微波处理标本用于聚合酶链反应检测淋病奈瑟氏菌

微波处理标本用于聚合酶链反应检测淋病奈瑟氏菌阮月芹韩兆东高乐俊（附属医院检验科，滨州市２５６６０３）关键词微波；聚合酶链反应；淋病奈瑟氏菌聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测泌尿、生殖道炎患者分泌物中淋病奈瑟氏菌ＤＮＡ（ＮＧ－ＤＮＡ）是诊断淋球菌感染的一种快速...     

PCR对可疑慢性淋病病人淋病奈瑟菌的检测

①目的明确临床上可疑慢性淋病病人的病原学诊断。②方法用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对７６例可疑慢性淋病病人的尿道分泌物进行了淋病奈瑟菌检测，并与传统的细菌分离培养法的敏感性进行了比较。③结果聚合酶链反应测出阳性标本２２份（２８．９％），分离培养法测出阳性标本８份（１０．５％）。两种方法敏感性比较，差异有显著性（χ２＝１２．０７，Ｐ＜０．０１）。④结论与细菌培养法相比ＰＣＲ敏感而快速，是明确慢性淋病病原学诊断和指导治疗的好方法。     

聚合酶链反应与培养法检测临床标本的淋球菌

淋球菌也称淋病奈瑟菌（Neisseriagonorrheae），是引起淋菌性尿道炎及淋球菌性阴道炎的病原体。其传统检查方法是涂片加培养。淋球菌的涂片检查，在男性急性淋病性尿道炎时，阳性率可达95％～99％，但在女性感染时因在子宫颈管取材杂菌较多，诊断困难，阳性率较低［’］。而淋球菌培养法不仅时间长（48h），巨阳性率不高。近年发展起来的聚合酶链反应（PCR）技术正不断应用于临床标本中淋球菌的检测。我室对培养法、PCR法的检测结果进行了分析比较。1材料与方法1．l标本的采集及保存：所有标本均采取自我院皮肤科门诊具有急性尿道炎症状…     

聚合酶链反应（PCR）检测淋球菌的临床意义

本文应用聚合酶链反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）方法对门诊患者中８６例女性宫颈分泌物和４２例男性尿道分泌物进行淋球菌检测，ＰＣＲ法检测敏感性为１００％，明显高于直接涂片（１１．７２％）和分离培养（１９．５３％）。因此ＰＣＲ法直接检测临床标本淋球菌具有特异、敏感、快速的优点，可以成为临床常规检查以取代直接涂片和分离培养，对于提高淋病的检出率和控制其传播具有非常重要的意义。     

淋球菌五种检测方法的比较

淋病是国内外最常见的性病之一，它严重影响着人们的身体、工作和生活质量，其病原体为淋病奈瑟氏菌(简称淋球菌)。检测淋球菌的方法很多，有聚合酶链反应(简称PCR)、尿液淋球菌快速试验、淋病快速实验(简称试纸法)、细菌培养、涂片G染色等，各种方法的检测灵敏度有一定的差别。我们对2002年5月—2004年6月，214例门诊及住院病人用上述5种方法作了淋球菌检测比较，现报道如下：     

应用PCR技术检测淋病奈瑟菌342例结果分析

对３４２病人进行随机抽样，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术和分泌物培养两种方法检测淋球菌。ＰＣＲ阳性１１０例，阳性率为３２．１６％；淋球菌培养阳性１２例，阳性率为３．５１％。ＰＣＲ阳性率明显高于培养，说明ＰＣＲ技术对淋病奈瑟菌的诊断具有特异性强、敏感性高的特点。     

淋球菌四种检测方法的比较

目的：在临床实验室工作中使用一种快速、准确诊断淋病的方法。方法：对114例泌尿系感染的标本，以细菌培养法为标准，同时作涂片法，分泌物协同凝集法，尿液淋菌酶法检查淋球菌。结果：尿液淋菌酶法与细菌培养法的符合率为99．1％。结论：尿液淋菌酶法可以做为淋病的快速、准确诊断方法。     

3种不同方法对淋球菌检测的比较研究

目的 探讨直接涂片法、分离培养法、聚合酶链反应对淋球菌的诊断价值。方法 用上述３种方法同时对２５８例急、慢性淋病患者进行淋球菌检测。结果 直接涂片、分离培养、ＰＣＲ的阳性率分别为７１．７１％（１８５／２５８）、７０．１６％（１８１／２５８）、９９．２２％（２５６／２５８），差异有显著性（Ｐ〈０．０１），其中，男性患者为８４．７１％（１３３／１５７）、７０．７０％（１１１／１５７）、１００％（１５７     

