性别决定基因—SRY

性别决定基因──ＳＲＹ复旦大学遗传学研究所卢珂综述邱信芳审阅人的性别决定机制一直是人们关心的问题，这可以追溯到亚里斯多德时代。直到１９００年，一般还认为人胚胎的性别是由环境因素（如母体营养）决定的。重新发现孟德尔定律以后才陆续弄清大多数动物的性别是由...     

体外扩增人类性别决定基因作产前性别测定的初步研究

根据位于人类Ｙ染色体短臂的性别决定区ＳＲＹ基因的序列，人工合成一对引物。以正常男、女性白细胞ＤＮＡ为对照，以ＰＣＲ技术体外扩增了１６例绒毛ＤＮＡ样本，结果有９例出现Ｙ特异性扩增带，余为阴性，说明这９例为男性胎儿，另７例为女性胎儿。用扩增性别决定基因的方法作产前性别测定，在临床上可用于Ｘ连锁遗传病的辅助诊断和性异常的研究。     

体外扩增人类性别决定基因作产前性别测定的初步研究

根据位于人类Ｙ染色体短臂的性别决定区ＳＲＹ基因的序列。人工合成一对引物。以正常男、女性白细胞ＤＮＡ为对照，以ＰＣＲ技术体外扩增了１６例绒毛ＤＮＡ样本，结果有９例出现Ｙ特异性扩增带，余为阴性，说明这９例为男性胎儿，另７例为女性胎儿，用扩增性别决定基因的方法作产前性别测定，在临床上可用于ｘ连锁遗传病的辅助诊断和性异常的研究。     

性别决定的分子机制

人类性别分化是从受 精卵开始的,在WT-1,SF-1,GATA-4等基因产物的作用下,中胚层发育成为具有双向分化潜能的生殖嵴。男性胚胎在SRY的作用下启动SOX9,DMRT1,DMRT2等下游基因,促使生殖嵴分化为睾丸,而女性胚胎则在双倍DAX-1作用下形成卵巢。     

宫颈癌性别决定基因9基因启动子区甲基化水平检测对宫颈癌的价值研究

目的检测宫颈癌性别决定基因9(SOX9)基因启动子区的甲基化水平并探讨其在宫颈癌诊断、治疗及预后评估中的临床意义。方法采用双探针实时定量聚合酶链式反应(PCR)技术检测48例宫颈癌脱落细胞标本(宫颈癌组)和48例正常宫颈脱落细胞标本(正常宫颈组)中SOX9基因启动子区的甲基化水平,比较两组间的差异及其与宫颈癌组各病理分型间的关系。结果宫颈癌组的平均甲基化分值高于正常宫颈组,差异有统计学意义(P=0.000)。宫颈鳞癌SOX9基因启动子区甲基化分值高于腺癌,G3高于G1～G2,有淋巴结转移和脉管癌栓的高于无淋巴结转移和脉管癌栓的,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 SOX9基因启动子区甲基化与宫颈癌的发生、发展密切相关,可用于指导宫颈癌的诊断、治疗和预后评估。     

性器官异常患者SRY基因检测

目的：检测性器官异常患者SRY基因,研究其在性发育过程中的作用。方法：采用PCR方法结合核型分析和临床表现对性器官异常患者进行SRY基因检测。结果：1例46,XX患者基因组DNA中有SRY基因,1例真两性畸形患者有SRY基因,2例社会性别为男性者经检测SRY基因阴性,另65例患者SRY基因检测与社会性别一致。结论：SRY基因突变、缺失、易位是导致性器官异常的原因之一。     

