中药复方降酶合剂对大鼠肝脏细胞因子调节的实验研究

目的：研究中药复方制剂降酶合剂对D-氨基半乳糖所致动物急性肝损伤的保护作用,和对内毒素（LPS）刺激后肝枯否细胞（KC）分泌IL-6、IL-8和TNF-α的调节作用。方法：复制大鼠D-氨基半乳糖致急性肝损伤模型,制备SD大鼠降酶合剂和联苯双酯的含药血清,以LPS和含药血清刺激SD大鼠体外培养KC,采用ELISA夹心法检测IL-6、IL-8和TNF-α水平。结果：D-氨基半服糖所致急性肝损伤模型转氨酶和细胞因子分泌水平明显增高,中药降酶合剂可以降低转氨酶和调节细胞因子分泌水平。培养细胞在加入LPS刺激后,上清中IL-6、IL-8和TNF-α浓度明显高于对照组（P＜0.01)。而在加入降酶合剂后,上清中的IL-6、IL-8和TNF-α水平明显下降（P＜0.01)。结论：降酶合剂降低ALT的作用可能与其通过对机体免疫功能的调节,降低IL-6、IL-8和TNF-α等细胞因子的产生有着密切的关系。     

降酶口服液对鼠降血清转氨酶的实验研究

目的：观察降酶口服液对D－氨基半乳糖（D－Gal）及四氯化碳（CCl4)引起小鼠及大鼠血清转氨酶升高的影响。方法：用动物随机分为空白对照组、模型对照组、阳性药对照组和高、低剂量给药组，观察D－Gal及CCl4所致小鼠及大鼠血清转氨酶（ALT及AST）的变化。结果：与模型组相比用药各组的血清转氨酶升高不明显。结论：降酶口服液能阻止D－G al及CCl4造成的血清转氨酶升高。     

NADPH—黄递酶在饥饿大鼠肝脏内的分布及组化观察

作者用β－ＮＡＤＰＨ（还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸）黄递酶组织化学法，观察了正常大白鼠、饥饿大白鼠肝脏组织的ＮＤＰ黄递酶分布。结果显示，在饥饿大鼠的肝细胞、肝枯否氏细胞及肝血窦内皮细胞都有ＮＤＰ阳性反应产物。ＮＤＰ呈细颗粒状，均匀分布于细胞质内。当饥饿延长到４８小时以后，ＮＤＰ颗粒染色加深。以上提示，饥饿能诱导大鼠肘脏产生ＮＯ（一氧化氮）。推测ＮＯ参与生理状态下肝脏的物质代谢调解。     

硒芪合剂对实验性大鼠肝脏酶学及肝脏病理的影响

目的:研究硒芪合剂对实验性大鼠肝脏酶学及肝脏病理的影响,并与复方益肝灵进行比较。方法:采用化学毒物四氯化碳致大鼠肝脏损伤后,用硒芪合剂与复方益肝灵予以治疗。结果:硒芪合剂能显著降低大鼠血清GOT、GPT、GGT及LDH,同时也能降低PCⅢ、LN、HA等。显著减轻肝脏浊肿、空泡变性、脂肪变性及肝纤维化。结论:硒芪合剂对大鼠实验性肝损伤有明显保护作用而且优于复方益肝灵。     

硒芪合剂对实验性大鼠肝脏酶学及肝脏病理的影响

目的研究硒芪合剂对实验性大鼠肝脏酶学及肝脏病理的影响,并与复方益肝灵进行比较.方法采用化学毒物四氯化碳致大鼠肝脏损伤后,用硒芪合剂与复方益肝灵予以治疗.结果硒芪合剂能显著降低大鼠血清GOT、GPT、GGT及LDH,同时也能降低PCⅢ、LN、HA等.显著减轻肝脏浊肿、空泡变性、脂肪变性及肝纤维化.结论硒芪合剂对大鼠实验性肝损伤有明显保护作用而且优于复方益肝灵.     

