不同氧浓度对原代培养人早孕绒毛细胞滋养细胞血管内皮生长因子及其可溶性受体表达的影响

目的:探讨原代培养人早孕绒毛细胞滋养层细胞(CT)在缺氧时血管内皮生长因子(VEGF)和可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)的表达。方法:将经胰蛋白酶/DNA酶Ⅰ联合消化通过Percoll分离纯化得到的细胞滋养层细胞进行原代培养。采用ELISA法测定正常氧浓度(20%O2,A组)、低氧浓度Ⅰ组(8%O2,B组)和Ⅱ组(2%O2,C组)及低氧复氧组(2%O2/20%O2,D组)培养的不同时段细胞上清液中VEGF和sFlt-1蛋白的表达。结果:B组、C组于培养72h、96h、120h、144h时间点测得VEGF、sFlt-1的浓度明显高于A组(P<0.01);D组于培养96h、120h、144h后测得VEGF、sFlt-1的浓度较72h低,且分别与A组同期相比无明显差异(P>0.05)。结论:细胞滋养层细胞在低氧条件下VEGF、sFlt-1分泌增加,低氧复氧后VEGF和sFlt-1表达均恢复正常。     

缺氧调控滋养细胞和内皮细胞sFlt-1差异表达的研究

目的:探讨缺氧条件下,人早孕绒毛滋养细胞(TEV-1)及人脐静脉内皮细胞(EVC-304)中可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)差异表达的特点。方法:CoCl2诱导TEV-1及EVC-304化学缺氧,并于0,6,12,24,48,72,96,120h用ELISA法分别检测上清中sFlt-1蛋白表达,RealtimeRT-PCR法检测各组sFlt-1mRNA表达。结果:缺氧72h后滋养细胞sFlt-1mRNA及蛋白表达随时间延长明显升高(P<0.05),而内皮细胞sFlt-1mRNA及蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:正常情况下滋养细胞及脐静脉内皮细胞中均有sFlt-1表达;缺氧诱导滋养细胞sFlt-1表达明显增加,而内皮细胞sFlt-1表达对缺氧刺激无明显反应。     

缺氧对滋养细胞VEGF分泌与基因表达调控作用的研究

目的:研究原代培养人早孕绒毛滋养细胞VEGF分泌、基因表达的特点,以及缺氧的调控作用。方法:原代培养早孕绒毛滋养细胞,研究正常和缺氧(氯化钴化学诱导)条件下细胞培养上清液中VEGF含量(ELISA法)以及滋养细胞VEGF mRNA表达(RT-PCR方法)特点。结果:(1)免疫组化技术证实培养细胞角蛋白阳性,波形蛋白阴性,纯度达95%以上;(2)正常培养的滋养细胞在培养12h后分泌产生的VEGF明显增加,至培养结束时的72h达到最高点;缺氧诱导滋养细胞大量分泌产生VEGF的时间提前至缺氧培养后6h,持续至72h无下降,VEGF水平明显高于正常,最高达到2200ng/ml,较正常上升47%;(3)滋养细胞VEGF mRNA表达于培养12h时开始明显上升,至48h时达峰值;缺氧则使VEGF mRNA表达显著上升的时间提前至6h,约12h达峰值。结论:早孕绒毛滋养细胞中存在VEGF基因转录并分泌至细胞外;缺氧诱导VEGF转录增强、分泌增加。     

肝细胞生长因子对卵巢癌血管生成因子的影响及信号传导途径

目的研究肝细胞生长因子(HGF)对人卵巢癌SKOV3细胞血管内皮生长因子的影响及其信号传导机制。方法将不同浓度、不同作用时间的HGF和核转录因子(NFkB)抑制剂PDTC刺激培养的SKOV3细胞;应用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测卵巢癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的变化;采用蛋白印迹方法检测卵巢癌细胞VEGF蛋白和核蛋白NFkB的变化。结果HGF促进卵巢癌细胞VEGF mRNA和蛋白的表达,且随时间和浓度增加作用增强,PDTC可以抑制HGF的刺激作用;HGF促进细胞核NFkB蛋白的活化,且随时间延长作用增强,于刺激1 h达高峰,PDTC可以抑制HGF对NFkB的活化作用。结论HGF通过NFkB途径在核酸和蛋白水平调节卵巢癌细胞分泌VEGF。     

sFlt-1及PLGF与子痫前期发病的关系

可溶性血管内皮生长因子受体1 (sFlt-1)与Flt-1均属于血管内皮生长因子受体(VEGFR),其与Flt-1竞争结合VEGF,完全阻断VEGF的生物学活性,引起血管生成障碍并影响血管壁的完整性和通透性.胎盘生长因子(PLGF)是VEGF家族成员之一,PLGF与Flt-1受体结合时,发挥促血管生成和促绒毛滋养细胞增...     

