端粒酶反义寡核苷酸对膀胱癌治疗作用的体外实验

目的：探讨端粒酶反义核苷酸对膀胱癌的治疗作用。方法：用TRAP-银染方法检测25例膀胱癌组织和4例癌旁组织中端粒酶活性的表达。以端粒酶RNA模板区为靶点,不同剂量的序列为TAGGGTTAGACAA的硫代磷酸修饰的反义寡核苷酸（PS-ASON）作为实验组（A、B、C）,以硫代磷酸修饰 13个核苷酸的随机引物作为对照组（D）,仅加入培养液作为空白对照组（E）,与人膀胱癌细胞株BIU87细胞共同孵育1~30 d,计细胞数,光镜及电镜观察,DNA凝胶电泳检测、流式细胞仪测定和分析细胞的凋亡和坏死。结果：25例膀胱癌组织中,24例（96%）表达端粒酶活性,4例癌旁组织无端粒酶活性表达。与随机引物及空白对照组比较,实验组的ASON能明显减少细胞增殖数目,实验组细胞在第2、8天及8天后出现较明显的凋亡峰和DNA梯状电泳带,并出现退化、老化、凋亡和坏死的形态学变化,凋亡率明显增高（P<0.001）,并显示剂量的依赖性（P<0.01）。 结论：以端粒酶RNA模板区为靶点的反义寡核苷酸引起膀胱癌BIU87细胞增殖抑制,退化、老化、凋亡和坏死,对膀胱癌的治疗有潜在的意义。     

Effect of antisense oligonucleotides of telomerase on the growth of RCZ cells derived from renal cell carcinoma in culture

目的 :研究端粒酶反义抑制剂对肿瘤细胞的影响。方法 :以端粒酶 RNA模板区为靶点 ,序列为 TAGGGTTAGACAA的硫代磷酸修饰的反义寡核苷酸 ( PS- ASON)及 1 3个寡核苷酸的随机引物与肾癌细胞株 RCZ细胞共同孵育 ,计数 1～ 43d细胞数 ,计算细胞倍增时间 ,通过 MTT法测定 ASON对细胞生长的抑制率。结果 :ASON实验组与随机引物对照组比较能明显减少细胞增殖数目 ( P<0 .0 1 )、增加抑制率 ( P<0 .0 1 )及延长倍增时间 ( P<0 .0 0 5) ;并且其抑制效果显示出剂量的依赖性 ( P<0 .0 5) ,具有序列选择特异性。结论 :以端粒酶 RNA模板区为靶点的反义寡核苷酸抑制肾癌 RCZ细胞增殖 ,可能对肿瘤治疗有潜在的意义     

端粒酶反义寡核苷酸体外抑制宫颈癌细胞端粒酶活性的研究

目的探讨端粒酶反义寡核苷酸(ASON)对宫颈癌Hela细胞端粒酶活性的影响.方法针对端粒酶RNA的ASON作用于Hela细胞,同时以加有转染剂FuGENE6者为对照组,计数连续作用1,3,5 d后的细胞数.TRAP方法测定端粒酶的活性.结果ASON组与随机引物及空白对照组比较,端粒酶活性降低,细胞的增殖速度延缓;有转染剂FuGENE6的ASON组的细胞增殖数目和端粒酶活性显著低于无FuGENE6的ASON组;细胞对有FuGENE6的ASON的摄取显著多于单纯的ASON.在FuGENE6的介导下,ASON对端粒酶活性的抑制与ASON的浓度和治疗时间呈正相关.结论针对端粒酶RNA的ASON能抑制Hela细胞的端粒酶活性,转染剂FuGENE6可以增强端粒酶ASON对宫颈癌细胞端粒酶活性的抑制作用.     

反义寡核苷酸对胆囊癌细胞端粒酶活性的作用

目的：探讨反义寡核苷酸对胆囊癌细胞端粒酶活性的影响及对胆囊癌细胞生长增殖的作用。方法：设计针对端粒酶RNA亚基模板序列并经硫代磷酸修饰的反义、正义和随机序列寡核苷酸，并以正常人成纤维细胞作对照，观察其对人胆囊癌细胞(GBC-SD)端粒酶活性和细胞生长增殖的影响以及对正常人成纤维细胞的作用。结果：反义寡核苷酸可有效地抑制GBC-SD的端粒酶活性，呈剂量依赖性，并明显地抑制GBC-SD的生长，对正常人成纤维细胞生长无明显作用。结论：硫代反义寡核苷酸对胆囊癌端粒酶活性有明显的抑制作用。     

bcl-2反义寡核苷酸对膀胱癌BIU87细胞株的影响

目的:探讨bcl-2反义寡核苷酸对培养的膀胱癌BIU87细胞株的影响.方法:采用bcl-2基因第1外显子的反义寡核苷酸,以硫代磷酸修饰(PS-ASON),序列为5′-TCTCCCAGCGTGCGCCAT-3′,与膀胱癌细胞株BIU87共同孵育作为实验组.加入正义的bcl-2寡核苷酸,序列为5′-TACCGCGTGCGACCCTCT-3′(PS-SON)作为对照组,用流式细胞仪检测细胞凋亡和坏死率,电镜观察细胞形态变化.结果:与对照组相比,实验组的细胞坏死率明显上调,电镜下细胞形态呈坏死改变.结论:bcl-2的反义寡核苷酸引起膀胱癌细胞大量坏死,可能成为膀胱癌的治疗方法之一.     