五灵胶囊对LPS诱导枯否细胞释放细胞因子的影响

目的:探讨五灵胶囊对枯否细胞(Kupffer cells, KC)释放细胞因子介导肝细胞(hepatocellular cells, HC)损伤的作用. 方法:分离并纯化HC与KC并建立LPS及D-GlaN损伤肝细胞模型,观察五灵胶囊对2种损伤模型的作用以及对LPS诱导KC释放细胞因子介导肝细胞损伤的作用. 结果:五灵胶囊2个剂量能有效地阻滞LPS,D-GlaN损伤肝细胞以及降低LPS诱导KC释放TNF-α,IL-6,IL-8水平,抑制KC释放细胞因子损伤肝细胞. 结论:五灵胶囊遏制KC大量释放细胞因子是治疗慢性肝炎作用机制之一.     

大鼠烧伤内毒素血症时肝组织酶组织化学的变化及其图像分析

应用酶细胞化学和电子计算机图像分析技术，定量研究烧伤合并内毒素血症时大鼠肝组织内源性过氧化物酶（ＰＯ）和酸性磷酸酶（ＡＣＰ）的变化及其意义。结果显示：ＰＯ仅分布于枯否氏细胞（ＫＣ）中，早期ＰＯ阳性的ＫＣ数目增多，体积增大，ＰＯ含量明显升高，继之ＫＣ数目减少，ＰＯ含量明显降低，这一变化趋势与肝脏形态学观察结果具有明显相关性。而ＡＣＰ则主要分布于肝实质细胞且优势定位于毛细胆管区。结果提示，ＫＣ及其ＰＯ     

SD大鼠肝脏枯否细胞分离方法改进研究

目的：研究一种简单、高效、实用并且稳定的SD大鼠肝脏原代枯否细胞( KCs)的提取及培养方法。方法选择体质量200 g左右的健康SD雄性大鼠,采用0．05% IV型胶原酶在体原位灌注法结合剪碎法,37℃水浴振荡20 min,经30%和60%Percoll密度梯度离心后,再经40% Percoll离心及贴壁法纯化提取KCs。倒置显微镜下观察细胞形态,并用台盼蓝染色实验鉴定细胞活力,吞墨实验观察细胞吞噬功能及流式细胞术鉴定细胞纯度。结果每只大鼠平均肝脏KCs的获得量为(1．00±0．20)×107(n=20),细胞活力为(92．34±0．15)%,细胞纯度均在(93．56±0．24)%。结论改良的SD大鼠肝脏KCs提取方法操作简单,效果可靠,可为今后KCs的研究奠定基础。     

柔肝降酶合剂治疗抗痨药所致药物性肝炎临床观察

目的 观察柔肝降酶合剂治疗抗痨药所致药物性肝炎的临床疗效.方法 将结核性脑膜炎经抗痨治疗后导致的药物性肝炎患者69例,随机分为治疗组和对照组,治疗组34例,采用柔肝降酶合剂治疗;对照组35例,采用肝泰乐治疗.治疗后第4周评价临床疗效.结果 治疗组显效21例,有效11例,无效2例,总有效率94.1%;对照组显效17例,有效12例,无效6例,总有效率82.9%.两组疗效经统计学比较有显著差异(P＜0.05).结论 柔肝降酶合剂能有效治疗抗痨药所致药物性肝炎.     

青蒿琥酯对大鼠肝Kupffer细胞分泌肝纤维化相关细胞因子的影响

目的探讨青蒿琥酯对大鼠肝巨噬(Kupffer)细胞分泌致炎细胞因子的影响。方法 CCl4皮下注射SD大鼠进行肝纤维化造模,Percoll密度梯度离心法分离纯化大鼠肝Kupffer细胞,ELISA检测不同浓度青蒿琥酯处理LPS刺激的大鼠肝Kupffer细胞分泌致炎细胞因子TNF-α、TGF-β1和IL-6的变化。结果造模12周后,模型组大鼠出现明显的肝纤维化,Percoll密度梯度离心纯化后的大鼠肝Kupffer细胞在LPS刺激后TNF-α、TGF-β1和IL-6的表达量在模型组较对照组显著增加(P<0.05)。0μmol/L、125μmol/L、175μmol/L、225μmol/L 4个浓度的青蒿琥酯处理后,模型组较对照组致炎细胞因子TNF-α、TGF-β1和IL-6的表达量显著下调,并且175μmol/L为最佳抑制浓度(P<0.05)。结论青蒿琥酯可以抑制大鼠肝Kupffer细胞分泌致炎细胞因子     

