昆明山海棠治疗耳胆脂瘤的实验研究

目的应用昆明山海棠对耳胆脂瘤动物模型治疗后，进行TGF-β1、C—FOS在耳胆脂瘤上皮中的表达的研究，探讨昆明山海棠在局部治疗耳胆脂瘤方面的价值及应用原理．方法制作耳胆脂瘤动物模型，以氯霉素、昆明山海棠、生理盐水制剂，进行局部对照治疗，应用免疫组化SP染色法检测TGF-β1、C—FOS分别在以上3组动物模型胆脂瘤上皮中、17例对照健康耳中的表达，应用计算机图像分析系统对其阳性表达进行定量分析．结果应用昆明山海棠、氯霉素局部治疗后的动物模型，其耳胆脂瘤C—FOS的表达明显低于正常外耳道上皮组织（F=7．293，P〈0．05），而仅有昆明山海棠制剂使其TGF-β1表达增强（F=5．789，P〈0．05），同时也发现生理盐水对TGF-β1、C—FOS的表达无影响．结论即刻早期基因C—FOS在胆脂瘤中表达显著增强，并与胆脂瘤侵袭能力的高低相关．而TGF-β1名为生长抑制多态因子，当在胆脂瘤中高表达使其抑制细胞生长，使胆脂瘤的高增殖处于可控制状态．提示应用昆明山海棠制剂通过细胞因子作用于耳胆脂瘤动物模型，可达到治疗胆脂瘤的目的．     

白细胞介素1β在中耳胆脂瘤上皮的表达

目的 探讨IL-1β在中耳胆脂瘤上皮组织中的表达.方法 采用酶联免疫法测定胆脂瘤上皮组织匀浆液及正常外耳道皮肤组织匀浆液中IL-1β水平.结果 在12例中耳胆脂瘤上皮及10例正常外耳道皮肤组织中,IL-1β的表达分别为(313.562±52.924)及(141.414±31.335)pg/mL(P<0.01).结论 IL-1β在中耳胆脂瘤上皮组织中存在高表达;IL-1β可能参与促进胆脂瘤上皮增生.     

中耳胆脂瘤组织中碳酸酐酶的免疫组化研究

目的:探讨碳酸酐酶(carbonic anhydrase,CA)在中耳胆脂瘤组织中的表达及其在中耳胆脂瘤骨质破坏机制中的作用.方法:采用免疫组化SABC染色法检测54例(57耳)中耳胆脂瘤和22例正常外耳道皮肤中CA的表达.结果:CA在中耳胆脂瘤上皮和正常外耳道皮肤的阳性表达率分别为98.25%和63.64%,中耳胆脂瘤组织CA的表达较正常外耳道皮肤高(P＜0.05).CA在胆脂瘤上皮各层细胞均有阳性表达,角化物为阴性表达.正常外耳道皮肤CA主要分布在棘细胞层和颗粒层,基底细胞层和角质层表达较弱.广泛性胆脂瘤和局限性胆脂瘤CA表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论:CA在中耳胆脂瘤组织中的表达增强,可能与胆脂瘤破坏骨质的脱矿物质阶段有关.     

宫颈癌中p21WAF1和CyclinD1的表达与预后

目的 探讨p21WAF1和CyclinD1在宫颈癌发生、发展、预后中的意义。方法 采用免疫组化SP法检测41例宫颈癌,17例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和10例正常宫颈组织中p21WAF1和CyclinD1的表达,及它们与病理组织分级、临床分期、转移和生存时间的相关性。结果 宫颈癌组织中CyclinD1的阳性表达率明显高于CIN组和正常对照组(均为P<0.05),但与肿瘤分级、临床分期、转移无显著相关性(均为P>0.05),CyclineD1阳性表达的宫颈癌患者的中位生存期明显小于阴性表达者(均为,P<0.05)。宫颈癌组织p21WAF1阳性表达率则明显低于CIN组和正常对照组(P<0.05),p21WAF1与肿瘤分级有明显相关性(P<0.05)。结论 CyclinD1高表达,p21WAF1低表达与宫颈癌的发生、发展密切相关。CyclinD1表达可作为判断宫颈癌患者预后的指标。     

