TBI大鼠海马糖皮质激素受体表达变化对认知功能的影响

目的 研究创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后大鼠海马区糖皮质激素受体(ghcocorticoid receptor,GR)表达的变化对认知功能的影响.方法 建立大鼠脑损伤模型,应用免疫组化、Western blot和Morris水迷宫检测伤后大鼠海马区GR表达与学习记忆功能的关系.结果伤后4～10 d大鼠海马区GR持续低表达;Morris水迷宫检测伤后大鼠出现认知功能障碍.结论 TBI大鼠海马区GR表达变化与认知功能的障碍改变具有相关性.

Abstract：

Objective To explore the effect of glucocorticoid receptor(GR)expression in rat hippocampus on cognitive function after traumatic brain injury(TBI). Methods The TBI model wag established in rats.Then,immunohistochemistry and Western blot were used to detect the GR expression and evaluate its relation with cognitire dysfunction by Morris water maze. Results Expression of hippocampal GR was down-regulated 4-10 days after TBI.Morris water maze test showed significant impairment of the cognitive function in rats. Conclusion There is correlation between expression change of hippocampal GR and cognitive dysfunction.     

小剂量糖皮质激素对重症患者糖皮质激素受体及细胞免疫功能的影响

目的 研究小剂量糖皮质激素( glucocorticoid,GC)对重症患者糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)及细胞免疫功能的影响. 方法 收集2007年3月-2009年3月ICU重症患者40例,根据有无应用GC治疗分为GC组和非GC组,在GC治疗后1,7,10 d收集血液标本,检测外周血中单核白细胞( mononuclear leukocytes,MNL)和多核白细胞(polymorphonuclear leukocytes,PML)上GR的结合容量、T淋巴细胞CD4/CD8比值.GC使用方法:氢化可的松100 mg,每8h/次静脉注射. 结果 外周血MNL的GR结合容量第1,7天GC组和非GC组间差异无统计学意义.GC组第1天GR结合容量较低,第7天更低(P＜0.05);非GC组第1天GR结合容量偏低,但第7天GR结合容量显著提高(P＜0.05).外周血PML上GR的结合容量变化趋势与MNL相似.CD4/CD8比值第1天GC组和非GC组间比较差异无统计学意义;第10天CD4/CD8比值非GC组明显高于GC组(P ＜0.05);GC组CD4/CD8比值第10天略降低,与第1天比较差异无统计学意义;非GC组第10天CD4/CD8比值比第1天显著提高(P＜0.05). 结论 小剂量GC对外周血白细胞GR结合容量有一定负反馈调节作用,对细胞免疫功能有一定的抑制作用.     

创伤后应激障碍样行为异常大鼠海马糖皮质激素与盐皮质激素受体表达研究

目的：在建立海马惊厥阈下电刺激创伤后应激障碍（PTSD）动物模型基础上，进一步探讨脑组织糖皮质激素受体（GR）与盐皮质激素受体（MR）变化规律。方法：采用频率25Hz、波宽1ms、串长10s、串隔7min、强度100μA的恒流、单脉冲电流，反复刺激大鼠海马，并通过旷场行为及拒俘反应性检查观测大鼠情感行为改变；利用免疫印迹法检测脑组织GR与MR表达。结果：成功诱发了实验大鼠较长时程的活动习性改变，警觉水平增高，惊恐行为，环境适应能力下降，躲藏逃避反应等PTSD样行为异常表现。免疫印迹检测显示，电刺激停止后2d-1周，阈下刺激组大鼠海马GR表达明显增高；电刺激停止后1dMR表达增高，2－3d则明显降低；而额叶皮层二者表达无明显改变。结论：海马CA1区惊厥阈下电刺激可基本模拟PTSD多种临床表现，而海马结构GR持续性高表达与MR较长时程降低在PTSD样行为异常的发生发展中可能有重要意义。     

