去整合素-金属蛋白酶17与肿瘤的研究进展

去整合素-金属蛋白酶17(ADAM17),是一种锌依赖的多结构域Ⅰ型跨膜蛋白,在人类的生长发育过程及炎症和肿瘤等病理过程中起重要作用。研究表明ADAM17在人类多种肿瘤呈高表达,作用机制主要通过水解细胞膜水的多种受体配体的功能而发挥切割转化生长因子α,EGFR-PI3K-Akt信号转导途径及血管的生成等方面来促进肿瘤的发生、进展。     

去整合素-基质金属蛋白酶在肿瘤细胞中的作用研究进展

去整合素-金属蛋白酶(ADAM)家族是许多细胞外基质(ECM)的成分。根据其结构的不同分为膜锚定型和分泌型,这些分子在各种生物活动(如细胞黏附、细胞融合、细胞迁移、膜蛋白脱落和蛋白水解)中发挥作用。一些ADAMs成员在恶性肿瘤的病理过程中发挥作用。ADAMs的活性受基因表达、胞质和周围细胞的调控,酶原和抑制因子也参与调控。尽管现在还不清楚具体的作用机制,但是它们中大多数具有调控生长因子活性,整合、诱导细胞增殖和侵袭的作用。     

蛇毒金属蛋白酶及去整合素的结构与功能

蛇毒金属蛋白酶是蛇毒主要功能性蛋白质之一,它直接作用于局部组织的毛细血管,影响毛细血管内皮细胞与基底膜之间的相互作用;蛇毒去整合素与蛇毒金属蛋白酶来自共同的前金属蛋白酶原,这些酶原都含有4个共同的结构域:信号肽、前导肽、蛋白酶结构域、间隔区.去整合素因能特异性识别整合素而得名,蛇毒去整合素为低分子量蛋白质,含有多个Cys残基,它能阻断整合素与其配体的结合,抑制整合素介导的细胞与细胞、细胞与细胞外基质之间的黏附反应,在血小板聚集、感染、炎症反应、肿瘤转移等病理过程中发挥重要作用.     

蛇毒金属蛋白酶及去整合素的结构与功能

金属蛋白酶和去整合素是大多蛇毒的重要组成成分,大分子的金属蛋白酶简称MDC酶,其由N末端金属蛋白酶结构域、类去整合素结构域和一个C末端的富半胱氨酸结构域组成;去整合素是小分子量的含有RGD序列并富含半胱氨酸的非酶多肽。 MDC酶的去整合素结构域虽然不具有RGD模体,但其与去整合素有很高程度的结构同源性,并能识别细胞表面受体整合素、抑制整合素依赖的细胞之间的相互作用。 ADAM家族蛋白是发现与哺乳动物细胞的膜结合MDC酶,其与可溶性蛇毒MDC酶密切相关。这组膜锚定哺乳动物AD-AM家族蛋白在结构上同样具有一个去整合素结构域和一个金属蛋白酶结构域（ A Disintegrin And Metallopro-teinase domains ）,故简称为ADAM家族蛋白。 ADAM家族参与细胞表面分子的脱落,一些蛇毒MDC酶也有这一属性。     

矽肺模型大鼠肺间质成纤维细胞基质金属蛋白酶2的表达

目的探讨肺间质成纤维细胞基质金属蛋白酶2(MMP-2)在肺纤维化中的表达及意义。方法清洁级Wistar大鼠50只,随机分为对照组和实验组,实验组气管内注射SiO2悬液,对照组代以等剂量生理盐水。注射后1,3,7,14,28d分离和提取肺间质成纤维细胞,应用免疫细胞化学和逆转录多聚酶链式反应(RT—PCR)方法,观察其MMP-2蛋白及其mRNA的动态变化。结果①SiO2作用后3d成纤维细胞MMP-2表达增高,达对照组的2.423倍(t=5.205,P<0.01),此后一直维持高水平;②MMP-2mRNA的转录从SiO2作用后1d就开始升高。结论在肺纤维化早中期,肺间质成纤维细胞高表达MMP-2。     