壬基酚对子宫肌瘤作用的实验研究

目的:研究环境雌激素(environmental estrogens,EEs)中壬基酚(NP)对体外培养子宫肌瘤细胞的作用效应及可能机制。方法:对子宫肌瘤细胞进行原代、传代培养及细胞鉴定。CCK-8法分析不同浓度NP在24小时、48小时、72小时对子宫肌瘤细胞活性的作用效应。采用荧光定量RT-PCR法检测各干预组雌激素受体α(ERα)mRNA、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)mRNA、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达。采用Western Blot法检测ERα、IGF-1、VEGF蛋白的表达情况。结果:不同浓度的NP作用于子宫肌瘤细胞24小时、48小时、72小时,结果显示NP对子宫肌瘤细胞有促增殖作用,这种作用具有时间和浓度的依赖性。不同浓度的NP促进ERα、IGF-1、VEGF相关基因和蛋白的表达,该作用随着NP作用浓度的增加而增强,差异有统计学意义(P0.05)。结论:NP可促进子宫肌瘤细胞增殖,其作用机制可能与通过ERα介导的IGF-1、VEGF等促肿瘤生长因子的表达增加有关。     

可溶性血管内皮生长因子受体1在子痫前期患者胎盘组织中的表达及意义

目的探讨可溶性血管内皮生长因子受体1(sFlt-1)在子痫前期患者胎盘组织中的mRNA及蛋白表达水平变化及其意义。方法(1)采用免疫组化方法及RT-PCR技术分别检测30例子痫前期患者(子痫前期组,其中轻度子痫前期11例,重度子痫前期19例)及45例健康孕妇(对照组,其中早期妊娠18例、中期妊娠12例、晚期妊娠15例)胎盘组织中sFlt-1的蛋白及mRNA表达水平。(2)采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各组孕妇血清中血管内皮生长因子(VEGF)及sFlt-1水平。结果(1)子痫前期组胎盘组织中sFlt-1 mRNA表达水平为0．90±0．11,对照组晚期妊娠妇女为0．80±0．06,两者比较,差异有统计学意义(P<0．01)。子痫前期组重度患者为0．93±0．12,子痫前期组轻度患者为0．85±0．05,两者比较,差异也有统计学意义(P<0．05)。(2)sFlt-1蛋白在子痫前期组患者胎盘组织中的表达水平为0．156±0．008,对照组中晚期妊娠妇女为0．143±0．009,两者比较,差异有统计学意义(P<0．01);子痫前期组重度患者sFlt-1蛋白表达水平为0．159±0．008,子痫前期组轻度患者为0．151±0．005,两者比较,差异也有统计学意义(P<0．05)。(3)子痫前期组孕妇血清VEGF、sFlt-1水平分别为(19．3±2．9)ng／L、(30．2±13．7)μg／L,对照组晚期妊娠妇女为(30．2±3．1)ng／L、(7．4±3．1)μg／L,两者比较,差异有统计学意义(P<0．01)。(4)对照组孕妇血清sFlt-1水平与胎盘sFlt-1蛋白及mRNA表达水平呈正相关关系(r=0．439,P<0．01;r=0．314,P< 0．05);子痫前期组孕妇血清sFlt-1水平与胎盘sFlt-1蛋白及mRNA表达水平也呈正相关关系(r= 0．383,r=0．372;P均<0．05)。结论子痫前期患者胎盘组织中sFlt-1 mRNA表达水平上调及sFlt-1蛋白过度表达,可引起循环中sFlt-1水平升高,从而参与子痫前期的病理生理过程。     

子痫前期孕妇血清及尿液中VEGF、PLGF、sFlt-1水平变化及意义

目的:研究子痫前期孕妇血清及尿液中血管内皮生长因子(VEGF)、胎盘生长因子(PLGF)、可溶性血管内皮生长因子受体1(sFlt-1)水平变化与病情程度的关系,以及对子痫前期的预测价值.方法:将妊娠28～40周的19例轻度子痫前期,13例重度子痈前期孕妇作为研究组,9例正常妊娠孕妇作为对照组.采用酶联免疫吸附法检测各组孕妇血清及尿液中VEGF、PLGF、sFlt-1水平.结果:轻度子痫前期组血清及尿液VEGF、PLGF、sFlt-1水平与重度子痫前期组比较,差异均有高度统计学意义(P＜0.01).轻度子痫前期组血清及尿液ⅦGF、PLGF、sFlt-1水平与对照组比较,差异均有高度统计学意义(P＜0.01).子痫前期组,血清PLGF及sFlt-1水平高于尿液中水平.而血清VEGF水平则低于尿液中的水平.在对照组,血清的VEGF、PLGF及sFlt-1水平均高于尿中的水平.结论:孕妇血清和尿液中ⅦGF、PLGF、sFlt-1水平与子痫前期病情程度呈相关性.检测孕妇尿液中的VEGF、PLGF及sFlt-1水平可能预测子痫前期的发生.     