模拟快速上浮脱险对大鼠肝脏糖皮质激素受体mRNA表达的影响

目的观察模拟200m快速上浮脱险对大鼠肝脏糖皮质激素受体（GR）转录水平表达的影响，探讨这一应激方式对机体的损伤机制。方法sD大鼠30只，随机分为5组：正常对照组6只，模拟快速上浮脱险后1、2、4、24h各6只。用RT—PCR方法检测大鼠肝脏GRmRNA表达水平。结果GRmRNA在大鼠肝脏中多量表达；模拟快速上浮脱险后其表达水平迅速降低（P〈0．01），以后随时间延长逐渐恢复，24h基本恢复至正常。结论模拟快速上浮脱险可一过性下调肝脏GRmRNA表达。     

高功率微波对大鼠下丘脑和垂体中糖皮质激素受体影响

目的探讨高功率微波（high power microwave，HPM）辐照后下匠脑与垂体中糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor，GR）的变化及其意义。方法采用2～90mW／cm^2的HPM辐照130只二级雄性Wistar大鼠，分别于照后6h、1、3、7、14d、28d与3月活杀动物，取下丘脑与垂体，采用免疫组化和图像分析技术研究GR在辐照后大鼠下丘脑与垂体中的表达。结果辐照后下丘脑神经元中GR表达减弱。10mW／cm^2组在6h与1d时较对照组有显著下降（P〈0．05），7d后呈恢复趋势；50mW／cm^2绀在1d时有显著下降（P〈0．05）。辐照后垂体远侧部内分泌细胞GR表达增强。10mW／cm^2组在6h时有显著升高（P〈0．01），7d后呈恢复趋势；50mW／cm^2组在1、3d时均有显著升高（P〈0．01）。结论一定功率密度的HPM辐照后，下丘脑GR表达下降；垂体GR表达增强；HPA轴负反馈调控紊乩；表明GR参与rHPM辐照后下丘脑．垂体．肾上腺轴病变的病理生理过程。     

脂多糖致大鼠急性肺损伤肺组织中糖皮质激素受体的表达及活性变化

目的探讨脂多糖致大鼠急性肺损伤24h内肺组织糖皮质激素受体(GR)表达及活性变化的特点。方法将70只Wistar大鼠随机分为脂多糖致伤组和地塞米松治疗组,采用RT-PCR和Western blot在mRNA水平和蛋白质水平测定致伤组肺组织GR,EMSA法测定肺组织GR活性。结果大鼠肺组织GR mRNA在致伤后表达下调,24h恢复至正常水平;肺组织GR蛋白质表达降低,伤后8h降至最低;肺组织GR活性在伤后1h降到最低,24h仍未恢复至正常水平。地塞米松治疗组在治疗后期不能有效维持GR活性。结论大鼠急性肺损伤肺组织GR蛋白表达降低,可能与mRNA表达降低及蛋白降解加速有关;GR活性被显著抑制,出现糖皮质激素抵抗。     

阻断糖皮质激素受体对肝总动脉结扎大鼠肝功能的影响

目的 观察肝缺血损伤与糖皮质激素受体(GR)通路之间的关系,为从提高GR的途径减轻肝脏缺血后损伤提供理论依据.方法 208只SD大鼠随机分为正常对照组(n=8)、单纯结扎组(n=40)、阻断50％ GR组(n=40)、阻断80％GR组(n=40)、阻断50％GR伴结扎组(n=40)、阻断80％GR伴结扎组(n=40).采用肝总动脉结扎的方法建立大鼠肝缺血模型,动态观察肝总动脉结扎后GR的变化及GR阻断对模型大鼠血清肝功能指标[丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)]和肝脏组织结构的影响.结果 肝总动脉结扎后,GR阻断组与单纯结扎组相比,ALT、AST、ALP较单纯结扎组峰值升高,且随着GR阻断程度加深呈现酶峰提前,恢复时间延长的趋势;肝脏组织炎性浸润、缺血坏死程度也较单纯结扎组明显加重.免疫组织化学提示GR阻断后,肝总动脉结扎2h时肝细胞内GR较单纯结扎组明显减少,6h达到最低,其中80％阻断组较50％阻断组减少更为明显.结论 GR的减少对肝缺血后损伤发生的过程具有重要影响.     