Protective effect of glycine on liver injury during liver transplantation

Multiple procedures of liver transplantation bring conditions producing cold ischemia-reperfusion （I/R） injury. During cold storage, the graft organ is subjected to cold ischemia, also known as hypoxia injury. After reperfusion, although hypoxic condition has been ameliorated, reoxygenation of the graft liver can produce not only reperfusion injury including generation of oxygen free radical, lipoperoxidation and calcium overload, but also aggravate the hypoxia damage,     

鼠肝枯否细胞的分离,培养和鉴定

目的：研究鼠肝Ｋｕｐｆｅｒ细胞的分离、培养和鉴定。方法：用链酶蛋白酶和胶原酶原位灌流，ｎｙｃｏｄｅｎｚ密度梯度离心分离大鼠Ｋｕｐｐｆｅｒ细胞，再经贴壁培养，并应用免疫组织化学、吞噬功能试验，电镜等方法进行鉴定。结果：本法能成功地获得高纯度的Ｋｕｐｆｅｒ细胞，Ｋｕｐｆｅｒ细胞得率为３～５×１０６／肝，贴壁后呈典型的星形及多角形，免疫组化染色示ｌｙｓｏｚｙｍｅ阳性，胸浆内见吞噬的ｉｎｄｉａｉｎｋ及ｌａｔｅｘｂｅａｄｓ颗粒，电镜观察细胞表面有发达的伪足、微绒毛，胞浆内含大量溶酶体及吞噬ｌａｔｅｘｂｅａｄｓ颗粒。结论：本实验所用的Ｋｕｐｆｅｒ细胞分离培养方法，简单易行，可靠，细胞纯度高，可用于进一步研究Ｋｕｐｆｅｒ细胞的生物学功能     

吡格列酮对炎性因子所致胰岛细胞凋亡的保护作用

目的：探讨Ppar-γ激动剂吡格列酮（PGZ）对炎性因子所诱导的胰岛细胞凋亡的保护作用，初步研究其作用机制。方法：Western—blotting检测NIT-1细胞的Ppar-γ受体蛋白表达；联合IL-1β及IFN-γ作用于体外培养的胰岛细胞株NIT-1，建立胰岛细胞炎症模型，观察（IL-1β＋IFN-γ）与PGZ预孵育NIT-1细胞的凋亡；MTT法、流式细胞术检测细胞生长抑制率及凋亡率，比色法检测凋亡细胞caspase-3比活性。结果：NIT-1细胞表达Ppat-γ蛋白；（IL—1β＋IFN-γ）组作用24h对NIT-1细胞生长抑制率、凋亡率、caspase-3比活性分别为49．8％、28．0％、3．5，对照组3项指标分别为0％、4．3％、1，两组比较均有十分显著差异（P〈0．01）；PGZ组3项指标分别为2．7％、7．1％、1.3，与对照组比较，均无明显差异（P〉0．05）；（PGZ＋IL-1β＋IFN-γ）组的3项指标分别为18．6％、14．8％、1．5，与（IL-1β＋IFN-γ）组比较均有差异（P〈0．05），与对照组比较分别为P〉0．05，P〈0．05，P〈0．05。结论：NIT-1细胞表达Ppar-γ受体蛋白；联合IL—1β及IFN-γ明显诱导NIT-1细胞凋亡，PGZ显著抑制IL-1β及IFN-γ诱导的NIT-1细胞凋亡，其机制与降低caspase-3活性有关。     

