中药对脊髓损伤大鼠背根神经节c-Jun表达的影响

应用荧光免疫组化法及激光扫描共聚焦显微镜技术,探索中药脊髓I号促进大鼠损伤脊髓修复再生的机制。结果表明,服用脊髓I号后脊髓损伤侧背根节神经元的c-Jun表达明显上调;脊髓损伤侧背根节神经元的细胞核呈完整形态的数量明显增多。提示脊髓I号可能通过对c-Jun基因表达的调节,激发损伤脊髓组织的修复再生。     

中药脊髓I号对脊髓损伤大鼠背根节CGRP表达的影响

为研究在脊髓损伤后服用中药脊髓I号 (SCI)对背根节 (DRG)神经元降钙素基因相关肽 (CGRP)表达的影响 ,探讨SCI促进脊髓修复再生效应的机制 ,用免疫细胞化学法和定量图像分析法 ,检查了SCI对Wistar大鼠下胸髓半横断损伤诱发的局部DRG神经元CGRP表达的影响。结果发现 :①脊髓半横断引起同侧首、尾向各 3个DRG内CGRP表达的明显和持续性下调 ;②损伤后投给SCI冲剂 ,可以明显减轻、但不能完全阻止脊髓损伤诱发的CGRP表达下调 ;③损伤后投给中药补阳还五汤 ,或用大剂量的氢化可的松治疗 ,不能减轻脊髓损伤诱发的CGRP表达下调 ;④在服用SCI大鼠脊髓的损伤区 ,显示有明显的修复再生。提示 :CGRP表达程度与脊髓损伤及其修复再生的情况相关 ;SCI可能通过对CGRP mRNA基因表达的调节 ,激发损伤脊髓组织的修复再生。     

中药脊髓Ⅰ号对脊髓损伤大鼠背根节CGRP表达的影响

为研究在脊髓损伤后服用中药脊髓I号(SCI)对背根节(DRG)神经元降钙素基因相关肽(CGRP)表达的影响,探讨SCI促进脊髓修复再生效应的机制,用免疫细胞化学法和定量图像分析法,检查了SCI对Wistar大鼠下胸髓半横断损伤诱发的局部DRG神经元CGRP表达的影响.结果发现:①脊髓半横断引起同侧首、尾向各3个DRG内CGRP表达的明显和持续性下调;②损伤后投给SCI冲剂,可以明显减轻、但不能完全阻止脊髓损伤诱发的CGRP表达下调;③损伤后投给中药补阳还五汤,或用大剂量的氢化可的松治疗,不能减轻脊髓损伤诱发的CGRP表达下调;④在服用SCI大鼠脊髓的损伤区,显示有明显的修复再生.提示:CGRP表达程度与脊髓损伤及其修复再生的情况相关;SCI可能通过对CGRP-mRNA基因表达的调节,激发损伤脊髓组织的修复再生.     

中药脊髓I号对脊髓损伤大鼠背根神经节一氧化氮合酶表达的影响

为研究中药合剂脊髓I号 (SCI)促进脊髓修复再生效应的机制 ,用NADPH d染色法和图像分析技术观察了脊髓损伤大鼠灌服SCI后 ,背根节 (DRG)细胞一氧化氮合酶 (NOS)的表达。结果表明 :大鼠脊髓损伤后及时灌服SCI与对照组大鼠比较 ,脊髓损伤侧首、尾向各 2个DRG内NOS的表达明显和持续性上调 (神经节细胞NOS表达强阳性率可达 40 %以上 )。提示NOS表达程度与脊髓损伤和修复再生的情况相关 ;而SCI可能通过对NOS基因表达的调节 ,促进损伤脊髓组织的修复再生。     

