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应用聚合酶链反应技术检测结核分支杆菌的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
应用聚合酶链反应技术检测结核分支杆菌的研究谭耀驹李一耕谭守勇我们选用分子量为38000片段长度为419bp(38000-419bp)系统,对患者的痰液、胸液、脑脊液、支气管冲洗液、淋巴分泌物等进行聚合酶链反应(PCR)检测,探讨其在实际应用中的可信性... 相似文献
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结核病人外周血结核分支杆菌聚合酶链反应检测及临床意义 总被引:3,自引:0,他引:3
采用巢式聚合酶链反应 (PCR)方法扩增结核病人外周血单核细胞 (PBMC)结核分支杆菌 (MTB)IS6 110部分序列 ,并将其克隆与测序 ,结合临床资料分析探讨其临床意义。材料与方法 ①对象 :我院 1999年住院的 77例活动性肺结核病人。另以同期住院的非结核病人 (10例肝炎 ,30例肺炎和慢性阻塞性肺疾病 )作对照。②PCR引物 :根据Thierry等[1] 报道的结核分支杆菌IS6 110序列 ,采用Goldkey软件 ,在其保守区设计两对套式引物 ,委托上海生工生物工程公司合成。引物序列为 :TB15′CGTGAGGGCATCGAGGT… 相似文献
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应用多重聚合酶链反应法检测并鉴别结核分支杆菌与非结核分支杆菌DNA 总被引:6,自引:1,他引:6
OBJECTIVE: To improve the specificity and sensitivity of polymerase chain reaction (PCR) technique for detecting and identification of DNA of M. tuberculosis and M. nontuberculosis. METHOD: Three pairs of oligonucleotide primer were used in triplex-PCR. A 383 bp DNA fragment encoding part of the 65,000 mycobacterial surface antigen, a 123 bp fragment corresponding to a specific M. tuberculosis complex sequence which was the insertion sequence 6110 (IS 6110) and a 268 bp fragment for human beta-globin were amplified by triplex-PCR respectively. RESULT: The sensitivity of the triplex-PCR-electrophoresis for the DNA of mycobacterium was 0.6 pg. The specific bands of 383 bp and 123 bp among the amplified DNA from M. hominis, M. bovis, BCG and M. simiae were present in the agarose gel. By contrast, only a band of 383 bp was found among the M. nontuberculosis which contained M. avium, M. chelonae, M. scrofulaceum, M. xenopi, M. kansasii, M. intracellulare and M. smegmatis. Compared with the standard strains, there was an additional 268 bp band in simulated clinical samples infected by Mycobacterium. The above 3 specific bands were found neither in other 15 bacterial species tested nor in Mycoplasma pneumoniae. 182 clinical samples were examined by culture, smear and triplex-PCR. 72 nontuberculous clinical samples were all negative. In 110 tuberculosis clinical samples, the positive rates were 2.7%, 13.6% and 32.7%, respectively. CONCLUSION: The triplex-PCR possesses a high specificity and sensitivity. This method could detect and identify the DNA of M. tuberculosis and M. nontuberculosis except M. simiae. It is a valuable tool for early diagnosis and differentiation for infection of M. tuberculosis and M. nontuberculosis. 相似文献
