间接荧光抗体试验检测日本血吸虫感染家兔血清中特异性抗体水平的动态变化

用尾蚴、雌虫、雄虫和血吸虫感染兔肝组织内虫卵冰冻切片抗原进行间接荧光抗体试验（ＩＦＡＴ），观察日本血吸虫感染家兔血清中特异性抗体的动态变化。抗尾蚴、成虫（雌、雄虫）、虫卵抗体检出的最早时间分别为３ｗｋ、３ｗｋ、４ｗｋ，其抗体滴度高峰分别在感染后７ｗｋ、１０～１２ｗｋ和１０ｗｋ。以抗尾蚴抗体水平最高，抗虫卵抗体次之，抗雌、雄虫抗体较低。这为全面了解感染宿主对血吸虫各期抗原（尾蚴、雌、雄虫、虫卵）的免疫反应及免疫学诊断提供了新的资料     

间接荧光抗体试验检测日本血吸虫感染家兔血清中特异性抗…

用尾蚴，雌虫，雄虫和血吸虫感染兔肝组织内虫卵冰冻切片抗原进行间接荧光抗体试验，观察日本血吸虫感染家兔血表中特异性抗体的动态变化，抗尾蚴，成虫，虫卵抗体检出的最早时间分别为３ｗｋ，３ｗｋ，４ｗｋ，其抗体滴度高峰分别在感染后７ｗｋ，１０－１２ｗｋ和１０ｗｋ。以抗尾蚴抗体水平最高，抗虫卵抗体次之，抗雌，雄虫抗体较低。     

检测日本血吸虫抗体的胶体金-葡萄球菌A蛋白试剂盒研制

目的研制胶体金-葡萄球菌A蛋白试剂盒用于检测日本血吸虫抗体。方法通过不同筛目尼龙绢和低频超声等方法,制备、纯化日本血吸虫可溶性虫卵抗原,研制胶体金-葡萄球菌A蛋白试剂盒。用该试剂盒检测人血清中日本血吸虫特异性抗体,并用ELISA方法进行平行比较。结果胶体金-葡萄球菌A蛋白试剂盒检测慢性血吸虫病的敏感性为93%,检测急性血吸虫病的敏感性为100%,检测健康人血清的特异性为96%,检测肺吸虫病的交叉反应为40%,对其他寄生虫和乙肝未见有交叉反应。与ELISA检测结果比较,两种方法具有良好的一致性。结论胶体金-葡萄球菌A蛋白试剂盒具有快速、简便、不需要仪器、敏感性高和特异性强等优点,可广泛用于血吸虫病流行区现场查病。     

人群日本血吸虫特异性抗体水平流行病学特征

人群日本血吸虫特异性抗体水平能揭示人群的疾病分布,不同地区、季节、人群以及不同的流行强度,人群的特异性抗体分布特征不同。随着水利建设、人口流动、经济文化变化以及防控措施的加强,人群血吸虫特异性抗体水平也在发生改变。深入研究人群血吸虫特异性抗体水平特征,有助于认识血吸虫病在不同人群中的免疫机制,为全国血防策略的制定和调整提供理论依据。     

重组日本血吸虫副肌球蛋白免疫小鼠血清特异性抗体的检测

目的 探讨重组日本血吸虫副肌球蛋白（rSj97)免疫小鼠产生抗感染保护力的机制。方法 用ELISA法对每次免疫前、攻击感染前的免疫小鼠血清中特异性抗体的动态及滴度进行检测。结果 第1次免疫后即产生了特异性抗体,第2次加强免疫后抗体水平进一步上升,攻击感染前达最高。攻击感染前的血清抗体滴度测定结果显示,平均抗体滴度达1：51 200。结论 rSj97免疫小鼠可引起明显的体液免疫应答。     

重组日本血吸虫副肌球蛋白免疫小鼠血清特异性抗体的检测

目的探讨重组日本血吸虫副肌球蛋白(rSj97)免疫小鼠产生抗感染保护力的机制.方法用ELISA法对每次免疫前、攻击感染前的免疫小鼠血清中特异性抗体的动态及滴度进行检测.结果第1次免疫后即产生了特异性抗体,第2次加强免疫后抗体水平进一步上升,攻击感染前达最高.攻击感染前的血清抗体滴度测定结果显示,平均抗体滴度达151200.结论rSj97免疫小鼠可引起明显的体液免疫应答.     

