溶脲脲原体感染对大鼠睾丸Sertoli细胞FasL表达的影响

溶脲脲原体（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ Ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ,ＵＵ）是泌尿生殖道感染的常见病原体,可导致睾丸明显的病理损伤,且与不育有关。本文以对数生长期的ＵＵ、热灭活ＵＵ和ＵＵ上清液体外感染或作用于大鼠的Ｓｅｒｔｏｌｉ细胞,观察Ｓｅｒｔｏｌｉ细胞表面 ＦａｓＬ表达的变化。实验证明,活ＵＵ、热灭活 ＵＵ和 ＵＵ上清感染后,Ｓｅｒｔｏｌｉ细胞表面 ＦａｓＬ表达均增加,其中以活ＵＵ感染的影响最为明显。提示睾丸组织的免疫豁免与其局部的ＦａｓＬ功能性表达有关;在感染时,Ｓｅｒｔｏｌｉ细胞通过上调ＦａｓＬ的表达以维持睾丸局部免疫豁免的保护机制。     

锌指蛋白(ZNF)185在小鼠不同发育阶段睾丸中的表达

目的:研究锌指蛋白(ZNF)185在小鼠不同发育阶段睾丸中的表达。方法:从小鼠脑、肝、卵巢和不同发育阶段睾丸组织中提取总RNA,采用半定量RT-PCR法检测ZNF185的表达;制备小鼠不同发育阶段睾丸冰冻切片,应用免疫细胞化学分析法检测ZNF185蛋白的定位。结果:①ZNF185在睾丸中的表达显著高于脑、肝和卵巢组织。②ZNF185在小鼠性成熟前组睾丸中的表达显著低于性成熟期和老年期,而性成熟期和老年期之间差异不显著。③在性成熟前,ZNF185主要定位于睾丸间质细胞和类肌细胞;在性成熟期和老年期小鼠中,ZNF185主要定位于睾丸间质细胞、类肌细胞和精子。结论:ZNF185在小鼠性成熟后睾丸中的表达升高,定位更广泛。     

溶脲脲原体感染对小鼠T淋巴细胞增殖和B淋巴细胞产生特异性抗体的 …

溶脲脲原体是泌尿生殖道感染的常见病原体,在Ｕ．Ｕ．上行性感染的动物模型中,大鼠睾丸出现明显的病理损伤。本语文主要探讨Ｕ．Ｕ．染（或作用）对小林功能的影响。体外实验,以对数生长期的Ｕ．Ｕ．热灭活Ｕ．Ｕ．和Ｕ．Ｕ．上清（不含Ｕ．Ｕ．）或作用小鼠Ｔ淋巴细胞（脾细胞来源）,采用ＭＴＴ法淋巴细胞的增殖活性。体内实验,以上述Ｕ．Ｕ．感染（或作用）正常ＢＡＬ／Ｃ小鼠,于ｄ５用ＳＲＢＣ免疫各小鼠,免疫后ｄ５测定各     

肌动蛋白结合蛋白细丝蛋白A参与肿瘤坏死因子α诱导的支持细胞屏障功能降低的研究

目的:探讨肌动蛋白结合蛋白细丝蛋白A(filamin A,FLNa)在肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNFα)调节支持(Sertoli)细胞屏障功能过程中发挥的作用。方法:体外分离培养20日龄大鼠睾丸支持细胞,用10μg/L TNFα处理后测定跨上皮电阻(trans-epithelial electrical resistance,TER),反映屏障功能改变;Western blotting分析TNFα处理后FLNa表达水平变化;细胞免疫荧光或鬼笔环肽染色分别检测FLNa及微丝(F-actin)的定位改变;FLNa si RNA干扰后检测支持细胞屏障功能。结果:TNFα处理后TER值较对照组显著降低(P0.01);Western blotting结果显示TNFα处理组FLNa水平明显下降(P0.01);细胞形态学检测亦表明TNFα处理后FLNa及F-actin在支持细胞的分布有显著改变;TER测定结果表明FLNa经si RNA沉默后可降低血睾屏障(BTB)功能(P0.01)。结论:FLNa可通过调节F-actin在支持细胞中的排布参与TNFα引起的BTB功能降低。     