TGF-β1、β3 在子痫前期患者胎盘组织中的表达

［摘要］目的　探讨子痫前期患者胎盘组织中转化生长因子β1（ transforming growth factor-β1,TGF- β1） 及TGF- β3的水平变化, 为研究子痫前期的发病机制提供依据．方法　运用免疫组化法检测55 例子痫前期患者（实验组,其中轻度子痫前期19例,重度子痫36例）,46例正常妊娠孕妇（ 对照组） 胎盘组织中TGF- β1及TGF- β3的表达．结果　轻度子痫前期组胎盘绒毛滋养细胞及蜕膜细胞TGF- β1的阳性表达强度高于对照组,差异有统计学意义（P < 0.05）．重度子痫前期TGF- β3的阳性表达强度高于对照组,差异有统计学意义（P < 0.05）．重度子痫前期组TGF-β1、β3表达高于轻度子痫前期组（P < 0.05）．结论　子痫前期胎盘组织中TGF-β1、β3表达水平明显增高, 并且与子痫前期病情发展相关．     

稳定高效表达p21WAF1/CIP1蛋白的Hela细胞株的建立

目的：建立高效、稳定表达p21WAF1/CIP1人宫颈癌细胞株Hela-pcDNA3-WAF1。方法：应用脂质体(lipofectin)将质粒pcDNA3和重组质粒pcDNA3-WAF1分别转入人宫颈癌细胞系Hela细胞；经G418筛选，转染阳性细胞连续传代培养，并应用免疫荧光技术监测重组基因p21WAF1/CIP1翻译水平的表达活性。结果：经G418筛选，Hela细胞全部死亡，转染质粒pcDNA3和重组质粒pcDNA3-WAF1的Hela细胞存活，并可连续传代培养30代；免疫荧光技术监测p21WAF1/CIP1表达结果显示：转染重组质粒pcDNA3-WAF1的Hela细胞p21WAF1/CIP1表达阳性细胞率（92.83%）显著高于转染质粒pcDNA3（12.26%）和Hela细胞组（5.63%）（F=17 218.22，P<0.001）；各代间差异无显著性（F=1.562，P>0.05）。 结论：建立一株高效、稳定表达p21WAF1/CIP1人宫颈癌细胞株Hela-pcDNA3-WAF1。     

表皮生长因子受体在中耳胆脂瘤中的表达

目的：探讨表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）在中耳胆脂瘤发生，发展中的作用。方法：运用免疫组化方法检测表皮生长因子受体在１０例正常外耳道上皮及３６例胆脂瘤上皮中的表达情况。结果：１０例正常外耳道上皮全部为阴性，３６例胆脂瘤上皮中２３例出现ＥＧＦＲ阳性表达（阳性率为６３．９％）ＥＧＦＲ阳性表达与中耳胆脂瘤骨质破坏程度呈正相关。结论：ＥＧＦＲ过度表达与胆脂瘤上皮细胞增生及胆脂瘤周围骨质破坏有关，它在胆脂瘤的发生、发展中起着重要作用。     

p21WAF1基因与肝细胞癌临床病理特征的相关性分析

目的探讨p21WAF1基因与肝细胞癌（HCC）临床病理特征（组织学分级、转移、肿块大小和包膜形成）的相关性。方法随机选择45例肝细胞癌患者的癌和癌旁肝组织标本，SP法检测其p21WAF1蛋白表达，分析p21WAF1基因与HCC临床病理特征（组织学分级、转移、肿块大小和包膜形成）的相关性。结果p21WAF1在癌和癌旁肝组织中阳性表达率分别为68.9％和15．6％，两者比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；HCC组织学分级、有无转移、肿块大小、有无包膜形成者p21WAF1蛋白阳性表达率比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论p21WAF1基因表达阳性率在HCC的临床病理特征（组织学分级、转移、肿块大小和包膜形成）间无差异，p21WAF1尚不能作为HCC分化不良及预后的指标。     

TGF-β1对大鼠肾小球系膜细胞PAI-1表达的影响

目的：观察不同浓度重组人转化生长因子-β1（TGF-β1）对大鼠肾系膜细胞增殖情况和纤溶酶原激活物(PAI-1)抑制物表达水平的影响。方法：采用MTT和流式细胞仪检测细胞增殖,Western blotting和RT-PCR法检测PAI-1的表达水平。结果：与对照组相比,0.1和0.5 μg·L^-1 TGF-β1诱导肾小球系膜细胞增殖,增殖率分别为(146.6±10.2)%和(134.6±14.5)%,PAI-1 mRNA和蛋白表达增强;而5和25 μg·L^-1 TGF-β1诱导的细胞增殖率为(75.2±13.2)%和(67.5±11.1)%,PAI-1 mRNA和蛋白表达无明显变化。结论：低剂量TGF-β1促进大鼠系膜细胞增殖、诱导PAI-1表达;高剂量TGF-β1则抑制系膜细胞增殖。     