聚合酶链反应检测淋球菌的临床应用

本文报告应用聚合酶链反应（polymerasechainreaction,PCR）方法对67名性罪错青年女性采取宫颈分泌物进行淋球菌检测，同时用直接液片检测和分离培养淋球菌，阳性率分别为53．73％、8．96％和17．91％PCR法对淋球菌的检率较直接徐片法和分离培养法均高，其中12名分离培养阳性者，其PCR法也为阳性。作者认为应用PCR法直接检测临床标本淋球菌具有特异、敏感、快速和简便的优点，目前已具备条件的医疗卫生单位可以推广应用。     

聚合酶链反应技术在淋病诊断及治愈判定中的价值

目的：探讨聚合酶链反应技术（PCR）在淋病诊断及治愈判定中的价值。方法：应用PCR和淋球菌培养法平行检测74例STD门诊疑诊为淋病患者的标本,并对34例确诊患者进行治疗后的随访检测。结果：74例疑诊患者中,两种方法均检出淋球菌的有54例,均阴性的6例,PCR阳性而培养法阴性的14例,PCR阴性而培养法阳性的0例。以PCR和培养法检测结果为“扩大金标准”,则PCR的敏感性为100％（68／68）,显著高于培养法的（79．41％）;两者的特异性均为100％（6／6）。对34例确诊患者进行治疗后随访检测结果显示：PCR检测的阴转时间平均33．4±8．7天,明显延迟于培养法（平均6．3±1．8天）。结论：PCR诊断淋病具有高敏、特异、快速的优点,但在治愈判定中的价值不如培养法。PCR阴转则表明病情已愈,有临床意义。     

快速检测结核分枝杆菌γpoB基因突变的研究

目的 :应用PCR SSCP技术直接快速检测痰标本中结核分枝杆菌γpoB基因突变 ,评价此方法用于结核分枝杆菌利福平 (RFP)耐药性的意义。方法 :以结核分枝杆菌H37Rv为对照、5 0例耐RFP(单耐和多耐 )结核分枝杆菌临床分离株、12例RFP敏感菌株、35例耐RFP肺结核患者痰标本 ,采用PCR SSCP检测痰标本和菌株中结核杆菌γpoB基因突变。结果 :5 0例耐RFP菌株中有 45例PCR SSCP条带与结核分枝杆菌H37Rv条带有明显差别 ,与药敏试验结果做对比 ,PCR SSCP检测敏感性为 90 % ,特异性为 10 0 % ;12例敏感菌株与H37Rv条带一致 ,35份肺结核病人痰标本 ,2 1份痰PCR扩增阳性 ,15份SSCP图谱与H37Rv图谱有差别 ,而用PCR SSCP 2 8份图谱与H37Rv有差别 ,阳性率为 80 %。结论 :PCR SSCP检测结核分枝杆菌γpoB基因突变快速、简便、易行 ,有望用于结核分枝杆菌RFP耐药性的快速测定 ,并将成为直接检测临床标本中结核分枝杆菌耐RFP快速方法     

应用聚合酶链反应技术检测解脲脲原体

本文就聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测解脲脲原体（ＵＵ）的方法建立与应用进行了探讨。利用互补于１６ＳｒＲＮＡ基因的一对引物，通过ＰＣＲ对ＵＵ进行检测，扩增片段长度为３９７ｂｐ。与４６例培养对照，培养阳性９例，ＰＣＲ阳性１３例，而且其它相关微生物ＰＣＥ检测无特异性扩增。对临床６２例泌尿生殖道感染患者进行检测，阳性率为１５／６２（２４．２％）。该法具有可靠、简便、快速等优点，用于解脲脲原体感染的临床诊断具有重要价值。     

分子信标荧光定量PCR技术检测结核分枝杆菌方法建立及其临床应用

目的 建立结核分枝杆菌的分子信标荧光定量PCR检测方法 ,探讨该方法 检测结核分枝杆菌的临床应用价值.方法 针对结核分枝杆菌Ag85B DNA特异保守序列设计引物和分子信标探针,并构建标准品.采用分子信标荧光定量PCR法、抗酸染色法、集菌培养法检测158例肺结核患者痰液标本,比较3种方法 的检出率.结果 所建立方法 最低检测限度为2个基因拷贝/反应,在2×10~2～2×10~8基因拷贝/mL范围内,Ct值同DNA量的对数呈线性关系.该方法 检测5株非分枝杆菌和6株非结核分枝杆菌结果 均为阴性,检测结核分枝杆菌H37Rv出现75 bp特异条带.分子信标荧光定量PCR法、抗酸染色法、集菌培养法阳性检出率分别为60.13%、16.46%、31.01%,荧光定量PCR法检出率明显高于抗酸染色法和集菌培养法.结论 分子信标荧光定量PCR法具有较高的灵敏度和特异度,对结核病的诊断有一定的临床意义.     