白蛋白纳米载体介导的反义核酸对肝癌细胞端粒酶活性的抑制

目的 利用纳米载体增强端粒酶反义寡核苷酸时肝脏肿瘤细胞端粒酶活性的抑制作用.方法 实验设6组:空白对照组、纯纳米粒组、游离正义寡核苷酸组、游离反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸-纳米粒组和反义寡核苷酸-纳米粒组.用TRAP-ELASA法检测端粒酶反义寡核苷酸对肿瘤细胞端粒酶活性的影响,以MTT法测定端粒酶反义寡核苷酸对肝脏肿瘤细胞(HepG2)生长的抑制作用.结果 ①纯纳米粒组、游离端粒酶正义核苷酸组和端粒酶正义核苷酸-白蛋白纳米粒处理组的端粒酶活性与空白对照组差异无显著性(P>0.05).②游离端粒酶反义核苷酸和端粒酶反义核苷酸-白蛋白纳米粒处理的肿瘤细胞的端粒酶活性与空白对照相比明显下降(P<0.05),且两者之间差异存在显著性(P<0.05).③纯纳米粒组、游离端粒酶正义核苷酸和端粒酶正义核苷酸-白蛋白纳米粒对肿瘤细胞的抑制作用很小.游离端粒酶反义核苷酸的抑制作用明显,端粒酶反义核苷酸-白蛋白纳米粒的抑制作用最强,两者之间差异有显著性(P<0.05).结论 白蛋白纳米粒可作为反义技术治疗的有效载体,增强端粒酶反义核苷酸的抑制作用.     

端粒酶反义寡核苷酸对MCF-7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响

为探讨端粒酶反义寡核苷酸对人乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响,应用与人端粒酶RNA组分(hTR)模板区互补的硫代反义寡核苷酸处理MCF-7细胞.发现经反义hTR寡核苷酸作用后,细胞端粒酶活性明显受到抑制,至作用后72 h,端粒酶活性较对照组降低61.0%(P<0.05);细胞生长明显受到抑制;细胞周期发生显著变化,G0/G1期细胞数增多,S期及G2/M期细胞数则减少;细胞增殖指数由0.46降低至0.29;并可观察到凋亡细胞的出现,凋亡发生率为10.7%;而无义寡核苷酸处理组及空白对照组以上各指标均无明显变化.提示端粒酶反义寡核苷酸可明显抑制乳腺癌细胞端粒酶活性,抑制细胞生长和增殖,诱导细胞凋亡;表明应用反义技术抑制端粒酶活性治疗乳腺癌可能具有广阔的前景.     

脂质体介导端粒酶反义RNA对人乳腺癌细胞MCF-7活性及增殖的影响

目的:探讨经脂质体介导转染端粒酶反义RNA对MCF-7细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法:用脂质体介导法将pBBS212-hTR(反义端粒酶RNA真核表达载体)导入人乳腺癌细胞MCF-7中,采用TRAP-PCR-ELISA法测定端粒酶活性,四唑盐比色(MTT)法检测MCF-7细胞的增殖,FCM分析等方法观察其对MCF-7细胞的增殖影响。结果:端粒酶反义RNA能显著抑制MCF-7细胞的端粒酶活性,抑制MCF-7细胞的增殖并诱导其凋亡。结论:脂质体转染反义端粒酶RNA在封闭细胞端粒酶活性表达的同时,可促进MCF-7细胞凋亡。     

端粒酶反义寡核苷酸对MCF—7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响

为探讨端粒酶反义寡核苷酸对人乳腺癌MCF－7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响,应用与人端粒酶RNA组分（hTR）模板区互补的硫代反义寡核苷酸处理MCF－7细胞。发现经反义hTR寡核苷酸作用后,细胞端粒酶活性明显受到抑制,至作用后72h,端粒酶活性较对照组降低61.0%（P＜0.05）;细胞生长明显受到抑制;细胞周期发生显著变化,G0／G1期细胞数增多,S期及G2／M期细胞数则减少;细胞增殖指数由0.46降低至0.29;并可观察到凋亡细胞的出现,凋亡发生率为10.7%;而无义寡核苷酸处理组及空白对照组以上各指标均无明显变化。提示：端粒酶反义寡核苷酸可明显抑制乳腺癌细胞端粒酶活性,抑制细胞生长和增殖,诱导细胞凋亡;表明应用反义技术抑制端粒酶活性治疗乳腺癌可能具有广阔的前景。     