含三磷腺苷的Hanks平衡盐溶液处理张氏肝癌细胞诱导新去整合素金属蛋白酶相关蛋白的表达

目的研究不同条件下张氏肝癌细胞中去整合素金属蛋白酶(ADAMs)及ADAM相关蛋白的表达和功能改变。方法用热激、含有三磷腺苷(ATP)的Hanks平衡盐溶液(HBSS)处理张氏肝癌细胞,Western blotting检测AD-AM相关蛋白,对处理过的细胞构建cDNA文库,用ADAMs通用抗体对文库进行免疫筛选,对阳性克隆的插入序列测序并进行体外表达,分析蛋白的性质。结果包含ATP的HBSS处理张氏肝癌细胞诱导出2个新的相对分子质量为30 000和50 000的ADAM相关蛋白,热激处理未出现相同的反应。对处理细胞构建了cDNA文库,筛选出1个新的有碱性蛋白酶活性的ADAM相关蛋白。结论含有ATP的HBSS处理张氏肝癌细胞可以诱导出1种新的ADAM相关蛋白。     

去整合素金属蛋白酶8在食管鳞癌的表达及与病理特征的关系

目的 探讨去整合素金属蛋白酶8（ADAM8）在食管鳞癌的表达及与病理分级和预后的关系。方法 选取河南科技大学第一附属医院因食管鳞癌行手术治疗患者47例。免疫组织化学法检测ADAM8的表达;统计患者病理特征并进行术后随访,分析ADAM8与病理特征及预后的关系。结果 食管鳞癌组织中ADAM8高表达比例与正常组织比较,差异有统计学意义（P?<0.05）,食管鳞癌组织中ADAM8高表达比例大于正常组。肿瘤高分级患者ADAM8表达高于低分级肿瘤患者,TNM分期Ⅲ、Ⅳ期患者ADAM8表达高于Ⅰ、Ⅱ期患者,淋巴结转移患者ADAM8表达高于无淋巴结转移患者,差异均有统计学意义（P?<0.05）。癌组织中ADAM8高表达患者与ADAM8低表达患者,术后2年生存率的比较,差异有统计学意义（P?<0.05））。结论 ADAM8在食管鳞癌中表达上调,ADAM8表达水平对判断食管鳞癌病理特征与预后具有一定参考价值。     

解整合素-金属蛋白酶17在肺泡上皮细胞间质转化中的作用研究

目的：探讨解整合素-金属蛋白酶17(a disintegrin and metalloproteinase-17,ADAM 17)过表达和抑制在转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)介导的A549细胞上皮向间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition, EMT)过程中的作用,以进一步揭示肺纤维化的机制。方法将A549细胞分为空白对照组、TGF-β1组、PMA(ADAM 17激活剂)组和TNF484(ADAM 17抑制剂)组。各组细胞培养36 h后,应用倒置相差显微镜观察各组细胞形态,Real-time PCR和Western blotting分别检测ADAM 17、上皮及间质细胞标记物在mRNA和蛋白水平上的表达情况。结果镜下观察发现未诱导的A549细胞呈鹅卵石形态,排列比较紧密;经TGF-β1诱导后,细胞形态伸长,出现伪足,排列较松散,细胞与细胞之间的紧密连接消失。Real-time PCR和Western blotting检测结果均显示ADAM 17在PMA组高表达,而在TNF484组低表达,差异有统计学意义;上皮细胞标记物E-cadherin在空白对照组和TNF484组高表达,间质细胞标记物Vimentin在TGF-β1组和PMA组高表达,差异同样有统计学意义。结论 ADAM 17的过表达有助于TGF-β1介导的A549细胞EMT进程,提示ADAM 17可作为肺纤维化的标记物之一。     