荧光原位杂交技术检测沙眼衣原体的可行性研究

目的：探讨荧光原位杂交（FISH）技术检测沙眼衣原体（CT）的临床应用及其意义.方法：将超高倍多媒体显微仪检测法（MMDI）和荧光定量PCR结果一致作为判定衣原体是否感染的扩大金标准,取符合扩大金标准判定的宫颈棉拭子标本纳入FISH技术检测.结果：130例样本中MMDI和荧光定量PCR检测均为CT阳性的有52例,CT阴性的有78例.FISH技术检测阳性的46例,阴性84例.FISH技术检测CT的灵敏度为84.62％,特异度为97.44％,阳性预测值为95.65％,阴性预测值为90.48％.结论：成功构建了FISH技术检测沙眼衣原体的技术平台,该技术弥补了MMDI特异性低及PCR可视性不足的缺点.     

PCR扩增梅毒螺旋体poIA基因及其在一期梅毒诊断中的应用

目的提高对梅毒诊断的灵敏性和特异性。方法运用PER扩增了梅毒螺旋体(Tp)的DNA多聚酶I基因(polA)的特异性片段,检测了该方法的特异性和灵敏性;用该方法检测了118例生殖器溃疡,同时用Tp PCR试剂盒和血清学方法平行检测同批病人的溃疡或血清标本。结果polA PCR只在扩增Tp时有特异性产物,灵敏性约为20个Tp拷贝;检测118例生殖器溃疡标本,用Tp PCR试剂盒为对照,polA PCR方法的特异性和灵敏性分别为96.8％和95.7％,两种PCR检验结果差异无显著性(x2=0.25,P>0.05);polA PCR方法与血清学方法对一期梅毒诊断结果差异有显著性(x2=4.45,P<0.05)。结论polA PCR方法高度敏感、特异,在一期梅毒诊断中优于血清学方法,可作为血清学方法的补充用于梅毒的诊断。     

Polymerase chain reaction for the rapid diagnosis of tuberculous meningitis

Polymerase chain reaction (PCR) based on the amplification of a 169 bp DNA fragment specific for the Mycobacterium tuberculosis complex was evaluated for the rapid diagnosis of tuberculous meningitis (TBM). A total of 105 CSF specimens from clinically suspected cases of TBM were studied. Clinical details of the cases and cytochemical parameters of the CSF specimens were recorded. For PCR 10 CSF specimens from cases other than TBM, 4 non-mycobacterial culture isolates (one strain of E coli, one strain of proteus species and 2 strains of salmonella species) and one sample of sterile distilled water were processed as negative controls. For positive control standard culture of Mycobacterium tuberculosis H37Rv was processed with every batch of specimens. Besides PCR, smear for AFB by the Ziehl-Neelsen (ZN) and the fluorochrome method and culture on Lowenstein-Jensen medium was also carried out. By PCR, 31.42% specimens were found positive, whereas by conventional culture on Lowenstein-Jensen medium only 3.8% specimens were positive.     