缺氧诱导因子1α及其靶基因在子痫前期患者胎盘组织中的表达

目的探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)及其靶基因血管内皮细胞生长因子(VEGF)、可溶性血管内皮细胞生长因子受体1(sFlt-1)基因在子痫前期患者胎盘组织中的表达。方法采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)法对20例重度子痫前期患者(子痫前期组)和15例正常妊娠妇女(对照组)的胎盘组织中的HIF-1α、VEGF、sFlt-1蛋白表达进行检测;同时应用RT- PCR技术对两组孕妇胎盘组织中HIF-1α、VEGF、sFlt-1 mRNA水平进行检测,并进行相关性分析。结果(1)子痫前期组HIF-1α蛋白表达(+++)者9例(45%,9/20),sFlt-1蛋白表达(+++)者11例(55%,11/20),对照组分别为2例(13%,2/15)和3例(20%,3/15),两组分别比较,差异均有统计学意义(P＜0．05);子痫前期组VEGF蛋白表达(+++)者3例(15%,3/20),明显低于对照组的7例(47%,7/15),两组比较,差异有统计学意义(P＜0．01)。(2)子痫前期组HIF-1αmRNA、sFlt-1 mRNA水平分别为0．604±0．013、0．898±0．041,对照组分别为0．208±0．007、0．559±0．244,两组分别比较,差异均有统计学意义(P＜0．05);子痫前期组VEGF mRNA表达水平虽高于对照组,但差异无统计学意义(P＞0．05)。子痫前期组VEGF mRNA/sFlt-1 mRNA比值(0．439±0．009)低于对照组(0．824±0．011),两组比较,差异有统计学意义(P＜0．05)。(3)子痫前期组HIF-1αmRNA的表达与sFlt-1 mRNA表达呈正相关(r=0．577,P＜0．05),与VEGF mRNA/sFlt-1 mRNA比值呈负相关(r= -0．376,P＜0．05)。结论HIF-1α在子痫前期患者胎盘组织中表达水平明显升高,主要是通过调节VEGF、sFlt-1基因的转录,而影响滋养细胞的浸润和胎盘血管重铸,参与子痫前期的发病。     

HLA-E介导孕激素对绒毛膜癌JEG-3细胞血管内皮生长因子表达的调节作用

目的:研究人类白细胞抗原E(HLA-E)是否参与孕激素对JEG-3细胞VEGF基因表达的调节作用。方法:JEG-3细胞分为5组,接受不同处理:空白对照(组1)、孕激素处理(组2)、转染HLA-E siRNA慢病毒后孕激素处理(组3),HLA-E siRNA慢病毒转染(组4)以及慢病毒阴性对照转染(组5)。48小时后收集细胞,分别采用Real-time PCR和Western blot方法检测JEG-3细胞血管内皮生长因子(VEGF) mRNA及蛋白表达水平。结果:组2 JEG-3细胞的VEGF mRNA和蛋白表达较组1增高,差异有统计学意义(P0.05);沉默HLA-E基因(组4)导致VEGF mRNA和蛋白表达降低,与组1比较,差异有统计学意义(P0.05)。组3 JEG-3细胞经HLA-E siRNA慢病毒转染、沉默HLA-E表达后再接受孕激素处理,VEGF mRNA及蛋白表达水平与组1比较差异无统计学意义(P0.05)。组5与组1比较,VEGF mRNA及蛋白水平比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:HLA-E介导孕激素对JEG-3滋养细胞VEGF表达的上调,孕激素对JEG-3细胞VEGF的上调作用被HLA-E基因的沉默消除。     