转化生长因子-β1在实验性根尖周炎病

目的：探讨转化生长因子-β₁(TGF-β₁)在实验性根尖周病炎症反应和预防中的可能作用。方法：30只Wistar大鼠于上颌1、2磨牙制备根尖周炎动物模型（实验组），下颌1、2磨牙作自身对照组。按开髓后1~10周不同时间点随机分成10组(n=3)，采用组织病理学及免疫组织化学方法观察TGF-β₁在根尖周炎病变不同阶段中的定位及分布。结果：实验组炎症早期的牙髓（第1~2周）和根尖周（第4~6周）组织中均可见TGF-β₁阳性表达，表达细胞多为巨噬细胞、淋巴细胞和成纤维细胞；其染色强度随炎症的发展而改变；牙髓坏死及根尖周炎慢性期（第7周）TGF-β₁阳性表达消失。自身对照组下颌第1、2磨牙不同时间点牙髓及根尖部组织均未见TGF-β₁阳性染色。结论：TGF-β₁在实验性根尖周病变的炎症反应和防御反应中具有一定的调节作用。     

p21WAF1/CIP1、细胞周期素D1、p53在结肠癌的表达

目的探讨p21WAF1/CIP1、细胞周期素D1(cyclin D1)及p53在结肠癌的表达及三个基因产物间的相关性.方法应用原位杂交技术及免疫组织化学技术检测p21WAF1/CIP1、cyclin D1的mRNA及p53蛋白在结肠癌中的表达.结果 p21WAF1/CIP1 mRNA在癌组织的表达率为84.13%,明显高于癌旁组织61.90%(P<0.05).cyclin D1 mRNA在癌组织表达率为63.49%,明显高于癌旁组织44.44%(P<0.05).p53蛋白在结肠癌的阳性表达率为38.09%,p53过表达组p21WAF1/CIP1 mRNA表达较p53阴性组为低,二者存在显著差异(P<0.05),p53过表达组cyclin D1 mRNA表达较p53阴性组为高,差异具有显著性(P<0.05).p21WAF1/CIP1 mRNA与cyclin D1 mRNA表达存在相关性(P<0.05).结论 p21WAF1/CIP1、cyclin D1、p53的异常表达及它们之间可能存在的相互作用,可能在结肠癌的癌变过程中发挥重要作用.     

氟对成纤维细胞和成骨细胞TGF-β和Smad2/3表达的影响

目的: 观察不同浓度氟化物在不同时间段对成纤维细胞和成骨细胞中转化生长因子β（TGF-β）和Smad2/3表达的影响。方法：将成纤维细胞和成骨细胞各分7个染氟组（0、0.0001、0.001、0.1、1、10和20 mg•L^-1），在5个染氟时间段（2 、4、24、48 和72 h） 采集细胞培养上清，应用酶联免疫吸附（ELISA）法检测TGF-β和Smad2/3含量，应用RT-P CR方法检测染氟48 h细胞 TGF-β mRNA 的表达。结果：与染氟0 mg•L^-1组 比较，氟作用2 h的0.001、0.1、1、10 和20 mg•L^-1组和氟作用4 h的0.0001、0.001、0.1、10 和20 mg•L^-1组成 纤维细胞TGF-β蛋白表达明显降低（P<0.01或P<0.05)；染氟48 h 时1和20 mg•L^-1组成纤维细胞TGF-β mRNA表达有所增强，染氟2～24 h时Smad2/3表达多呈上升趋势，但差异无 显著性（P>0.05）；成骨细胞染氟48 h时0.0001、0.001和1 mg•L^-1组TGF- β蛋白表达增强 （P<0.01或P<0.05），TGF-β mRNA的表达呈增强趋势；染氟成骨细胞Smad2/3表达多呈上升趋势，其中染氟48 h 的20 mg•L^-1组表达明显升高（P<0.01）。结论：染氟对 成纤维细胞和成骨细胞TGF-β表达具有不同的作用特点，TGF-β在成纤维细胞成骨表型转换过程中可 能起重要作用。     

结直肠癌虚实辨证与p21WAF1、p21H—ras蛋白表达相关性研究

目的:探讨结直肠癌患者肿瘤组织p21WAF1、p21H-ras表达与中医虚实辨证的相关性.方法:将45例结直肠癌患者按照中医辨证标准分为虚证组,实证组,虚实央杂证3组,应用免疫组化方法检测结直肠癌组织蛋白p21WAF1、p21H-ras表达,比较组之间的差异.结果:结直肠癌虚证组p21WAF1阳性表达水平显著低于实证及虚实夹杂证组(P=0.025),差别有统计学意义;p21H-ras阳性表达水平在虚证,实证及虚实夹杂证组三组内差异无显著性(P=0.800).结论:p21WAF1阳性表达与结直肠癌中医病证虚实有关,p21WAF1表达低可能是结直肠癌虚证辨证分型的客观物质基础之一.     

