不同浓度钛合金微粒对成骨细胞信号通路中转录表达因子RUNX2影响

目的关节假体松动后出现骨溶解,如何有效阻止骨溶解,一直是个难题。文中通过探讨不同浓度钛合金微粒对转录因子RUNX2影响,进一步了解磨损微粒抑制成骨细胞作用机制。方法实验分为空白对照组和钛合金微粒处理组5μg/ml(A组)、10μg/ml(B组)、15μg/ml(C组)。采用细胞计数试剂盒-8法检测各组培养120 h成骨细胞增殖活性。分别采用RT-PCR和蛋白免疫印迹法(Western)检测培养120 h后成骨细胞的RUNX2 mRNA和蛋白表达。结果培养120 h后,与空白对照组相比,各钛合金处理组细胞增殖活性显著下降(P<0.05),B组、C组细胞中RUNX2 mRNA水平亦明显下降(P<0.01),并且RUNX2蛋白表达水平变化趋势与其mRNA的表达变化趋势一致。结论钛合金微粒降低成骨细胞增殖活性,下调成骨细胞RUNX2-转录因子的表达。钛合金微粒对RUNX2表达水平的调控可能是其抑制成骨细胞增殖的机制之一。     

杜仲对MC3T3-E1成骨细胞及OPG/RANKL比值的影响

目的:探讨杜仲对小鼠成骨细胞(MC3T3-E1)及骨保护素(OPG)与细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)比值的影响,为杜仲防治骨质疏松症提供基础。方法:MC3T3-E1成骨细胞按5×103个/孔密度接种于96孔板,加药组的浓度分别为10-1、10-2、10-3mg/mL,对照组为未加药。加药72 h后MTT法检测细胞增殖情况、碱性磷酸酶(ALP)的分泌,ELISA方法检测OPG和RANKL的表达水平,并计算OPG/RANKL的比值。结果:与对照组相比,杜仲10-1mg/mL组在细胞增殖及ALP的分泌均有明显促进作用(P<0.01,P<0.05);可明显抑制RANKL的表达(P<0.05),且表现出浓度依赖性;对OPG有促进表达的作用,但与空白对照组比较无统计学意义(P>0.05)。经计算杜仲可上调OPG/RANKL的比值(P<0.05)。结论:杜仲可通过促进MC3T3-E1成骨细胞增殖与分化成熟,并上调OPG/RANKL的比值,间接抑制破骨细胞的分化和成熟,从而抑制骨吸收,可达到预防与治疗骨质疏松症的目的。     

骨松灵合剂对去卵巢大鼠成骨细胞增殖及Ⅰ型胶原雌激素受体表达的影响

目的通过观察骨松灵合剂对去卵巢大鼠成骨细胞增殖及Ⅰ型胶原、雌激素受体表达的影响,探讨骨松灵合剂对骨代谢的可能作用机制。方法不同浓度的骨松灵合剂刺激大鼠成骨细胞,采用噻唑蓝(MTT)法测定活细胞的数量,RT-PCR和免疫细胞化学染色方法来测定不同浓度的骨松灵合剂对去卵巢大鼠成骨细胞Ⅰ型胶原、雌激素受体表达的影响。结果与对照组相比,30,60,120,240mg/ml的骨松灵合剂对成骨细胞均有促增殖作用(P<0.05),48h、72h后,120mg/ml的骨松灵合剂仍有此作用,其他浓度对成骨细胞促增殖作用消失(P>0.05)。120mg/ml骨松灵合剂培养成骨细胞24h、48h、72h后均可增加成骨细胞Ⅰ型胶原mRNA表达,并有时间依赖性。120mg/ml骨松灵合剂培养成骨细胞24h、48h、72h后均可增加成骨细胞ERαmRNA,ERβmRNA表达,ERαmRNA表达在培养24 h后有所增加,48h、72h较24 h无明显变化;ERβmRNA表达增加有时间依赖性。结论骨松灵合剂可以促进去卵巢大鼠成骨细胞增殖及Ⅰ型胶原、雌激素受体表达,这些可能是骨松灵合剂对骨形成的作用机制。     