日本血吸虫IgG抗体检测试剂盒的现场应用评价及质控分析

目的评价日本血吸虫IgG抗体检测试剂盒在血吸虫病流行区的应用效果。方法在云南省洱源县2个血吸虫病流行村选择505例常住居民作为检测对象,采用尼龙绢集卵孵化法进行血吸虫病病原法检测。采用Levey-Jennings(L-J)质控图法对整个试验过程进行质量控制。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对调查对象进行日本血吸虫IgG抗体检测,并对检测结果进行分析。结果505名检测对象中,ELISA法查出IgG抗体阳性者290例,阳性率为57.43%;质控血清A和质控血清B检测结果均在L J质控图可控范围内,ELISA检测结果可信。尼龙绢集卵孵化法查出虫卵阳性者20例,阳性率为3.96%。ELISA与粪检的阳性符合率为90.00%。结论日本血吸虫IgG抗体检测试剂盒有较好的稳定性、可靠性,适于现场血吸虫病人的筛查。     

用特异性抗体筛选日本血吸虫基因组DNA基因库

用酶免疫测定法筛选日本血吸虫(S.j.)基因组DNA基因库,先将λ噬菌体(λgt11),重组体噬菌斑的表达抗原转移至硝酸纤维(NC)膜,然后用经导入λgt11的大肠杆菌Y1090细胞裂解液吸收的感染兔血清(IRS)检测。结果,从97只平板初筛出8个可能阳性噬菌斑,经再次筛选,8个中2个仍为阳性。其中1个阳性克隆经纯化后导入Y1089细胞扩增,其表达产物经ELISA复筛进一步证实S.j.抗原阳性。表明该克隆编码S.j.抗原,该克隆的表达产物能被IRS识别。该免疫筛选方法能有效地分离单个编码S.j.抗原的克隆,且筛选效率高(每次可筛选1×10~5噬菌斑形成单位),结果可靠、特异,不需要同位素标记技术,操作简便,为进一步筛选编码诱导S.j.保护性免疫力的抗原的基因打下基础。     

日本血吸虫抗体检测 间接红细胞凝集试验

前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由国家卫生标准委员会寄生虫病标准专业委员会提出。本标准起草单位:安徽省血吸虫病防治研究所、中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、浙江省医学科学院寄生虫病研究所、江苏省血吸虫病防治研究所、江西省寄生虫病防治研究所。本标准主要起草人:张世清、汪天平、许静、闻礼永、章乐生、郑彬、熊彦红、梁幼生、林丹丹。     

单克隆抗体反向间凝试验的建立及其在日本血吸虫病诊断上的应用

ＭｃＡｂ－Ｇ３－ＲＩＨＡ诊断血吸虫病、采用绵羊红细胞，经戊二醛固定、鞣酸鞣化，致敏纯化肠相关ＭｃＡｂ，然后冷冻干燥用于检测宿主血清中循环抗原，并以ＩＨＡ对比检测ＣＡｂ。以之检测６３０份样本，其中正常人２２４例，ＲＩＨＡ假阳性率为４．４％，ＩＨＡ为４．９１％；急性血吸虫病１６５例，ＲＩＨＡ阳性率９８．７９、ＩＨＡ９９．３９％；疫区人群２４１份，ＲＩＨＡ阳性率７１．７８％，ＩＨＡ为８４．２３％；其中粪检阳性者ＲＩＨＡ阳性率８６．６７％（６５／７５），粪检阴性者的阳性率是６５．０６％（１０８／１６６），而ＩＨＡ的阳性率分别为９６．０％（７２／７５），７８．９２％（１３１／１６６），ＥＰＧ≥３０的慢性血吸虫病者ＲＩＨＡ及ＩＨＡ阳性率均为１００．０％，当ＥＰＧ＜３０时，ＲＩＨＡ和ＩＨＡ阳性率分别是６９．２３％、９２．３１％。实验结果显示：急性血吸虫病人群循环抗原ＧＭＲＴ为慢性患者的２１．７６倍，不同感染度的慢性患者循环抗原ＧＭＲＴ较为接近。急、慢性血吸虫病血清中ＣＡｂ显著多于循环抗原。本法操作简便，有较好的特异性与敏感性，适用于血吸虫病循环抗原的检测。     

