脂多糖、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β对鼠肺微血管内皮细胞水通道蛋白-1表达的影响

目的　通过观察脂多糖 (LPS)、肿瘤坏死因子 α(TNF- α)、白细胞介素 1β(IL- 1β)对鼠肺微血管内皮细胞水通道蛋白 1(AQP- 1)表达的影响 ,为研究急性肺损伤时肺水异常代谢的机制提供实验依据。方法　在体外培养大鼠肺微血管内皮细胞 ,分为LPS组、TNF α组、IL- 1β组和对照组 ,前三组分别给予LPS 10 0ng/mL、TNF -α 10 0 0U/mL、IL -1β10 0 0U/mL刺激 4h ,应用半定量RT- PCR法以及免疫细胞化学染色法检测AQP- 1的表达。结果　刺激组AQP -1的表达显著低于对照组 (P <0 . 0 1)。结论　LPS、TNF -α、IL- 1β刺激下AQP- 1表达下降 ,提示AQP -1在急性肺损伤时可能与肺水代谢异常有关。     

脂多糖对复合培养的微血管内皮细胞Janus激酶表达的影响

目的：研究脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）对复合培养的微血管内皮细胞中Janus激酶（Janus kinase,JAK）基因表达的影响。方法：与肺动脉平滑肌细胞复合培养鼠肺微血管内皮细胞，采用半定量RT－PCR技术检测正常组、LPS2、8、16h组的JAK2和TYK2基因的表达水平。结果：LPS复合培养2h组肺微血管内皮细胞中JAK2 mRNA表达水平升高，在LPS8h组达最高，与正常组比较均有明显差别。在正常组和LPS刺激组均未见肺微血管内皮细胞表达TYK2基因。结论：肺微血管内皮细胞不表达TYK2基因；LPS可使复合培养的肺微血管内皮细胞中JAK2基因的表达升高。     

全氟化碳对脂多糖诱导肺微血管内皮细胞表达ICAM-1的影响

目的 观察全氟化碳(PFC)对脂多糖(LPS)诱导肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cells, PMVEC)表达细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1)的影响,探讨PFC的抗炎作用及其对PMVEC的保护机制.方法 采用组织块法培养大鼠PMVEC,将细胞接种于Transwell小室,按随机数字表法分为空白对照组(C)、PFC干预组(F)、LPS刺激组(L)、LPS刺激 PFC干预组(LF),以处理0 h为空白对照,各处理组分别给予PFC或100 μg/L LPS共孵育3、8、24 h,通过MTT法观测PFC作用后正常大鼠PMVEC细胞活力变化,应用逆转录PCR(RT-PCR)和流式细胞术(FCM)分别检测各组各时相点大鼠PMVEC ICAM-1 mRNA和蛋白表达量.结果 PFC作用后,正常大鼠PMVEC的细胞活力未见明显改变.各组各时相点ICAM-1 mRNA表达的变化规律与蛋白质水平基本一致,F组各时相点ICAM-1的表达量与C组比较均无显著性差异(P＞0.05);L组各时相点细胞的ICAM-1表达均较C组显著增强(P＜0.05,P＜0.01);LF组与L组同时相点比较,3 h组ICAM-1表达量无明显差异(P＞0.05),但8 h和24 h组均有显著降低(P＜0.01,P＜0.05).结论 PFC通过抗炎效应直接下调LPS诱导PMVEC表达ICAM-1,发挥PMVEC保护作用.     

升降散对急性肺损伤大鼠肺微血管内皮细胞NF-kB表达的影响

目的 探讨升降散对急性肺损伤的治疗作用机理.方法 40只雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、升降散大剂量组、中剂量组及小剂量组.给药6 d后,舌下静脉注射LPS复制急性肺损伤模型,取肺组织切片,免疫组化检测.采集图像.分析微血管内皮细胞核的平均灰度.结果 药物治疗组与模型组比较,能明显抑制微血管内皮细胞核中NF-kB的表达,有显著性差异.结论 升降散可通过抑制肺微血管内皮细胞NF-kB的表达,抑制炎症反应对肺组织造成的急性损伤,对急性肺损伤起到防治作用.     