宫颈癌性别决定基因9基因启动子区甲基化水平检测对宫颈癌的价值研究

目的检测宫颈癌性别决定基因9(SOX9)基因启动子区的甲基化水平并探讨其在宫颈癌诊断、治疗及预后评估中的临床意义。方法采用双探针实时定量聚合酶链式反应(PCR)技术检测48例宫颈癌脱落细胞标本(宫颈癌组)和48例正常宫颈脱落细胞标本(正常宫颈组)中SOX9基因启动子区的甲基化水平,比较两组间的差异及其与宫颈癌组各病理分型间的关系。结果宫颈癌组的平均甲基化分值高于正常宫颈组,差异有统计学意义(P=0.000)。宫颈鳞癌SOX9基因启动子区甲基化分值高于腺癌,G3高于G1～G2,有淋巴结转移和脉管癌栓的高于无淋巴结转移和脉管癌栓的,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 SOX9基因启动子区甲基化与宫颈癌的发生、发展密切相关,可用于指导宫颈癌的诊断、治疗和预后评估。     

人类性别研究的分子遗传学进展

人类性别的形成机理是重要的研究课题 ,对于提高人口素质 ,防止性别畸形等危害人类健康的遗传病出现 ,有十分重要的意义。随着分子遗传学的发展、基因克隆、基因扩增、ＤＮＡ测序等研究方法、实验技术的改进 ,近年来有较大的进展 ,已进入分子水平。1　人类性别形成的研究人类性别的形成机理在很长一段时间内是一个科学之迷 ,经过科学家半个多世纪的努力 ,终于在 2 0世纪 30年代认识到人类的性别不是由环境决定 ,而是由染色体组成决定的。并于 195 9年证实对人类性别形成起决定性作用的是性染色体。研究表明 :人类性别的形成包括性别决定和性…     

性器官异常患者SRY基因检测

目的 :检测性器官异常患者SRY基因 ,研究其在性发育过程中的作用。方法 :采用PCR方法结合核型分析和临床表现对性器官异常患者进行SRY基因检测。结果 :1例 46 ,XX患者基因组DNA中有SRY基因 ,1例真两性畸形患者有SRY基因 ,2例社会性别为男性者经检测SRY基因阴性。另 6 5例患者SRY基因检测与社会性别一致。结论 :SRY基因突变、缺失、易位是导致性器官异常的原因之一。     

黑斑蛙SOX基因PCR扩增产物研究

目的：研究SOX基因在性别决定中的作用。方法：利用PCR技术，对黑斑蛙基因组中的SOX基因进行扩增。结果：扩增的片段大小为450bp和900bp。结论：SOX基因中存在有内含子，雌雄个体中均存在SOX基因，无性别特异性。     

SOX9基因判断前列腺癌恶性程度及生化复发的预测

目的：探讨SOX9基因在判断前列腺癌恶性程度及预测前列腺癌去势后生化复发的作用。方法：通过Oncomine公共数据库查询SOX9基因在前列腺癌中的表达情况;RT—QPCR法检测SOX9基因在前列腺癌细胞株DU145、LNCap、PC3和正常前列腺细胞株RWPE-1中的表达;免疫组织化学法检测106例前列腺癌癌组织与癌旁组织中的SOX9基因表达情况,并结合前列腺癌患者临床病理参数进行分析;建立SD大鼠手术去势模型,检测SOX9基因在去势后大鼠前列腺组织中的表达情况。结果：SOX9基因在前列腺癌组织中呈高表达;SOX9基因在PC3细胞株中的表达水平显著高于RWPE-1细胞株（P：0．004）;106例前列腺癌癌组织中62例呈SOX9阳性表达,癌旁组织中26例呈SOX9阳性表达;SOX9基因在前列腺癌组织中的表达水平明显强于癌旁组织,两者比较,差异有统计学意义（P=0．000）;SOX9高表达与前列腺癌患者血清PSA水平（P=0．007）、Gleasonscore（P=0．034）和肿瘤TNM分期（P=0．013）呈正相关,而与年龄（P=0．179）无明显相关性;对照组和模型组分别有2只、9只SD大鼠前列腺组织sox9染色阳性,两组比较,差异有统计学意义（P=0．005）。结论：SOX9基因的高表达与肿瘤的恶性程度相关,可结合血清PSA水平对前列腺癌疑似患者进行早期诊断并判断前列腺癌的恶性程度,还可用来预测生化复发速度。     