溶脲脲原体感染动物模型的建立─对睾丸的形态学影响

本文观察了溶脲脲原体（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ，Ｕ．Ｕ．）对ＳＤ雄性大鼠睾丸的形态学影响。结果表明，在４０例膀胱内接种Ｕ．Ｕ．（１０５ＣＣＵ／ｍｌ）的大鼠中，有２５例睾丸中分离出Ｕ．Ｕ，动物睾丸重量减轻。光镜下可见１１例动物呈广泛的曲精小管萎缩，生精细胞严重脱落。部分曲精小管仅见支持细胞和少量精原细胞，有的仅剩下界膜。在曲精小管中发现许多多核巨细胞，有多核巨细胞处，生精上皮破坏更为明显，间质渗出、水肿。电镜观察发现，Ｕ．Ｕ．可吸附或侵入生精细胞内，造成生精细胞胞浆空泡化乃至崩解，部分线粒体基质空泡化或嵴消失。其余１４只大鼠睾丸组织有局灶性破坏。     

溶脲脲原体与人精子膜蛋白交叉反应抗原的研究

目的 :研究溶脲脲原体 ( Ureaplasma urealyticum,UU)与人精子膜之间的交叉反应抗原。方法 :将从不育患者精液中分离、纯化等获取的 UU蛋白质与人精子膜蛋白进行十二烷基硫酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( SDS- PAGE) ,再将电泳条带转移到硝酸纤维素膜上 ,用兔抗人精子膜抗血清及羊抗兔 Ig G- HRP进行 Western blot反应。结果 :Western blot证实 UU中 61 k D、5 0 k D和 2 7k D蛋白质组份与精子膜蛋白具有相似抗原性。结论 :UU与人精子膜之间存在交叉反应抗原 ,这可能与临床上 UU感染不育患者血清和 /或精液中抗精子抗体 ( As Ab)阳性率明显升高相关     

溶脲脲原体对体外培养大鼠支持细胞分泌IL-1α和IL-6的影响

目的 :研究溶脲脲原体 ( ureaplasma urealyticum,UU)对大鼠睾丸支持细胞分泌 IL- 1 α和 IL- 6的影响。方法 :2 0 d龄雄 SD大鼠 8只 ,无菌取睾丸 ,经 型胶原酶和透明质酸酶消化 ,分离出纯度较高的支持细胞 ,用 DMEM/Ham's F- 1 2培养液培养。实验组加入 UU一起培养 ,对照组则加 UU培养基。分别取培养 1～ 4d的细胞上清液 ,用 ELISA法检测其 IL- 1α和 IL- 6的含量。结果 :实验组与对照组相比 ,IL- 1α的含量显著降低 ( P<0 .0 1 ) ,IL- 6的含量显著升高 ( P<0 .0 1 )。结论 :UU感染使支持细胞分泌 IL- 1 α减少 ,却明显促进 IL- 6的分泌。提示 UU感染与生殖道 (腺 )局部免疫有关     

氯化镉对大鼠睾丸波形蛋白表达的影响

目的:探讨氯化镉(CdCl2)对大鼠睾丸曲细精管和间质区波形蛋白表达的影响。方法:20只雄性SD大鼠随机分为对照组与3个实验组,每组5只动物。实验组分别每天腹腔注射CdCl20.2mg/kg(低剂量组),0.4mg/kg(中剂量组)和0.8mg/kg(高剂量组),共14d,对照组注射等量生理盐水。采用免疫组化法检测睾丸波形蛋白的表达和改变。结果:波形蛋白在睾丸曲细精管支持细胞胞浆呈阳性表达。随着Cd2+剂量增加,实验组阳性支持细胞率及波形蛋白表达量与对照组的比较均显著减少(P<0.01),各实验组间比较也有显著性差异(P<0.01)。在中、高剂量组,波形蛋白向管腔伸展的辐射状部分变短,甚至消失。3个实验组的间质区波形蛋白表达均显著低于对照组(P<0.01)。结论:CdCl2染毒可导致大鼠睾丸支持细胞和间质区的波形蛋白表达量显著下降,且损伤呈剂量效应。     