LPS诱导小鼠肺微血管内皮细胞VEGF表达的探讨

目的：研究小鼠肺微血管内皮细胞分离培养方法并探讨脂多糖(LPS)诱导小鼠肺微血管内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达．方法：贴块法培养小鼠肺微血管内皮细胞,并进行系列鉴定．采用ELISA方法检测正常组、LPS(1μg／ml)作用2、8、16、24、36、48h组的VEGF变化水平。结果：获得的小鼠肺微血管内皮细胞具有鹅卵石形态,但LPS对小鼠肺微血管内皮细胞形态影响明显。对异植物血凝素结合试验,CD31及Ⅷ因子抗原免疫组化染色为阳性。LPS(1μg／ml)分别作用小鼠肺微血管内皮细胞2h组可见VEGF表达升高,8h组达最高,16、24、36、48h组的表达量低于8h组。结论：LPS作用后,小鼠肺微血管内皮细胞VEGF表达呈抛物线型下降。LPS损伤内皮细胞功能和形态。     

大鼠肺微血管内皮细胞的分离培养

目的探讨一种分离和培养大鼠肺微血管内皮细胞(LMVEC)的简单方法。方法组织贴块法培养大鼠LMVEC,倒置显微镜下观察细胞的形态和生长特性,并采用免疫组化方法进行鉴定。结果获得的LMVEC具有规律的铺路石镶嵌状排列,内皮细胞特异性抗体CD31免疫组化染色阳性。结论组织贴块法培养LMVEC是简单可行的。     

重组Shh因子对海水浸泡肺微血管内皮细胞增殖和凋亡的影响研究

目的 观察不同剂量重组Shh(recombinant sonic hedgehog,rShh)因子对海水浸泡肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cell,PMVEC)的促进增殖及抗凋亡作用.方法 组织块法原代培养大鼠PMVEC,建立大鼠PMVEC海水浸泡模型,加入不同剂量重组Shh因子,采用TUNEL法检测PMVEC凋亡率.采用2,3-苯基溴化四唑(MTT)染色计数法测定细胞增殖活性.结果 海水浸泡可导致PMVEC损伤,表现为PMVEC细胞增殖受到抑制以及凋亡发生率增加.重组Shh能降低海水所致PMVEC增殖抑制率和其凋亡率,在实验剂量范围内,其促增殖和抗凋亡作用呈剂量依赖性.结论 重组Shh可促进海水浸泡PMVEC增殖和抑制其凋亡.     

脂多糖对大鼠肺微血管内皮细胞Gsα和Giα蛋白亚型的影响*

目的：观察脂多糖（LPS）对大鼠肺微血管内皮细胞（RPMVECs)G蛋白的影响及甲基强的松龙的干预作用。方法：用流式细胞技术（FCM）检测G蛋白亚型的变化。结果：①10μg/ml LPS作用于RPMVECs30和90min后,Gsα蛋白水平较对照组显著下降。甲基强的松龙干预30和90min后,对LPS致RPMVECs膜Gsα蛋白水平的变化有显著抑制作用。②10μg/ml LPS作用于RPMVECs30和90min后,Giα蛋白水平较对照组显著下降。甲基强的松龙干预30和90min后,对LPS致RPMVECs膜Giα蛋白水平的变化有显著抑制作用。结论：①LPS诱导RPMVECS Gsα和Giα蛋白水平的变化可能是LPS诱导RPMVECs单层通透性增加的机制之一。②甲基强的松龙参与抑制LPS诱导RPMVECs单层通透性增加的作用。     

两种单肺通气方式对大鼠肺AQP-5表达影响的对比研究

目的研究两种单肺通气（OLV）方式下大鼠肺组织水通道蛋白-5（AQP-5）表达的变化。方法建立两种OLV大鼠模型：夹闭左侧肺门OLV组（A组）,过深插管OLV组（B组）。按不同通气时间分亚组A1、A2、A3和B1、B2、B3。设双对照组：双肺通气组（C组）,同样分亚组C1、C2、C3;空白对照（D组）。免疫印记法检测肺AQP-5的表达。结果 A、B、C组AQP-5的表达均较D组减少（P〈0.05）;各亚组左右两侧肺AQP-5的表达差异无统计学意义（P〉0.05）;A、B、C组组内各亚组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）;A1、B1、C1组间比较差异均无统计学意义（P〉0.05）;A2、B2、C2组间比较,A2比B2和C2均有减少（P〈0.05）,B2与C2差异无统计学意义（P〉0.05）;A3、B3、C3组间比较,A3和B3均较C3组减少（P〈0.05）,A3比B3减少（P〈0.05）。结论机械通气可致大鼠AQP-5表达下调,与时间相关,夹闭法OLV和插管过深法OLV对AQP-5表达的影响超过双肺通气,前者更明显。     

高糖对脂多糖诱导的大鼠肺微血管内皮细胞自噬的影响

目的:探究高糖(HG)环境对脂多糖(LPS)处理的大鼠肺微血管内皮细胞(RPMECs)自噬的影响.方法:LPS联合HG处理RPMECs 24 h后;相应商品化试剂盒检测细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量.免疫印迹法检测Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC-3...     