槲皮素治疗肺间质纤维化作用机制研究进展

肺间质纤维化是一种慢性、进行性间质性肺疾病,以弥漫性肺泡炎及肺泡结构破坏为特征.肺纤维化病因复杂,发病机制尚不明确,尚未有明确、有效的治疗手段,为呼吸系统难治性疾病.槲皮素是自然界广泛存在的天然黄酮类化合物,具有多种生物活性.各项研究表明,槲皮素能够对抗肺间质纤维化的形成,有安全性高、价格低廉、简便易得等优点.该文旨在...     

基质金属蛋白酶—2与肝纤维化

肝纤维化是肝脏细胞外基质合成和降解失衡结果。基质金属蛋白酶（MMP）和金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP）是细胞外基质（ECM）合成及降解代谢平衡调节中两个重要因素。研究显示MMP－2含量及活性与肝纤维化关系密切，通过调节MMP－2、TIMP－1基因表达来治疗肝纤维化将是一个新的途径。     

中和白细胞介素 17 对博来霉素诱导小鼠肺纤维化的干预作用

目的??初步探讨中和白细胞介素 17（IL-17）对博来霉素（BLM）诱导小鼠肺纤维化形成过程的 干预作用及其机制。方法??96 只小鼠随机分为 4 组,即抗体干预组、同型抗体对照组（IgG2A 组） 、博来霉素 组（BLM 组） 、正常对照组（NC 组） 。气管内注射 BLM 使小鼠急性肺损伤诱导肺纤维化形成, NC 组则给予 等量生理盐水。复制模型后第 4、9、14、19 和 22 天抗体干预组小鼠尾静脉注射 IL-17A 中和抗体, IgG2A 组 注射同型抗体 IgG2A; BLM 组和 NC 组则注射等量生理盐水。在培养的第 7、 14 和 28 天将 4 组小鼠分批处死, 取气管肺泡灌洗液（BALF）涂片进行细胞计数, ELISA 法检测 IL-1β、 IL-10、 IL-17A、 IFN-γ 含量的变化; 检测小鼠肺组织羟脯氨酸（HYP） 、丙二醛（MDA）及活性氧（ROS）等生化指标,并评价各组小鼠肺组织 的纤维化程度。结果??抗体干预组与 BLM 组比较,BALF 中细胞总数、淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞的 个数, IL-1β、IL-10、IFN-γ 的含量, 以及 HYP、MDA、ROS 的含量在各个时间点均降低（ P <0.05） ; 而 IgG2A 组上述指标在各个时间点与 BLM 组比较,差异无统计学意义（ P >0.05） 。结论??中和 IL-17A 对 BLM 所致的实验性小鼠肺纤维化模型具有一定的防治作用, 有利于延缓肺纤维化的进程。     

矽肺模型大鼠肺间质成纤维细胞MMP-2和MMP-9的表达

目的:探讨肺间质成纤维细胞MMP-2和MMP-9在SiO2致肺纤维化中的表达及意义. 方法: 清洁级Wistar大鼠50只,随机分为对照组和实验组,实验组气管内注射SiO2悬液,对照组代以等剂量生理盐水. 注射后1,3,7,14和28 d分离和提取肺间质成纤维细胞,应用免疫细胞化学和逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法,观察其MMP-2,MMP-9蛋白及其mRNA的动态变化. 结果:①SiO2作用后1 d成纤维细胞MMP-2表达增高,7 d达高峰,为对照组的3.887倍(t=23.667,P<0.001);MMP-9在SiO2作用后1 d表达增高,7 d达对照组的3.103倍(t=11.399,P<0.001);②MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA的转录从SiO2作用后1 d就开始升高. 结论:受SiO2刺激后,肺间质成纤维细胞上调MMP-2和MMP-9的表达,损伤肺泡基底膜,启动肺纤维化的发生.     