性反转综合征的细胞遗传学1例分析

目的: 探讨性反转综合征发病的可能原因。方法: 运用人类外周血淋巴细胞常规染色体核型并结合相关文献资料进行分析。结果: 分析30个中期分裂相,核型均为46,XY。结论: 该女性患者为46,XY男性性反转综合征;SRY基因的突变或缺失以及SOX基因的突变是导致性反转综合征的主要原因。     

WT1为靶点的DC肿瘤疫苗研究进展

WT1基因在小儿肾癌中首次被发现,随后的研究中大量数据显示WT1基因在血液系统肿瘤和实体瘤中存在高表达,这提示WT1作为肿瘤免疫治疗新靶点的可行性。树突状细胞(DC)在诱导肿瘤抗原特异性效应和记忆性细胞过程中的作用,以及在人体内呈递抗原的能力,使其成为肿瘤免疫治疗的基础。随着目前DC研究的不断进步,以WT1为靶点的DC肿瘤疫苗也日趋成熟,有的已成功应用于临床。     

SOX9基因慢病毒载体的构建及其在骨髓间充质干细胞中的表达

目的 构建SOX9基因的慢病毒载体并使其在兔骨髓间充质干细胞(MSCs)中表达.方法 通过RT-PCR获得人SOX9基因编码区(CDS)片段,将该片段克隆入质粒Pwpxl-MOD2中产生Pwpxl-MOD2/SOX9,将Pwpxl-MOD2/SOX9、pRsv-REV、pMDlg-pRRE、pMD2G共转染293T细胞,获得携带目的基因SOX9基因的重组病毒.同时共转染Pwpxl-MOD2,pRsv-REV,pMDlg-pRRE,pMD2G进另一组293T细胞包装产生空载体慢病毒作为阴性对照.包装好的慢病毒体外感染MSCs,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法及免疫印迹检测SOX9的表达;四甲基噻唑蓝(MTT)法测定慢病毒对细胞增殖能力的影响.结果 酶切、PCR及测序鉴定证实慢病毒载体质粒Pwpxl-MOD中插入片段为基因SOX9.病毒感染MSCs后,经RT-PCR法和免疫印迹证实SOX9基因在MSCs中表达.MTT法检测示慢病毒感染对骨髓间克质干细胞的生长未产生显著影响.结论 成功构建SOX9基因的慢病毒载体并感染骨髓间充质干细胞后能够稳定表达SOX9.为研究椎间盘退变的基因及生物学治疗提供了实验依据.     

WT1基因与急性白血病研究新进展

WT1基因是人体内一个复杂的基因,它在一些恶性肿瘤患者体内呈现有规律的表达,这使它一直成为多年来研究的热点。WT1在人类多数急性白血病(AL)细胞异常地高表达,而在正常人的骨髓则无表达或极微量表达,提示WT1基因与AL的发生、发展存在密切关系。近年,对该基因的突变、表达水平与AL预后的关系,以及针对该基因的免疫治疗都有新的研究成果。     

RNA干扰对HL-60白血病细胞株WT1基因表达的抑制作用

目的 研究RNA干扰(RNA interference, RNAi) 对白血病细胞株WT1 基因表达的抑制作用.探讨WT1小干扰RNA在白血病治疗中的应用.方法 设计制备多对针对WT1基因的小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA),转染HL-60人白血病细胞株,采用RT-PCR法测定WT1 mRNA 的表达,Western blot 测定WT1 蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 siRNA 后WT1 mRNA与蛋白的表达强度分别为(23.62±1.28)%和(23.20±1.04)%,和对照组比较有显著性差异(P＜0.05);在WT1表达受到抑制的同时,HL-60细胞的凋亡率为(13.72 ±1.33)%,和对照组比较有显著性差异(P＜0.05).结论 siRNA能有效抑制HL-60细胞中WT1基因的表达,增加细胞凋亡.     