年龄因素对大鼠睾丸中脑红蛋白表达的影响

目的:探讨脑红蛋白(neuroglobin,NGB)在不同年龄段大鼠睾丸中的分布特征及表达差异。方法:随机选取3月、9月、15月龄SD雄性大鼠,每个年龄段各8只,处死后立即在无菌情况下取睾丸组织,免疫组织化学SP法观测NGB在大鼠睾丸中的定位,巢式PCR和Western blotting分析NGB mRNA和蛋白的表达差异。结果:免疫组织化学显示NGB在大鼠睾丸的间质细胞、精原细胞、各级精母细胞、支持细胞和精子细胞的胞质和胞核都有表达;巢式PCR检测表明9月龄组大鼠睾丸组织中NGB mRNA表达量最高,15月龄组表达次之,3月龄组表达量最低;而NGB蛋白表达与其mRNA相一致。结论:NGB在各年龄段大鼠睾丸组织中广泛表达,且年龄因素影响大鼠睾丸中脑红蛋白的表达。     

溶脲脲原体感染对大鼠生育及胚胎发育影响的研究

９０只雄性ＳＤ大鼠随机分为三组。Ａ、Ｂ两组每只动物膀胱内接种溶脲脲原体（ＵｒｅａｐｌａｓｍａＵｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ，Ｕ．Ｕ．）悬液１ｍｌ（１０５ＣＣＵ／ｍｌ）；Ｂ组接种３个月后，每日口服（灌胃）美满霉素２０～１００ｍｇ／ｋｇ体重，共１４天。Ｃ组为对照。接种５个月后，所有动物进行交配试验。结果表明，接钟后Ａ组动物睾丸组织Ｕ．Ｕ．再分离率为６２．５％，Ｂ组５％，Ｃ组未检出Ｕ．Ｕ．。Ａ组睾丸Ｕ．Ｕ．阳性的动物左右睾丸重量均明显低于Ｂ组和Ｃ组（Ｐ＜０．０２）。Ａ组有１２例动物不育（３０％），Ｂ组有２例动物不育（１０％），Ｃ组全部生育。Ａ组仔鼠（ｎ＝２４０，５．９７±０．６５ｇ）及胚鼠体重（ｎ＝２９３，３．５６±０．９７ｇ）明显低于Ｂ组（分别为ｎ＝１８２，６．９８±０．２６ｇ和ｎ＝１６１，４．４３±０．７２ｇ）和Ｃ组（分别为ｎ＝３２５，６．８９±０．５３ｇ和ｎ＝３４６，４．１７±０．８７ｇ）。Ａ组还发现死胎、畸胎、皮下出血和宫内生长迟缓现象。提示：Ｕ．Ｕ感染可影响大鼠的生育力及胚胎发育，美满霉素可有效抑制Ｕ．Ｕ．生长，并在一定程度上改善生殖状况。     

胚胎期氟他胺暴露对SD大鼠支持细胞增殖和成熟的影响

目的:探讨胚胎期暴露于氟他胺(Flu)对SD雄性仔鼠睾丸支持细胞的影响。方法:将妊娠的SD大鼠随机分为Flu组和正常组,Flu组自妊娠后第12～21日每日皮下注射25 mg/kg Flu以建立生殖发育障碍模型,正常组不作任何处理。分别在雄性幼仔出生后第13日(PD 13)、PD15、PD 17随机颈椎脱臼法处死幼仔鼠,收集雄仔鼠睾丸组织。免疫组织化学检测雄仔鼠BrdU并计算支持细胞增殖指数,Real-time PCR检测各组雄仔鼠SGP-2基因的表达。结果:随着生长发育,正常组和Flu组雄仔鼠睾丸支持细胞增殖指数均呈下降趋势,PD 17正常组支持细胞增殖已经停止,Flu组PD 13、PD 15、PD 17支持细胞增殖指数升高,明显高于正常组(P<0.05)。PD13 Flu组支持细胞SGP-2 mRNA表达量较正常组无明显差异(P>0.05);PD 15、PD 17 Flu组支持细胞中SGP-2 mRNA表达量明显低于正常组(P<0.01)。结论:胚胎期Flu暴露导致支持细胞增殖期延长、成熟延迟,这可能是导致其生殖细胞发育障碍的重要原因之一。     