博莱霉素致小鼠肺纤维化中解整合素-金属蛋白酶17表达水平的研究

目的 观察博莱霉素致小鼠肺间质纤维化中解整合素-金属蛋白酶17（a disintegrin and metalloproteinase-17,ADAM17）表达水平变化与转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）之间的相关性,以阐明肺纤维化的发病机制.方法 60只小白鼠随机分为6组,每组10只.正常对照组经气管内一次性注入0.9％氯化钠注射液（5 mg/kg）.模型组5组分别为注射博莱霉素3d、7d、14 d、21 d、28 d组,经气管内一次性注入博莱霉素（5 mg/kg）,分别在规定的时间点取肺组织,通过Masson胶原染色评价肺纤维化的程度,用免疫组织化学染色和蛋白质印迹（Western blotting）方法检测ADAM17和TGF-β1在肺组织的蛋白水平表达,RT-PCR检测ADAM17和TGF-β1mRNA的表达.结果 博莱霉素诱导小鼠肺纤维化模型成功,模型组病理呈不同程度的胶原沉积和成纤维细胞增生.小鼠纤维化程度自7d组开始均高于正常对照组（P＜0.01）.免疫组化结果示,TGF-β1、ADAM17在对照组呈弱表达,模型组表达量高于对照组（P＜0.01）,且14 d时表达量最高.Western blotting和RT-PCR结果与免疫组化结果一致.相关性分析结果示,TGF-β1、ADAM17在免疫组化、Western blotting和RT-PCR中的相关系数r分别为0.777、0.808、0.906（P＜0.01）,表明二者呈正相关.结论 ADAM17在博莱霉素致小鼠肺间质纤维化过程中表达水平上调,ADAM17可能通过上调TGF-β1发挥致纤维化的作用.     

解聚素-金属蛋白酶17和上皮生长因子受体在人脑胶质瘤中的表达及其临床意义

目的探讨解聚素-金属蛋白酶17（ADAM17）和上皮生长因子受体（EGFR）在人脑胶质瘤的表达及临床意义。方法回顾性分析同济大学附属第十人民医院（以下简称＂我院＂）2011年1月~2013年11月收治的并行外科手术治疗的人脑胶质瘤患者38例,选择同期在我院行外科手术治疗脑外伤患者15例为对照组。采用免疫组织化学法和Western blot法检测胶质瘤组织中ADAM17和EGFR蛋白的表达,并分析其与人脑胶质瘤恶性程度的相关性。结果人脑胶质瘤中ADAM17和EGFR表达较对照组明显增多（P〈0.05）,且随着恶性程度的提高,表达逐渐增多,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 ADAM17和EGFR在人脑胶质瘤细胞内均有表达,且随着肿瘤恶性程度的增高而增加,提示ADAM17和EGFR在人脑胶质瘤的发生过程中可能起重要的作用,其水平高低与胶质瘤的恶性程度具有一定相关性。     

双氢青蒿素对小鼠肺纤维化的影响及作用机制

目的探讨双氢青蒿素对小鼠肺纤维化的影响及其可能机制。 方法将SPF小鼠35只随机分成空白对照组、模型组、甲泼尼龙组、双氢青蒿素低、高剂量组,每组7只;成模后,分别用药物治疗14天后处死小鼠,取肺脏标本进行肺泡炎症、肺纤维化评分和羟脯氨酸测定。培养成纤维细胞,分为对照组、甲泼尼龙低、高剂量组、双氢青蒿素低、中、高剂量组,分别给与药物处理,MTS法检测成纤维细胞增殖率,蛋白质印迹法测定成纤维细胞相关蛋白水平。 结果双氢青蒿素组及甲泼尼龙组肺泡炎症、纤维化评分和羟脯氨酸含量均明显低于模型组;双氢青蒿素组和甲泼尼龙组抑制NIH3T3细胞增殖能力,且呈时间、剂量依赖性;各剂量双氢青蒿素组和甲泼尼龙组均可下调MMP-2和Cyclin D1蛋白及上调TIMP1表达,且一定范围内呈剂量依赖性。 结论小鼠肺泡炎症和肺纤维化程度能被双氢青蒿素有效减轻,同时成纤维细胞的增殖可被其抑制,在一定范围内上述效应与药物剂量相关。     