血管内皮生长因子和缺氧诱导因子-1α在妊娠高血压综合征患者胎盘组织中的表达

目的:探讨胎盘组织中血管内皮生长因子(VEGF)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达水平与妊娠高血压综合征(PIH综合征)患者严重程度的相关性。方法:采用免疫组织化学EliVision法对35例PIH综合征患者和40例正常产妇(对照组)胎盘组织中VEGF和HIF-1α的表达水平进行检测分析。结果:VEGF和HIF-1α在胎盘滋养细胞和血管内皮细胞中均有的表达,VEGF在轻度PIH综合征患者胎盘中的表达水平与对照组相比无显著差异,VEGF在中度和重度PIH综合征患者胎盘中的表达水平则较对照组显著下降(P0.05),HIF-1α在PIH综合征组患者胎盘中的表达水平显著高于对照组(P0.05),且重度高于中度、中度高于轻度。结论:PIH综合征患者胎盘中VEGF的表达水平降低,而HIF-1α的表达水平升高,并均与病情的严重程度相关,提示其可能参与调控PIH综合征的发生和发展过程。     

血管内皮生长因子（VEGF）及其可溶性受体在早期复发性流产患者中的表达及临床意义

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）及其可溶性受体（silt．1）与复发性流产（RSA）的相关性。方法：应用酶联免疫吸附试验（ELIsAl技术和免疫组织化学方法分别检测30例RSA患者血清和绒毛中VEGF及silt-1的表达情况,并以同期因非意愿妊娠要求行人工流产术的正常早孕妇-k-（n=30）为对照,比较VEGF及silt-1表达的临床意义。结果：RSA组血清VEGF（2637．50±2145．09ng／L）、silt—l蛋白（13796．67±ll917．08ng／L）表达水平均高于对照组（分别为982．67±675．47ng／L和3540．67±2989．80ng／L）（P〈O．051：RSA组绒毛组织vEGF和silt-1的表达阳性率（分别为76．7％和96．7％）均高于对照组（分别为50．0％和66．7％）（P〈O．05）。结论：RSA患者血清和绒毛中VEGF、silt-1表达程度升高,可能是导致孕早期胚胎停育的原因之一。     

基质细胞衍生因子-1(SDF-1)表达与复发性流产的关系

目的:探讨复发性流产(recurrent spontaneous abortions,RSA)患者血清及滋养细胞中基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor 1,SDF-1)表达与流产的关系。方法:应用酶联免疫吸附试验及荧光定量聚合酶链反应方法检测RSA患者血清及绒毛组织中SDF-1 mRNA的表达(n=36),同期选取因非意愿妊娠7~9周行人工流产患者的血清及绒毛(n=36)作为对照组。结果:RSA患者血清及滋养细胞中SDF-1蛋白及mRNA的表达均显著低于正常妊娠者,差异有统计学意义(P0.01)。结论:RSA患者SDF-1蛋白及mRNA低表达与流产发生关系密切。     

妊娠期糖尿病患者孕期及产后血清VEGF、sFlt1水平的变化及意义

目的探讨妊娠期糖尿病(GDM)患者孕期及产后血清血管内皮生长因子(VEGF)及其可溶性受体1(sFlt-1)水平的变化及意义。方法对100例GDM患者(其中,FGR21例、巨大儿27例、胎儿正常52例)及30例正常孕妇(对照组),用ELISA法检测各孕妇孕28周、32周、36周、分娩前及产后24h血清VEGF及sFlt-1水平。结果三组GDM患者不同孕周VEGF水平均比同期对照组高(P<0.05);FGR组孕期及产后sFlt-1水平均比同期其余三组高(P<0.05);除巨大儿组外,其余三组孕期sFlt-1水平随孕周增加逐步升高(P<0.05)。结论 GDM患者孕中晚期VEGF水平变化平稳,总体水平高于正常妊娠者;GDM孕妇孕期sFlt-1水平的变化影响胎儿发育结局。     