人睾丸发生过程中转化生长因子β_1受体(TGF-β_1R)表达的研究

目的:研究转化生长因子β_1受体(TGF-β_1R)在人胚胎睾丸发生过程中的表达。方法:收集25例12～28周龄胎儿睾丸标本,免疫组织化学ABC法染色,以正常羊血清代替一抗为阴性对照,TGF-β_1受体抗血清的工作浓度为1:100,光镜观察。结果:TGF-β_1受体在人胚胎睾丸间质细胞呈阳性表达,曲细精管内精原细胞、支持细胞、管用细胞未见阳性表达。TGF-β_1也受体在12周龄睾丸组织未见阳性表达,16周时达高峰,此后呈逐渐下降趋势(P<0.05)。结论:TGF-β_1也通过与其受体结合在人睾丸发生过程中起重要作用。     

三种胚胎期药物诱导大鼠隐睾模型的神经细胞黏附分子(NCAM)表达比较

目的:探讨邻苯二酸二丁酯(DBP)、己烯雌酚(DES)、氟他胺(Flu)宫内诱导SD鼠隐睾对生殖母细胞(Go)发育的影响。方法:SD孕鼠于妊娠12~21 d每日给予Flu(25 mg/kg,n=15)、DES(1.5μg/kg,n=15)皮下注射,DBP(500 mg/kg,n=10)灌胃,仔鼠出生后第1、10、20、80日取仔鼠睾丸组织,通过免疫组织化学及RT-PCR检测神经母细胞黏附分子(neural cell adhesion molecule,NCAM)在睾丸中的表达差异。结果:DES、DBP诱导大鼠曲细精管NCAM表达与玉米油溶剂对照(n=6)和空白对照组(n=6)一致,出生后第1日(PD1)曲细精管管腔内生殖母细胞(Go)位于管腔中央且均呈阳性表达;PD10 Go迁移至基底膜,NCAM表达明显减弱至消失;PD20、PD80隐睾及下降睾丸曲细精管内NCAM阴性表达。Flu诱导PD10及PD20、PD80隐睾组织中可见位于管腔中央的Go残留,NCAM呈阳性表达;RT-PCR结果显示Flu诱导PD10仔鼠睾丸及PD20隐睾的NCAM mRNA表达显著高于2个对照组(P<0.05)。结论:仅Flu诱导的隐睾组织在各时间段均可见Go残留,且NCAM mRNA及蛋白质表达显著高于正常组,该模型更适宜于研究隐睾Go发育缺陷。     

丝瓜络对高血脂症小鼠睾丸增殖细胞核抗原表达的影响

目的:探讨丝瓜络(Retinervus luffae fructus,RLF)对高血脂症小鼠睾丸增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达的影响.方法:24只雄性昆明小鼠随机分为3组,每组8只.对照组(A组):给予基础饲料;高脂+丝瓜络组(B组):在给予的高脂饲料中添加体积分数10％丝瓜络粉;丝瓜络组(C组):给予基础饲料中添加体积分数10％丝瓜络粉.光学显微镜下观察睾丸生精上皮的组织学改变,应用免疫组织化学法检测睾丸PCNA的表达,比较3组的曲细精管异常率和睾丸精原细胞PCNA阳性细胞率.结果:与A组比较,B和C组的异常曲细精管率和睾丸精原细胞PCNA阳性细胞率无统计学差异(P＞0.05).结论:丝瓜络对高血脂症小鼠睾丸精原细胞PCNA的表达没有明显的影响.     