癫疒间患者性激素受体及糖皮质激素受体改变的研究

癫疒间患者性激素受体及糖皮质激素受体改变的研究１１６０２１大连解放军第２１０医院梁丰赵瑛①邵福源①刘志民①关键词癫疒间；受体，性激素；糖皮质激素中国图书资料分类号Ｒ７４２．１原发性癫疒间的病因迄今尚无一致性认识，近年文献提出与甾体激素功能紊乱有关。巳...     

运动性免疫抑制大鼠肝、脾糖皮质激素受体表达变化探讨

目的:研究运动性免疫抑制时糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)mRNA和蛋白表达变化,探讨GR在运动性免疫抑制发生中的作用。方法:40只SD大鼠随机分为安静对照组(C组,n=10)、中强度运动组(M组,n=10)和过度疲劳运动组(O组,n=20)。后两组分别进行不同强度的8周递增负荷训练,每周训练6天。每周称量大鼠体重。8周训练结束后采血,检测Hb、血睾酮、皮质酮水平,外周血T细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+)、自然杀伤细胞(NK细胞)数量和辅助性T淋巴细胞1、2(Th1、Th2)特异性细胞因子IFN-γ、IL-4水平。之后断头处死动物,采用real time PCR和Western blot方法分别检测大鼠肝、脾GR mRNA和蛋白水平。结果:(1)与安静对照组和中强度运动组相比,过度疲劳运动组大鼠体重从第4周起明显下降(维持至实验结束),Hb、血浆睾酮水平、睾酮/皮质酮比值均显著下降,血浆皮质酮水平显著升高,表明过度疲劳训练组大鼠已发生过度疲劳。(2)8周训练后,与安静对照组和中强度运动组相比,过度疲劳运动组大鼠CD3+细胞、NK细胞数量显著减少、IFN-γ/IL-4比值显著下降,Th1/Th2失衡,但CD4+/CD8+比值无显著性差异,表明运动性免疫抑制大鼠模型建立成功。(3)与安静对照组和中强度运动组相比,8周训练后,过度疲劳运动组大鼠肝、脾GR mRNA和蛋白水平均显著下降;与安静对照组相比,中强度运动组大鼠肝、脾GR mRNA和蛋白水平均无显著变化。(4)相关性分析显示,肝、脾GR mRNA和蛋白水平与血浆GC的相关系数分别为-0.752、-0.613、-0.144和-0.397,均P<0.05。结论:(1)运动性免疫抑制大鼠肝、脾GR mRNA和蛋白表达水平较安静对照组和中强度运动组显著降低。(2)运动性免疫抑制大鼠肝、脾GR mRNA减少和脾GR蛋白水平下降可能与血浆GC升高有关。     

补体受体1型的结构功能及sCR1基因克隆表达的策略

补体受体1型（Complement receptor type 1,CR1）具有外源性及内源性活性,既可灭活组装于非自身细胞膜上的C3/C5转化酶,也可灭活自身细胞膜上形成的C3/C5转化酶。CR1是唯一既对经典,替代及植物凝集素（MBL）3个补体激活途径的,对C3/C5转化酶拥有衰变加速活性,又有辅助1因子裂解C3b和C4b作用的补体调节蛋白。对补体分子的过度活化具有抑制和调节作用,在防治补体介导的缺血再灌注损伤以及异种器官移植超急性排斥反应等疾病具有广阔的应用前景。本文主要综述CR1的结构功能及生物学活性,sCR1基因的克隆与表达及在创伤、缺血再灌注损伤中的应用研究现状。     

人血管生成素-1基因cDNA的克隆及结构分析

 目的 克隆人血管生成素-1基因,并分析其结构特征,为研究生理及病理性血管生成奠定基础。方法 提取人胎盘组织总RNA,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增逆转录产物,经克隆及序列测定获得人血管生成素-1 cD-NA;用计算机软件分析基因序列及编码蛋白质结构。结果 获得高质量的胎盘组织总RNA。RT-PCR扩增出—1.5 kb的cD-NA片段,将PCR产物的阳性克隆测序,显示含1534 bp的插入片段,可编码503个氨基酸的蛋白质,与小鼠的血管生成素-1氨基酸高度同源。编码的氨基酸中含3个功能结构域。结论 为从基因及蛋白质水平研究人血管生成素-1与生理、病理性血管生成奠定了基础。     