Detection of Quinidine-Specific Antibodies with Platelet 125J-Labeled Staphylococcal Protein A Test

Abstract. Remarkably high titers (80–160) of quinidine-specific antibodies were detected in the serum of 5 patients with suspected quinidine purpura, when ¹²⁶I-labeled staphylococcal protein A was used as the marker of IgG bound onto platelets. During a follow-up of 3 of the patients, the antibody titers declined.
The antibodies could be detected even when the final drug concentration was reduced from 0.3 to 0.003 mmol/I (i.e. therapeutic levels). The reaction between serum and platelets was independent of the type of quinidine salt used. No cross-reactivity occurred with quinine.
Heat inactivation of the serum did not decrease the quantity of specific antibodies detected on the platelets. The sedimentation behavior of antiplatelet activity in density gradient centri-fugation resembled that of 7 S antibodies. When sedimentation was, however, effected on the drug-serum mixture, the reactivity of 7 S decreased.     

流行性出血热患者唾液中特异性IgM抗体检测

本文报道应用IgM—抗体捕捉ELISA法检测流行性出血热患者唾液中特异性IgM抗体的结果。该法特异、敏感。检测出EHF患者发病第一天的唾液IgM抗体,阳性率92.86％(26/28)。其中21例在第15～20病日同时采集血清和唾液标本,检测结果唾液IgM阳性率80.95％(17/21)、将血清唾液IgM抗体均阳性的标本5例经2—ME试验,加热试验证明了其特异性。唾液标本较血清取材更方便、简单、成本低。     

同步检测血清和唾液中的棘球蚴抗原及其特异性抗体

应用ＭｃＡｂ－Ｓａｎｄｗｉｃｈ－ＥＬＩＳＡ（夹心法）及Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ（点免疫法）同步检测了包虫病病人的不同抗原、抗体样品,结果表明ＭｃＡｂ夹心法对患血清、唾液抗原阳性检出率分别为８０．４３％和６０．８７％;点免疫法对血清、唾液抗体检出率为８６．９６％和７８．２６％,均明显高于对照组（Ｐ〈０．０５）,对抗原,抗体的同步检测结果进行显性及相关性分析,得出血清抗原检测可取代以往的血清抗体检测,唾     

Staphylococcal Protease: A Proteolytic Enzyme Specific for Glutamoyl Bonds

An extracellular protease of Staphylococcus aureus, strain V8, previously shown to cleave specifically the peptide bonds on the carboxyl-terminal side of either aspartate or glutamate residues in phosphate buffer (pH 7.8) hydrolyzes only glutamoyl bonds in either ammonium bicarbonate (pH 7.8) or ammonium acetate (pH 4.0). Of all aspartoyl bonds tested, only the Asp-Gly linkage is cleaved at a detectable rate. The staphylococcal protease hydrolyzes all of the seventeen different glutamoyl bonds studied, although those involving hydrophobic aminoacid residues with bulky side chains are cleaved at a lower rate.     

Detection of Reduced Acetaldehyde Protein Adducts Using a Unique Monoclonal Antibody