尿激酶对肺纤维化干预作用及对MMP-9和TIMP-1的影响

目的:探讨尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)对肺纤维化的干预作用和对MMP-9/TIMP-1的影响.方法:SD雄性大鼠45只,随机分成3组:干预组(博莱霉素 尿激酶)、模型组(博莱霉素 生理盐水)和对照组.所有大鼠第28天处死.经HE、Masson胶原染色评价肺组织肺泡炎和肺纤维化程度.酶联免疫吸附法( ELISA)检测肺泡灌洗液中MMP-9、TIMP-1含量.结果:(1)肺泡炎程度评价:模型组为(1.7±0.6)分,干预组为(0.9±0.7)分,对照组为(0.2±0.4)分,模型组与干预组、对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).(2)肺纤维化程度评价:模型组为(2.0±0.8)分,干预组为(1.1±0.7)分,组间差异有统计学意义(P＜0.01).(3)TIMP-1含量:模型组(1 240.8±90.3) pg/ml,对照组(1 078.3±31.6)pg/ml,干预组 (1 163.6±69.6) pg/ml,模型组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);模型组与干预组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:尿激酶能减轻博来霉素诱导的大鼠肺纤维化,可能是通过抑制TIMP-1途径起作用.     

肺间质纤维化大鼠体内明胶酶活性的变化

目的观察肺间质纤维化大鼠体内明胶酶活性的变化情况。方法雄性SD大鼠80只,随机分为假手术组(n=40)和博莱霉素组(BLM组,n=40)。向BLM组大鼠气管内一次性注入BLM复制肺纤维化模型,假手术组大鼠则在气管内注入等量生理盐水。两组动物同步于气管内灌注后第1、3、7、14、28d分别随机处死8只。腹主动脉抽血分离血清,支气管肺泡灌洗收集肺泡灌洗液,冰浴匀浆肺组织制备匀浆液,-80℃冻存。采用明胶酶谱法测定基质金属蛋白酶活性。结果与假手术组相比,BLM组各样品中MMP-9活性均有所增加;血清及肺组织匀浆中MMP-9的活性在BLM注入后1d开始升高,血清MMP-9活性在3d达高峰,肺组织匀浆MMP-9活性在7d达高峰,14及28d已与假手术组无明显差异;肺泡灌洗液中MMP-9活性在BLM注入后1d开始增加,7d达高峰,14d趋向平稳,28d回落。BLM组血清样品中MMP-2活性在各时间点均无明显改变;肺泡灌洗液样品中MMP-2活性从14d起开始升高,持续到第28d始终未见有回落;肺组织匀浆样品中MMP-2的活性升高较早,从3d起开始升高,至28d始终未见回落。结论MMP-2和MMP-9在BLM致大鼠肺纤维化过程中的来源及作用均不同。     

IL-17对肺成纤维细胞的增殖、转化和胶原合成作用

目的探讨IL-17对博来霉素诱导肺纤维化形成中的肺成纤维细胞增殖、转化、胶原合成作用。方法用5 mg/kg博来霉素气管内注入的方法诱导肺纤维化形成,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-17/IL-17RmRNA在肺纤维化形成中表达的变化,选择表达IL-17RmRNA最佳时间的肺成纤维细胞进行原代培养、鉴定。使用四氮唑蓝比色法检测不同浓度的IL-17对肺成纤维细胞的增殖。使用RT-PCR和Western Blotting检测肌成纤维细胞标志物α-SMA以及I和III型胶原的表达。结果(1)IL-17/IL-17RmRNA在肺纤维化形成中明显升高,在第14天表达最高。(2)不同浓度IL-17能够促进肺成纤维细胞的增殖,最佳浓度为50 ng/ml。(3)IL-17促进肺成纤维细胞表达α-SMA增加。(4)IL-17促进肺成纤维细胞I和III型胶原合成。结论 IL-17具有促进小鼠肺纤维化形成中肺成纤维细胞增殖、转化和胶原的合成作用,可能在肺纤维化形成中起重要作用。     