新基因XTP11表达蛋白在酵母细胞中的转录激活功能研究

目的 构建乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP11的酵母表达载体,探索应用酵母双杂交系统克隆与XTP11蛋白结合的肝细胞蛋白的可行性。方法 用聚合酶链反应（PCR）扩增XTP11编码基因,并在其5＇端引入Nco I／BamHI酶切位点,连接入酵母表达载体pGBKT7中,构建编码XTP11全序列与酵母蛋白GAL4 DNA结合域融合蛋白的酵母表达质粒,转化酵母细胞AHl09并应用Westem blot方法检测XTP11蛋白表达。然后铺于含有X-α半乳糖的SD／-Trp和SD／-Trp-His-Ade营养缺陷型培养基上进行自激活验证（蓝／白筛选）。结果 成功地构建了XTP11的酵母表达载体并在酵母细胞中表达相应的融合蛋白,转化了pErBKT7-XTP11的AH109酵母细胞在两种营养缺陷型培养基上均可正常生长,并且可以产生α-半乳糖苷酶,从而在铺有x_n半乳糖的培养基上呈现蓝色,表明XTP11蛋白代替了酵母GALA蛋白的DNA激活域发挥作用,从而激活下游报告基因（ADE2,HIS：3,MEL1和LacZ）的表达。结论 全序列XTP11蛋白与GALA DNA结合域的融合蛋白在酵母细胞中呈现转录激活功能,限制了应用酵母双杂交系统研究XTP11的肝细胞结合蛋白。     

受体结合实验及其在放射性显像剂研究中的应用进展

受体结合实验是一种重要的药物筛选方法,它通过体外实验来考察配体与受体的结合能力。目前,很多放射性显像剂是利用放射性配体与体内受体结合的高度选择性来进行受体显像的。因此,受体结合实验是放射性显像剂研究中广泛使用的一种体外评价方法,在放射性显像剂设计与筛选中发挥了重要作用。     

一低剂量辐射诱导新基因的转录调控和初步功能分析

目的：克隆低剂量辐射诱导基因，研究辐射对其转录调控作用和生物学功能。方法：用mRNA差异显示技术分离辐射诱导表达基因，用RACE技术获取cDNA旁侧序列，Northern杂交分析基因的转录调节，生物信息学分析基因的结构和功能。结果：获得包括3'端在内的辐射诱导新基因LRIGx的cDNA片段，序列同源性比较显示与人染色体20ql 1.2-12一段DNA高度同源（＞99％），Northern杂交结果揭示该基因转录子全长约8．5kb，在0．2Gy照射后2h出现诱导表达，4h后转录子水平为对照细胞的5倍多，也受0．02Gy更低剂量照射诱导表达，2Gy大剂量照射后1h出现短暂诱导表达，但不如低量照射明显，2h后恢复正常水平，生物信息学分析结果显示该基因编码产物含有解旋酶活性保守区，结论：分离鉴定出一低剂量辐射反应基因，其编码蛋白可能参与DNA代谢（如修复）等细胞辐射反应过程。     

多发伤患者外周血白细胞糖皮质激素受体α、β的表达及其意义

目的探讨多发伤患者外周血白细胞糖皮质激素受体α、β(GRα、GRβ)在转录水平的表达规律及其意义。方法收集30例我科多发伤患者及5例健康志愿者(对照组)外周血,提取白细胞RNA,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测外周血白细胞GRα、GRβm RNA水平表达,同时检测患者皮质醇水平。结果多发伤患者伤后第1,4,7天外周血GRαmRNA半定量比值分别为0.56±0.03、0.82±0.06、0.85±0.06,伤后第1天比对照组(0.86±0.08)明显降低(P<0.05);多发伤患者伤后第1,4,7d外周血GRβmRNA半定量比值分别为1.12±0.06、0.79±0.08、0.76±0.08,伤后第1天比对照组(0.74±0.06)明显升高(P<0.05)。伤后第1天,损伤严重度评分(ISS)≥16分组GRα表达低于ISS<16分组,而GRβ表达高于ISS<16分组(P<0.05)。多发伤患者外周血皮质醇在伤后第1天比对照组明显升高(P<0.05),其升高与GRα的降低呈负相关。结论多发伤患者创伤早期外周血白细胞GRα、GRβ在转录水平的表达与损伤严重程度有关,GRβ高表达在创伤患者发生糖皮质激素抵抗的过程中起重要作用。     