一氧化氮对体外培养脊髓及背根神经节细胞的作用

研究一氧氧化氮对体外培养脊髓及背根神经节细胞的作用。     

己酮可可碱对染汞大鼠脊髓及背根神经节TNF-α表达的影响

目的 观察己酮可可碱对大鼠脊髓和背根神经节(DRG)肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响.方法 雄性SD大鼠40只,体重180-220g,分为7组.对照组(10只)经口灌胃生理盐水(NS)2mL/次,每天1次;A、B、c组(各5只)按17mg/kg;D、E、F组(各5只)按8.5mag/kg经口灌胃HgCl_2溶液,每天1次.7组均连续灌胃18～22d.染汞组动物出现汞中毒症状后,处死A、D组大鼠和对照组5只大鼠.随后B、E组用二巯丙磺钠注射液(DMPS)按28 mg/kg腹腔注射驱汞2个疗程(驱汞3 d,休息4 d为1个疗程):C组用DMPS+己酮可可碱(按29.22 mg/kg经口灌胃,每天1次,共14 d);F组腹腔注射Ns 1 mL/次,方法同DMPS.实验结束后处死全部动物,灌注固定取出脊髓L5-6节及L5、L6两侧DRG并制成病理切片.用免疫组织化学SABC法测定DRG和脊髓TNF-α表达水平.结果 染毒组大鼠DRG和脊髓TNF-α平均灰度均显著低于对照组;阳性反应物平均面积均显著高于对照组(P<0.05);B、E组用DMPS驱汞2个疗程及F组腹腔注射NS 2周期后,均未见TNF-α表达显著减弱,C组(DMPS+己酮可可碱)DRG和脊髓TNF-α平均灰度显著提高.平均面积减少(P<0.05).结论 亚急性HgC1_2中毒大鼠DRG和脊髓TNF-α表达显著增强,己酮可可碱联合αDMPS能够有效抑制TNF-α表达.     

胶原酶对大鼠脊神经背根神经节损伤的病理学研究

[目的]通过病理学方法研究胶原酶对大鼠脊神经背根神经节的损伤情况.[方法]57只健康的Sprague-Dawley雄性大鼠分为正常对照组;急性胶原酶手术组、亚急性胶原酶手术组和慢性胶原酶手术组;急性生理盐水手术组、亚急性生理盐水手术组和慢性生理盐水手术组.暴露大鼠左侧腰5背根神经节,并在各胶原酶手术组局部滴注胶原酶1 mL(300 U),各生理盐水手术组局部滴注生理盐水1 mL.分别于注药后1 h、1周、30 d处死动物并取包含背根神经节的一段神经做病理学检测.[结果]光镜下各组背根神经节的细胞数、胞膜、胞浆、胞核形态和细胞间神经纤维、血管相比较均无明显变化和差别.透射电镜下各组背根神经节的细胞数、细胞大体形态、胞膜和节内神经纤维相比较均无明显变化和差别,但胶原酶手术组背根神经节细胞胞内细胞器超微结构与正常对照组和相应生理盐水手术组比较有差别,表现为核仁部分偏向一侧、线粒体大量肿胀,部分嵴断裂和空泡形成.光镜病理和透射电镜均未见节细胞成群细胞坏死、细胞膜早期破裂和凋亡小体形成.[结论]临床应用的胶原酶化学髓核溶解术的胶原酶治疗浓度对大鼠脊神经背根神经节细胞有损伤作用.在临床工作中一定要慎重使用胶原酶的用药剂量和浓度,才能提高胶原酶应用的安全性.     

Caveoline-1蛋白在慢性神经痛大鼠背根神经节和脊髓背角表达的变化

目的 观察Caveolin-1蛋白在神经痛大鼠中不同作用时间脊髓背角和背根神经节表达量的变化。方法 实验动物分组和动物模型制作：对照组28只,神经痛模型组（L5脊神经结扎）28只,按处理时间不同又各分为1、3、5、7、10、14、21天共7组,每组各4只,制备动物模型。痛行为学检测：术后1、3、5、7、10、14、21天,测定各组机械撤足阈值和热撤足潜伏期,神经痛模型组和对照组对比,确定疼痛模型制作成功。神经痛模型组和对照组大鼠均在第22天处死,按同侧和对侧分别提取L5脊髓和背根神经节组织总蛋白,利用蛋白印迹法检测Caveolin-1在各实验分组脊髓背角和背根神经节同侧和对侧的表达量。结果 同侧背根神经节Caveolin-1的表达量在L5脊神经结扎后的第5、7、10、14、21天与对照组比较,分别升高了40.4%±3.67%、126.9%±5.46%、159.7%±4.89%、119.1%±5.77%和91.4%±5.31%,其中术后第10天差异有统计学意义（P<0.01）,同侧脊髓背角Caveolin-1的表达量在L5脊神经结扎后的第5、7、10、14、21天与对照组相比分别升高了33.3%±4.89%、152.8%±3.56%、142.1%±5.43%、103.2%±6.21%、175.6%±4.81%,其中第10、14、21天差异有统计学意义（P<0.05）。对照组之间Caveolin-1的表达无明显变化。结论 慢性神经痛可诱导Caveolin-1在同侧脊髓背角和背根神经节表达量的增加。     