子痫前期滋养细胞sFlt-1和HIF-1α表达及细胞功能在低氧条件下的变化

目的探讨低氧对子痫前期滋养细胞中可溶性血管内皮生长因子受体-1（sFlt-1）和缺氧抑制因子-1α（HIF-1α）的表达及滋养细胞凋亡和侵袭能力的影响。方法取正常妊娠及子痫前期孕妇终止妊娠后的胎盘绒毛组织,分离培养滋养细胞。分为：对照组（正常孕妇）：21%O2浓度培养;子痫前期组：分别行21%O2浓度（21%O2组）和1%O2浓度（1%O2组）培养。采用细胞免疫荧光检测滋养细胞密度,实时定量-多聚酶链反应（real tima-PCR）和蛋白印记（Western Blot）法检测滋养细胞中sFlt-1和HIF-1αmRNA及蛋白的表达,TUNNEL法检测滋养细胞调亡,Transwell测定滋养细胞的侵袭能力。结果子痫前期21%O2组、1%O2组与对照组sFlt-1mRNA的表达分别为（2.87±1.94）ng/ml、（3.51±1.25）ng/ml和（1.93±0.77）ng/ml,HIF-1αmRNA的表达分别为（2.79±0.64）ng/ml、（1.77±0.23）ng/ml和（3.63±0.38）,三组比较,差异均有统计学意义（P均〈0.01）。21%O2组、1%O2组与对照组sFlt-1蛋白分别为（4.99±1.77）μg/ml、（7.02±1.23）μg/ml和（3.83±0.63）μg/ml,HIF-1α蛋白分别为（3.83±0.63）μg/ml、（3.06±0.25）μg/ml和（7.73±1.02）μg/ml,三组比较,差异均有统计学意义（P均〈0.01）。21%O2组、1%O2组与对照组72h滋养细胞凋亡分别为（15.81±3.93）个、（20.18±3.47）个和（6.64±1.37）个,侵袭数目分别为（10.05±1.92）个、（18.65±4.17）个和（2.22±0.43）个,三组比较,差异均有统计学意义（P均〈0.01）。结论子痫前期和正常妊娠孕妇滋养细胞均对低氧敏感,低氧对滋养细胞sFlt-1和HIF-1α的表达有影响,且低氧条件下促使滋养细胞凋亡及侵袭能力强化。     

低氧通过HIF-1α和HIF-2α上调SKOV3细胞Syndecan-1的表达

目的:探讨缺氧环境下,卵巢癌细胞株SKOV3中HIF-1α、HIF-2α和Synde-can-1在转录及蛋白水平的表达及相互作用关系。方法:利用MatInspector在线分析软件,分析Syndecan-1的转录因子结合位点。在CoCl2诱导缺氧环境以及低氧诱导因子(HIF)抑制剂雷帕霉素(Rapamycin)的干预下,实时荧光定量RT-PCR检测HIF-1α、HIF-2α及Syndecan-1 mRNA水平的表达;Western blot检测HIF-1α、HIF-2α蛋白水平的表达。结果:Syndecan-1的转录因子结合位点中有3处HIFF(低氧诱导因子家族)/HIF保守序列。缺氧时,HIF-1αmRNA降低(P<0.05),HIF-1α蛋白、HIF-2αmRNA和蛋白、Syndecan-1mRNA水平均升高(P<0.05)。Rapamycin不能抑制CoCl2模拟缺氧条件下HIF-1α的蛋白表达,可抑制HIF-2α的表达。Syndecan-1 mRNA动态变化曲线和HIF-1α及HIF-2α蛋白水平的动态变化曲线一致。结论:低氧可诱导HIF-1α和HIF-2α的表达,并通过HIF-1α、HIF-2α途径增强Syndecan-1的表达。     

子痫前期患者胎盘组织中降钙素受体刺激肽-3(CRSP-3)的表达及意义

目的:研究子痫前期患者胎盘组织中降钙素受体刺激肽-3(CRSP-3)的表达与正常妊娠者之间的差异及其临床意义。方法:采用免疫组织化学方法检测住院分娩的50例子痫前期患者(子痫前期组:轻度子痫前期25例,重度子痫前期25例)和30例正常晚期妊娠孕妇(对照组)胎盘组织中CRSP-3的表达定位,Real-time PCR及Western blotting方法检测胎盘组织中CRSP-3mRNA和蛋白的表达。结果:子痫前期和正常妊娠者胎盘组织细胞滋养细胞和合体滋养细胞中均表达CRSP-3。子痫前期患者胎盘组织中CRSP-3mRNA及其蛋白表达水平均高于正常妊娠组(P均0.05)。其中重度子痫前期患者胎盘组织中CRSP-3mRNA和蛋白表达水平显著高于正常对照组(P均0.01),虽重度子痫前期胎盘组织中CRSP-3表达略高于轻度子痫前期,但组间无统计学差异(P均0.05)。结论:CRSP-3上调可能参与子痫前期的发病,但是与疾病的进展及严重程度无关。     

正常及复发性流产绒毛组织中血管生成相关基因的表达

目的:探讨正常早孕及不明原因早期复发性流产(RSA)绒毛组织中血管生成调节因子VEGF、Flk1、HIF-1α和vasohibin的表达与RSA的关系。方法:采用免疫组化方法检测38例不明原因早期RSA绒毛组织和20例因非意愿妊娠行人工流产的健康者正常妊娠绒毛组织中VEGF、Flk1、HIF-1α和vasohibin的表达。结果:与正常组相比,RSA组VEGF和Flk1表达明显降低(P<0.05),vasohibin表达明显增高(P<0.05),HIF-1α的表达无明显变化(P>0.05)。结论:RSA的发生可能与血管生成调节因子表达异常导致的绒毛蜕膜组织中血管重铸障碍有关。