人毛乳头细胞生长相关蛋白作用下细胞VEGF的表达

目的研究人毛乳头生长相关蛋白作用下不同代人毛乳头细胞VEGF的表达。方法通过体外培养低传代的人毛乳头细胞,收集其上清配制成条件培养基,用此条件培养基培养高传代人毛乳头细胞,通过RT-PCR观察各代毛乳头细胞的VEGF变化。结果用低传代人毛乳头细胞的上清液培养过的9代人毛乳头细胞的VEGF表达不仅明显好于对照组(P<0.01),而且明显好于基础培养基作用下的7代人毛乳头细胞的VEGF表达(P<0.01)。结论低传代人毛乳头细胞的培养液在体外能明显地促进VEGF的表达。     

毛乳头细胞培养基血清浓度的探索

目的 研究不同血清浓度的培养基对毛乳头细胞生长速度及细胞状态的影响.方法 改良一步酶消化法分离培养人头皮毛乳头细胞,分别以无血清培养基及10%、15%等不同浓度小牛血清培养基,培养第3代毛乳头细胞,倒置相差显微镜下观察细胞生长状态,细胞消化后,计数并绘制生长曲线.结果 在无血清培养基培养条件下,毛乳头细胞传代后贴壁率较低.贴壁后细胞未见明显增殖;传代后前8 d,15%和20%血清培养基培养的毛乳头细胞生长速度,明显快于无血清培养基组和10%血清培养基组(P<0.05);传代第10天后,15%和20%血清培养基中毛乳头细胞生长速度差异无显著的统计学意义.结论 细胞生长速度与血清浓度密切相关.     

海藻多聚糖硫酸酯对人毛乳头细胞增殖的影响

目的:实验旨在观察褐藻多聚糖硫酸脂对体外培养人毛乳头细胞增殖的影响。方法:采用两步酶消化法分离纯化人毛乳头细胞,取第5代细胞用于实验,选择8个浓度的海藻多聚糖硫酸酯作用于体外培养的人毛乳头细胞72h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖活性。结果:显示0.1～1.25mg/ml浓度范围的海藻多聚糖硫酸酯有明显的促进细胞增殖作用(P<0.05)。结论:海藻多聚糖硫酸酯在一定浓度范围内可促进毛乳头细胞增殖。     

海藻多聚糖硫酸酯对人毛乳头细胞增殖的影响

目的:实验旨在观察褐藻多聚糖硫酸脂对体外培养人毛乳头细胞增殖的影响。方法:采用两步酶消化法分离纯化人毛乳头细胞,取第5代细胞用于实验,选择8个浓度的海藻多聚糖硫酸酯作用于体外培养的人毛乳头细胞72h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖活性。结果:显示0.1～1.25mg/ml浓度范围的海藻多聚糖硫酸酯有明显的促进细胞增殖作用(P<0.05)。结论:海藻多聚糖硫酸酯在一定浓度范围内可促进毛乳头细胞增殖。     

雄激素与体外培养的人毛乳头细胞和外根鞘细胞相互作用的研究

目的观察不同浓度雄激素(睾酮)对体外培养人毛乳头细胞和外根鞘细胞增殖活性的影响.方法采用脱发和非脱发成人头皮标本,用胶原酶消化法分离毛乳头,在角质形成细胞无血清培养基上,对其进行体外培养.采用非脱发成人头皮标本,组织法培养毛囊外根鞘细胞.然后将不同浓度睾酮加入两种毛乳头细胞与外根鞘细胞的共同培养基中,比较其对外根鞘细胞的增殖活性的影响.结果不同浓度睾酮对单独培养的两种毛乳头细胞和外根鞘细胞的增殖性均无作用(与对照组相比P>0.05).10-9 ml/L浓度(与对照组相比P<0.05)、10-8 ml/L浓度、10-7 ml/L浓度(与对照组相比P<0.01)睾酮与非脱发患者的毛乳头细胞共同培养时,可促进外根鞘细胞增殖.而10-10 ml/L浓度(与对照组相比P<0.05)、10-9 ml/L浓度、10-8 ml/L浓度、10-7 ml/L浓度(与对照组相比P<0.01)睾酮与脱发患者的毛乳头细胞共同培养时,对外根鞘细胞出现增殖抑制作用.结论睾酮对外根鞘细胞的影响,与其剂量和毛乳头细胞的存在有关.在这个过程中,毛乳头细胞可能起介导作用.     