Acetaldehyde (AA), the major product of alcohol metabolism, has been shown to bind to proteins in vivo and form chemical adducts. These AA-protein adducts have been shown to alter protein structure and function and may result in tissue damage. Recent reports have shown that polyclonal antibodies can be produced that recognize proteins modified in vitro with AA in the presence of sodium cyanoborohydride (NaCNBH₃), a strong reducing (R) agent. Antibodies prepared in this way have been shown to recognize proteins in the livers of rats fed alcohol chronically. Because multiple AA-protein adducts can be recognized by polyclonal antisera, and a variety of adducts may be formed in vitro or in vivo, this study was designed to develop monoclonal antibodies specific for proteins modified by AA. In addition, adducts formed under R conditions are probably chemically different than those formed under nonreducing (NR) conditions, and monoclonal antibodies may provide the specificity required to distinguish these chemical differences. Balb/c mice were immunized with bovine brain tubulin that was modified by treatment with 5 mM AA for 7 days under NR conditions. Sera from immunized animals were tested for antibody activity to the immunogen (protein-NR) and for cross-reactivity to protein-R and unmodified protein. Although the highest serum antibody titers were seen toward the NR adduct, antibodies to the R adduct were also detected. This activity difference was independent of the carrier protein, because NR and R bovine serum albumin, keyhole limpet hemocyanin, and actin also gave similar results when used as the adducted protein. Surprisingly, all the monoclonal antibodies (RT1.1, RT1.2, RT1.3, and RT1.4) produced by hybridomas generated from spleen cells from NR-tubulin immunized mice recognized the R and not the NR adduct. One of these hybridomas (RT1.1) produces an lgG2b antibody that reacts with all tested proteins that have been modified with AA under chemical R conditions. Because of its monoclonal specificity, this antibody may be useful in probing for the presence of R AA-protein adducts made both in vitro and in vivo.     

恶性疟原虫融合抗原PfCP-2.9的单克隆抗体制备及功能分析

目的 制备恶性疟原虫（FCC1/HN株）融合抗原PfCP-2.9的单克隆抗体，分析其生物学特性及功能。 方法 用PfCP-2.9免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞及SP2/0骨髓瘤细胞在聚乙二醇（PEG1500）作用下进行融合，制备单克隆抗体，并分析其特性。 结果 获得1株能分泌抗PfCP-2.9的小鼠杂交瘤细胞株单克隆抗体F12D，经免疫球蛋白类型和亚类鉴定为IgG1。ELISA和蛋白质印迹法（Western blotting）显示单克隆抗体F12D能与PfCP-2.9发生特异性反应，F12D所识别的PfCP-2.9抗原表位不能耐受还原剂巯基乙醇，表明F12D识别的是构象表位。间接免疫荧光试验（IFA）显示F12D可识别培养的FCC1/HN。体外抑制试验结果显示，F12D终浓度为0.3 mg/ml时，对FCC1/HN的抑制率为56%。 结论 单克隆抗体F12D能与PfCP-2.9发生特异性反应，其所识别表位为构象表位，F12D可识别体外培养的FCC1/HN，并对其生长具有抑制作用。     

用布鲁氏菌膜蛋白抗原的免疫酶斑点试验检测布鲁氏菌病患者抗体

本文报告用布鲁氏菌外膜蛋白抗原。对142份布鲁氏菌病急,慢性患者血清进行免疫酶斑点试验,为减少样品的交叉凝集、省试剂和携带方便,又将纤维素膜用打孔器打成小圆片备用。结果表明,就敏感性、特异性和操作程序而言,免疫酶斑点试验要优于ELISA,可供大量布病血清检查之用。所采用的外膜蛋白抗原,将为今后诊断粗糙型及非典型布鲁氏菌引起的布鲁氏菌病提供了广谱抗原。     

以重组蛋白为抗原的ELISA法检测旋毛虫抗体

目的 寻求特异性强、敏感性高的旋毛虫病诊断抗原。 方法 以旋毛虫新生幼虫期特异性T668基因在E.coli高效表达的重组蛋白为抗原，分别以兔、猪和健康者血清及旋毛虫病阳性血清为一抗，以辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔IgG、山羊抗猪IgG和山羊抗人IgG为二抗，建立检测旋毛虫抗体的间接ELISA方法，并以旋毛虫肌幼虫排泄?鄄分泌（ES）抗原作为检测对照。 结果 以T668重组蛋白为抗原，对兔、猪和人旋毛虫病血清进行检测，阳性检出率为100 ％，且敏感性高（0.016 μg / 孔），与ES抗原检测结果完全一致。 结论 T668重组抗原有望替代ES抗原检测旋毛虫抗体。