大鼠酒精性肝病Kupffer细胞Toll样受体4和细胞因子的变化

目的　观察酒精性肝病大鼠Kupffer细胞 (KCs)Toll样受体 (TLR) 4基因表达和细胞因子的变化。 方法　 2 8只Wis tar大鼠随机分为乙醇喂养组 (E组 )和葡萄糖喂养组 (C组 )。E组大鼠饮水中加入乙醇 (剂量 5～ 12g.kg-1.d-1)喂养 ,C组饮水中加入等量的葡萄糖。两组大鼠分别于 4周和 8周活杀分离KCs,用逆转录多聚酶联反应 (RT PCR)测定KCs中TLR4mRNA的表达 ;用酶联免疫法 (ELISA)测定血浆中TNF α和IL 6浓度变化。结果　RT PCR显示E组TLR4mRNA的表达也显著高于C组(P <0 .0 1)。E组 4周和 8周的TNF α浓度分别为 (32 6± 4 2 )ng/L和 (40 2± 5 1)ng/L ,明显高于对照组的 (86± 12 )ng/L和 (97±13)ng/L (P <0 .0 1) ;IL 6浓度为 (387± 4 6 )ng/L和 (413± 5 1)ng/L ,也显著高于C组的 (73± 10 )ng/L和 (78± 11)ng/L (P <0 .0 1)。结论　乙醇能诱导大鼠肝脏KCs表达TLR4基因 ,TLR4和细胞因子在大鼠酒精性肝脏损害中可能起作用。     

非生物型人工肝对肝衰竭患者内毒素及细胞因子的清除作用

目的 观察血浆置换、血浆灌流两种典型非生物型人工肝对重肝衰竭患者体内血浆内毒素及细胞因子的清除效果。方法 7例和10例重型肝炎患者分别行血浆灌流、血浆置换治疗，比较治疗前后患者血液中内毒素、细胞因子等的变化。结果 经血浆灌流治疗后，患者血中细胞因子、内毒素显著下降，但IL－6变化不大；血浆置换治疗后，患者血中内毒素下降明显，但对TNF－α、IL－1β、IL－6清除效果欠佳。结论 血浆灌流能更有效清除血浆多数细胞因子、内毒素，有望成为有效清除细胞因子的一种治疗手段，从而延缓肝衰竭进一步发展。     

二甲双胍对糖尿病小鼠肝库普弗细胞炎症反应的抑制作用和吞噬功能的改善作用

目的：观察二甲双胍对糖尿病小鼠肝库普弗细胞（KCs）炎症反应的抑制作用,探讨其对肝KCs吞噬功能的改善作用,阐明二甲双胍对糖尿病小鼠肝KCs的保护机制。方法：16只C57BLKS/J db/db小鼠分为糖尿病组和糖尿病加二甲双胍组,16只C57BLKS/J db/m小鼠分为非糖尿病组和非糖尿病加二甲双胍组,每组8只。分别取各组小鼠肝KCs体外培养,透射电镜观察KCs超微结构,ELISA法定量测定KCs中白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和γ干扰素（INF-γ）水平,Western blotting法检测KCs中细胞间黏附分子1（ICAM-1）蛋白表达水平,Transwell小室法检测KCs的中性粒细胞趋化功能,倒置显微镜下观察KCs吞噬能力。结果：糖尿病小鼠KCs中线粒体和粗面内质网（RER）的数量减少,RER扩张,线粒体肿胀及脂滴增多。与非糖尿病组比较,糖尿病组小鼠KCs中IL-6、TNF-α、INF-γ水平和ICAM-1表达水平明显升高（P<0.05）,KCs的中性粒细胞趋化能力增强（P<0.05）,吞噬能力减弱（P<0.05）。与糖尿病组比较,糖尿病加二甲双胍组小鼠KCs中IL-6、TNF-α、INF-γ水平和ICAM-1表达水平明显降低（P<0.05）,KCs的中性粒细胞趋化能力减弱（P<0.05）,吞噬能力增强（P<0.05）。结论：二甲双胍可以抑制糖尿病小鼠肝KCs的炎症反应并改善其吞噬功能,对肝KCs起到保护作用。     