中耳胆脂瘤上皮组织中OPN和MMP9的表达及相关性研究

目的：检测骨桥蛋白（OPN），基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在中耳胆脂瘤上皮中的表达，研究OPN和MMP9在胆脂瘤骨质破坏中的作用机制及相关性。方法：采用免疫组织化学SP技术检测OPN和MMP-9在25例中耳胆脂瘤上皮和15例正常外耳道上皮中的表达，比较二者在实验组与对照组上皮表达阳性率有无差别及二者的相关性。结果：OPN和MMP-9在中耳胆脂瘤上皮中表达明显高于外耳道正常皮肤，差别有统计学意义（P〈0．05）；在中耳胆脂瘤上皮中OPN和MMP-9表达之间呈正相关。结论：①MMP-9和OPN在中耳胆脂瘤上皮中高表达，二者表达之间呈正相关。②MMP-9和OPN在中耳胆脂瘤骨质破坏的过程中发挥重要作用，OPN可能是MMP-9高表达的诱导因素。③OPN和MMP-9在中耳胆脂瘤上皮中表达增高为中耳胆脂瘤骨质破坏的研究提供了新的方向。     

TGF-β1、p27蛋白在胆囊癌中的表达与预后的关系

目的:研究TGF-β1、p27蛋白在胆囊癌中的表达,探讨TGF-β1、p27与胆囊癌预后的关系.方法:采用免疫组化SABC法检测TGF-β1、p27各自在胆囊癌、胆囊炎中的表达及两者同时在胆囊癌、胆囊炎中的表达,并比较TGF-β1、p27胆囊癌组织中同时阳性表达组与阴性表达组患者术后2年内的生存时间.结果:TGF-β1在胆囊炎组织中的阳性表达率14.29%,在胆囊癌组织中的阳性表达率44.74%;p27在胆囊炎组织中的阳性表达率为78.57%,在胆囊癌组织中的阳性表达率42.11%;TGF-β1、p27在胆囊炎组织中同时表达的阳性率7.14%,在胆囊癌组织中同时表达的阳性率42.11%;TGF-β1、p27在胆囊癌组织中同时阳性表达组术后2年内的平均生存时间为18.7个月,阴性表达组的平均生存时间为10.5个月.两者差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:TGF-β1、p27在胆囊癌的发生、发展中起重要作用,与预后有关,可作为判断患者手术预后的评价指标.     

乳腺癌中p21WAF1的表达

目的:探讨乳腺癌中p21WAF1的表达与细胞增殖活性及预后的关系。方法:采用免疫组化法检测p21WAF1在58例无淋巴结转移的乳腺癌中的表达,采用流式细胞术分析DNA含量。结果:在乳腺癌中p21WAF1的阳性率为43%,阳性反应产物见于瘤细胞核,p53阳性者的p21WAF1阳性表达率(54%)高于p53阴性者(35%),p21WAF1的表达与SPF(S期细胞比例)和患者预后无关。结论:乳腺癌中p21WAF1的表达不能作为判断肿瘤细胞增殖活性和患者预后的独立标志物。     

rAd—p53瘤内注射前后鼻咽癌原发灶p53、p21WAF1蛋白的表达及意义

目的探讨重组人p53腺病毒（rAd—p53）瘤内注射前后的鼻咽癌原发灶中p53蛋白、p21WAF1蛋白的表达情况及其意义。方法51例中晚期鼻咽癌的患者随机分为两组,治疗组27例rAd—p53瘤内注射＋同步放化疗,对照组24例同步放化疗。分别收集临床资料及rAd—p53瘤内注射前后鼻咽部瘤体组织标本。采用免疫组化二步法检测鼻咽癌原发灶组织标本中p53蛋白、p21WAF1蛋白的表达情况。结果治疗组治疗前、后鼻咽癌原发灶p53蛋白和p21WAF1蛋白阳性表达率分别为33．33．0％和33．3％、62．96％和77．77％,p53蛋白和p21WAF1蛋白阳性表达率在治疗后均明显提高,治疗前后比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）。对照组治疗前、后鼻咽癌原发灶p53蛋白和p21WAF1蛋白的阳性表达率分别为40．74％和37．5％、51．58％和50．0％,两者治疗后也有所增高,但治疗前后比较差异均无统计学意义（P均〉0．05）。结论rAd-p53瘤内注射后,鼻咽癌原发灶p53蛋白表达增加进而导致p21WAF1蛋白表达增加,可能是其治疗鼻咽癌的作用机制之一。     