胸腺肽治疗特发性肺纤维化患者的疗效观察及机制探索

目的观察胸腺肽治疗特发性肺纤维化患者的临床疗效,并探索可能的治疗机制。方法共47例特发性肺纤维化（idiopathic pulmonary fibrosis, IPF）患者纳入研究,随机分为胸腺肽治疗组（22例）和对照组（25例）,观察用药1年后两组患者的肺功能、急性加重发生率及6min步行距离变化,并分别对治疗前后血清中细胞因子含量进行检测分析。结果与对照组相比,胸腺肽治疗组肺功能各指标变化无明显差别,但急性加重发生人数所占比例显著低于对照组（13.6% vs 40.0%, P=0.044）,6min步行距离下降值明显低于对照组[（56.64±15.42） vs （72.54±23.04）m],差异有统计学意义（P=0.009）;胸腺肽治疗1年后,治疗组患者IL-1ra、INF-γ水平较对照组显著升高[（161.09±68.15） vs (72.69±24.77)pg/mL,(2.12±0.47) vs (0.96±0.44)pg/mL],差异有统计学意义（P<0.001）;治疗前后组内统计分析提示,与治疗前相比,治疗组患者血清中IL-6水平在治疗后显著下降[（1.89±1.13） vs (0.61±0.36)pg/mL],差异有统计学意义（P=0.019）;治疗组IL-1ra、INF-γ和IL-7水平在治疗后显著升高[（80.62±31.41） vs (161.09±68.15)pg/mL,(1.23±0.29) vs (2.12±0.47)pg/mL,(3.60±0.71) vs (5.95±1.55)pg/mL],差异有统计学意义(P值分别为0.005,0.012和0.046）。结论胸腺肽可以减少IPF患者急性加重发生率,改善患者活动耐量,并可能通过细胞因子的调节发挥抗纤维化作用。     

IL-17和IL-6在大鼠肺纤维化过程中的动态表达及意义

目的研究IL-17及IL-6在大鼠肺纤维化发生过程中的表达,以探讨其可能在大鼠肺纤维化发生发展过程中作用。方法取健康雄性Wistar大鼠72只,随机分为正常对照组（N组）、肺纤维化模型组（M组）及地塞米松治疗组（T组）。肺纤维化模型组和地塞米松治疗组向气管内灌注博来霉素（BLM）5 mg/kg,制备肺纤维化模型。正常对照组采用气管内灌注生理盐水替代。地塞米松治疗组于次日腹腔注射地塞米松注射液（1 mg/kg）,隔日1次。正常对照组和肺纤维化模型组腹腔注射生理盐水。三组动物于造模后第3、7、14、28天分批处死。留取肺组织,石蜡包埋切片,观察其病理学改变并测定肺组织中羟脯氨酸含量。用双抗夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清中IL-17及IL-6的含量。结果肺纤维化模型组肺组织病理切片表现为逐渐由肺泡炎至纤维化动态改变过程,肺组织内羟脯氨酸高于正常对照组和地塞米松治疗组。肺纤维化模型组血清IL-17水平、IL-6水平各时间点均明显高于正常对照组及地塞米松治疗组。肺纤维化模型组及地塞米松治疗组血清IL-17及IL-6水平于第7天达到峰值。结论 IL-17及IL-6在肺纤维化模型组的高表达,提示其可能参与肺纤维化形成过程。