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AmpliSensor-聚合酶链反应技术检测结核分支杆菌及临床应用 总被引:14,自引:3,他引:11
目的探讨Amplisensor-聚合酶链反应(AmpliSensor-PCR)在结核病诊断中的价值。方法采用AmpliSensor-PCR对784例结核病患者及160例肺癌患者的标本进行检测,并与PCR(凝胶电泳后,经溴化乙锭染色)、涂片、培养等法比较。结果AmpliSensor-PCR的敏感性显著高于涂片及培养(P<0.01)。特异性较PCR法高。结论AmpliSensor-PCR可以通过标准曲线划定检出下限,并可换算出标本中原始的靶DNA值,同时具有较高的特异性和敏感性,对肺结核尤其是肺外结核的诊断有一定的临床意义。 相似文献
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聚合酶链反应试剂对检测痰结核分支杆菌的影响 总被引:7,自引:0,他引:7
目的观察聚合酶链反应(PCR)的试剂对检测痰结核分支杆菌的敏感性和特异性的影响。方法对结核病组205例和非结核病组105例的痰标本同时进行三个厂家生产的PCR试剂检测、普通细菌培养和抗酸染色法涂片检测。再对PCR假阳性的痰普通细菌培养结果进行分析,试找出PCR假阳性的其它因素。结果三种不同引物序列和扩增产物片段长度的PCR试剂对结核性痰标本的阳性率分别为82.4%、71.7%和61.0%,组间差异有非常显著意义(P<0.005)。结论PCR试剂的引物序列和扩增产物长度对检测痰结核分支杆菌的阳性率和假阳性率有很大的影响 相似文献
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应用多重聚合酶链反应法检测并鉴别结核分支杆菌与非结 … 总被引:4,自引:0,他引:4
目的 提高聚合酶链反应(PCR)检测分支杆菌DNA的特异性和敏感性、以检测和鉴别结核分支杆菌与非结核分支杆菌DNA。方法 应用三对具有特异性的寡核苷酸引物,进行多重PCR扩增。这三对引物分别对应于分支杆菌65000表面抗原、结核分支杆菌插入序列IS6110及人类β-珠蛋白基因的部分序列,其扩增产物分别为383bp、123bp和268bp。结果 此多重PCR电泳检测的灵敏度为0.6pg。经多重PCR 相似文献
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结核分支杆菌DNA的单管巢式聚合酶链反应检测 总被引:8,自引:1,他引:8
目的探讨单管巢式聚合酶链反应(SNPCR)检测石蜡包埋组织结核分支杆菌DNA的特异性和敏感性。方法应用普通PCR(GPCR)、双管巢式PCR(DNPCR)和SNPCR对结核分支杆菌BCG和30例结核性淋巴结炎石蜡包埋组织进行结核分支杆菌复合群IS6110特异插入序列片段DNA检测。结果DNPCR和SNPCR检测BCGDNA均于15fg以上呈现阳性结果,其敏感性明显优于GPCR(480fg)。GPCR、DNPCR和SNPCR检测30例结核性淋巴结炎阳性率分别为43%、100%和100%,抗酸染色阳性率(10%)与3种PCR法相比差异有非常显著意义(均P<0.01)。GPCR阳性率与DNPCR和SNPCR相比差异亦具非常显著意义(均P<0.01)。SNPCR阳性率与DNPCR相同。结论巢式PCR检测淋巴结石蜡包埋组织结核分支杆菌的敏感性显著高于GPCR,其中SNPCR具有与DNPCR相同的特异性和敏感性,并具有更大的实用价值。 相似文献
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荧光定量聚合酶链反应技术检测结核分支杆菌的临床应用 总被引:1,自引:0,他引:1
我们采用荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)技术检测了115例结核患者高度疑有结核分支杆菌的标本和 3 0例非结核病的患者标本 ,并与培养法、抗酸染色法和PCR 电泳法进行了比较 ,现报告如下。对象与方法 对象 :115例临床诊断为结核病的患者为四川省人民医院门诊和住院患者 ,符合结核病诊断标准。 3 0例非结核患者为对照组 ,其中肺炎 2 5例 ,慢性支气管炎 5例。标本包括痰、胸腹液、晨尿和精液。方法 :标本经处理后 ,进行碱性复红染色 ;罗氏培养基培养 ;PCR电泳 ,每份用该法检测 2次。FQ PCR :仪器为美国ABI公司生产的 770 0… 相似文献
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TaqMan聚合酶链反应技术检测结核分支杆菌DNA及其临?… 总被引:22,自引:1,他引:22
目的 探讨TaqMan聚合酶链反应(TaqMan-PCR)技术在肺结构诊断中的价值。方法 对168例活动性肺结核、57例肺癌患者的痰和外周血及34-例健康对照外周血,同时应用TaqMan-PCR、PCR检测,并与痰涂片法、BACTEC法及改良罗氏培养法结果进行比较。结果 TaqMan-PCR检测痰和外周血总的阳性率分别为53.0%和61.3%,显著高于PCR、痰涂片法、BATCTEC法及改良罗氏培 相似文献