氯喹对内毒素血症小鼠的保护作用以及对细胞因子的影响

目的　探讨氯喹对内毒素血症小鼠的保护作用以及抑制内毒素引起的细胞因子释放情况。方法　清洁级昆明小鼠 40只 ,随机分为LPS、氯喹、氯喹 +LPS和对照组 ,每组动物 10只。LPS组 ,给予 10mg kg的LPS ;氯喹组 ,给予 2 0mg kg的氯喹 ;LPS +氯喹组在给予 2 0mg kg氯喹后 ,立即给予 10mg kg的LPS ;对照组给予注射用水 ,注射体积为 2 0 0 μl 2 0g。观察尾静脉给药后 7h内小鼠的死亡率。体外培养小鼠ANA 1细胞 ,观察培养体系中预先加入氯喹 3h后 ,不同浓度的LPS引起的TNF α、IL 6的释放情况。结果　氯喹可降低内毒素引起的小鼠死亡 ,死亡率由 10 0 %降低为 5 0 % (P <0 0 5 ) ;培养体系中预先加入氯喹后LPS引起的TNF α、IL 6的释放显著降低 ,尤其以IL 6的下降最明显 ,在LPS(4 0 μg ml)刺激组IL 6降幅可达 68倍之多。结论　氯喹对内毒素血症小鼠具有显著保护作用 ,可明显抑制内毒素引起的细胞因子释放 ,提示氯喹可能是治疗内毒素血症的有效药物     

D-氨基半乳糖与脂多糖对小鼠肝脏损伤后再生修复的影响

目的观察部分肝切除联合D-氨基半乳糖(D-GaIN)、脂多糖对肝损伤后再生修复的影响。方法 40只BALB/c雄性小鼠随机均分为2组。D-GaIN/脂多糖/肝脏部分切除组:腹腔注射D-GaIN(500 mg/kg),1 h后注射脂多糖(50μg/kg);肝脏部分切除组:生理盐水代替D-GaIN和脂多糖,同样方法注射;两组小鼠在第2次腹腔注射24 h后行肝脏1/3切除。观察两组小鼠术后肝脏体质量比值、肝再生率、肝细胞损伤、增殖与肝卵圆干细胞增生。结果肝脏部分切除组术后第9天肝大体结构基本恢复正常,肝再生率为(22.26±105.93)%,而D-GaIN/脂多糖/肝脏部分切除组第14天肝质量较术前仍偏小,肝再生率为(9.49±32.55)%,P<0.001。D-GaIN/脂多糖/肝脏部分切除组术后肝窦和中央静脉充血,库普弗细胞增多;肝脏部分切除组术后第7天有明显肝细胞增殖,D-GaIN/脂多糖/肝脏部分切除组肝细胞增殖甚少。D-GaIN/脂多糖/肝脏部分切除组肝脏术后第3天开始出现肝卵圆干细胞增生,从汇管区开始向肝小叶内延伸以修复损伤。结论 D-GaIN联合脂多糖可部分抑制肝部分切除后小鼠成熟肝细胞增殖,D-GaIN/脂多糖/肝部分切除可诱导肝卵圆干细胞增生。     

亚麻醉剂量氯胺酮对肝移植围术期细胞因子的影响

目的探讨原位肝移植围术期亚麻醉剂量氯胺酮对血清细胞因子水平的影响。方法将行经典式原位肝移植手术病人20例随机均分为氯胺酮组(于麻醉后手术前静脉注射氯胺酮0.25mg/kg·b.w.,继以每小时0.5mg/kg·b.w.持续静脉滴注,无肝期暂停,开放前10min重启至手术结束);对照组(给予同等容量生理盐水),并于麻醉后手术前、阻断前5min、开放前5min、开放后15min、开放后60min、术毕即刻、术后4h、术后24h采集动脉血,酶联法检测血清中TNF-α、IL-6、IL-10水平。结果无肝期两组病人血中3种细胞因子水平较术前均显著增加(P<0.05),以IL-6和IL-10更为明显,开放后进一步上升,并于开放后60min达高峰,术后24h降至较术前略高水平。氯胺酮组TNF-α水平从阻断前5min至术毕4h均显著低于对照组(P<0.05),IL-6水平从阻断前5min至开放后60min明显低于对照组(P<0.05),IL-10水平在各个时间点两组间均无影响(P>0.05)。结论肝移植术中由于缺血再灌注及手术应激,机体产生明显的炎症及抗炎反应,以IL6及IL-10更为灵敏。氯胺酮能够抑制TNF-α、IL-6的上升,对IL-10的作用不明确。