巢式PCR联合焦磷酸测序法在乙型肝炎病毒耐药基因检测中的敏感性与特异性分析

目的评价巢式PCR联合焦磷酸测序法在乙型肝炎病毒(HBV)耐药基因检测中的敏感与特异性。方法选取rtM204I(ATT)突变型和rtM204(ATG)未突变型质粒,按照不同比例混合后,采用巢式PCR联合焦磷酸测序法对突变位点进行检测,并与常规PCR焦磷酸测序法进行比较,对两种方法的线性及一致性进行分析;选取不同病毒载量临床标本,采用巢式PCR焦磷酸测序法检测耐药突变位点,并与巢式PCR Sanger测序法进行比较,对两种方法的敏感性及特异性进行分析。结果常规PCR焦磷酸测序和巢式PCR焦磷酸测序结果拟合曲线R2>0.99,P<0.05,线性模型有显著性意义。分别将常规PCR焦磷酸测序和巢式PCR焦磷酸测序结果与预测值的差值进行分析,巢式PCR能够较常规PCR更好的反映实际值,在90%比例处优于常规PCR。临床75例患者标本巢式PCR Sanger测序与巢式PCR联合焦磷酸测序结果灵敏性比较提示,Sanger测序的灵敏性为92%,巢式PCR联合焦磷酸测序的灵敏性达到100%,差异有统计学意义(P<0.01)。对于不同病毒拷贝数标本的灵敏性不同,其差异主要表现在低浓度组(HBV DNA≤3log10 copies/ml),Sanger测序的灵敏性为78%,而焦磷酸测序的灵敏性可以达到100%,差异有统计学意义(P<0.01)。阴性对照,两种方法均未检出HBV病毒,两种方法的特异性均较好。结论巢式PCR联合焦磷酸测序的方法监测乙肝病毒变异同巢式PCR联合sanger测序相比,有更好的灵敏性,尤其是在低病毒拷贝数时,差异明显,这对于临床提早发现耐药突变株,指导临床及时更换用药有重要意义。     

16S rRNA基因序列鉴定标本中病原细菌的方法学研究

目的研究16S rRNA基因序列鉴定标本中病原微生物的关键技术,评价序列分析技术作为病原微生物检测方法的可行性和实用件。方法对117份不同来源的临床标本分别采用形态学、细菌培养、16S rRNA基因扩增与测序分析,比较不同方法对病原菌检出的灵敏度与特异性。分子技术通过改良的微量核酸提取方法,扩增16S rRNA基因两个区域（BSF8-BSR534和BAK11 w-BAK2）。结果细菌培养和PCR检测的阳性率分别是49％（57／117）和72％（84／117）,63％（53／84）的PCR产物通过直接测序鉴定到种;60例（52％）培养阴性标本中有7例（12％）经序列分析再次鉴定出病原菌;形态学检查阳性率为64％（75／117）,与PCR结果接近,两者结合可提供推测性报告。第1对引物（扩增区：BSF8-BSR534）较适合革兰阳性细菌分类,第2对引物（扩增区：BAK11w-BAK2）对临床常见病原菌均可获得理想的序列。结论改进核酸提取技术、筛选恰当的引物、优化基因扩增和测序流程,通过16S rRNA基因序列直接鉴定标本中病原微生物有着广阔的应用前景。     

麻疹患儿粪便麻疹病毒核酸的检测及临床意义

目的：探讨麻疹患儿肠道排毒情况和粪便病毒核酸快速检测的临床意义。方法38例临床诊断麻疹患儿,入院时均有发热、皮疹等麻疹感染症状。在入院2d内同时采集咽拭子和粪便标本。标本在冷链条件下送传染病诊治国家重点实验室,采用RT- PCR法检测麻疹病毒核酸及Ct值。同时对部分咽拭子和粪便标本扩增均阳性的PCR产物进行基因测序。结果38例患儿粪便麻疹病毒核酸阳性37例,占97.4%,Ct值23.8±3.04;咽拭子病毒核酸阳性35例,占92.1%,Ct值28.0±4.0。两者阳性率比较,差异无统计学意义（χ^2=0.029,P＞0.05）;两组Ct值比较,差异有统计学意义（t=5.23,P＜0.05）。3例患儿咽拭子和粪便标本的麻疹病毒基因型（均为H1a基因亚型）和核苷酸序列完全一致。结论粪便病毒核酸快速检测与咽拭子标本具有相同的临床诊断价值,粪便病毒核酸拷贝数高于咽拭子病毒核酸,且粪便标本的采集具有方便、无痛苦,依从性好,不易受人为因素的影响,值得推广。     

3种方法检测结核分枝杆菌的比较

目的比较荧光定量PCR与抗酸染色、结核抗体检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异性,及在临床诊断中的应用价值.方法对48例临床确诊的结核病患者和21例非结核呼吸系统疾病患者的痰标本应用荧光定量PCR法和痰涂片抗酸染色法检测,并分离患者外周血血清检测结核抗体,对3种检测方法的结果进行分析比较.结果抗酸染色法检测结核杆菌阳性率为22.9%,特异性为100%;血清结核抗体检测阳性率为77.1%,特异性为85.7%;荧光定量PCR检测阳性率为52.1%,特异性为100%.结论荧光定量PCR是一种快速、防污染、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法,在临床上有重要应用价值.