C-myc反义寡核苷酸对肺癌细胞生长增殖及其端粒酶活性抑制作用的观察

目的：探讨硫代磷酸修饰型反义核酸封阻C-myc基因，抑制癌细胞代谢、生长的作用。方法：培养端粒酶高活性的人肺癌细胞系LTEP-a-2，合成针对C-myc基因的硫代反义寡核苷酸封条和随机序列寡核苷酸片断，导入LTEP-a-2细胞系，作用72h，分析反义封条对细胞端粒酶，琥珀酸氧化脱氢酶(SDH)，DNA合成和细胞增殖的作用。结果：C-myc反义封条PS-ODN12 5μmol／L抑制LTEP-a-2细胞34．87％的端粒酶活性；10μmol／L抑制62．71％端粒酶活性；20μmol／L抑制89．18％端粒酶活性。反义封条PS-ODN9 20μmol/L仅抑制LTEP-a-2增殖(39．22％～85．29％)和SDH活性(42％～80％)作用。其对DNA合成亦有抑制作用(71．49％～87．35％)。随机序列硫代修饰寡核苷酸PS-ODN9 20μmol／L仅抑制LTEP-a-2细胞2．37％端粒酶活性，抑制4．5％的细胞增殖和4％SDH活性。结论：C-myc反义封条对肺癌细胞LTEP-a-2的增殖、端粒酶活性有特异性抑制作用，并呈剂量依赖关系。     

阳离子卟啉对膀胱肿瘤细胞端粒酶活性抑制作用的研究

目的探讨阳离子卟啉TMPyP4[四-（N-甲基-4-吡啶基）]对膀胱肿瘤细胞株T24和BIU87的端粒酶活性的影响.方法 MTT法测定细胞抑制率;流式细胞仪测定细胞凋亡率;PCR-ELISA法测定肿瘤细胞的端粒酶活性;RT-PCR法测定hTERT和c-myc的mRNA表达量.结果 TMPyP4和阿霉素均表现为剂量和时间依赖的细胞抑制作用.低细胞毒浓度的TMPyP4和阿霉素作用于肿瘤细胞后均能使肿瘤细胞的凋亡率增加,端粒酶活性降低,以及hTERT和c-myc mRNA表达量降低;TMPyP4作用时间较长后,上述作用优于阿霉素.结论低细胞毒浓度的TMPyP4在药物作用时间较长后诱导细胞凋亡的作用优于阿霉素,其作用机制可能与降低hTERT活性和c-mycmRNA表达量有关.     

生存素反义寡核苷酸诱导膀胱癌细胞凋亡及增强其化疗敏感性

目的探讨生存素反义寡核苷酸（生存素-ASODN）对化疗药多西紫杉醇（泰索帝）诱导膀胱癌细胞系BIU87细胞凋亡的影响。方法将已构建成功的生存素-ASODN真核表达载体pcDNA3-SWas通过脂质体介导转染膀胱癌细胞系BIU87,并筛选转染成功的阳性克隆;采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测其生存素mRNA表达;锥虫蓝拒染法观察生存素-ASODN与泰索帝联合应用对BIU87细胞生存的影响;细胞计数和四甲基偶氮唑盐（MTT）试验测定转染细胞对泰索帝敏感性;琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡DNA断裂情况;核染色检测凋亡细胞的细胞核的变化;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果转染生存素-ASODN真核表达载体pcDNA3-SWas的BIU87-SVVas细胞生存素mRNA表达水平下降、细胞增殖明显受抑,与转染pcDNA3空载体BIU87-neo细胞、未转染载体的BIU87细胞进行比较,差异均有统计学意义（均P〈0．05）;经琼脂糖凝胶电泳,BIU87-SVVa8细胞可见到DNA梯形条带,而其他对照组未见到;与BIU87-neo、BIU87细胞相比,BIU87-SVVas细胞的细胞核呈致密浓染;加入泰索帝的BIU87-SVVas细胞组的凋亡率大幅度增加。结论生存素-ASODN可促进泰索帝诱导BIUg7细胞凋亡及增加其对泰索帝的敏感性,为膀胱癌的生物学治疗研究奠定了实验基础。     

端粒酶RNA反义寡核苷酸对人肺癌细胞端粒酶活性和细胞增殖的影响

目的 观察脂质体介导的端粒酶RNA反义寡核苷(ASODN)对人肺癌细胞系端粒酶活性的作用及其对癌细胞增殖的影响。方法 合成与人类端粒酶RNA模板区碱基序列互补的ASOND，并用阳离子脂质体转染剂DO-SPER介导，作用于人肺癌细胞系，空白组和正义寡脱氧核苷酸(SODN)作为对照。用以PCR为基础的端粒重复序列扩增法(TRAP)结合ELISA方法检测肺癌细胞的端粒酶活性。台盼蓝拒染法细胞计数、噻唑蓝(MTT)试验观察癌细胞增殖情况。结果 脂质体介导的抗端粒酶ASODN对肺癌细胞的端粒酶活性具有抑制作用；细胞计数和MTT试验显示肺癌细胞增殖速度明显减慢。结论 针对端粒酶模板区的ASODN可显抑制端粒酶活性和肺癌细胞的增殖，可运用于抗肿瘤实验性治疗和相关研究。