Expression of aquaporin-1 and aquaporin-3 in lung tissue of rat model with ischemia-reperfusion injury

End-stage lung diseases are common and frequentlyoccurring diseases which are difficult for clinical treatment. In recent years, lung transplantation has become a widely accepted and effective therapeutic option for patients with the end-stage pulmonary diseases. Early pulmonary edema resulting from ischemia-reperfusion injury accounts for the major part of mortality and morbidity after lung transplantation. The water channel proteins in lung injury have been little studied, and their impact on the formation of pulmonary edema remains unclear. In this study, we established a rat lung ischemia-reperfusion model to study its impact on the expressions of water channel proteins in lung tissue and explore a new approach to lung transplantation in pulmonary edema pathogenesis.     

自噬对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤的影响

目的：研究自噬对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤的影响。方法将48只SD大鼠平均分为4组：（1）生理盐水对照组（NS组）;（2）脂多糖（LPS）模型组（L组）;（3）LPS＋自噬组（L＋ A）;（4）LPS＋自噬抑制组（L＋I）。血气分析检测动脉血氧分压（PaO2）、动脉二氧化碳分压（PaCO2）和pH值;计算肺组织干湿比;HE染色观察肺组织病理学变化并进行肺损伤评分;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清和肺泡灌洗液中微管关联蛋白LC3b、髓过氧化物酶（MPO）、巨噬细胞炎性蛋白‐2（MIP‐2）、白细胞介素‐1β（IL‐1β）、肿瘤坏死因子‐α（TNF‐α）的表达。结果与NS组比较,L组动脉血PaO2、pH值降低,PaCO2升高（P＜0．05）;与L组相比,L＋A组动脉血PaO2、pH值上升,PaCO2下降（P＜0．01）;L＋I组动脉血PaO2、pH值降低,PaCO2升高（P＜0．01）,差异具有统计学意义。L组和L＋I组血清和肺泡灌洗液中LC3b水平降低,M PO、M IP‐2、IL‐1β和T N F‐α水平均升高,而L＋ A组正好相反。结论自噬对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤起到改善或保护作用。     

不同剂量脂多糖对大鼠急性肺损伤效应的观察

目的观察脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠血浆IL-4含量变化,探讨其在ALI发生发展过程中的意义.方法 120只Wistar大鼠根据注射LPS剂量随机分为2、4、6和8 mg/kg组,并设立生理盐水对照组(NS组),伤后1、2、4和6 h观察大鼠的一般情况、动脉血氧分压(PaO2)、肺组织湿质量/干质量比值、肺组织病理改变,并检测血浆IL-4含量.结果①梯度剂量LPS可以引发程度不同的大鼠ALI;当LPS≥6 mg/kg时,发生急性呼吸窘迫综合征(ARDS).②LPS可以诱导大鼠血浆IL-4含量升高;当LPS≥6 mg/kg时,血浆IL-4含量峰值显著提高.结论①尾静脉注射LPS可以复制出大鼠ALI模型.②LPS≥6 mg/kg是大鼠发生ARDS的临界剂量.③LPS诱导大鼠血浆IL-4含量升高可能与ARDS发生有关.     

内皮祖细胞在急性肺损伤中应用的研究进展

急性肺损伤是由各种肺内外因素导致的进行性呼吸困难和难治性低氧血症,其病理特征包括炎症反应及肺泡-毛细血管屏障功能破坏,微循环血管内皮损伤是主要标志.内皮祖细胞可以从骨髓动员迁移到损伤部位,分化为成熟内皮细胞发挥直接修复作用,并通过间接免疫调节作用改善微环境.此外内皮祖细胞还可以分泌细胞因子以自分泌或旁分泌方式促进新生血...     