β1,4-GalT I在大鼠坐骨神经损伤后脊髓和背根神经节中的表达

目的:观察β1,4-GalTImRNA在坐骨神经损伤后相应节段脊髓和背根神经节中的表达变化。方法:采用real-timePCR方法,分析β1,4-GalTImRNA在大鼠坐骨神经损伤后相应脊髓和背根神经节中的表达变化。运用原位杂交检测β1,4-GalTI在脊髓和背根神经节中的定位情况。结果:Real-timePCR显示,与正常脊髓和背根神经节相比,β1,4-GalTI在坐骨神经损伤后发生表达变化。原位杂交结果显示β1,4-GalTI在正常脊髓中的表达较弱,主要表达于脊髓灰质中,而损伤后在灰质和白质中均可见有大量的阳性信号。β1,4-GalTI在背根神经节中则主要定位于神经元。结论:本实验发现β1,4-GalTI在正常脊髓和背根神经节中有表达,并在坐骨神经损伤后发生表达变化。提示β1,4-GalTI在周围神经损伤后再生和退变过程中可能发挥一定的作用。     

神经营养素-3重组腺病毒促进脊髓背根神经节的存活

目的：观察神经营养素－3（neruotrophin3,NT－3)重组腺病毒（adorsal root ganglia ,DRG）细胞存活的促进作用,方法：原代培养DRG,加入不同感染增殖率（multiplicity of infection,MOI)的Ad-NT-3,观察DRG细胞的形态,MTT法测定DRG细胞的增殖活性,结果：当加入MOI为10和50的Ad-NT－3时,形态学发现,DRG细胞数目增加,突起变长,尤其以3d后表现更为明显,DRG细胞的增殖活性显增加（P＜0．01）,当MOI为100时1d和3d,DRG细胞数目明显减少,无突起或变短,部分细胞死亡,MTT法测定DRG细胞的增殖活性均显降低（P＜0．01）,结论：NT－3基因能通过腺病毒介导表达NT－3蛋白,促进体外培养DRG细胞的生活。     

部分背根切断对备用背根节GDNF、FGF-2表达的影响

目的 探讨部分背根切断后不同时相备用背根节(DRG)中胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、成纤维细胞神经生长因子(FGF-2)的表达变化。方法 15只猫分正常组、单侧部分背根切断7d及14d组,每组5只。分别于术后7d、14d处死动物,取正常组一侧、模型组手术侧L6DRG,用兔抗GDNF、FGF-2抗体行免疫组化ABC法染色,计数DRG内两因子阳性总细胞及阳性大、中小细胞的数量。结果 GDNF在正常猫DRG大、中小细胞均有分布;去部分背根后,两时相备用DRG GDNF阳性神经元总数均有下降且呈进行性递减。DRG阳性中小细胞数亦为术后两时相进行性下降,DRG阳性大神经元术后两时相均较正常组显著减少,但术后14d与术后7d组无显著性差异。FGF-2在脊髓DRG大、中小细胞亦有分布;去部分背根后7d,FGF-2阳性神经元总数下降,14d时又恢复至正常,中小细胞亦表现为先减少后上升的趋势,而大细胞则术后两时相与正常组间无显著差异。结论 去部分背根手术可致备用DRG中GDNF阳性神经元总数进行性下降,FGF-2表现为术后7d下降,14d时恢复。     

异丙酚对谷氨酸诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的 观察异丙酚对谷氨酸诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞的凋亡和相关基因bcl-2、bax蛋白表达变化的影响。方法 取新生2～3d Wistar大鼠T12～L5脊髓背角星形胶质细胞，原代纯化培养3周。将细胞分为正常对照组（C组）、乳剂对照组（L组）、谷氨酸对照组（G组）、异丙酚对照组（P组）、谷氨酸和异丙酚合用组（GP1、GP2、GP3组）。加药后培养24h免疫细胞化学法观察bcl-2和bax蛋白平均吸光度（A）值及细胞形态学变化，流式细胞仪检测星形胶质细胞凋亡率。结果 与C组比较，G组、GP。组细胞发生大量凋亡（均P〈0.01），bax蛋白阳性表达，bax蛋白A值升高（均P〈0.01），bcl-2蛋白阴性表达，bcl-2蛋白A值降低（均P〈0.01）。与G组比较，GP2组、GP3组凋亡降低（P〈0.05，P〈0.01），bcl-2蛋白阳性表达，bcl-2蛋白A值升高（P〈0.05，P〈0.01），bax蛋白阴性表达，bax蛋白A值降低（P〈0．05，P〈0.01）。结论 异丙酚通过增强bcl-2蛋白表达，显著抑制谷氨酸诱导的星形胶质细胞凋亡，其抑制程度与剂量有关。     

