的:研究金龙胆草总皂苷对宫颈癌(Hela)细胞和肺癌(SPC-A1)细胞增殖的影响。方法:采用MTT法检测金龙胆草总皂苷对Hela细胞和SPC-A1细胞生长的影响;琼脂糖凝胶电泳法检测药物作用后细胞DNA变化;Western blot法检测药物对半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)含量的影响。结果:10-3～10-7mol·L-1金龙胆草总皂苷对Hela细胞和SPC-A1细胞的生长抑制有明显的剂量和时间依赖性,并诱导细胞发生凋亡;DNA凝胶电泳呈凋亡特有的梯状带;Caspase-3含量在药物作用前后有变化。结论:金龙胆草总皂苷是通过诱导Hela细胞和SPC-A1细胞凋亡而抑制其生长的。     

RNA干扰下调宫颈癌Hela细胞Survivin基因对Hela细胞增殖能力影响的研究

目的:通过RNA干扰技术下调宫颈癌Hela细胞Survivin基因表达,观察Hela细胞增殖能力的变化情况。方法:当细胞生长至70.0%左右覆盖率时进行脂质体转染,细胞分为空白组(Hela细胞未转染组)、阴性对照组(转染空质粒)、实验组[Survivin-siRNA(+)质粒转染Hela细胞]三组。采用脂质体介导的方法将特异针对Hela细胞Survivin基因的干扰RNA转染入细胞后不同时间观察细胞生长形态的变化,记录转染后第1天到第5天每天的生长情况并绘制生长曲线,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验记录24 h,48 h,72 h活细胞数量,总结分析细胞生长情况。结果:RNA干扰后出现细胞生长速度减慢,实验组与空白组比较,从第3天到第5天空白组细胞数明显高于实验组(第3天P<0.05,第4天、第5天P<0.01)。实验表明,干扰24 h后实验组活细胞数量与空白组、阴性对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05),48 h及72 h实验组活细胞数明显低于空白组与阴性对照组(P<0.01)。结论:Survivin基因沉默能够有效特异地抑制宫颈癌Hela细胞的体外恶性增殖能力,有利于细胞的凋亡,Survivin基因可以作为宫颈癌基因治疗的靶点。     

依地福新对Hela细胞生长的抑制作用及其机制研究

目的:观察依地福新对人宫颈癌Hela细胞的体外生长抑制作用,并进一步探讨其作用机制。方法:细胞中分别加入不同浓度的依地福新(0.5、1.0、5.0、10.0μmol.L-1)处理96h,并设立未加依地福新的对照组。应用MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞周期分布;染色法检测细胞凋亡率。结果:与对照组比较,不同浓度依地福新处理Hela细胞24～96h后,细胞增殖显著受到抑制,并呈浓度及时间依赖性;1.0、5.0、10.0μmol.L-1浓度依地福新处理72h后,Hela细胞G0/G1期细胞数量显著增加,S期细胞数量显著降低(P<0.01);各浓度组细胞凋亡率均显著增加(P<0.01)。结论:依地福新对Hela细胞具有生长抑制作用,其机制可能与阻滞细胞周期及诱导凋亡有关。     

小剂量顺铂对Hela细胞凋亡的实验研究

目的：实验研究小剂量顺铂对放疗诱导Hela细胞凋亡的作用。方法：将细胞分为空白对照组、单纯化疗组、单纯放疗组、放疗加化疗组4组,采用TUNEL法分另1检测各组细胞的凋亡率。结果：单纯放疗、化疗都可诱导Hela细胞凋亡,顺铂(化疗)可以明显增强放疗诱导的细胞凋亡。结论：小剂量顺铂可明显增加放疗诱导的Hela细胞凋亡,为临床应用小剂量顺铂使放疗增效提供了理论依据。     

紫杉醇诱导Hela细胞凋亡及其与凋亡相关蛋白的关系

目的　探讨Taxol诱导Hela细胞凋亡的特点及细胞凋亡的分子机制。方法　用紫杉醇诱导Hela细胞凋亡 ,采用HE、TUNEL电镜及流式细胞仪分别检测凋亡及观察凋亡细胞的形态变化特点。采用免疫组化S P法及ELISA等分别检测凋亡相关蛋白PCNA及caspase 3的表达和活性的动态变化。结果　紫杉醇可诱导Hela细胞凋亡并可使Hela细胞出现较多的病理性核分裂像以及细胞核的多微核化 ;正常增生的Hela细胞有一定的PCNA表达 ,加入Taxol后 ,与对照组比较 ,其表达明显增强 ;不同浓度的Taxol可使Hela细胞中caspase 3活性的增高 ,并具有时间及剂量的依赖性。结论　Taxol可诱导Hela细胞凋亡 ,Hela细胞凋亡是Caspase 3依赖性的     