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标本处理方法对聚合酶链反应检测结核分支杆菌结果的影响 总被引:1,自引:1,他引:0
目的探讨应用十二烷基硫酸钠(SDS)处理标本在结核分支杆菌聚合酶链反应(PCR)中的价值。方法从186例活动性结核病人收集痰、胸腹水、脑脊液、尿、血液等标本266份,标本分别用SDS和常规方法进行处理。两种方法处理的标本同时用PCR-反相膜杂交试验检测结核分支杆菌,并将结果进行比较。结果用SDS和常规方法处理的标本,PCR-反相膜杂交试验结核分支杆菌的检出率分别为65.0%(173/266)和51.5%(136/266)。通过配对计数资料卡方检验,SDS法和常规法之间的差异具有非常显著性意义(χ 相似文献
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实时荧光定量聚合酶链反应检测支气管肺泡灌洗液中结核分枝杆菌-DNA对肺结核的诊断价值 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应法(FQ-PCR)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中结核分枝杆菌-DNA(TB-DNA)对肺结核的诊断价值。方法肺结核52例(菌阳20例,菌阴32例),肺炎35例,采用FQ—PCR法检测其支气管肺泡灌洗液中TB—DNA水平。结果52例肺结核组的阳性率为65.4%(菌阳19例,菌阴15例),35例非肺结核组的阳性率为5.7%,经统计学比较,FQ-PCR法检出结核杆菌阳性率显著高于痰涂片抗酸染色和培养法(P均〈0.05),FQ-PCR法特异性高。结论FQ-PCR法检测BALF中TB-DNA为痰涂片阴性及无痰患者提供良好的诊断依据。 相似文献
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目的评估rpoB基因突变检测在结核分支杆菌利福平耐药性测定中的应用价值。方法采用聚合酶链反应-冷单链构象多态性(PCR-冷SSCP)方法对87株结核分支杆菌临床分离株及有药敏结果的22份相应肺结核患者痰标本进行分析。结果PCR扩增rpoB基因的敏感性为100pgDNA及5000个菌体,属于分支杆菌特异。所有分离菌的rpoB基因PCR扩增均为阳性。采用套式PCR可使扩增敏感性提高100倍。与传统药敏试验方法相比,PCR-冷SSCP对87株结核分支杆菌临床分离菌利福平耐药性的检测敏感性和特异性分别为89.6%及100%。22份涂阳培阳痰标本中套式PCR扩增阳性的6份均为高度利福平耐药,其SSCP结果也与相应分离株的药物敏感性试验相符。结论PCR-冷SSCP检测结核分支杆菌rpoB基因突变快速、简便、易行,适用于结核分支杆菌分离株利福平耐药性的快速测定。如进一步提高引物增特异性及敏感性,该技术可望用于临床标本直接检测 相似文献
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聚合酶链反应技术在结核病诊断中的应用 总被引:2,自引:0,他引:2
聚合酶链反应技术在结核病诊断中的应用吴青平,徐朝斌结核病主要依靠患者临床表现,实验室常规检查以及结核病原菌的培养结果而诊断,采用实验室的一般检查培养方法。结核菌的培养检出时间长,阳性率低,不能及时地为临床提供可靠的诊断依据。本文介绍应用聚合酶链反应(... 相似文献
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聚合酶链反应检测支气管冲洗液中的结核菌何积银王香玲任晓肖陈国安韩梅宁张起旺应用聚合酶链反应(PCR)技术检测支气管冲洗液中的结核菌,并与支气管粘膜刷检涂片和纤维支气管镜(纤支镜)活检进行比较。1.研究对象:对接受纤支镜检查的患者根据病史、体征、X线胸... 相似文献
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聚合酶链反应在血行播散型肺结核诊断中的应用 总被引:15,自引:1,他引:15
对32例血行播散型肺结核、40例浸润型肺结核及30例非肺结核患者的静脉血标本,应用聚合酶链反应(PCR)技术检测结核分支杆菌DNA,并与镜检和培养法比较。对象血行播散型肺结核组:32例,合并结核性脑膜炎9例,脊柱结核5例,结核性胸膜炎4例,喉结核3例... 相似文献
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DNA扩增抑制试验在聚合酶链反应检测结核分支杆菌中的作用张显忠郭爱军曹洪林杨明峰我们建立了DNA扩增抑制试验,检测系统中抑制因素所造成聚合酶链反应(PCR)试验的假阴性,以使PCR技术更加完善。材料与方法:标本来源:病例系本院住院肺结核病患者,根据临... 相似文献
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分别检测6种结核菌DNA提取方法的裂解效能、聚合酶链反应(PCR)扩增灵敏度及其对临床标本的阳性检出率,结果显示,TE-TritonX法和Chelex-100法能裂解绝大多数的细菌并具最高的敏感性,可检测出少至10个菌细胞。其临床标本的阳性检出率分别为93.3%和86.6%,而其余4种方法效果较差,TE-Triton和Chelex-100两种沸水浴法简捷、经济,高效,值得临床实验室推广使用。 相似文献