部分背根切断及针刺促进备用背根节c-jun的表达

目的 探讨部分背根切断术及针刺对背根节（DRG）c-jun表达的影响。方法 针成年雄猫15只，分假手术组，手术组和术后针刺组，每组5只。手术组动物行单侧备用根术，术后针刺组动物经单侧备用根术后，针刺后肢手术侧L6脊神经分布区中的两组穴位，足三里和悬中：伏兔和三阴交，每天一次，每次30min，连续针刺7d，通过免疫组化ABC法，用c-jun特异抗体（1:1000,Santa Cruz)对切片进行染色，DAB呈色。观察并测量DRG中c-jun阳性神经元的分布，数量及反应强度。结果 在假手术组DRG中，只有部分神经元染色。手术组c-jun阳性神经元的数值较假手术组显著增多（P＜0．05），其免疫反应水平较假手术组，显著上升（P＜0．05）。术后针刺组较手术组的c-jun免疫反应强度增强，而阳性神经元的数量没有显著差异。结论 部分背根切断后备用DRG神经元中c-jun的表达增加，针刺促使c-jun的表达进一步上调。     

部分背根切断激发脊髓Ⅱ板层细胞凋亡

目的为了解部分背根切断后脊髓可塑性中是否涉及脊髓内胶质细胞和神经元细胞凋亡.方法采用DNA原位末端标记-TUNEL法染色,检测部分背根切断后脊髓细胞凋亡.结果在部分背根切断后脊髓的手术侧和非手术侧均见部分TUNEL阳性反应的胶质细胞和神经元,且手术侧的Ⅱ板层凋亡细胞数较非手术侧多(P＜0.05).结论背根切断不仅导致手术侧胶质细胞和神经元凋亡细胞数量明显增加,而且对非手术侧也有影响.     

切断大鼠前根及电针刺激对相应脊神经节内ACh释放的影响

采用ACh敏感电极测定相应脊神经节(DRG)内ACh活度的方法,观察切断大鼠前根及电针刺激对相应脊神经节内ACh释放的影响。结果:①切断大鼠左侧L4前根后第3d,切断侧L4DRG内ACh相对含量较切断前相对照侧L4DRG内ACh相对含量明显降低(均为P<0.01)。②切断左侧L4前根前给予电针刺激后,两侧L4DRG内ACh的相对含量较电针前明显增加(P<0.01)。③切断左侧L4前根后第3d给予电针刺激,切断侧L4DRG内ACh相对含量同电针前相比无显著性差异(P>0.05),但显著低于对照侧电针后的ACh相对含量(P<0.01)。提示:DRG内有ACh的释放,ACh的释放是由前根投射到DRG内的胆碱能神经纤维所致。表明在DRG水平前角运动神经元对一级感觉传入实施调控的可能性是存在的。     

组织外植块对培养的鸡胚背根节神经突起生长的影响

为了解神经元的发育和周围组织的关系,本文分别用:(1) 10天鸡胚背根节与10天鸡胚心脏、皮肤、角膜、骨骼肌、肠、大脑、脊髓外植块联合培养;(2) 不同时期的鸡角膜与不同胚龄的鸡胚背根节联合培养;(3) 10天鸡胚背根节与雏鸡角膜内、外层联合培养。用于联合培养的背根节和组织外植块均按Maximow双盖片法种植在涂有鼠尾胶原的盖玻片上,两者相距1.5mm。外植块大小约0.5×1×1mm~3。培养48小时后取出固定,用改良的Bodian蛋白银法浸镀染色,在低倍镜下对神经突起进行半定量计数。 实验结果表明鸡胚心脏,皮肤和角膜外植块对背根节神经突起生长具较强的促进作用且对生长方向有明显诱导作用;骨骼肌、肠和大脑对神经突起生长也有不同程度促进作用,但脊髓却无明显作用。14、16、18天鸡胚角膜对8、10、12、14天鸡胚背根节神经突起生长有明显促进作用;12、14天鸡胚背根节在各时期角膜作用下神经突起生长都较丰富。含上皮层的雏鸡角膜外植块促进背根节神经突起生长的作用比含内皮层的角膜外植块要强。