骨肽对成骨细胞Bel-2及Bax表达影响的实验研究

目的：探讨骨肽对成骨细胞凋产柑关基因Bcl—2及Bax表达的影响。方法：体外分离培养成骨细胞,0．02mg／ml、0．08mg／ml、0．32mg／ml三个剂量浓度骨肽分别作用12h、24h、36h,收集细胞上清利用酶联免疫法（ELISA法）检测Bcl-2及Bax表达含量。结果：骨肽各浓度组在12h、24h均可引起Bcl-2表达升高、降低Bax的表达水平,其中0．08rag／ml剂量组作用24h效果最为显著。结论：骨肽可促进凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达、抑制凋亡蛋白Bax的表达,从而发挥促进成骨细胞增殖的作用。     

多发性骨髓瘤患者骨髓上清液和血清DKK1表达水平及其临床意义

目的 分析研究多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者骨髓上清液和血清Wnt通路抑制因子Dickkopf-1(DKK1)表达水平,探讨DKK1在多发性骨髓瘤中的临床意义。 方法 本研究对象为2014—2015年新疆医科大学第一附属医院门诊及住院的20例MM初治患者和10例缺铁性贫血初治患者。实验方法采用双抗体夹心酶标免疫分析法(ELISA)检测20例初治MM患者(MM组)及10例缺铁性贫血初治患者(对照组)的骨髓上清液及血清DKK1表达水平。 结果 MM患者骨髓上清液DKK1水平为(8.9±2.8) ng/ml,对照组患者骨髓上清液DKK1水平为(1.3±0.9) ng/ml;MM患者外周血血清DKK1水平为(8.7±2.2) ng/ml,对照组患者外周血血清DKK1水平为(1.0±0.5) ng/ml。MM组骨髓上清液及血清DKK1表达水平与对照组之间比较差异有统计学意义(P=0.001)。MM组骨髓上清液和MM组血清的DKK1表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 MM患者骨髓上清液DKK1表达水平明显高于对照组。MM患者外周血血清DKK1表达水平明显高于对照组。MM患者的骨髓上清液和外周血血清DKK1表达水平差异无统计学意义。本研究揭示了能造成成骨细胞功能改变,活性减弱,加速破骨细胞分化,抑制成骨前体细胞亢进分化的DKK1是骨髓瘤骨病发生的重要因素。DKK1的表达水平高低与溶骨性病变相关。      

苦参碱对A 549细胞增殖和PinX1 mRNA表达的影响

目的探讨苦参碱对A549细胞增殖和PinX1mRNA表达的影响。方法用不同浓度的苦参碱作用A549细胞48h,流式细胞仪检测增殖指数,RT-PCR检测PinX1 mRNA表达。结果随着苦参碱浓度的增加(0mg/ml、0.5mg/ml,1.0mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg/ml),A549细胞增殖指数(PI)逐渐下降(34.35±1.26、18.34±1.01、13.38±1.02、8.47±0.86、7.01±0.75),PinX1mRNA表达逐渐增强(PinX1/β-actin相对灰度值0.42、0.81、1.44、2.05、2.53),二者呈明显负相关(r=-0.89,P<0.05)。结论苦参碱呈浓度依赖性抑制A549细胞的增殖可能与增强PinX1mRNA的表达有关。     

香豆雌酚对新生大鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的:观察香豆雌酚对大鼠成骨细胞(OBs)增殖分化的影响,初步探讨香豆雌酚对OBs的作用机制.方法:用不同浓度香豆雌酚干预OBs,根据不同时间分别用酶消化法测碱性磷酸酶活性和羟脯氨酸含量、放免法测骨钙素含量及半定量RT-PCR法检测OBs内OPG/RANKL基因的表达. 结果:香豆雌酚呈浓度和时间依赖性促进大鼠OBs增殖及碱性磷酸酶表达;干预12h,各浓度组羟脯氨酸含量呈浓度依赖性增高,其中10-8mol·L-1作用最大(P=0.022);培养12h,OBs表达骨钙素呈浓度依赖性,24h达高峰,其中10-8mol·L-1有显著性差异(P=0.012),48h有所下降;不同浓度、时间组香豆雌酚均能促使OBs增加表达OPG mRNA,同时有抑制RANKL mRNA表达的作用,其在24h 10-8mol·L-1浓度作用强度最大(P=0.038),10-5mol·L-1则呈现抑制作用.结论:香豆雌酚能促进OBs的增殖分化,其作用呈浓度和时间依赖性,且至少部分有OPG/RANKL途径的参与.     