鱼腥草及三丫苦对甲型流感病毒NPAG表达的影响

目的：探讨鱼腥草及三丫苦对甲型流感病毒（nucleo protein antigen,NPAG）表达的影响,了解鱼腥草及三丫苦抗甲型流感病毒的分子机制。方法以胶体金法测定NPAG的表达。瞬间转染,实验分为：Hela细胞组、空质粒组[PCDNA3.1（＋）/empty]、重组质粒组[PCDNA3.1（＋）/NP）]、脂质体组、三丫苦醇提物组和鱼腥草油组。药物实验加入重组质粒同时将药物加入培养细胞孔中进行干预。转染48h后,测定其上清液NPAG的表达。结果胶体金法测试显示：Hela细胞组、PCDNA3.1（＋）/empty组、脂质体组、鱼腥草油组为阴性;PCDNA3.1（＋）/NP组、三丫苦醇提物为阳性,NPAG浓度1：64。结论鱼腥草油组可抑制甲型流感病毒NPAG的表达,能抗甲型流感病毒。三丫苦醇提物组不影响NPAG的表达。     

转染p21基因对人宫颈癌Hela细胞的影响

目的研究转染p21基因对人宫颈癌Hela细胞的抑制及凋亡影响。方法用Lipofectamine2000脂质体介导,将质粒pcDNA3．1（＋）-p21基因转入人宫颈癌Hela细胞株;免疫组化法检测转染021基因后,其编码蛋白在Hela细胞的表达情况;描绘p21基因转染后Hela细胞的增殖曲线;WST-1法测定OD值,计算细胞生长抑制率及流式细胞仪检测p21基因转染对Hela细胞的凋亡影响。结果免疫组化法显示p21基因转染后在Hela细胞的胞核内高表达;p21基因的表达可抑制Hela细胞的体外生长,且Hela／021细胞的生长曲线较对照组明显降低;WST-1法显示Hela／p21的细胞活力与对照组相比有显著性差异（P〈0．05）;流式细胞仪检测显示转染p21基因的Hela细胞凋亡率显著高于对照组,约20％以上。结论转染p21基因对Hela细胞具有明显的抑制和诱导凋亡作用。     

顺铂增加人Hela细胞放疗敏感性涉及细胞周期的研究

目的 探讨小剂量顺铂增加人Hela细胞对电离辐射敏感性涉及细胞周期动力学的机理。方法 将Hela细胞分为空白对照组、单纯放疗组、单纯化疗组和放疗加化疗组，用流式细胞仪测定细胞凋亡率和细胞周期变化，采用SP免疫组化法检测Hela细胞受作用后p53基因蛋白表达情况。结果 单纯放疗、单纯化疗均可诱导Hela细胞凋亡，而放疗加化疗组细胞凋亡率明显增加，经顺铂作用后，Hela细胞周期发生明显变化，表现为G1期减少、S期和G2／M期增加，突变型p53表达减弱。结论 小剂量顺铂可通过改变培养的人Hela细胞周期，诱导细胞G2／M期延迟从而提高放疗敏感性，可能与其内在的p53基因表达改变有关。     

硫芥诱导Hela细胞发生凋亡及坏死

目的 研究硫芥诱导的Ｈｅｌａ细胞凋亡的作用。方法 生长在ＤＭＥＭ培养基中的Ｈｅｌａ细胞与不同浓度的硫芥作用３小时,凋亡用电镜,电泳及流式术检测。结果 低浓度硫芥（１μｍｏｌ．Ｌ＾－１）抑制细胞生长;较高浓度（１－１００μｍｏｌ．Ｌ＾－１）俣细胞主要在Ｇ１期阻滞,发生典型的凋亡形态改变,提了细胞ＤＮＡ进行琼脂糖凝胶电泳,出现“ＤＮＡＬａｄｄｅｒ”,流式术观察表明硫芥处理３小时后,细胞撤药培养１２小时