鼠盘状结构域受体真核表达载体的构建与表达

目的 分别构建DDR2的野生型(FLDDR2)、嵌和体(FcDDR2)和截短体(ttDDR2)的真核表达载体,并在哺乳动物细胞表达,为进一步研究DDR2与类风湿性关节炎发病机制的关系奠定基础。方法 FLDDR2和ttDDR2通过RT-PCR的方法获得,测序正确后亚克隆入pCDNA3．1( )。FcDDR2是利用人IgG1的Fc段替代部分胞浆区,测序正确后亚克隆入pMKIT-Neo。重组产物经脂质体2000介导瞬时转入COS-7细胞,48h后收取蛋白,分别利用蛋白印迹法和免疫沉淀法检测重组产物的表达。转入重组质粒的细胞经胶原刺激3h后收取蛋白,利用免疫印迹和免疫沉淀法检测磷酸化水平的变化。结果 所构建的三种真核表达载体均可在COS-7细胞中正确表达。将ttDDR2和FLDDR2共转染COS-7细胞并给予胶原刺激后FLDDR2的磷酸化水平有所下降,而FcDDR2在无胶原刺激时也可自身活化,其程度与FLDDR2经胶原刺激后的活化程度相仿。结论 成功构建了FLDDR2、ttDDR2和FcDDR2三种真核表达载体,其中FcDDR2可以作为一种激活剂,而ttDDR2在一定程度上具有负性竞争的作用。     

小鼠骨髓组织4种造血生长因子受体cDNA片段的克隆和序列测定

目的：探索大剂量照射后造血生长因子受体基因的表达规律。方法：应用逆转录PCR技术，从小鼠骨髓造血组织中扩增出造血生长因子受体的目的片段，PCR产物与克隆载体连续后转化感受态大肠杆菌，阳性菌落提取质粒后进行序列测定。结果：4种造血生长因子受体片段均扩增成功，PCR产物经测序证实。结论：粒细胞集落刺激因子受体（G－CSFR），促红细胞生长素受体（EPOR）、促血小板生成素受体（c-mpl)和干细胞因子受体（c-kit)cDNA片段的克隆成功，从为整体水平上研究照射后造血生长因子受体的表达规律打下了基础。     

脓毒症时骨骼肌细胞糖皮质激素受体表达与低氧诱导因子关系的研究

目的研究脓毒症时骨骼肌中糖皮质激素受体(GR)表达与低氧诱导因子(HIF-1α)的关系,进一步阐明脓毒症时骨骼肌蛋白高分解代谢的机制。方法 54只Balb/c小鼠随机分为对照组、脓毒症组和治疗组。脓毒症组通过采用腹腔注射脂多糖(10mg/kg)诱导脓毒症(n=24);治疗组(n=24)在伤前2h分别使用糖皮质激素受体拮抗剂(RU38486(10mg/kg)灌胃,余处理同脓毒症组。同时设立对照组(n=6),于伤后24、6、1、2h取材。利用蛋白免疫印迹(western blot)测定肌组织重链肌球蛋白(MHC),半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测GR和HIF-1αmRNA的表达变化。结果在内毒素注射6h后,脓毒症小鼠骨骼肌MHC的含量较对照组显著减少,伤前使用糖皮质激素受体拮抗剂RU38486灌胃,于6h后骨骼肌MHC含量增多,后期均高于脓毒症组。脓毒症小鼠GR与HIF-1αmRNA表达在整个实验过程中显著增加;使用RU38486灌胃后,于伤后6h GR mRNA的表达明显降低(P<0.05),并维持在较低水平,在整个治疗过程中HIF-1α明显降低。相关性分析表明,脓毒症中GR与HIF-1α的表达呈正相关。结论体内GR表达增高是脓毒症大鼠骨骼肌蛋白降解显著增加的原因之一,其作用可能是在基因水平与HIF-1α协同作用,进而导致骨骼肌蛋白分解增强。