p21WAF1和pRb在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义

目的 探讨p21WAF1和pRb在膀胱移行细胞癌（BTCC）中表达及相互关系和其意义。方法 应用免疫组织化学SP法检测57例BTCC患者癌组织中P21WAF1和PRb的蛋白表达。结果 p21WAF1和pRb的阳性表达率分别为36．8％和45．6％,p21WAF1随病理分级升高阳性率显著下降（P＜0．05）,pRb的表达与BTCC的临床分期和有无转移均相关;p21WAF1和pRb的表达呈负相关（P＜0．005,Kappa=-0.401),p21WAF1(-)/pRb( )组合的发生率为38．6％,并与BTCC的病理分级、临床分期和有无转移均相关（P＜0．05）。结论 p21WAF1和pBb的表达异常与BTCC的发生发展密切相关,p21WAF1的改变可能为癌变的早期事件,联合检测p21WAF1和pRb可较完整准确地评价BTCC的生物学特性,估计预后,指导治疗。     

生长抑素受体亚型SSTR2和SSTR5 mRNA在肝癌组织中的表达及其临床意义

目的：分析肝癌组织中生长抑素受体亚型SSTR2和SSTR5 mRNA表达状况及其与肿瘤的关联性,为应用生长抑素及其类似物诊断和治疗肝癌奠定理论基础。方法：肝癌患者肝组织标本22例,采用RT-PCR检测并鉴定肝癌癌组织、癌旁组织及正常肝组织SSTR2和SSTR5　mRNA表达率,分析表达率与肿瘤特征之间的关系。结果：SSTR2mRNA肝癌癌组织的表达率为81.8%(18/22) ,表达水平为118.27±17.25,与正常肝组织［36.4%(8/22),69.49±19.43］比较差异有显著性（P<0.05）;与癌旁组织［72.7%（16/22）,111.18±23.74］比较差异无显著性（P>0.05）;癌旁组织与正常肝组织比较差异有显著性（P<0.05）。SSTR5 mRNA表达率和表达水平肝癌癌组织［18.2%（4/22）, 51.67±30.32］、癌旁组织［18.2%（4/22）,49.56±27.61］及正常肝组织［9.1%（2/22）,48.73±15.72］三组间两两比较差异均无显著性（P>0.05）。高分化肝癌组织中 ［SSTR2 100%（18/18）,SSTR5 25%（4/16）］和无淋巴结转移的肝癌组织中表达率［SSTR2 25.0%（4/16）,SSTR5 100%(4/4)］分别高于低分化的表达率［0(0/4),0(0/6)］和有淋巴结转移的表达率［0(0/6),0(0/18)］（P<0.05）;Ⅰ、Ⅱ期［SSTR2 85.7%（12/14）,SSTR5 21.4%（3/14）］与Ⅲ、Ⅳ期［75.0%（6/8）,12.5%（1/8）］表达率比较差异无显著性。结论:SSTR2 mRNA亚型在肝癌中呈高表达,其表达率、表达水平与癌组织分化程度、有无淋巴结转移有关联性,与肝癌的分期无关联。     

PCNA与TGF-β_1胎儿晶状体上皮细胞的表达

目的 :观察增殖细胞核抗原 (PCNA)及转化生长因子 -β1(TGF-β1)在人胎儿晶状体上皮细胞的表达。方法 :用 SP免疫组织化学法对 4 8例人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞进行 PCNA、TGF- β1免疫细胞化学染色。结果 :PCNA、TGF-β1在人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞均有表达 ;免疫阳性细胞随着胎龄的增加而减少。PCNA阳性细胞核为桔黄色或棕黄色 ;TGF- β1阳性细胞浆为桔黄色或棕黄色的颗粒状或斑块状 ;经相关分析 ,TGF-β1与 PCNA呈正相关。结论 :PCNA、TGF-β1在人胎儿不同胎龄胎晶状体上皮细胞均有表达 ;TGF-β1促进晶状体上皮细胞的增殖