HSPC011基因在人毛乳头细胞表达的生物学功能

目的 探讨HSPC011基因在人毛乳头细胞表达的生物学功能。方法 应用Nucleo-lector^TM基因转染技术，分别将质粒pCI-neo、绿色荧光蛋白质粒pEGFP-N1、真核表达重组质粒pCI-neo／HSPC011转染人毛乳头细胞和3T3细胞，了解HSPC011基因表达对这些细胞生长特性的影响。结果 通过观察绿色荧光蛋白在人毛乳头细胞和3T3细胞的表达，发现Nucleofector^TM基因转染效率分别约为70％和30％。HSPC011基因在人毛乳头细胞表达后，细胞形态幼稚而类似于3T3细胞，但其凝集性生长特性保持不变；HSPC011基因表达对毛乳头细胞的增殖活性无明显影响。HSPC011基因转染3T3细胞后，对3T3细胞的生长特性无任何影响。结论 初步体外实验表明，HSPC011基因在毛乳头细胞表达可能具有调节细胞分化的作用。     

雄激素与体外培养的人毛乳头细胞和外根鞘细胞相互作用的研究

目的观察不同浓度雄激素(睾酮)对体外培养人毛乳头细胞和外根鞘细胞增殖活性的影响。方法采用脱发和非脱发成人头皮标本,用胶原酶消化法分离毛乳头,在角质形成细胞无血清培养基上,对其进行体外培养。采用非脱发成人头皮标本,组织法培养毛囊外根鞘细胞。然后将不同浓度睾酮加入两种毛乳头细胞与外根鞘细胞的共同培养基中,比较其对外根鞘细胞的增殖活性的影响。结果不同浓度睾酮对单独培养的两种毛乳头细胞和外根鞘细胞的增殖性均无作用(与对照组相比P>0.05)。10-9ml/L浓度(与对照组相比P<0.05)、10-8ml/L浓度、10-7ml/L浓度(与对照组相比P<0.01)睾酮与非脱发患者的毛乳头细胞共同培养时,可促进外根鞘细胞增殖。而10-10ml/L浓度(与对照组相比P<0.05)、10-9ml/L浓度、10-8ml/L浓度、10-7ml/L浓度(与对照组相比P<0.01)睾酮与脱发患者的毛乳头细胞共同培养时,对外根鞘细胞出现增殖抑制作用。结论睾酮对外根鞘细胞的影响,与其剂量和毛乳头细胞的存在有关。在这个过程中,毛乳头细胞可能起介导作用。     

微载体技术高效扩增人毛乳头细胞的培养

目的探讨用微载体培养技术进行人毛乳头细胞高效扩增的培养方法，以满足对毛乳头细胞的大量需求。方法采用Cytodex-3为培养载体进行人第3代毛乳头细胞的微载体培养，定期观察培养液颜色的变化，采用苔盼蓝染色进行活细胞计数，倒置显微镜下观察生长状况。将微载体上消化的细胞进行传统培养，观察细胞生长情况，甲苯胺蓝染色，细胞免疫组织化学染色。结果培养至第12天，微载体上细胞数量最多，并且细胞聚集成团，类似毛乳头样结构。利用这时的细胞进行普通培养，仍然表现出凝集性生长特点，细胞呈异染性，免疫组织化学染色阳性。结论利用Cytodex-3培养可以收获大量具有生物活性的毛乳头细胞。     

HBV对人骨髓间充质干细胞体外增殖的影响

目的探讨HBV对人骨髓来源间充质干细胞(MSCs)体外增殖的影响。方法从成人骨髓分离纯化MSCs并体外培养至第3代,将MSCs与含高浓度HBV的人血清共培养作为实验组,并用不含HBV的健康人血清作为对照。采用MTT法绘制细胞生长曲线并计算细胞倍增时间。分别应用细胞克隆形成试验和流式细胞术检测MSCs的克隆形成能力和细胞增殖指数。结果实验组的生长曲线发生右移,其对数生长期的细胞倍增时间较对照组延长(t=2.453,P<0.05)。体外培养10 d后,实验组的细胞克隆形成率和增殖指数均明显低于对照组(t=2.488,P<0.05;t=2.798,P<0.05)。结论 HBV可抑制人骨髓间充质干细胞的体外增殖。     

成年恒河猴骨髓基质干细胞的体外培养

目的温对猴骨髓基质干细胞(BMSCs)进行体外培养及扩增，观察其原代及传代细胞的生长特点及生物学特点。方法 抽取4只成年猴髂骨骨髓，用全骨髓培养法进行体外培养获得BMSCs，胰酶消化传代，用条件培养基培养传代细胞。逐日倒置显微镜观察细胞生长情况，对传代细胞进行HE染色及碱性磷酸酶(ALP)染色。结果 成年雄性恒河猴BMSCs体外培养生长良好，原代细胞10-13d汇成单层，传代后4～7d长满瓶底。HE染色光镜下观察见BMSCs为单核细胞，细胞呈梭形、多角形，传代细胞碱性磷酸酶染色呈强阳性。结论 猴BMSc的体外培养增殖能力强，可诱导为成骨细胞，可作为灵长类动物骨组织工程的种子细胞。