松果菊苷通过激活ERK/BMP-2信号通路促进大鼠的成骨细胞增殖观察

目的：考察松果菊苷对大鼠成骨细胞增殖的影响及作用机制。方法将不同浓度的松果菊苷（0.01,0.1,1.0,10.0,100 nmol/L）及MAPK/ERK信号通路抑制剂PD98059（20μmol/L）与成骨细胞共培养12,24,36,48,60 h后,采用MTT法检测细胞增殖情况。酶联免疫吸附法（ELISA）和qRT-PCR法检测细胞上清中和成骨细胞中骨钙素（BGP）和骨形态发生蛋白（BMP-2）的表达水平。Western blotting检测成骨细胞中Smad4、ERK1/2和p-ERK1/2的蛋白表达水平。结果松果菊苷能够促进大鼠成骨细胞的增殖,而且能诱导ERK 的磷酸化从而激活 MAPK/ERK 信号通路,并提高成骨细胞中 BMP-2和 Smad4的表达而激活BMP/Smad信号通路。加入PD98059后,松果菊苷诱导的BMP-2和Smad4表达及成骨细胞增殖均受到抑制。结论松果菊苷可通过激活ERK/BMP-2信号通路促进大鼠的成骨细胞增殖。     

靶向抑制 PI3K 对PDK-1/Akt信号通路调控成骨细胞分化的影响

目的 通过观察磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)特异性抑制剂LY294002在成骨细胞分化过程中的影响,探讨PI3K通过调控PDK-1 /Akt信号通路对成骨细胞分化影响的分子机制。方法 采用体外培养C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)。通过CCK-8检测LY294002的最大安全浓度。对照组使用成骨细胞诱导培养基(OBM)处理BMSC,干预组在OBM中添加LY294002。检测两组细胞碱性磷酸酶（ALP）活性和细胞矿化能力,并分别采用Western-Blot和RT-PCR检测PDK-1 /Akt信号通路及下游蛋白和转录因子基因的表达水平。结果 CCK-8结果提示,在3.2 μM及以下浓度对BMSC的增殖没有影响;LY294002对成骨细胞分化的影响呈剂量依赖性（P＜0.05）;干预组ALP阳性细胞和细胞外基质矿化较对照组明显减少 (P＜0.05); Western-Blot 检测结果显示,干预组p-PDK 1和p-Akt蛋白表达水平较对照组明显降低 (P＜0.05);RT-PCR 结果提示,干预组成骨细胞相关基因ALP和骨钙素（OCN）mRNA较对照组表达明显下降 (P＜0.05)。结论 靶向抑制PI3K可通过PDK-1 /Akt信号通路明显下调成骨细胞相关基因ALP和OCN的表达,并抑制成骨细胞的分化。     

木犀草素对小鼠体外培养前成骨细胞MC3 T3-E1增殖、分化、矿化和Wnt通路的影响

目的:探讨木犀草素对小鼠体外培养前成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化及Wnt通路的影响.方法:在体外培养的MC3T3-E1s培养基中加入木犀草素0.25~8.00μmol/L培养12、24和48 h,以洛伐他汀0.04μmol/L作为阳性对照,采用细胞计数试剂盒法检测细胞增殖情况;用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测细胞内ALP的活性;茜素红S染色法检测细胞矿化能力;采用实时荧光定量反转录PCR法检测细胞Ⅰ型胶原、骨钙素、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(Lrp5)、β-连环素、护骨素/细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA表达水平.结果:木犀草素可以剂量依赖性和时间依赖性地促进成骨细胞MC3T3-E1增殖(P<0.05~P<0.01);木犀草素(2.00、4.00和8.00μmol/L)可以剂量依赖性地促进MC3T3-E1成骨细胞ALP活性,增强MC3T3-E1成骨细胞矿化能力并上调MC3T3-E1成骨细胞中Ⅰ型胶原、骨钙素、Lrp5、β-连环素和护骨素/细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA表达.结论:木犀草素2.00、4.00和8.00μmol/L可以促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化与矿化及Wnt通路中Lrp5和β-连环素mRNA的表达.