汉防己甲素对大肠杆菌脂多糖所致急性肺损伤大鼠炎症介质的影响

目的 探讨中药单体汉防己甲素(trandrine,Tet)干预对静脉注射内毒素(LPS)所致急性肺损伤(ALI)的影响及其可能机制.方法 将健康雄性Wistar大鼠32只,随机分为4组:即正常组、模型组、Tet预防组和Tet治疗组.除正常组外,其他3组采用大肠杆菌LPS静脉注射造成急性肺损伤模型,Tet预防组和Tet治疗组分别于注射LPS前后30 min内缓慢注射T注射液(20 mg/kg),正常组给予等量生理盐水.于初始(0)、0.5、2,4、6 h 5个时间点采集动脉血测定动脉血氧分压(PaO2)和动脉血二氧化碳分压(PaCO2).实验结束时测定肺组织湿干重比(W/D),检测支气管肺泡灌洗液(BALF)白细胞总数及总蛋白含量;ELISA法测定外周血及BALF中炎症介质TNF-α及BALF中IL-1β、IL-6浓度;测定肺组织一氧化氮(NO)浓度.结论 模型组在LPS输注完毕后PaO2逐渐下降,PaCO2逐渐下降(P<0.05),Tet预防组0.5、2、4、6 h,Tet治疗组2、4、6 h PaO2高于模型组(P<0.05),PaCO2与模型组差异无统计学意义(P<0.05);模型组肺组织W/D值和NO含量、BALF中自细胞计数、总蛋白含量、IL-1β、TNF-α、IL-6浓度显著性增高(P<0.05),两T组均能减轻上述变化(P<0.05).结论 Tet早期干预能减轻内毒素所致急性肺损伤的炎症介质失衡.     

罗红霉素对内毒素性急性肺损伤的保护作用

目的　探讨罗红霉素对大鼠急性肺损伤模型的保护作用 .方法　使用内毒素 (L PS,2 mg·kg- 1 ,ip)建立 SD大鼠急性肺损伤模型 ,随机分为 3组 :1正常对照组 (NC) ,经胃灌入生理盐水 10 m L· kg- 1 ;2 L PS组 ,静脉注射 L PS后 ,10m L· kg- 1生理盐水灌胃 ;3罗红霉素 (roxithromycin,Rox)治疗组 (Rx) ,静脉注射 L PS后 ,经胃灌入罗红霉素 2 0 mg·kg- 1 .测定各组动脉血氧分压 (Pa O2 )、p H、二氧化碳分压(Pa CO2 )、肺系数、肺水含量、肺通透性指数 ,放射免疫法测定血清和肺泡灌洗液中的 TNF-α,IL - 10浓度 .结果　注射 L PS4 h后 ,治疗组与内毒素组相比 ,Pa O2 ,p H升高 ,Pa CO2 降低 ,肺系数 (0 .5 8± 0 .0 3vs 0 .6 7± 0 .0 4 ,P<0 .0 5 )、肺水含量 (78.76± 2 .13vs 82 .81± 3.87,P<0 .0 5 )、肺通透性指数 (6 .2 5±0 .74 vs12 .4 7± 0 .89,P<0 .0 5 )均有明显下降 .血清和肺泡灌洗液中的 TNF- α下降 ,IL- 10升高 ,病理学观察 Rx组肺组织病变减轻 .结论　罗红霉素能改善大鼠急性肺损伤时气体交换能力 ,调节肺部细胞因子 ,对内毒素诱导的急性肺损伤有保护作用     

脂多糖对大鼠肺微血管内皮细胞ACE和ACE2表达的影响及血管紧张素转换酶抑制剂的干预作用

目的 观察脂多糖(LPS)对大鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)血管紧张素转换酶(ACE)和血管紧张素转换酶2(ACE2)表达的影响及血管紧张素转换酶抑制剂( ACEI) Captopril的干预作用.方法 组织块法体外培养大鼠PMVECs,观察LPS对PMVECs作用的时间和浓度相关毒性以及Captopril的干预作用;再将PMVECs随机分为4组:对照组(n=6),不加干预措施;Captopril组(n=6),10-5mol/L Captopril孵育细胞8 h;LPS组(n=6),1 mg/mL LPS孵育细胞8 h;Captoril+ LPS组(n=6),10-5 moL/L Captopril孵育细胞30 min后再加入1 mg/mL LPS孵育8h.CCK8检测细胞活性;Western blotting法检测各组细胞ACE和ACE2的表达.结果 LPS可对大鼠PMECs产生明显的毒性作用,并可使细胞ACE表达上调及ACE2表达下降;经Captopril干预后,可明显抑制LPS的细胞毒性作用,并逆转LPS对PMVECs中ACE及ACE2表达的影响,使ACE和ACE2表达水平回调至对照组水平.结论ACEI能减轻LPS所致的PMVECs毒性作用,而ACE及ACE2表达的变化可能在这一过程中起重要作用.