鞘脂激活蛋白原(PSAP)在多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢中的表达及意义

目的:探讨鞘脂激活蛋白原(PSAP)在多囊卵巢中的表达。方法:用免疫组织化学、RT-PCR和Western blotting方法检测来曲唑(LE)诱导的多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠模型卵巢组织的PSAP表达。结果:LE诱导的PCOS大鼠模型内分泌紊乱,代谢特点和形态特征均与人的PCOS相似。在PCOS大鼠卵巢中,PSAPmRNA和蛋白表达均增高。结论:PSAP在LE诱导的PCOS大鼠模型卵巢组织中过表达,并在PCOS发生、发展过程中起到重要的作用。     

转化生长因子β受体Ⅱ在大鼠实验性隐睾中的表达及与生精细胞凋亡的关系

目的:探讨转化生长因子β受体Ⅱ(TGFβ-RⅡ)与实验性隐睾诱导的生精细胞凋亡的关系。方法:建立大鼠单侧隐睾动物模型,SABC法检测TGFβ-RⅡ在隐睾及对照侧睾丸组织内的分布及表达,TUNEL法检测凋亡生精细胞。结果:术后不同时间组隐睾侧曲细精管TGFβ-RⅡ表达均低于对照侧(P<0.01)。术后隐睾侧细胞凋亡数量较对照侧明显增加(P<0.01)。结论:TGFβ可能通过TGFβ-RⅡ介导的信号转导过程在睾丸生精细胞凋亡过程中发挥重要的调控作用。     

IL-10对人早孕蜕膜基质细胞的细胞因子信号抑制因子(SOCSs)基因表达的调控作用

目的:研究细胞因子信号抑制因子SOCS1、SOCS2、SOCS3基因在正常人早孕蜕膜基质细胞的表达及其意义。方法:体外分离培养人早孕蜕膜基质细胞,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blotting法检测SOCS表达,酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法检测细胞IL-10、IFN-γ的分泌。结果:无血清培养蜕膜基质细胞未见SOCS1表达,但表达SOCS2、SOCS3;细胞培养14h所分泌的IL-10高于细胞培养2h时的水平(P<0.05),IFN-γ分泌则无明显变化(P>0.05);IL-10(0.1ng/ml)作用蜕膜基质细胞14h内,不同程度上调SOCS2、SOCS3表达。结论:人早孕蜕膜基质细胞自分泌、旁分泌的IL-10可能诱导细胞SOCS2、SOCS3的表达。     

氯化镉(CdCl_2)对大鼠卵泡颗粒细胞中分拣蛋白1(Sort1)表达的影响

目的:探讨镉(Cd)引起卵泡细胞凋亡与分拣蛋白(Sort1)表达的关系。方法:利用流式细胞仪检测大鼠卵泡颗粒细胞的凋亡;利用免疫组织化学技术检测大鼠卵巢中Sort1的表达部位,在此基础上利用实时荧光定量PCR技术和蛋白免疫印迹技术检测CdCl2处理后大鼠卵泡中Sort1表达量的变化。结果:5μmol/L、20μmol/L和50μmol/L 3个浓度的CdCl2染毒处理均可引起大鼠卵泡颗粒细胞的凋亡;Sort1主要表达于大鼠卵巢颗粒细胞和卵泡膜细胞中;3个浓度的CdCl2均可使大鼠卵巢中Sort1的表达量显著增加(P<0.05)。结论:Sort1可能参与Cd诱导的卵泡颗粒细胞的凋亡过程。     

着床丝氨酸蛋白酶-2(ISP2)蛋白在小鼠卵子和早胚组织中的表达及其定位

目的:了解ISP2蛋白在小鼠卵细胞和早胚组织中的表达情况。方法:收集小鼠未成熟卵、成熟卵、受精卵和着床前胚泡,利用特异性抗ISP2抗体,采用免疫荧光和激光共聚焦显微镜技术对ISP2在卵细胞和早期胚胎组织中的表达模式以及亚细胞定位进行检测分析。结果:在小鼠未受精卵、受精卵和着床前胚泡中均能检测到特异的ISP2蛋白信号;通过激光共聚焦显微镜观察到ISP2在细胞膜上的信号强于其在细胞质。结论:ISP2蛋白在小鼠卵子和早胚组织中均有表达,并主要分布在细胞膜上。