肾母细胞瘤免疫治疗中的细胞毒T淋巴细胞效应

目的 用肾母细胞瘤WT1基因一段序列(WT1y)构建于真核表达质粒pCDNA3.1(+),通过小鼠和体外细胞模型初步研究所激发的细胞毒T淋巴细胞(CTL)效应.方法 WT1基因一段序列,含HLA-A~*2402锚定残基的9个氨基酸.构建重组真核表达质粒pCDNA3.1(+)/WT1y.免疫Balb/c小鼠,ELISA方法检测体液免疫反应;分离脾淋巴细胞,FCM检测脾淋巴细胞中CD4/CD8.结果 重组质粒测序鉴定,与GenBank中登录的序列完全一致;免疫组小鼠T淋巴细胞增殖及CTL活性均明显优于对照组(p0.01);体外具有较强溶解靶细胞的功能.结论 WT1基因的DNA疫苗具有很强的CTL效应,为小儿肾母细胞瘤的治疗提供了新的思路.

Abstract：

Objective To construct the eukaryotic expression vector harboring Wilms'tumor gene(WT1y)and assess the cytotoxic T lymphocyte (CTL)response specific to the DNA vaccine of WT1y product in Balb/c mice and in vitro cultured cells.Methods Synthesized WT1y gene (321 bp including HLA-A*2402 anchoring residue)was cloned into the eukaryotic vector to construct the plasmid pCDNA3.1(+)/WT1y.WT1-specific antibody was detected in mouse serun'l by ELISA,and T lymphocyte proliferation was detected by flow cytometry.The CTL response was detected by co-culture of the murine spleen cells with the tumor cells.Results The recombinant ptasmid was confirmed using DNA sequencing.WT1-specific antibodies were detected in the seruml of immunized mice,which showed significantly greater T lymphocyte proliferation than the control group (P<0.01).The CTLs resulted in specific lysis of WT1-expressing murine tumor cells.Conclusion Using HBVC as the vector for WT1y gene,wenave obtained the virus-like particles that induce high cellular immune response,which shed light on a new approach for treatment of Wilms'tumor.     

儿童原发性肾上腺皮质功能减退的临床特征和基因突变研究

目的分析儿童原发性肾上腺皮质功能减退患者的临床特征及其DAX1、SF1基因突变的发生率,探讨导致该病可能的分子机制。方法选择原发性肾上腺皮质功能减退的男性患儿25例,观察患儿的临床特征并行辅助检查。抽提外周血基因组DNA,对DAX1基因2个外显子(外显子1和2)的PCR扩增产物进行测序分析;无突变者行SF1基因(外显子2~7)突变筛查。结果患儿均有不同程度的皮肤色素沉着、乏力、恶心、呕吐及脱水等表现;18例曾出现肾上腺危象;8例有明确家族史。15例达到青春发育年龄的患儿中,8例(53.3%)伴性发育不良。DAX1基因检测共发现8种突变,包括1种错义、6种移码和1种无义突变;其中6种(c.291delC、c.332-333delCT、p.E137X、c.605delG、c.731delG和c.838delG)为新发现突变,余为已报道过的突变:2例为p.L262P(表兄弟),1例为c.652-653delCA;未发现SF1基因突变存在。DAX1基因突变率为40%(10/25),伴性发育不良患儿突变率为62.5%(5/8),有明确家族史患儿DAX1基因突变率为100%(8/8);DAX1基因突变患儿的发病年龄不同,...     

荧光定量RT-PCR检测急性白血病患者外周血WT1基因的表达

目的　了解急性白血病患者外周血WT1基因的表达水平。方法　建立荧光定量RT -PCR方法 ,用PEABI 770 0PCR仪检测 114例急性白血病患者、2 6例非白血病患者和3 6例正常人外周血中WT1基因的表达水平。结果　 2 2例急性髓系白血病 (AML)和 15例急性淋巴细胞白血病 (ALL)初发患者WT1基因的表达量为 10 5～ 10 6拷贝 / μgRNA ,取得部分缓解的 2 6例AML和 19例ALL患者的表达水平为 10 2～ 10 4拷贝 / μgRNA ,而取得完全缓解的 17例AML和 13例ALL患者的表达水平为 0～ 10 2拷贝 / μgRNA。 结论　WT1基因在白血病外周血中有高水平的表达 ,可作为急性白血病疗效考核及监测微残留病的指标。